Masson-Fontana黑色素染色液使用说明

Masson三色染色试剂盒说明书Masson 三色染色试剂盒说明书（南京森贝伽生物科技有限公司）【产品介绍】Masson 染液是显示组织中纤维染色的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关。

分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

淡绿分子量最大。

因此Masson 染色肌纤维红色，胶原纤维绿色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

【用途】主要用于胶原纤维染色。

【产品特点】①染色稳定；②分化时间短，1～2 分钟；③色彩清晰鲜艳；④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；⑤所染切片保存时间长且不易褪色。

固定：甲醛升汞或甲醛盐溶液。

切片：所有类型。

【产品组成】编号名SBJ0126（7×50ml）SBJ0126（7×100ml）SBJ0126（7×500ml）Storage试剂（A）A1：苏木素染色液25ml 100ml 500ml RTA2：三氯化铁水溶液25ml 100ml 500ml RT 临用时取A1、A2 等量混合，成为试剂（A），不可预先配制后放置，因染色液的色素根与铁会化合，形成不容性沉淀，等量混合后，一般24h 后失去染色力。

试剂（B）: 盐酸乙醇分化液50ml 100ml 500ml RT 试剂（C）: 氨水水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（D）: 丽春红酸性品红染色液50ml 100ml 500ml RT 试剂（E）: 乙酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（F）: 磷钼酸水溶液50ml 100ml 500ml RT 试剂（G）: 苯胺蓝染色液50ml 100ml 500ml RT 【参考操作步骤】1、切片脱蜡至水。

2、试剂（A）染色5min～10min。

3、试剂（B）分化、水洗，试剂（C）返蓝、水洗。

Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。

混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。

能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

试剂名：改良 Masson 三色染色液货号：G1345 品牌：索莱宝1、石蜡切片65℃烘烤1h（使组织更贴合玻片，并溶解石蜡。

如果是刚切好的切片，则烘烤2-3h），立即放入脱蜡剂中脱蜡；2、脱蜡：脱蜡剂Ⅰ（15min）、脱蜡剂Ⅱ（15min）水化：无水乙醇I（5min）、无水乙醇 II（5min）、95%乙醇I（5min）、95%乙醇II （5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min）脱蜡处理，蒸馏水3min3、将 Bouin 液滴在组织上，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片组织上的黄色消失。

4、天青石蓝染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。

5、Mayer 苏木素染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。

（显微镜下观察，细胞核呈现深蓝色，细胞质有蓝色）6、酸性乙醇分化液分化3-5s，流水冲洗 10min返蓝。

（细胞核呈现灰蓝色，细胞质应相对透明无色）7、丽春红品红染色液染 2-5min，稍水洗玻片上无染料即可。

（容易造成深红或紫红色，基本看不清细胞核。

建议先染色30s-1min，显微镜下观察，适当增加时间）8、磷钼酸溶液浸泡10min，倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5-10min。

（如果丽春红染色过深，苯胺蓝也应该适当染久一些，最终应该是红蓝色分明，能明显分辨出胶原显微）9、弱酸溶液处理 2min。

10、透明：切片直接依次放入无水乙醇 I（5min）-无水乙醇 II（5min）- 脱蜡剂Ⅰ（5min）- 脱蜡剂Ⅱ（5min）。

然后用纸巾擦干玻片上残余脱蜡剂，或直接铺平玻片在通风橱内，干燥脱蜡剂。

使用中性树脂封片。

注：masson染色不像HE可以把颜色洗脱再重复步骤，建议使用同一批切片，先摸索染色时间。

广州市外显子生物技术有限公司Http//Masson染色液说明书货号：S-1518规格：20ml产品组成：名称规格保存Weigert铁苏木素A液20ml RT避光Weigert铁苏木素B液20ml RT避光丽春红酸性品红染液20ml 2-4℃低温环境磷钼酸溶液20ml 2-4℃低温环境苯胺蓝染液20ml 2-4℃低温环境盐酸酒精分化液1%冰醋酸溶液20ml 2-4℃低温环境20ml 2-4℃低温环境简介：利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关，根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。

储存条件：本试剂盒应贮存于2-4℃低温环境。

有效期：原包装未开封试剂有效期为12 个月，在有效期内的已开封试剂应在开封后 6 个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

操作步骤：1.切片脱蜡至水。

2.Weigert铁苏木素使用前Weigert铁苏木素A、B 液等比例混合。

染10-20分钟，流水稍洗。

3.盐酸酒精分化，流水冲洗数分钟。

4.丽春红酸性品红染液染5-10分钟，蒸馏水稍冲洗。

5.磷钼酸溶液处理约5分钟，去掉溶液，不用水洗，直接用苯胺蓝染液复染5分钟。

6.1%冰醋酸处理1分钟，95%酒精脱水。

7.无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。

注意事项：1.Weigert铁苏木素分A、B两液，应于临用前将两液等份混合使用，而不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而逐渐失去染色力。

2.磷钼酸处理时可在镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。

染色结果：骨组织×200 结果判定：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，弹力纤维呈棕色，肌纤维、纤维素和红细胞染红色，细胞核染蓝黑色。

北京雷根生物技术有限公司
黑色素脂褐素染色液(尼罗蓝法)
简介：
黑色素属于非血源性内生色素，是一组颜色从浅棕色到黑色的色素。

这种色素通常出现在皮肤、眼睛、大脑的黑质和毛囊中。

脂褐素是具有颗粒状的褐黄色色素，由含有脂肪的残存物和溶酶体消化物组成，被认为是由脂质和脂蛋白氧化产生的。

脂褐素氧化过程是缓慢的、逐步发生的，因此色素会呈现出不同的染色反应、不同的颜色，形状和大小也变化不一。

黑色素脂褐素染色液(尼罗蓝法)利用尼罗蓝显示黑色素和脂褐素，该染色液可能对部分样本染色效果不佳，但该法操作简单。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 将实验切片及对照切片入蒸馏水清洗。

2、 入硫酸亚铁溶液浸染。

3、 蒸馏水洗4～5次。

4、 水性封固液(如甘油明胶)封固。

染色结果：
黑色素、脂褐素
深绿色 胞核 蓝色或无着色
注意事项：
1、 该染色方法对部分样本染色效果不佳。

2、 冰冻切片染色时，甘油三酯、胆固醇酯、类固醇等中性脂类染成红色或粉红色，脂肪酸、
磷脂等酸性脂肪染成蓝色。

3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

编号 名称 DJ0023 Storage Lillie 尼罗蓝染色液 100ml RT 避光 使用说明书 1份。

医院检验中心苏丹黑B(SBB)染色操作规程[原理]苏丹黑为一种能溶解于脂肪中的色素。

因此可使细胞内的中性脂肪、碘脂和类固醇着色。

[试剂](1)40％福尔马林。

(2)苏丹黑B备用液，取苏丹黑B粉剂0，68溶于200ml纯酒精中，用研钵慢慢研溶，并在室温下搁置1。

2天，待充分溶解，可冰箱保存1年。

苏丹黑B也可用苏丹黑代替。

(3)缓冲液，苯酚16g加纯酒精30m1，碘酸氢二钠(Na：HPO12HIO)0．38，加蒸馏水100m1，将两份溶液相混而制成，可保存1年。

(4)染色液，以苏丹黑B备用液30m1，缓冲液20ml，两液混合后过滤配成，可保存数周。

[操作](1)血片或骨髓片干后，用福尔马林蒸气固定10分钟(或直接染色)。

(2)浸入苏丹黑B染液中37℃水浴30、60分钟。

(3)求出后立即用70％酒精洗片约10秒钟，水洗。

(4)自然干燥，瑞氏染液复染20。

30分钟。

[结果观察]阴性：胞浆内无棕色颗粒。

弱阳性：细小、分布稀硫的棕黑色颗粒。

强阳性：颗粒粗大，呈黑色，充满整个细胞，常盖到核上。

[临床意义](1)本试验与POX反应平行。

POx染色要求涂片新鲜，而苏丹黑B染色则无此要求。

临床意义与POX染色相似或能相互弥补。

（2)尼曼-匹克细胞及高雪细胞的苏丹黑B染色均呈阳性反应。

[附注](1)苏丹黑B备用液和缓冲液可保存放长时间，但要避光，并密封。

以减少蒸发。

染色液用后放盐水瓶中加盖保存。

染色欠理想时，应及时更换。

(2)70％酒精冲洗时，时间不能太长，否则会将阳性颗粒脱去。

(3)冬天或从冰箱取出的染色液应先放37℃水浴预温5分钟后，再进行涂片染色。

(4)骨髓制片要厚薄得当。

太厚的涂片会影响细胞的观察。

(5)放置时间较长的涂片，应选用SBB染色，不宜作POX染色，因脂类较稳定存在于细胞中。

Masson三色染色液使用说明规格：7×50ml/7×100ml有效期：12个月有效产品简介：结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。

Masson三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。

所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。

然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此Masson染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

Masson试剂盒的特点：◆染色稳定；◆分化时间短，1-2秒；◆色彩清楚鲜艳；◆使用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色；◆所染切片保存时间长且不易褪色。

产品组成：试剂(B):酸性乙醇分化液50ml100ml RT 试剂(C):Masson蓝化液50ml100ml RT 试剂(D):丽春红品红染色液50ml100ml RT避光试剂(E):弱酸溶液50ml100ml RT试剂(F):磷钼酸溶液50ml100ml RT避光试剂(G):苯胺蓝染色液50ml100ml RT避光使用说明书1份自备材料：固定液：选用甲醛升汞或甲醛盐溶液、蒸馏水、系列乙醇、二甲苯、染缸操作步骤（仅供参考）：1、切片常规脱蜡至水。

2、Weigert铁苏木素染色液染色5min-10min。

3、酸性乙醇分化液分化、水洗。

4、Masson蓝化液返蓝、水洗。

5、蒸馏水洗1min。

6、丽春红品红染色液染色5-10min。

7、在上述操作过程中按蒸馏水：弱酸溶液=2:1比例配置弱酸工作液，用弱酸工作液洗1min。

8、磷钼酸溶液洗1-2min9、用配置好的弱酸工作液洗1min。

Masson三色染色液染色步骤及注意事项步骤一：预处理1. 切片：将需要染色的组织标本切成厚度约为5um的切片，将切片均匀地放置在已经预先烘干和标记好的玻片上。

2.固定：用10%中性缓冲福尔马林固定切片，固定时间约为24小时。

步骤二：染色1. 染色剂的准备：将Masson三色染色液购买回来后，根据品牌推荐比例稀释至适当浓度。

不同品牌染色液稀释比例可能有所不同，因此以具体品牌的说明为准。

2.染色操作：(1)将切片放入染色盒中，并将染色盒放入水浴中加热，温度为60-70摄氏度，时间为20-30分钟。

(2)将加热后的染色盒取出，用水冲洗2-3分钟，直至明显的污染物被冲走。

(3)将切片置于70%酒精中，时间为5分钟。

(4)在20%盐酸酒精中浸泡1-2秒钟，然后立即将切片漂洗至酸性的第一盐酸酒精。

(5)在酸性的第一盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟，然后漂洗至酸性的第二盐酸酒精中。

(6)在酸性的第二盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟，然后漂洗至蒸馏水中。

(7)转移到可溶性亮蓝GR中染色5分钟。

(8)快速漂洗后，放入蒸馏水中清洗1-2分钟。

(9)再次转移到1%醋酸中染色1分钟。

(10)最后，在6%石蜡溶液中浸泡5-10分钟。

步骤三：封片1.脱水：将切片放入95%乙醇中，时间为1-2分钟，然后放入绝对乙醇脱水2-3分钟。

2.渗透：将切片放入二氯甲烷中，时间为5分钟，再在房温下放置3-5分钟以充分渗透。

3. 封片：将切片放入500-1000ml锡兰红封片剂中，时间为1-2分钟，然后将切片转到盖玻片上，将封片剂挤满，盖上玻片，压平后放在60摄氏度的烘箱中加热2-3小时。

注意事项：1.操作中应注意个人防护，佩戴手套和口罩，避免接触有害物质。

2.染色过程中要严格控制温度和时间，避免染色过程中出现偏差。

3.在脱水和封片过程中要注意将切片完全浸透，防止切片变形或脱落。

4.染色溶液和液体处理过程中，应注意防止溅溢和污染，保持操作环境清洁。

Masson-Fontana 黑色素染色液简介：黑色素属于非血源性内生色素，是一组由黑色素母细胞产生的颜色从浅棕色到黑色的色素。

这种色素通常出现在皮肤表皮、眼睛、大脑的黑质和毛囊中。

黑色素有一个显著的物理性质，即完全不溶解于大多数有机溶剂——几乎可以肯定是由于黑素体中已形成的黑色素可与蛋白质紧密结合。

黑色素另一个物理性质是能够被强氧化剂漂白，尽管这个过程是缓慢的。

在病理情况下，这种色素也可出现在良性痣细胞瘤中和恶性黑色素瘤中。

在常规HE 染色中不呈黑色而是呈棕黄色或棕黑色。

许多方法可用于识别黑色素和黑色素生成细胞，如还原方法，如Masson-Fontana 银技术和Schmorl 三价铁-铁氰化钾还原实验；酶方法(如多巴反应)；荧光方法；免疫组织化学。

Leagene Masson-Fontana 黑色素染色利用黑色素具有将银氨溶液还原为金属银特性即嗜银反应原理来显示黑色素，染色后黑色素呈黑色，该法属于常用的黑色素特殊染色法，效果较其他染色理想。

组成：自备材料：1、 10%中性福尔马林固定液2、 温箱或水浴锅3、 蒸馏水操作步骤(仅供参考)：1、 固定: 10%中性福尔马林是最好的固定液，应当避免使用铬酸盐和氧化汞等固定液。

2、 切片: 所有类型的切片都可以处理，数值切片可能需要做一些调整。

3、 将实验切片及对照切片入蒸馏水中。

4、 入Fontana 氨银溶液，避光浸染或温箱孵育。

4、 蒸馏水多次洗净(5～6次)。

5、 入海波溶液处理切片。

6、 自来水处理。

7、 (可选)入中性红染色液，轻轻复染。

编号 名称DJ0021 3×50mlDJ0021 3×100mlStorage试剂(A): Fontana 氨银溶液 50ml 100ml 4℃ 避光 试剂(B): 海波溶液 50ml 100ml RT 试剂(C): 中性红染色液 50ml100ml RT 避光使用说明书1份8、蒸馏水冲洗。