结核杆菌特异性细胞免疫反应监测

结核菌素试验的原理结核菌素试验是一种用于检测结核病的常规诊断方法，也被称为结核菌素皮内试验。

它是通过皮内注射结核菌素制剂，观察患者在注射后48-72小时内是否产生局部的皮肤反应来判断结核菌感染的一种方法。

结核菌素试验的原理主要是基于人体对结核菌素的过敏反应。

结核菌素是一种由结核分枝杆菌制备的蛋白质衍生物，其主要成分为结核分枝杆菌抗原。

当人体感染结核分枝杆菌后，免疫系统会产生特异性的细胞免疫应答，包括T细胞介导的细胞免疫和B细胞介导的体液免疫。

在结核分枝杆菌感染后，机体内的T淋巴细胞会对结核菌素产生超敏反应，导致注射结核菌素后，感染者的皮肤在注射部位出现明显的局部红肿和硬结。

结核菌素试验的结果是根据患者注射后48-72小时内皮肤反应的大小来判断的。

通常来说，如果患者对结核菌素有过敏反应，注射部位会出现直径大于5mm的硬结或红肿，这被认为是阳性反应，提示患者可能感染了结核分枝杆菌。

而如果注射部位没有出现硬结或红肿，或者出现的反应小于5mm，这被认为是阴性反应，提示患者可能未感染结核分枝杆菌。

结核菌素试验的原理基于人体的免疫反应机制，因此具有一定的特异性和敏感性。

但需要注意的是，结核菌素试验只能判断患者是否感染了结核分枝杆菌，而不能确定患者是否患有活动性的结核病。

因此，在临床实践中，结核菌素试验通常需要结合其他临床检查和病史资料来进行综合判断。

总之，结核菌素试验是一种简便、安全、可靠的结核病诊断方法，其原理是基于人体对结核菌素的过敏反应。

通过观察注射后48-72小时内的皮肤反应大小，可以初步判断患者是否感染了结核分枝杆菌。

结核菌素试验在结核病的早期诊断和流行病学调查中具有重要的意义，但在临床实践中需要综合考虑患者的临床表现和其他检查结果来进行综合判断。

近年来，结核病仍然是一个重要的公共卫生问题，它位居全球死亡原因第9位，是死亡人数最多的单一传染病，2016年，大约1040万人发病，其中56%发生在印度、印度尼西亚、中国、菲律宾和巴基斯坦[1]。

为有效防控结核病流行，早期诊治活动性肺结核病显得尤为重要。

目前虽然可以联合临床表现和影像学、病理学及微生物学检查诊断结核病，但在早期判断是否为活动性肺结核仍很困难。

痰培养和痰涂片方法检测结核杆菌的阳性率低，通过检测宿主对结核杆菌特异性免疫反应的技术已广泛应用于临床检验，包括结核菌素试验和γ-干扰素释放试验[2-3]。

接种过卡介苗或发生非结核分枝杆菌感染，均会降低结核菌素试验的特异性，而免疫功能不全则会降低结核菌素试验的敏感性，这均降低了结核菌素试验的诊断价值。

结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测(QuantiFERON-TB Gold)(以下简称QFT)属于γ-干扰素释放实验中的一种[4]。

2017年1-10月收治疑似结核患者163例，评估QFT 试验在活动性肺结核患者中的诊断价值。

资料与方法2017年1-10月收治疑似结核患者163例，男124例，女39例；平均年龄(32±14)岁。

以上患者HIV 抗体均为阴性，均未进行过抗结核治疗，未使用免疫抑制剂且无严重肝肾功能损害。

诊断标准及分组情况：根据肺结核诊断标准(WS 288-2008)对患者进行诊断：肺结核的诊断是以细菌学实验室检查为主，结合胸部影像学、流行病学和临床表现、必要的辅助检查及鉴别诊断，进行综合分析作出的。

其中若痰涂片找抗酸杆菌阳性，则为涂阳肺结核组；若痰涂片找抗酸杆菌阴性，则为涂阴肺结核组。

非肺结核组，经正规抗感染治疗2周复查胸部CT 病灶吸收者。

试验方法：163例患者均进行3次痰涂片找抗酸杆菌检查，QFT 检测，CT 检查。

QFT 检测方法：取患者静脉血6mL 至肝素抗凝管按QFT 检测试剂盒操作规范进行。

统计学方法：采用SPSS 17.0统计学软件分析数据。

结核分枝杆菌特异性细胞因子 (IFN-γ、IL-2)联合检测在肺外结核诊断中的临床价值【摘要】目的：分析结核分枝杆菌特异性细胞因子(IFN-γ、IL-2)联合检测（双因子检测）在肺外结核诊断中的临床应用价值。

方法：对本院2020年11月-2021年9月入院的63例临床诊断为肺外结核的患者以及52例非结核患者进行双因子联合检测、 -干扰素释放试验（T-spot检测）以及PPD检测，对结果进行分析。

结果：对入组的115例患者行双因子联合检测、T-spot检测及PPD检测，对检测结果进行分析得，双因子并联检测、串联检测、T-spot检测和PPD检测灵敏度分别为95.2%、84.1%、93.7%和95.2%；双因子并联检测、串联检测、T-spot检测和PPD检测特异性分别为94.2%、100.0%、98.1%和40.4%。

双因子并联检测灵敏度高于T-spot检测，串联检测特异性高于T-spot检测和PPD检测。

结论：在肺外结核的诊断中，双因子并联检测的灵敏度高于T-spot检测，使用双阳性为阳性指标的串联检测的特异性高于T=spot和PPD检测。

双因子检测在传统 -干扰素释放试验基础上增加了对IL-2的检测，实现了对肺外结核感染的特异性检出，在肺外结核的诊断上有非常重要的临床价值。

【关键词】肺外结核，IFN-γ，IL-2，双因子结核病是全世界十大死亡原因之一，根据2020年WHO发布的全球结核病报告显示，中国作为全球的30个结核病高负担国家之一，2019年结核病发病率为58/10万人，且新发患者数达到83.3万1,2, 其中很大一部分是肺外结核的患者，相比于肺内结核这一部分患者极易被忽略，是不可忽视的结核病传染源。

目前临床上有关肺外结核的诊断方式大多具有一定的局限性。

主要诊断方式包括患者患处组织以及穿刺物的抗酸染色以及结核分枝杆菌培养，结核菌素试验，针对结核分枝杆菌的抗体检测法，荧光定量PCR法，和γ干扰素释放试验等3-7。

检验时间：
每周一至周四抽血，周五中午之前出结果，周五不要抽血送检
开立方法：
结核杆菌特异性细胞免疫反应检测”拼音码JHGJXBMY，收费800/次。

临床意义及检验原理：
机体感染结核杆菌后，血液中的记忆性淋巴细胞会在再次接触结核杆菌特异性抗原时，产生T -干扰素。

应用基因工程技术将相应蛋白修饰后表达为结核杆菌特异性抗原，刺激全血，血液中会产生特异性T -干扰素，采用酶联免疫法检测丫-T扰素，可据此判断机体是否存在针对结核杆菌特异性的细胞免疫反应。

标本采集要求及注意事项：
1. 无菌采集新鲜肝素（绿管）抗凝静脉血至少3mL。

2. 溶血或乳糜血通常不会影响实验结果。

3. 黄疸样本不能用丁测定。

4. 不要使用微生物污染的样本。

5. 大环内酯类免疫抑制剂FK506患者的样本不适合用此试剂盒检测。

6. 采血后要及时送检。

分离的血浆样本可存丁2-8 C放置，在2周内使用。

结果判读：
N （阴性对照）、P （阳性对照）、T （检测）
当NR 0.5IU时，（T-N）/ （P-N）>0.60时判为阳性，否则为阴性；当
N >0.5IU时，（T-N） / （P-N）>0.85时判为阳性，否则为阴性；
方法的限制因素：
此方法不适用丁区分潜伏性感染和活动性活动性结核，不适用丁判断结核病
的严重程度或疾病进展情况。

T-SPOT与结核菌素实验对结核病患者的临床诊断价值分析李磊;孙超;曲德鑫;刘福奎;马彦【摘要】目的分析T-SPOT与结核菌素实验对结核病患者的临床价值.方法选取2015年12月～2017年12月疑似结核病患者202例,经过实验组织学检验100例患者确诊为结核病患者,进行外周血T-SPOT检测和结核菌素实验,比较两组患者诊断结果.结果以最终实验组织学检验为金标准,T-SPOT阳性检出率明显优于结核菌素检出率,差异具有统计学意义(P＜0.05),T-SPOT监测灵敏度、特异度、准确度均优于结核菌素实验,差异具有统计学意义(P＜0.05),T-SPOT检测Kappa值为0.985,说明一致性良好,结核菌素实验检测Kappa值为0.512,说明两者一致性中等.结论利用T-SPOT诊断结核病患者,敏感度高且特异性明显,对结核和肺外结核都有很好的应用价值,值得推广应用.【期刊名称】《口岸卫生控制》【年(卷),期】2019(024)001【总页数】3页(P14-15,19)【关键词】结核菌素实验;外周血T-SPOT检测;诊断【作者】李磊;孙超;曲德鑫;刘福奎;马彦【作者单位】烟台国际旅行卫生保健中心山东,烟台,264000;烟台国际旅行卫生保健中心山东,烟台,264000;烟台国际旅行卫生保健中心山东,烟台,264000;烟台国际旅行卫生保健中心山东,烟台,264000;中国人民解放军第一○七医院山东,烟台,264000【正文语种】中文【中图分类】R52世界卫生组织公布危害人类健康的传染病之一是结核病，是危害身体健康的潜在危险因素［1］。

目前，随着空气污染日益严重，结核病患者人数也逐年递增，如何快速准确的诊断结核病一直是医学领域关注的问题。

传统的结核菌素皮肤实验，受到卡介苗接种的局限作用，诊断敏感度、特异性不高，不能广泛应用。

目前，以T 细胞为免疫基础的体外干扰素释放实验在检测结核杆菌的过程中，具有良好的特异性和灵敏度，诊断正确率较高。

结核分枝杆菌特异性细胞因子（INF-γ、IL-2）联合检测在结核病诊断中及预后的应用价值分析【摘要】目的：分析结核分枝杆菌特异性细胞因子（INF-γ、IL-2）联合检测在结核病诊断中及预后结核患者的诊断价值。

方法：连续收集广州市胸科医院2021年6月-2021年12月共151例，其中103例结核患者，48例非结核患者，统计分析两组患者检测双因子的结果。

结果：对151例患者进行双因子检测，并联检测、串联检测的灵敏度分别为92.2%和81.6%；并联检测、串联检测的特异度分别为91.7%和100%；并联检测、串联检测的临床符合率分别为92.1%和84.8%；30例结核患者在停药3个月后IFN-γ和IL-2的平均表达水平有明显下降趋势。

结论：双因子联合检测具有极高的灵敏度、特异度和临床符合率，在结核病的诊断上有非常重要的临床价值；IFN-γ和IL-2的表达水平在预后结核患者的监测上有着很好的应用价值。

【关键词】结核分枝杆菌；IFN-γ；IL-2；双因子结核病是一种由结核分枝杆菌感染引起的传染性疾病。

中国是结核病高负担国家，2020年结核病发病率为59/10万，新发患者数目达84.2万[1]。

目前临床上对于预后患者的诊断方式具有一定的局限性，主要诊断方式为患者痰样本的抗酸染色以及结核分枝杆菌培养，因此一种方便快速，准确高效地判断预后患者的康复情况的方法是目前临床上十分迫切的。

近年来γ干扰素释放试验在各临床中心开展应用，其作为新型免疫学诊断方法，已被用于结核病的辅助诊断中[2]。

本研究将使用该试剂盒，研究结核特异性IFN-γ、IL-2联合检测对结核病诊断以及监测预后结核患者的应用价值。

1材料与方法1.1研究对象选择2021年6月至2021年12月广州市胸科医院收治的151例患者为研究对象，根据诊断结果将患者分为结核组和非结核组。

其中结核组103例，平均年龄36.7年；非结核组48例，平均年龄53.6岁。

1.2研究方法采集患者外周静脉血（每份不少于4mL）加入等体积RPMI-1640混匀后，以2：1加入到淋巴细胞分离液上层，室温梯度离心后吸取单个核细胞（PBMCs），计数后，将结核特异性融合蛋白与PBMC细胞37℃共培养16-20小时。

关于开展“结核特异性细胞因子IFN-γ和IL-2联合检测”项目可行性报告××医院×年×月×日目录一、项目背景介绍 (3)（一）结核病的现状 (3)（二）我国结核病临床诊断的痛点、难点 (3)（三）现有结核病诊断技术的优缺点 (5)二、项目的国内外研究进展 (6)（一）细胞因子IFN-γ、IL-2可作为“结核病辅助诊断”标志物 (6)（二）IL-2的联合检测，有助于弥补IGRA技术的不足 (6)三、项目开展的临床价值 (8)四、双因子试剂盒简介 (11)五、同类产品比较分析 (13)六、项目开展的效益分析 (15)七、项目开展的实验室设备要求 (16)八、迪澳生物简介 (17)九、参考文献 (18)一、项目背景介绍（一）结核病的现状结核病是一种严重危害人类健康的慢性呼吸道传染病，其病原体是结核分枝杆菌，是人类所知的最古老的一种传染病。

当结核病患者将细菌排入空气时，结核分枝杆菌就会传播，例如通过咳嗽等。

该疾病通常累及肺部（肺结核），但也可累及其他部位（肺外结核病）。

近10年来，由于高感染人群和高危人群的流动、结核杆菌耐药菌株的出现、卡介苗免疫效果偏低以及人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的蔓延等原因，结核病以极其迅猛的势头再次肆虐全球。

据世界卫生组织（WHO）《2020年全球结核病报告》显示，全球结核潜伏感染人群接近20亿。

2019年，全球新发结核病患者约996万，约有121万人死于结核病。

而我国结核病的流行形势亦非常严峻，我国是全球30个结核病高负担国家之一，位居全球第3位，每年新报告肺结核患者约83.3万例，位居甲乙类传染病第2位。

结核病的传染主要是发生在病人未被发现并进行治疗之前，1名结核病患者平均可传染15人，而目前全球普遍存在结核病诊断不足以及病例低报等现象。

为进一步遏制结核病流行，推进健康中国建设，2019年5月国家卫生健康委、国家发展改革委、教育部、科技部、民政部、财政部、国务院扶贫办和国家医保局联合制定了《遏制结核病行动计划（2019—2022 年）》，并指出：结核病的早期快速诊断是预防和控制结核病蔓延的关键。

QB—SPOT结核实验
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP 10）分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。

TBspot试验通常指T-SPOT试验，即结核杆菌感染T细胞斑点试验，又称为结核菌感染干扰素释放试验，是利用结核特异性抗原，通过酶联免疫斑点技术，检测受试者体内是否存在结核效应的T淋巴细胞，从而判断被检查者是否感染结核杆菌。

该检查的原理是结核杆菌感染之后，T淋巴细胞会形成免疫记忆。

通常在体外分离到T淋巴细胞之后，培养增殖T细胞的同时，用相应的特异性抗原，进行刺激，激活T细胞记忆，有记忆的细胞则会分泌大量的干扰素。

结核T-SPOT检查即为结核菌T细胞斑点检测，是临床用于诊断结核病的新型检查方法。

通过检测干扰素的量，判断该细胞是否存在结核感染形成的记忆，进而通过进一步的反应判断是否存在结核菌感染。

但它的结果不能作为单独或决定性诊断活动性结核的证据，阳性结果仅提示患者体内存在结核杆菌特异性的效应T细胞。

但是否为活动性结核，则需要结合患者的临床症状及其他检测指标，进行综合判断。

现在已经有多项研究的结果显示，T-SPOT试验只能判断是否感染过结核，但无法鉴别活动性结核与潜伏性结核，因此对于活动性结核的诊断价值有限。

阐述结核菌素试验的原理、结果及实际应用。

结核菌素试验是一种常用的诊断结核病的方法，它的原理是通过注射结核菌素来检测人体对结核菌的免疫反应，从而判断是否感染结核病。

本文将从原理、结果和实际应用三个方面来详细阐述结核菌素试验。

一、原理结核菌素试验是一种皮内试验，它的原理是利用结核菌素刺激人体免疫系统，观察皮肤反应，从而判断是否感染结核病。

结核菌素是一种由结核分枝杆菌培养物中提取的蛋白质，它能够刺激人体免疫系统产生特异性细胞免疫反应。

在结核菌素试验中，医生会将结核菌素注射到患者的皮下，然后观察注射部位的皮肤反应。

如果患者感染了结核病，那么注射部位的皮肤会出现红肿、硬结等反应，这是由于免疫系统对结核菌素产生了特异性反应。

如果患者没有感染结核病，那么注射部位的皮肤不会出现明显的反应。

二、结果结核菌素试验的结果通常分为阳性和阴性两种。

阳性表示患者感染了结核病，阴性表示患者没有感染结核病。

但是，需要注意的是，结核菌素试验并不能直接判断患者是否患有结核病，它只能判断患者是否感染了结核菌。

因此，在结核菌素试验的结果判断中，需要结合患者的病史、临床表现、影像学检查等多种因素进行综合分析。

三、实际应用结核菌素试验是一种简单、安全、无创的诊断方法，它广泛应用于结核病的诊断和预防。

具体应用包括以下几个方面：1. 诊断结核病：结核菌素试验可以作为结核病的辅助诊断方法，特别是对于早期结核病的诊断有很大的帮助。

在结核病的诊断中，结核菌素试验通常与胸部X线检查、痰液检查等其他检查方法结合使用，以提高诊断的准确性。

2. 筛查结核感染者：结核菌素试验可以用于筛查结核感染者，特别是对于高危人群的筛查有很大的帮助。

高危人群包括结核病患者的亲属、医护人员、糖尿病患者、艾滋病患者等。

3. 评估结核疫苗的免疫效果：结核菌素试验可以用于评估结核疫苗的免疫效果。

结核疫苗是一种预防结核病的有效方法，但是其免疫效果存在差异。

通过结核菌素试验可以评估接种结核疫苗后人体对结核菌的免疫反应，从而判断疫苗的免疫效果。