次乌头碱对心肌细胞Ca_2_调控蛋白mRNA表达的影响

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次乌头碱对心肌细胞钠通道SCN5A及钠钙交换蛋白 mRNA表达的影响

次乌头碱对心肌细胞钠通道SCN5A及钠钙交换蛋白 mRNA表达的影响李志勇;谭鹏;朱坤杰;李飞;孙建宁【期刊名称】《广东医学》【年(卷),期】2011(32)20【摘要】目的观察次乌头碱(HA)对原代培养乳大鼠心肌细胞钠(Na)通道SCN5A 亚基、钠钙交换蛋白(NCX)mRNA表达的影响.方法体外培养乳大鼠心肌细胞,采用RT-PCR法测定Na通道SCN5A及NCX mRNA表达.结果 HA作用15 min 时,60和120 μmol/L HA均能增加心肌细胞膜Na通道SCN5A及NCX 的mRNA表达量(P<0.05);动态观察HA对心肌细胞上述基因表达的影响,60 μmol/L HA对心肌细胞作用15及60 min可引发Na通道SCN5A及NCX mRNA的表达量增多(P<0.05).结论次乌头碱(≥60 μmol/L)可通过增加心肌细胞膜Na通道SCN5A、NCX mRNA表达,激活L-Ca通道,参与细胞内钙超载及心律失常的发生过程,在乌头碱类天然药物中毒时干预上述靶点基因改变可缓解中毒性心律失常的发生.【总页数】3页(P2637-2639)【作者】李志勇;谭鹏;朱坤杰;李飞;孙建宁【作者单位】中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,北京,100081;北京中医药大学中药学院,北京,100012;齐齐哈尔医学院基础医学院机能教研室,黑龙江齐齐哈尔,161006;北京中医药大学中药学院,北京,100012;北京中医药大学中药学院,北京,100012【正文语种】中文【相关文献】1.抗钠钙交换体特异位点抗体对心肌钠钙交换电流的激活作用及其与钙通道、钠泵的交叉反应 [J], 白晓洁;吴博威2.缬沙坦对心力衰竭大鼠心肌细胞钙通道和钠-钙交换体电流的影响 [J], 邓春玉;林曙光;吴伟康;钱卫民;阮小薇;吴书林3.黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞钙通道及钠钙交换载体的效应 [J], 刘恭鑫;杨英珍;顾全保;郭棋;虞勇4.FK506结合蛋白12.6基因转染对心力衰竭心室肌细胞钙通道和钠-钙交换器电流的影响 [J], 李德;伍卫;黄至斌;方昶5.心肌细胞钠钙交换通道及其功能 [J], 张建保;王斯刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

乌头碱对培养新生大鼠心室肌细胞Connexin43蛋白磷酸化状态及其胞内[Ca~(2+)]振荡模式的影响

乌头碱对培养新生大鼠心室肌细胞Connexin43蛋白磷酸化状态及其胞内［Ca~（2+）］振荡模式的影响【研究背景】乌头属植物（Aconitium plants）是被子植物亚门毛茛科中一类重要的有毒植物,也是我国最早有记载的有毒植物之一;全世界已知的就有350种以上,主要生长在北半球温带地区;在国内,目前已被鉴定的约200余种,广泛分布于除海南以外的其他省区。

乌头属植物及其制剂,在我国民间和传统中医治疗中已有二千多年的使用历史,疗效确切。

现代药理学研究证实,乌头类药材大多具有抗炎消肿、麻醉止痛、强心降压、免疫抑制以及肿瘤抑制等广泛功效,有较高的药用价值。

但该类药材,特别是其植物块根中,多含有剧毒的二萜类双酯型生物碱–乌头碱（aconitine）,其治疗量与中毒量或致死量接近,使用中因个体对乌头耐受性的差异、用法不当,以及误服或投毒等原因而发生中毒、甚至死亡的报道屡见不鲜。

近年来在日本和欧美国家,利用乌头块根或乌头碱纯品服毒自杀或投毒他杀的案例也时有报道。

乌头碱主要作用于神经系统和心脏。

严重的心律失常,尤其是室速和室颤,是导致其中毒死亡的主要原因。

以往运用离子通道结构分析和全细胞膜片钳技术等研究手段证实,乌头碱能与心肌细胞膜电压门控型Na+通道结合,抑制其失活,使Na+持续内流、延长细胞膜除极化时程而引发心律失常。

但值得注意的是,近年来的实验和临床研究认为,心肌细胞间电耦联的失衡与心律失常的发生关系更为密切。

因此,研究乌头碱对分离的单个心肌细胞离子通道的作用,不能全面反映其对作为功能性合胞体的心肌细胞群的整体结构和功能的影响。

另一方面,有学者曾推测,既然乌头碱能作用于心肌细胞膜Na+通道,使Na+持续内流,那么在理论上,可能会通过Na+-Ca2+交换机制而导致胞内游离Ca2+浓度升高。

乌头碱对心肌细胞DNA的损伤作用及其机制研究的开题报告

乌头碱对心肌细胞DNA的损伤作用及其机制研究的开题报
告
一、研究背景与意义
乌头碱一直被广泛应用于中药治疗各种疾病，但乌头碱含量很高，易对人体心肌细胞产生毒性。

目前大部分研究集中在乌头碱对心肌细胞代谢损伤的影响方面，较少关注其对心肌细胞DNA的损伤作用及其机制。

因此，本研究旨在探究乌头碱对心肌细胞DNA的影响和机制，以期为中药合理应用提供依据。

二、研究内容和方法
1. 研究内容
通过细胞实验研究乌头碱对心肌细胞DNA的损伤作用及其机制。

2. 研究方法
(1) 细胞培养：选用体外培养的小鼠心肌细胞作为实验对象。

(2) 细胞毒性：采用MTT法检测不同浓度乌头碱处理后心肌细胞的存活率。

(3) DNA损伤：采用单细胞凝胶电泳（SCGE）法检测不同浓度乌头碱处理后心肌细胞DNA单链断裂及碱基损伤程度。

(4) 分子机制：利用Western blot和实时荧光定量PCR技术检测不同浓度乌头碱处理后心肌细胞DNA修复相关蛋白和miRNA表达的变化。

三、研究预期结果
通过本研究，我们可以深入了解乌头碱对心肌细胞DNA的损伤作用及其机制，为中药治疗及毒性研究提供重要的实验数据和理论参考。

同时，本研究也为探究其他中药对心肌细胞DNA的影响提供了科学的参考方法和思路。

次乌头碱对心肌细胞钠通道SCN5A及钠钙交换蛋白mRNA表达的影响

２】显微镜下观察．
刚接种的心肌细胞尚未贴壁，呈
圆形，悬浮于培养液中。培养３４６— ８ｈ后，肌细胞心已全部贴壁生长，细胞核凸出明显，壁后细胞为梭贴形、菱形或多角形，出伪足，成不规则形并呈放射伸形状排列的细胞簇，出现自发节律性搏动。本实验制可备的心肌细胞平均存活率＞９％，免疫化学染色鉴０经定为心肌细胞，无成纤维细胞污染。
３３—３２６７．
ｄｃｄｔｏ［］ａｅ，０１７（）１２ —１３．ｕｅｕｒＪ．ＣｎＲｓ２１，１５：９４９２ｍｓ
［ＦＥＤＳＳ，ＯＧＯＫ．Ａｎｖｌｅｅｉｓｓｍｔｅｅｔｒｔｎ— ６］ＩＬＳＮｏｅｇｎｔｙｔｄｔｃｐｏｅｃｅｏｉ
工程材料有限公司：ｉｔｔｎＤＡＳｎｈｓｉ批ＦｒｒｄｃＮｙｔｅｉＫｔｓＳａｓ（号０００３）Ｆｒｅｔ公司；ＹＲＧｅｎＰＲＭｓｒ０２６４，ｅｎａｍｓＳＢｒｅＣａｔｅＭｉ（号４０９５）Ａｐｅｉｙｔｓ司。Ｃｒ型ｘ批３４１５，ｐｌｄＢｏｓｍ公ｉｓｅＪ＇Ｉ
０６８５１，国Ｓｇａ８Ｋ３２）美ｉ公司；ｍ胰蛋白酶、胶原酶 Ⅱ型、四噻唑兰、乙二胺四乙酸二钠，国Ａｒｅ公司；美ｍｅｏｓ５一
伤机体神经系统与心血管系统，突出的症状为心律最

何首乌饮对衰老生精细胞p53、Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

何首乌饮对衰老生精细胞p53、Bcl-2和Bax mRN俸达的影响**国家自然科学基金项目(81673714) A通讯作者单博颖I薛亚然梁思冷张研［，齐峰仏，牛嗣云仏(1•河北大学医学院,河北保定071000,2.河北大学附属医院；3.保定市第一医院)【摘要】fl的:探讨何首乌饮对衰老生精细胞p53、Bcl-2、Bax mRNA表达的影响。

方该採用自由基氧化损伤法建立生精细胞衰老模型，采用实时荧光定量PCR法检测各组生精细胞p53、Bcl-2和Bax mRNA的表达情况。

辖果:衰老组生精细胞p53、Bax mRNA的表达水平及Bax/Bcl-2比值明显高于正常组(P<0.05),Bcl-2 mRNA的表达水平明显低于正常组0<0.05)；何首乌饮干预组p53、Bax mRNA的表达水平及Bax/Bcl-2比值明显低于衰老组(FV0.05),Bcl-2mRNA的表达水平明显高于衰老组(PV0.05)。

借袍:何首乌饮可通过上调衰老生精细胞Bd-2的表达、下调p53和Bax的表达抑制生精细胞凋亡，发挥延缓生精细胞衰老的作用。

【关键词】何首乌饮滾老;生精细胞;p53；Bax；Bd-2；凋亡【中图分类号】R394.3【文献标识码】A【文章编号】1004-6879(20⑼03-0185-05 EFFECTS OFHESHOUWUYINONP53,BCLr2ANDBAXMRNAEXPRESSIONINA(aNGSPERMAT NICCELLSSHAN Bo-ying,XUE^-ran,LIANG Si,etal(Medical College qfHebei University,Hebei Banding071000,China) [ABSTRACTlObjedive:To investigate the effects of Heshouwuyin on p53,Bcl-2and Bax mRNA expression in aging spermatogenic cells.Methods:The spennalogenic cells aging model was established by free radical oxidative damaging method,and RT■矽CR was used to detect the p53,Bcl-2and Bax mRNA expression in spermatogenic cells in each groiq). Results:The p53,Bax mRNA egression and Bax/Bcl-2of spennatogenic cells in aging group were significantly higher than those in normal groiqj@M105)Mile Bcl-2mRNA expression was significantly lower@M105)・The p53,Bax mRNA expression and Bax/Bcl-2of spennatogenic cells in Heshouwuyin gro叩were significantly lower than those in aging gro叩^<0.05),while Bcl-2mRNA expression was significantly higher Q0.05).Conclusioiis:Heshouwuyin can inhibit^optosis of s pennatogenic cells by叩regulating Bcl-2egression and downregulating p53and Bax expression,so it can delay aging of spermatogenic cells.[KEY WORDS]Heshouwuyin;Aging;Spermatogenic cells;p53;Bax;Bcl-2;Apoptosis细胞凋亡在睾丸细胞的分化、精子的成熟及存活中发挥重要作用叫研究显示,生精细胞异常凋亡会弓废男性不育症導役中药复方在治疗男性不育症和延缓衰老方面发挥着重要作用。

乌头类生物碱对心肌的毒性作用及分子毒理学研究进展

乌头类生物碱对心肌的毒性作用及分子毒理学研究进展
刘艳;章诗伟;周兰;刘良
【期刊名称】《中国法医学杂志》
【年(卷),期】2009(024)006
【摘要】乌头属植物是被子植物亚门毛茛科中一类重要的有毒植物,也是我国最早有记载的药用有毒植物之一;其块根中多含有剧毒的二萜类双酯型生物碱-乌头碱,因个体差异、用法不当以及误服或投毒等原因而发生乌头中毒、甚至死亡的报道屡见不鲜.目前,对乌头碱的研究多局限在临床救治方面,缺乏对乌头碱毒性作用机制研究.本文参考国内外相关文献资料,对乌头碱的心肌细胞毒性作用机制进行了综述.【总页数】4页(P398-401)
【作者】刘艳;章诗伟;周兰;刘良
【作者单位】华中科技大学同济医学院法医学系,湖北武汉,430030;华中科技大学同济医学院法医学系,湖北武汉,430030;湖北省中山医院中心实验室,湖北武汉430033;华中科技大学同济医学院法医学系,湖北武汉,430030;华中科技大学同济医学院法医学系,湖北武汉,430030
【正文语种】中文
【中图分类】D919
【相关文献】
1.高乌头生物碱高乌甲素对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用研究 [J], 高稚淇;谢红;陈玲
2.藏药唐古特乌头总生物碱的急性毒性及抗炎镇痛作用 [J], 吴国泰;牛亭惠;刘五州;王瑞琼;杜丽东;李广远
3.乌头类植物药三种双酯型生物碱研究进展 [J], 李志勇;李彦文;孙建宁;张硕峰
4.乌头类生物碱对慢性心衰大鼠心肌SOD活性和MDA含量的影响 [J], 张琦;张大方
5.炮制对乌头生物碱的影响及毒性作用研究 [J], 刘智;张大方;曲晓波;张志仁;王奕琛
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乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响

乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响刘艳;梁曼;刘茜;章诗伟;刘良【期刊名称】《中国法医学杂志》【年(卷),期】2009(024)004【摘要】目的探讨乌头碱对新生大鼠心肌细胞DNA损伤的影响.方法新生SD大鼠20只,随机分为4组,取心室肌以差速贴壁法原代培养心室肌细胞.培养第6天,制成密度为2×105个细胞/mL的细胞悬液,分别加入乌头碱混合液至终浓度为0.1、0.5、1、2μmol/L,染毒30min;采用彗星电泳技术及CASP分析软件,检测不同浓度乌头碱染毒后心室肌细胞DNA损伤程度.结果心肌细胞被不同浓度乌头碱染毒后,尾部DNA含量、彗尾长度、尾矩、Olive尾矩均随乌头碱浓度增加而升高,头部DNA含量则逐渐降低,与对照组相比,有显著性差异(P<0.01);乌头碱染毒剂量越大,心肌细胞DNA损伤越严重.结论乌头碱染毒引起细胞DNA断裂损伤呈明显的剂量-效应关系,推测细胞DNA损伤是乌头碱毒作用机制之一.【总页数】3页(P239-241)【作者】刘艳;梁曼;刘茜;章诗伟;刘良【作者单位】华中科技大学同济医学院法医学系,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院法医学系,湖北,武汉,430030;华中科技大学同济医学院法医学系,湖北,武汉,430030;湖北省中山医院病理科,湖北,武汉,430033;华中科技大学同济医学院法医学系,湖北,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】D9【相关文献】1.吲达帕胺对脂多糖诱导新生大鼠心肌细胞损伤后TNF-α表达的影响 [J], 严广华;侯晓磊;刘萍;李方军2.心脉隆对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌细胞凋亡的影响 [J], 张丽娜;钟荣梅;吴星恒3.粉防己碱对新生大鼠心肌细胞低氧/复氧损伤中细胞凋亡的影响 [J], 张荣庆;程何祥;马颖艳;徐凯;贾国良;李飞;刘兵4.吲达帕胺对脂多糖诱导新生大鼠心肌细胞损伤后TNF-α表达的影响 [J], 严广华;侯晓磊;刘萍;李方军5.心脉隆对缺氧缺血性脑损伤模型新生大鼠心肌细胞凋亡的影响 [J], 张丽娜;钟荣梅;吴星恒因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

乌头类生物碱对心肌的毒性作用及分子毒理学研究进展_刘艳

[3]张鹏,王雨生.蛋白激酶C 在缺血人RPE 细胞表面达血管内皮生长因子中的作用[J].眼科研究,2005,23(4):345 348.(收稿日期:2008 03 07;修回日期:2008 05 25)综述基金项目湖北省自然科学基金资助项目(N o .2008CDB206) 作者简介刘艳,女,高级工程师,博士,主要从事法医毒理病理学研究。

通讯作者刘良,男,教授,博士生导师,主要从事法医病理学、法医毒理病理学教学、检案及研究。

乌头类生物碱对心肌的毒性作用及分子毒理学研究进展刘艳1,章诗伟1,2,周兰1,刘良1(1.华中科技大学同济医学院法医学系,湖北武汉430030;2.湖北省中山医院中心实验室,湖北武汉430033)摘要乌头属植物是被子植物亚门毛茛科中一类重要的有毒植物,也是我国最早有记载的药用有毒植物之一;其块根中多含有剧毒的二萜类双酯型生物碱–乌头碱,因个体差异、用法不当以及误服或投毒等原因而发生乌头中毒、甚至死亡的报道屡见不鲜。

目前,对乌头碱的研究多局限在临床救治方面,缺乏对乌头碱毒性作用机制研究。

本文参考国内外相关文献资料,对乌头碱的心肌细胞毒性作用机制进行了综述。

关键词法医毒理学;乌头类生物碱;毒性作用机制;心肌细胞文献标识码 A 文章编号 1001-5728(2009)06-0398-04The toxic ity of acon itum al k al o i ds on card i ocytes and th e progress of its re search usi n g th e m ethod s of m olecu l ar toxi cology (L IU Y an 1,ZHANG Sh i w ei 1,2,ZHOU Lan 1,L IU L i ang 1/1.D epart m ent of ForensicM ed icine ,T ongjiM e d ical College of H uazhong Universit y of Science and T echnology,W uhan 430030,China;2.Zhongshan H osp it al of H ubei P rovi nce ,W uhan 430033,China )Abstract A conitiu m p lants are a group o f i m portant po isonous p l ants i n the R anuncu l aceae fa m ily of A ng i osper m sub phy l u m,and one o f the earli est recorded po i sonous plants i n China as we l.l In t he ir tubers (root)have hypertox ic A con itiu m a l ka l o i ds ,wh i ch be l ong to the group o f diesterd iterpene a l kalo i ds .It is repeated l y reported i n Ch i na that aconiti ne po isoning ,and even deat h fro m acon iti ne po ison i ng ,caused by the i nd i v i dua l differences i n phar m aceutical to lerance of aconiti ne ,tak i ng t he w rong m ed i c i ne or inadequa te dosage ,or pu t i n t he po i son by hom i c i de .A t presen t ,the research on acon iti ne is m ainly li m ited to c li nical treat m ent ,bu t lack o f research on tox ic ity m echan is m of acon iti ne .T h i s paper rev ie w s som e progress re lati ng t o the tox i co l og ica lm echan i s m s o f th i s k i nd o f a l kalo i d .K ey word s forensic tox i co l ogy ;acon it u m al ka l o ids ;t ox icolog i ca lm echanis m ;card i om yo cy tes乌头属植物(acon iti u m plan ts)属被子植物亚门毛茛科,为我国最早有记载的药用有毒植物之一。

乌头碱诱发心律失常后心脏M3受体含量的变化

随着人们物质生活水平的不断提高，心律失常日益成为高发性疾病。心律失常是心脏冲动的频率、律、源部位、导速度与激动次序的异常。节起传支配心脏的迷走神经节后纤维末梢释放递质乙酰胆碱，作用于心肌细胞膜的Ｍ型乙酰胆碱受体可导致心率减慢，房肌收缩能力减弱，房肌不应期缩心心短，室传导速度减慢，房即具有负性变时、力和变变传导作用。目前，通过分子生物学技术已经克隆出哺乳动物Ｍ受体的５个亚型［，ＭＭ２Ｍ。１］即、、、Ｍ和Ｍ。Ｍ受体亚型的分布具有组织特异性，长期以来，统观念认为心肌组织中只存在Ｍ。受传体］而Ｍ。，受体主要分布于外分泌腺、、经和脑神平滑肌及内皮上也有少量分布ｌ。直到１８＿５］９９年，Ｊｉｌａｗａ等首次发现，家兔心肌组织中Ｍ。受体ｓ在
维普资讯
齐齐哈尔医学院学报２００７年第２卷第１８１期
乌头碱诱发心律失常后心脏Ｍ３体含量的变化受
宋娟逄丽红
检测乌头碱诱发心律失常后心肌Ｍ。受体ｍＲＮＡ表达量的变化。方法静脉注
１材料与方法１１材料．
１１１动物Ｗｉａ．．ｓｒ大鼠，雄均可，重２０ｔ雌体０～２０，５ｇ由齐齐哈尔医学院动物实验中心提供。１１２主要试剂乌头碱为美国Ｓｇ．．ｉｍａ公司产品；戊巴比妥钠为上海化学试剂采购供应站产品；总ＲＮＡ提取试剂盒是Ｉｖｔｏｅｎｉｇｎ试剂公司产品；物ｒ引由上海申能博采生物科技有限公司合成；ＲＴ～ＰＲＣ试剂盒为Ｉｖｔｇｎ试剂公司。ｎｉｏｅｒ１１３主要仪器ＰＲ仪为美国Ｂ０～ＲＡＤ公司．．Ｃ１产品，Ｌ２Ｅ生物机能实验系统为成都泰盟科技Ｂ～４０有限公司产品，低温高速离心机为ＢＣＥＫＭＡＮ公司产品，平电泳仪为美国ＢＯ— Ｒ水ＩＡＤ公司产品，紫外分光光度仪为美国ＢＯ— ＲＡ公司产品，能ＩＤ天ＧＩＳ凝胶图像处理系统为上海天能科技有限公司

次乌头碱对乳大鼠原代培养心肌细胞Ca^(2+)及Cx43表达的影响

次乌头碱对乳大鼠原代培养心肌细胞Ca^(2+)及Cx43表达的影响李志勇;谭鹏;孙建宁;刘永刚;李彦文【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2011(22)11【摘要】目的观察次乌头碱对原代培养的心肌细胞内Ca2+浓度及缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。

方法体外培养乳大鼠心肌细胞,采用流式细胞技术观察30,60,120μmol/L的次乌头碱在15,30,60 min对心肌细胞内Ca2+浓度变化的影响,并应用Western blot技术检测次乌头碱作用心肌细胞15 min后的细胞缝隙连接蛋白Cx43的表达水平。

结果次乌头碱能提高心肌细胞[Ca2+]i,这种作用在给药后15 min时最显著,随着作用时间的延长,细胞[Ca2+]i下降;次乌头碱作用心肌细胞15 min能降低心肌细胞Cx43的表达量,但无显著性差异。

结论次乌头碱能促进心肌细胞内Ca2+增高,进而导致细胞Cx43表达降低,增加心肌细胞发生心律失常的易感性。

【总页数】3页(P2689-2691)【关键词】次乌头碱;心肌细胞;钙离子;Cx43【作者】李志勇;谭鹏;孙建宁;刘永刚;李彦文【作者单位】北京中医药大学中药学院;中央民族大学中国少数民族传统医学研究院;中国中医科学院中医药信息研究所【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.TNF-α对原代培养大鼠心肌细胞β3-AR表达的影响及意义 [J], 荣箭;刘春峰2.广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响 [J], 梁永红;苏延旭;马兴才;张洪也;蒋兴明;陆世银;苏志恒;郑华;宋慧3.次乌头碱对乳大鼠原代培养心肌细胞的毒性作用 [J], 李志勇;孙建宁;张硕峰4.人PI3KCG慢病毒载体的构建及其在乳大鼠原代心肌细胞中的表达和初步功能检测 [J], 张辉;李妍妍;卢新政;周建丽;夏薇;李建民5.Taxol对缺氧培养乳鼠心肌细胞Cx43蛋白表达及分布的影响 [J], 王德国;王新;王安才;朱红军;孙贤林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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有限公司 ) 雌雄不拘 , 动物许可证号 : SCXK ( 京 ) 2002 - 0003。 HA ; ( 中国食品药品检定研究院 ) , 批号 : 200404, 纯度大于或
*
基金项目 : 国家科技部十五科技攻关计划重大项目 ( 2004BA 721A 11) ; 国家 973 计划资助项目 ( 2009CB522800) 。
摘要 : 目的考察次乌头碱 ( H A) 对原代培养乳大鼠心肌细胞 L - 钙通道、钙调蛋白 ( CaM ) 、肌质网雷诺定受体 ( RyR2 ) mR N A 表达的影响。方法体外培养乳大鼠心肌细胞 , 采用 RT- PCR 法测定 L - 钙通道 1C 亚基、 CaM 及 RyR2 mRN A 的表达。结果 HA 作用 15 min 时 , 60 、 120 / L 能提高心肌细胞膜 L - 钙 1C mRN A 的表达 ( P < 0. 05) ; 30、 60 、 120 / L 能使 CaM mRN A 的表达增高 ( P < 0. 01) ; 60、 120 / L 能提高 RyR2 mRN A 表达 ( P < 0. 05) ; 60 M / L 作用心肌细胞 5 min 时引发 L - 钙通道 1C mRN A 表达增多 ( P < 0. 05) ; 30、 60 M / L 作用 15、 60 min 时可引起 CaM mRN A 表达增多 ( P < 0. 01) 。结论 HA ( 60 / L) 可通过增加心肌细胞 L - 钙通道、 CaM 、 RyR2 mR N A 的表达 , 参与细胞内钙超载及心律失常的发生过程 , 在乌头类天然药物中毒时干预上述靶点基因改变可缓解中毒性心律失常的发生。关键词 : 次乌头碱 ; 心肌细胞 ; 钙调控蛋白 do i: 10. 3969/ j. issn. 1671 - 8348. 2011. 25. 022 文献标识码 : A 文章编号 : 1671 - 8348( 2011) 25 - 2546 - 03
Bio systems 公司 ; 凝胶图像分析仪、 ImageM aster V DS 购自美国 phar macia Biotech 公司 ; O YY - - 5 型电泳仪购自北京六一仪器厂 ; Y LD -2000 电热恒温鼓风干燥箱购自黄石市恒丰医疗器械有限公司 ; H ZQ - C 空气浴振荡器购自哈尔滨市东明医疗仪器厂。 1 . 3 方法 1 . 3 . 1 心肌细胞制备与培养
Effects of hypaconitine on expression of mRNA of calcium regulated proteins in myocardial cells * L i Zhiy ong 1 , T an P eng 2 , Zhao H ui 3 , L i Fei 2 , Sun J ianning 2 ( 1 China M inor ity T r aditional M edical Center of M inz u Univ er s ity of China, B eij ing 100081 China; 2 . School o f Chines e P har macy o f Beij ing Univ er sity of Chinese M edicine, Bei j ing 100102 China; Abstract: Objective 3 . S chool of T CM of Cap ital M edical Univ er s ity , Bej ing 100069 , China) T o o bser ve the effects o f H ypaconitine( H A) o n mRN A ex pr essio n of calcium r eg ulated pro teins such as
通讯作者 , Tel:
010 -84738626; E - mail : jn_sun @ sina. com. cn。
重庆医学 2011 年 9 月第 40 卷第 25 期表1
名称 - act in 扩增片段 -act in - EP -act in - RP L 钙通道 - 1C L 钙通道 - 1C -E P L 钙通道 - 1C -R P CaM CaM-EP CaM-R P RyR 2 RyR 2 EP RyR 2 RP
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重庆医学 2011 年 9 月第 40 卷第 25 期
基础研究
次乌头碱对心肌细胞 Ca2+ 调控蛋白 m RNA 表达的影响
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李志勇 1 , 谭鹏2 , 赵晖3 , 李飞2 , 孙建宁2 ( 1. 中央民族大学中国少数民族传统医学研究院, 北京 100081; 2. 北京中医药大学中药学院 , 北京 100012; 3. 首都医科大学中医药学院 , 北京 100069)
L - t ype calcium channel 1C, ca lmodulin( CaM ) and Ry R2 in my ocardial cells. Methods P rima ry neonatal rat myo car dial cells w ere generated and cultured. L - type calcium channel 1C, CaM and RyR2 mR N A w ere measur ed by tr anscr ipt ion - polymerase chain r eac t ion( RT- PCR) respectively . Results A fter co - incubating w ith H A fo r 15 min, 60, 120 / L H A can impr ove the expressio n of L type calcium channel 1C mRN A in myo ca rdial cells ( P < 0. 05) , 30, 60, 120 / L H A also can incr ease CaM mR N A in m yocar dia l cells( P < 0. 01) , 60, 120 / L H A incr eased t he ex pr essio n of Ry R2 mRN A in myo ca rdial cells( P < 0. 05) . A fter co - incubat ion with H A for 5, 15, 60 min, 60 M / L H A increased t he ex pression o f L - ty pe calcium channel 1C mR NA of my ocardial cells in 5 min( P < 0. 05) . T he ex pr ession of CaM mR NA of myocar dial cells wer e increased after co - incubating w ith 30, 60 M / L H A fo r 15, 60 m in( P < 0. 01) . Conclusion H A ( 60 M / L) can induce the calcium o ver load in m yocar dial cells, w hich w ill r esult in ar rhyt h mia. T his actio n maybe relates to the incr easing ex pression of L - ty pe calcium channel 1C, CaM and RyR2 mRNA of myocardial cells caused by HA . T he clinical tox ic arrhythmias can be reliev ed throug h interfering these tar get g enes when tox ic r eaction happens. Key words: hy paco nitine; myo cardial cells; calcium regulated pro teins 含有乌头碱、中乌头碱、次乌头碱 ( hypaco nitine, H A ) 等生物碱的天然药物主要包括附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿等药材 , 因含有上述毒性成分在临床应用中极易发生中毒 , 损伤机 - 4] 体神经系统与心血管系统 , 最突出的体征为心律失常 [ 1 。有研究显示 , H A 在附子炮制品及中成药中都有存在 [ 5-8] , 且附子的毒 - 效表达与乌头碱、中乌头碱、 H A 在炮制过程中的差异配比存在相关性 [ 9] , H A 在正常大鼠及离体心脏、原代培养乳鼠心肌细胞上都能引发严重心律失常 [ 10- 11] 。现将 HA 对心肌细胞L - 钙通道 1C 亚基、细胞内钙调蛋白 ( CaM ) 及肌质网上雷诺定受体 ( Ry R2 ) mR NA 表达的影响报道如下。 1 材料与方法 1 . 1 动物与药品 3 d 乳大鼠 ( 北京维通利华实验动物技术等于 98% , 用二甲基亚砜( DM SO ) 溶解 , 制成贮备液。 1. 2 试剂与仪器达氏修正依氏培养基 / F12 ( DM EM / F12) 购自美国 sig ma 公司 , 批号 086K 83521; 胰蛋白酶、胶原酶型 ( Co ) 、四噻唑兰 ( M T T ) 、乙二胺四乙酸二钠 ( EDT A N a2 ) 购自美国 A mresco 公司 ; 5 -溴 -2 - 脱氧尿核苷购自 BrdU , R oche 公司 ; 胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司 , 批号 071031; F ir st St rand cDN A Synthesis Kit 购自 F ermentas 公司 , 批号 00020634; SY BR G reen PCR M aster M ix 购自 A p plied Bio sy stems 公司 , 批号 43049155 。 CJT 型超净工作台购自北京昌平长城空气净化设备公司 ; RCO - 3000T-5V 型 CO2 恒温培养箱购自美国 G. S. 公司 ; DM IL H C 倒置相差显微镜购自德国 L eica 公司 ; Y XO GO 2 型电热式蒸汽消毒器购自山东新华医疗器械股份有限公司 ; 400R 低温离心机购自德国 H erae us 公司 ; GeneAmp 5700 T aqM AN P CR 仪购自美国 A pplied