-生物化学实验--聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质

天津科技大学生物化学实验报告专业：班级：姓名学号组别第组实验项目同组人完成时间年月日【实验名称】《垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质》【实验目的】学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

【实验原理】蛋白质的性质：三种物理效应：、、。

1、2、3、成绩：教师签字：批阅日期：聚丙烯酰胺凝胶电泳的四个不连续：、、、。

1、2、3、4、蛋白质的分子量与电泳迁移率之间的关系是：Mr=K(10-b·m)logMr=LogK—b·Rm式中Mr——蛋白质的分子量；logK——截距；b——斜率；Rm——相对迁移率。

实验证明，蛋白质分子量在15,000～200,000的范围内，电泳迁移率与分子量的对数之间呈线性关系。

蛋白质的相对迁移率Rm＝蛋白质样品的迁移距离／染料(溴酚蓝)迁移距离。

这样，在同一电场中进行电泳，把标准蛋白质的相对迁移率与相应的蛋白质分子量对数作图，由未知蛋白的相对迁移率可从标准曲线上求出它的分子量。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定蛋白质的分子量具有简便、快速、重复性好的优点，是目前一般实验室常用的测定蛋白质分子量的方法。

【材料与设备】1.仪器设备DYCZ-24D垂直板电泳槽(北京市六一仪器厂),电泳仪,微量移液器2.材料烧杯(250mL、500mL)、量筒(500mL、250mL)、培养皿3.主要试剂（1）标准蛋白混合液：内含磷酸化酶(Mw94,000)，牛血清蛋白(Mw67,000)，肌动蛋白(Mw43,000)，磷酸酐酶(Mw30,000)和溶菌酶(Mw14,000)（2）30％凝胶贮备液：Acr30g，Bis0.8g,加蒸馏水至100mL（3）分离胶缓冲液(1.5mol／L):Tris18.15g,加水溶解,6mol/L HCl调pH8.9,定容100mL（4）浓缩胶缓冲液(0.5mol／L):Tris6g,加水溶解，6mol/L HCl调pH6.8，并定容到100mL（5）5×电极缓冲液(pH8.3)：SDS lg，Tris6g，Gly28.8g，加水溶解并定容到1000mL。

血清蛋白的电泳的实验报告
血清蛋白的电泳实验报告
血清蛋白是人体血液中最主要的蛋白质成分之一，它们在维持血液渗透压、运
输营养物质和调节免疫功能等方面发挥着重要作用。

电泳是一种常用的实验技术，可以通过电场作用下将蛋白质分离成不同的带状，从而对血清蛋白进行分
析和鉴定。

在本次实验中，我们使用了聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对血清蛋白进行了分离。

首先，我们将血清样品加入到电泳凝胶槽中，然后施加电场使蛋白质在凝胶中
移动。

由于不同蛋白质的大小、电荷和形状不同，它们在电场作用下会以不同
的速度移动，最终形成不同的带状。

通过观察电泳结果，我们可以看到血清蛋白在凝胶上形成了多个明显的带状。

根据已知的标准蛋白质的电泳迁移率，我们可以对这些带状进行鉴定和定量分析。

通过比较实验样品的电泳图谱和标准样品的电泳图谱，我们可以确定血清
中不同蛋白质的含量和种类。

在实验中，我们发现血清蛋白主要可以分为白蛋白、球蛋白、转铁蛋白等多个
带状，它们在电泳图谱上呈现出清晰的分离和特征性的迁移率。

这些结果为我
们进一步了解血清蛋白的组成和功能提供了重要的参考。

总的来说，血清蛋白的电泳实验为我们提供了一种快速、准确地分析血清蛋白
的方法，对于临床诊断和疾病治疗具有重要意义。

通过对血清蛋白的电泳分析，我们可以更好地了解人体内蛋白质的组成和功能，为疾病的诊断和治疗提供科
学依据。

希望通过我们的努力，可以为医学科研和临床实践带来更多的启发和
突破。

血清蛋白的分离——聚丙烯酰胺凝胶电泳法【摘要】目的 1.、学习聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。

2、掌握聚丙烯酰胺园盘电泳的操作技术。

3、比较醋酸纤维薄膜电泳与本法分离血清蛋白质的效果。

方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对血清蛋白进行电泳分离，最后与醋酸纤维薄膜电泳的条带进行比较。

结果聚丙稀酰胺凝胶电泳法电泳鸡血清蛋白，在凝胶染色后出现了5条染色带。

结论聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白的效果要比醋酸纤维薄膜电泳好得多。

【关键词】聚丙烯酰胺凝胶电泳法、电泳、血清蛋白近年来我国家禽发生禽流感病状很严重，为了更好的预防和治疗禽流感，我们决定先采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法初步的鉴定鸡血清中含有几种蛋白质，因为大多数病毒都是依赖蛋白质为原料进行复制增多的。

然后再用考马斯亮蓝R250对电泳出来的凝胶进行染色、鉴定。

同时，也为了比较聚丙酰胺凝胶电泳法与醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的效果。

对象与方法一、对象1、检测标本：选取一只健康的鸡，杀鸡取血置于一个大烧杯内，用分离法分离血清。

2鸡血清的提取：采用高速离心机对原血进行高速离心，上清液就是鸡血清。

二、方法1、原理（1）盘状电泳是在区带电泳原理的基础上，以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物，采用电泳基质的不连续体系（即凝胶层的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、pH的不连续性及电位梯度的不连续性），使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带（厚度为10-2厘米），然后再进行电泳分离。

盘状电泳名称来源即由于此法的原理是依靠基质不连续性（discontinuity），凑巧分离出的区带也很象圆盘状（discoid shape），取“不连续性”及“圆盘状”的英文字头“disc”。

因此，英文名称为disc electrophoresis，中文直译为盘状电泳。

仪器装置：上下两个槽为圆形或方形，其中注入缓冲液。

上下槽的缓冲液中分别有正、负电极通入。

上槽底部有很多小孔，可插入装有聚丙烯酰胺凝胶的玻璃管。

实验十一聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一、目的1、掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳技术；2、掌握同工酶遗传标记的分析方法。

二、原理聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis)，是以聚丙烯酰胺凝胶为作为支持介质的一种常见电泳技术。

聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺（Acr）和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。

催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。

化学聚合法以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速器。

在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。

由于同工酶的酶蛋白分子的大小和结构不同，携带的电荷种类和数量不同，所以可用凝胶电泳将它们一一分开。

在适宜酶催化反映的条件下提供酶作用的底物，再利用特殊的显色反应以显示产物的形成或底物的消失，就可以看到经电泳分离后的同工酶谱带。

同工酶的鉴定过程通常如下：1、从植物样品中提取粗酶液；2、聚丙烯酰胺凝胶电泳把样品中酶带分开；用专一作用底物和特殊染料把需要分析的酶染色，显示同工酶谱。

同工酶技术是通过电泳和组织化学方法进行特异性染色而把酶蛋白分子分离，并将其位置和活性直接在染色区带以酶谱的形式标记出来。

分离同工酶的方法有：电泳法、层析法、酶学法和免疫学其中以电泳法最为普遍，电泳法中又以垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率为最好。

聚丙烯酰胺凝胶电泳有三种物理效应：1、样品的浓缩效应；2、凝胶的分子筛效应；3、一般的电泳分离的电荷效应。

三、仪器、设备、药品及材料仪器、设备：电泳仪、电泳槽、离心机、移液管、装凝胶用的玻璃管（内径为5mm、长度为90mm）。

垂直板电泳装置图药品：三羟甲基氨基甲烷（Tris）、四甲基乙二胺（TEMED）、丙烯酰胺（Acr）、价差双丙烯酰胺（Bir）、甘氨酸、过硫酸铵（AP）、蔗糖、溴酚蓝、联苯胺、过氧化氢。

聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血清蛋白[实验目的](1)学习聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳原理。

(2)掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的操作技术。

(3)比较醋酸纤维薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血清蛋白的操作效果。

[实验原理]带电质点在电场作用下，会向两极移动；带正电荷的移向负极，带负电荷的移向正极，这种现象称为电泳。

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。

[实验试剂]1、待测样品：新鲜血清2、制备分离胶、浓缩胶有关试剂：(1)凝胶缓冲液：称取1 mol/L HCl 48ml,Tris(三羟基氨基甲烷)36.6g,TEMED 0.23mL,加重蒸馏水至80mL 使其溶解，调pH8.9，然后加重蒸馏水定容至100mL ，至棕色瓶，冰箱储藏。

(2)分离胶贮液，一般有两种配法：ⅰ28％Acr-0.735％Bis贮液：丙烯酰胺28.0克，甲叉双丙烯酰胺0.735克,加重蒸馏水使其溶解然后定容至100mL.ⅱ30％Acr-0.8％Bis贮液:Acr30.0克,Bis0.8克,加重蒸馏水使其溶解定容至100mL.以上两种溶液需用棕色试剂瓶盛放,4℃储存,一般可放置一个月左右.(3)分析纯过硫酸铵(AP)(AR)0.14g加重蒸水100mL,棕色瓶,4℃储存仅能用一周,最好当天配置.上述三种试剂用于制备分离胶.(4)浓缩胶缓冲液:称取1mol/LHCL48mL,Tris5.98g,TEMED 0.46mL,加重蒸水至80mL,调pH6.7,用重蒸水定容至100mL,棕色瓶4℃储存.(5)浓缩胶贮液:称取Acr10g，Bis2.5g，加重蒸水溶解定容100mL，过滤后至棕色瓶4℃贮存。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质【目的】1 ．掌握圆盘电泳分离血清蛋白的操作技术。

2 ．熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

【原理】带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动，称为电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。

在电泳时，蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小，形状和所带的电荷量有关。

聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺（ Acr ）单体和少量交联剂 N,N- 亚甲基双丙烯酰胺（ Bis ）在催化剂过硫酸铵（ Ap ）和加速剂四甲基乙二胺（ TEMED ）的作用下发生聚合反应而制得的（其化学结构式见第 2 篇第 1 章）。

聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度或单体与交联剂的比例来加以控制。

根据血清蛋白分子量的大小，学生实验一般选用 7 ％聚丙烯酰胺凝胶分离血清蛋白质。

不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳利用浓缩效应、分子筛效应和电荷效应的三重作用分离物质（见第 2 篇第 1 章），使样品分离效果好，分辨率较高。

一般醋酸纤维薄膜电泳只能把血清蛋白质分离出 5 ～ 7 条带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳却能分离出十几条到几十条来（图 3-4 ），是目前较好的支持介质，应用十分广泛。

图 3-4 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱根据凝胶支持物的形状不同，分为垂直板电泳和盘状电泳两种，二者原理相同。

本实验采用的盘状电泳是在直立的玻璃管中，以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物，采用电泳基质的不连续体系，使样品在不连续的两相间积聚浓缩（浓缩效应）成厚度为 10 -2 cm 的起始区带，然后再利用分子筛效应和电荷效应的双重作用在分离胶中进行电泳分离。

【器材】1 ．电泳仪直流稳压电源，电压 400 ～ 500V ，电流 50mA 。

2 ．垂直管型圆盘电泳装置目前这类装置的种类很多，可根据不同的实验要求选择其中的一种。

这类装置均由两个基本的部分组成，一部分为载胶玻璃管，须选用内径均匀（ 5 ～ 6mm ） , 外径 7 ～ 8mm ，长 80 ～ 100mm 的玻璃管作为材料，也可以使用更细的玻璃管。

sds聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离技术，其原理如下：
1. 加SDS：将蛋白质样品加入含有十二烷基硫酸钠（SDS）的缓冲液中，SDS会与蛋白质发生作用，使蛋白质分子均匀地被带负电荷，同时SDS也会破坏蛋白质分子的三维结构，使其变成线性结构。

2. 空间分离：将样品加载到聚丙烯酰胺凝胶上，凝胶由于聚合物的交联作用而形成连续的三维通道结构，蛋白质分子在通道中发生空间分离。

3. 电泳：在聚丙烯酰胺凝胶中通入电流，蛋白质分子会受到电场力的作用，向电极移动，越小的蛋白质分子移动的越远，形成一条由大分子向小分子递减的带状图案。

4. 可视化：将凝胶染色或与荧光染料结合，可以在凝胶上清晰地看到分离出的蛋白带，根据分离的结果可以分析蛋白质的分子量和相对含量。

SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量【目的】1 . 掌握 SDS-PAGE 测定蛋白质分子量的操作方法。

2 . 熟悉 SDS-PAGE 测定蛋白质分子量的原理。

【原理】带电粒子在电场中向着与其自身电荷方向相反的电极移动, 称为电泳。

不同蛋白质分子具有不同的大小、形状, 在一定的 pH 环境中带有不同的电荷量, 因而在一定的电场中所受的电场引力及介质对其的阻力不同, 二者的作用结果使不同蛋白质分子在介质中以不同的速率移动, 经过一定的时间后得以分离, 这就是电泳分离蛋白质及核酸生物大分子的基本原理。

聚丙烯酰胺凝胶电泳就是以聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质的电泳。

在电泳时, 蛋白质在介质中的移动速率与其分子的大小, 形状和所带的电荷量有关, 为了使其只与蛋白质分子的大小有关, 从而利用蛋白质在介质中的迁移率来测定蛋白质的分子量, 就需要消除蛋白质分子的形状和所带电荷量的不同对迁移率的影响或减小到可忽略不计的程度。

SDS 是十二烷基硫酸钠（ sAium dAecyl sulfate ）的简称, 它是一种阴离子表面活性剂, 加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开, 并结合到蛋白质分子上（在一定条件下, 大多数蛋白质与 SDS 的结合比为 1.4 g SDS/ 1 g 蛋白质）, 使各种蛋白质 -SDS 复合物都带上相同密度的负电荷, 其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量, 从而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别, 使电泳迁移率只取决于分子大小这一因素, 于是根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线, 可求得未知物的分子量。

SDS 与蛋白质结合后引起蛋白质构象的改变。

SDS- 蛋白质复合物的流体力学和光学性质表明, 它们在水溶液中的形状, 近似于雪茄烟形状的长椭园棒, 不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样（约为 18? , 即 1.8 nm ）, 而长轴则随蛋白质分子量成正比的变化。

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质Separating Serum Protein by PAGE一、目的1.把握聚丙烯酰胺凝胶电泳的大体原理2.学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术二、原理聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE）,是在区带电泳原理的基础上，以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物，采纳电泳基质的不持续体系（即凝胶层的不持续体系、缓冲液离子成份的不持续性、pH的不持续性及电位梯度的不持续性），使样品在不持续的两相间积聚浓缩成薄的起始区带（厚度1—2mm），然后再进行电泳分离。

聚丙烯酰凝胶电泳的进程中有三种物理效应：（1）样品的浓缩效应，（2）凝胶的分子筛效应，（3）一样电泳的电荷效应。

使样品分离成效好，分辨率高。

例如人血清用醋酸纤维素薄膜电泳（）能够分成5—7个成份，而用聚丙烯酰胺凝胶电泳那么可分成20—30条带清楚的成份。

下面就聚丙烯酰胺凝胶电泳说明三种物理效应的原理。

1、样品的浓缩效应：由于电泳基质的4个不持续性，使样品在电泳开始时，得以浓缩然后再被分离。

（1）凝胶层的不持续性：两层不同的凝胶，其作用如下：浓缩胶：为大孔胶，样品在其中浓缩，并按其迁移率递减的顺序慢慢在其与分离胶的界面积聚成薄层。

分离胶：为小孔胶，样品在其中进行电泳和分子筛分离。

（2）缓冲液离子成份和电位梯度的不持续性：在浓缩胶当选择，电泳槽缓冲液pH为，HCl几乎全数释放出Cl-,甘氨酸（等电点在；羧基解离 pKa1=, 氨基—NH3+解离pKa2=）在此条件下有极少部份的分子（1—%）解离成为甘氨酸负离子NH2CH2COO-在下，大部份蛋白质都以负离子形式存在（大多数蛋白质等电点接近于）。

这三种离子都带有相同电荷，当电泳系统通过必然电流后三种离子同时向正极移动，而且它们的有效泳动率按以下顺序排列。

（有效泳动率=泳动率m·解离度d）m Cl d Cl>m蛋d蛋>m甘d甘依照有效率泳动率的大小，最快的称为快离子，最慢的称为慢离子，电泳刚开始时，两种凝胶都含有快离子，只有电泳槽中电泳含慢离子，电泳开始后，由于快离子的泳动率最大，就会专门快超过蛋白质，因此，在快离子的后面形成一离子浓度低的区域即低电导区。

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质一、实验目的：1、学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

2、掌握圆盘电泳的操作方法。

二、实验原理：1.聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是由丙烯酰胺( Acr )单体和少量交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺( Bis )在催化剂过硫酸铵( Ap )和加速剂四甲基乙二胺( TEMED )的作用下发生聚合反应而制得的。

聚丙烯酰胺凝胶具有网状结构，其网眼的孔径大小可用改变凝胶液中单体的浓度或单体与交联剂的比例来加以控制。

即凝胶的浓度决定凝胶筛孔的平均直径，凝胶的交联度决定凝胶筛孔的最大直径。

2.采用不连续系统（即缓冲液成分、pH及凝胶孔径不连续）聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过浓缩效应、分子筛效应、电荷效应，将血清中各蛋白质成份依其分子大小、电荷多少不同而进行高效分离。

3.连续系统缓冲液的pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场力的作用下，主要靠电荷及分子筛效应得到分离4.不连续系统①浓缩效应：a.凝胶层孔径不连续:浓缩胶大孔径，具有浓缩效应；分离胶小孔径，具有分子筛效应。

b.pH值不连续:电泳缓冲液pH=8.3;浓缩胶pH=6.7;分离胶pH=8.9。

c.缓冲液离子不连续:电泳液中Gly-(慢离子);凝胶中CI+(快离子);Pr介于二者之间。

d.电位梯度不连续：电泳时，氯离子跑得最快，留下一段低电导区，产生高电位梯度(电位与电导率成反比),使甘氨酸离子追赶氯离子，蛋白质夹在中间而被压缩。

蛋白质是大分子物质，此时解离度又不大，自然状态下电荷密度不高，但在等速电泳界面，为满足各横断面电流相等的要求，唯一可能就是分子相互靠近，以达到与Cl-离子、Gly-离子相同的电荷密度，于是发生浓缩效应。

②电荷效应：v=Eq/6πrη③分子筛效应：样品组分根据其分子量大小不同而分离，分子量小的泳动速度大。

三、实验步骤：1.准备电泳管每人取电泳管1支，标好号码，玻棒堵住底部，加1—2滴40％蔗糖于底端。

2.分离胶制备吸取1号2ml、2号4ml、水2ml，在桑玻氏管中混匀，用真空泵抽气至无气泡为止，抽气后加3号8mL，混匀备用。

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质一、电泳的概念带有电荷的离子在电场中称动的现象称为电泳。

电泳技术的发展：1937年Tiselius利用U形玻管进行血清蛋白电泳后用光学系统使各种蛋自所形成界面折光率差别成为曲线图象，发现血清蛋白可分为4~5高峰，即白蛋白、α(α1和α2)、β和γ球蛋白，使电泳技术开始应用于临床研究。

但这类电泳仪结构较复杂，价值昂贵不易推广。

1940年代，Kӧnig和Wieland等发明用滤纸作为支持物，使电泳技术大为简化，而且可使许多组份相互分离为区带，所以这类电泳被称为区带电泳，而Tiselius 的电泳装置则称界面自由电泳，纸上电泳发明后在临床上到广泛的应用。

1950年发展为琼脂凝胶电泳。

1953年又发展为电泳后用免疫沉淀线检测的免疫电泳。

1955年Smithies以淀粉胶为支持物进行血清蛋白电泳分离，结果可分为十余条区带，这是由于淀粉胶尚具有分子筛作用使蛋白更有效地分离，淀粉胶的制备不易标准化是该法的缺点。

1959年Davis发明聚丙烯酰胺凝胶电泳，聚丙烯酰胺具有耐热、透明、化学性质稳定等优点，并可以不同浓度的丙烯酰胺单体聚合为各种不同大小孔径的凝胶，即可制备各种不同孔径的分子筛，对于蛋白质和核酸等大分子物质的分离提供了有用的技术。

六十年代以来又出现了等电聚焦电泳和等速电泳等新电泳技术。

二、电泳的基本原理设一带电粒子在电场中所受的力为F，F的大小决定于粒子所带电荷Q的电场的强度X，即：F= QX又按Stoke氏定律，一球形的粒子运动时所受到的阻力F’与粒子运动的速度v、粒子的半径r、介质的粘度η的关系为：F’= 6πrηV当F＝F’时，即达到动态平衡时：QX= 6πrηV移项得：V／X= Q／6πrηV/X表示单位电场强度时粒子运动的速度，称为迁移率(mobility)，也称为电泳速度，以ｕ表示。

由公式可见，粒子的迁移率在一定条件下决定于粒子本身的性质，包括其所带电荷及其大小和形态。

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质技术实验分析聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）一、目的要求（1）学习电泳原理和技术（2）学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分离蛋白质技术二、实验原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（简称Acr）单体和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）通过化学催化剂（过硫酸铵），四甲基乙二胺（TEMED）作为加速剂或光催化聚合作用形成的三维空间的高聚物。

聚合后的聚丙烯酰胺凝胶形成网状结构。

具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。

血清蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳一般可分成12～25个组分。

因此适用于不同相对分子质量物质的分离，且分离效果好。

聚丙烯酰胺凝胶作为电泳材料的特性人工合成聚丙烯酰胺凝胶的化学体系的组成及功能：Acr：丙烯酰胺Bis：甲叉双丙烯酰胺AP：过硫酸铵——化学催化剂TEMED：四甲基乙二胺——加速剂SDS是一种阴离子去垢剂，SO32-带负电荷。

在含有强还原剂的SDS溶液中可形成SDS-蛋白质复合物。

由于结合大量带负电荷的SDS，好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖了。

从而起到消除各蛋白质分子之间自身的电荷差异的作用。

三、实验材料（一）试剂1、30%丙烯酰胺混合液（Acr:Bis 为29:1）称取丙烯酰胺（Acr）29g及甲叉丙烯酰胺（Bis）1.0g，用去离子水溶解并稀释至100ml，贮棕色瓶中于4℃保存，可用一个月。

2、1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液取1mol/L HCL溶液48ml、三羟甲基甲烷（Tris）36.6g，加双蒸馏水至80ml使其溶解，调pH至8.8，然后用双蒸馏水稀释至100ml，置棕色瓶中，4℃贮存。

3、1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液取1mol/L HCL溶液48ml，Tris5.98g，加双蒸馏水至80ml，调pH6.8，用双蒸馏水稀释至100ml，置棕色瓶中，4℃贮存。

4、Tris-甘氨酸电泳缓冲液称取Tris 6g、甘氨酸28.8g，加蒸馏水850ml，调pH至8.3，加蒸馏水到1000ml，4℃贮存。