单糖薄层层析实验的改进

实验二十五 细胞中糖类化合物的提取及成分鉴定

糖类是一类多羟基的醛或酮及其缩合物或衍生物的总称，可分为单糖、寡糖、多糖、复

合糖及糖的衍生物如糖胺、糖酸等。糖类是生物界分布极广，含量十分丰富的一类有机化合

物，几乎所有的动物、植物、微生物体内都含有糖类，其功能也是多样的。过去认为糖类在

生物体内的作用主要是作为能量来源及结构物质，但近20年以来发现糖的复合物在细胞识

别、细胞间物质的运输和免疫调节等方面有重要的作用。糖复合物的信息量非常大，是生物

的另一类重要生物大分子化合物。因此糖的分离、纯化、结构测定、结构与功能的研究也受

到科学家广泛的关注。

糖的提取分离方法很多，主要是依据不同糖分子的物理化学性质、溶解度的差异进行

分离提取。近年也发展了许多新的分离、纯化方法，如薄层层析法、各种柱层析法、气相色

谱及高效液相色谱法等。

糖的定量分析方法也很多，有化学计量法如次亚碘酸法和非化学计量法如铜试剂法、

硝基试剂法等方法可供选择。

本实验主要介绍单糖、蔗糖及淀粉的分离提取、鉴定和测定的一般原理和方法。

实验原理

1．单糖及多糖的提取

单糖：凡不能水解为更小分子的糖即为单糖。单糖种类很多，其中以葡萄糖分布最为广

泛，存在于各种水果、谷类、蔬菜和动物血液中。由于单糖分子中有多个羟基，增加了它的

水溶性，尤其在热水中溶解度很大；在乙醇中也有很好溶解性，但不溶于乙醚、丙酮等有机

溶剂中。而蔗糖等双糖分子也易溶于水和乙醇中。因此单糖和双糖一般可用热水或乙醇将之

提取出来。

多糖是由多个单糖分子失水缩合而成的大分子化合物。在自然界中分子结构复杂而多种

多样，有不溶性的结构多糖如植物纤维素、半纤维素，动物的几丁质等；另有一些为贮存物

质如淀粉、糖原等；还有一些多糖具有更复杂的生理功能，在动植物的生理活动中起重要作

用。多糖中的淀粉不溶于冷水及乙醇，但可溶于热水中形成胶体溶液。因此可以用乙醇提取

单糖及低聚糖，然后提取淀粉等多糖。样品中的蛋白质、色素等杂质可通过加入醋酸铅、氢

薄层色谱分析技术综述

摘要 薄层色谱法，是指将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，

成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，

用以进行药物的鉴别、杂质检查或含量测定的方法[1]。本文介绍了薄层层析法的

原理，操作方法，主要应用及其在各个学科中的应用，并指出了此方法的局限性、

须待解决的问题。

关键词：薄层色谱法；原理；操作方法；主要应用；局限性

薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属于

固－液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。它兼备

了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微

克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，将样品点成一条线，

则可分离多达500mg的样品。因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外，在进行化学

反应时，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”，常

利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。

薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或

支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度

为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色

剂，或在紫外灯下显色。

一、原理

色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能

的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反

复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。薄层色谱是一种微量、快速和简便

的色谱方法。由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，

[精品]糖类硅胶G薄层层析实验方法

糖类硅胶G薄层层析实验方法

一、实验目的

本实验旨在学习和掌握糖类化合物在硅胶G薄层上的分离和分析方法，了解糖类化合物的分离原理、操作技巧和鉴定方法。

二、实验原理

糖类硅胶G薄层层析是一种常用的分离和分析糖类化合物的方法。硅胶G薄层具有较高的分离效率和良好的选择性，可用于分离和鉴定各种糖类化合物，如单糖、低聚糖和多糖。在层析过程中，糖类化合物在硅胶G薄层上的移动速度与它们的极性、分子量和官能团有关。通过控制展开剂的极性和组成，可以实现对不同糖类化合物的有效分离。

三、实验步骤

1. 硅胶G薄层的制备：按照硅胶G薄层层析板的说明书，制备一定规格的硅胶G薄层板。

2. 点样：用毛细管或微量注射器将标准糖样品点在硅胶G薄层的适当位置。每个样品点应间隔一定距离，以便后续的定性分析。

3. 展开：将点好样品的硅胶G薄层板放入展开槽中，注入展开剂。展开剂的极性和组成应根据实验要求进行选择。一般情况下，糖类化合物在极性较大的溶剂中移动速度较快。

4. 显色：在展开后的硅胶G薄层板上，喷洒适当浓度的显色剂，使糖类化合物显色。常见的显色剂包括硝酸银溶液、苯胺-二苯胺溶液和溴酚蓝溶液等。根据需要选择合适的显色剂和显色条件。

5. 定性分析：通过观察硅胶G薄层板上各糖类化合物的Rf值（相对移动距离）和显色情况，对各糖类化合物进行定性分析。标准糖样品可作为参照对比。 6. 定量分析：采用合适的测量方法，如光密度法或荧光法等，测定硅胶G薄层板上各糖类化合物的含量。根据标准曲线或标准样品，对未知样品进行定量分析。

四、注意事项

1. 在制备硅胶G薄层时，应选择合适的硅胶G品牌和规格，确保层析板的分离效果和质量。

2. 点样时应注意样品的浓度和上样量，避免样品过载对分离效果的影响。

3. 在选择展开剂时，应根据实验要求和糖类化合物的性质进行选择，以获得最佳的分离效果。注意控制展开剂的极性和组成，避免对层析板和样品的损害。

香菇中糖类物质离与测定

2

———————————————————————————————— 作者：

———————————————————————————————— 日期：

3

香菇中糖类物质的分离与测定

摘要：本实验采用热水浸提和乙醇醇沉的方法提取香菇多糖（Lentinan，LNT），利用正交法得出最佳提取粗多糖的方案，得到的粗多糖回收率为14.05﹪，再对得到的粗多糖进行定性、定量分析。用苯酚—硫酸法测定已提取出的粗多糖中单寡糖与多糖的含量为35.9%；经过薄层层析和纸层析法分析单糖的组成，其中组成多糖的单糖多属于葡萄糖和阿拉伯糖；用Sepharsose CL—6B柱层析法测定多糖的相对分子量约为5597.58道尔顿。气象色谱分析单糖含的结果是香菇多糖中的单糖种类有半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖等，其中含量较多的半乳糖和葡萄糖。

关键字：香菇多糖 回收率 含量 组成 相对分子量

Separation and Determination of carbohydrates in

Lentinus edodes

Abstract：This experiment extracts of lentinan (Lentinan LNT) by using hot water

extraction and ethanol alcohol precipitation method. The orthogonal method to get

the optimum extraction of polysaccharides is the best program, resulting