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【Nand Flash驱动编写之前要了解的知识】1.硬件特性：【Flash的硬件实现机制】Flash全名叫做Flash Memory，属于非易失性存储设备(Non-volatile Memory Device)，与此相对应的是易失性存储设备(Volatile Memory Device)。
关于什么是非易失性/易失性，从名字中就可以看出，非易失性就是不容易丢失，数据存储在这类设备中，即使断电了，也不会丢失，这类设备，除了Flash，还有其他比较常见的入硬盘，ROM等，与此相对的，易失性就是断电了，数据就丢失了，比如大家常用的内存，不论是以前的SDRAM，DDR SDRAM，还是现在的DDR2，DDR3等，都是断电后，数据就没了。
Flash的内部存储是MOSFET，里面有个悬浮门(Floating Gate)，是真正存储数据的单元。
在Flash之前，紫外线可擦除(uv-erasable)的EPROM，就已经采用用Floating Gate存储数据这一技术了。
图1.典型的Flash内存单元的物理结构数据在Flash内存单元中是以电荷(electrical charge) 形式存储的。
存储电荷的多少，取决于图中的外部门（external gate）所被施加的电压，其控制了是向存储单元中冲入电荷还是使其释放电荷。
而数据的表示，以所存储的电荷的电压是否超过一个特定的阈值Vth来表示。
【SLC和MLC的实现机制】Nand Flash按照内部存储数据单元的电压的不同层次，也就是单个内存单元中，是存储1位数据，还是多位数据，可以分为SLC和MLC：1.SLC，Single Level Cell:单个存储单元，只存储一位数据，表示成1或0.就是上面介绍的，对于数据的表示，单个存储单元中内部所存储电荷的电压，和某个特定的阈值电压Vth，相比，如果大于此Vth值，就是表示1，反之，小于Vth，就表示0.对于nand Flash的数据的写入1，就是控制External Gate去充电，使得存储的电荷够多，超过阈值Vth，就表示1了。
主板BIOS报错信息详解主板BIOS报错信息详解◆ BIOS ROM checksum error-System halted翻译：BIOS 信息在进行总和检查 ( checksum ) 时发现错误，因此无法开机。
解析：会遇到这种问题...通常是「死定了」！通常是因为 BIOS 信息刷新不完全所造成的.◆ CMOS battery failed翻译：CMOS 电池失效。
解析：这表是 CMOS 电池的电力已经不足，请更换电池。
◆ CMOS checksum error-Defaults loaded翻译：CMOS 执行整和检查时发现错误，因此载入预设的系统设定值。
解析：通常发生这种状况都是因为电池电力不足所造成，因此建议先换电源看看。
如果此情形依然存在，那就有可能是 CMOS RAM 有问题，而因为 CMOS RAM 我们个人是无法维修的，所以建议送回原厂处理。
◆ Display switch is set incorrectly翻译：显示开关配置错误。
解析：较旧型的主机板上有 Jumper 可设定萤幕为单色或彩色，而此讯息表示主机板上的设定和 BIOS 里的设定不一致，所以只要判断主机板和BIOS谁为正确，然后更新错误的设定即可。
◆ Press ESC to skip memory test翻译：在内存测试中，可按下 ESC 略过。
解析：如果你在 BIOS 内并没有设定快速测试的话，那么开机就会执行电脑零件的测试，如果你不想等待，可按 ESC 略过或到 BIOS 内开启 Quick Power On Self Test 一劳永逸◆ HARD DISK initizlizing 【Please wait a moment...】翻译：正在对硬盘做起始化 ( Initizlize ) 动作。
解析：这种讯息在较新的硬盘上根本看不到。
但在较旧型的硬盘上，其动作因为较慢，所以就会看到这个讯息。
◆ HARD DISK INSTALL FAILURE翻译：硬盘安装失败。
2016 职称英语教材重点文章深度解析理工B 共共24 篇请主要关注出题概率为“高”和“中”的文章出题概率为“低”的文章做简单了解即可请主要关注出题概率为“高”和“中”的文章出题概率为“低”的文章做简单了解即可相关说明：1、本产品内容是针对2016 年全国职称英语等级考试考前复习的经典资料。
2、从2016 年教材中精选了24 篇文章进行深入分析。
所选文章在考试中出题的概率较大（正常情况下会有2-4 篇原文，但题型会变）。
3、每篇文章均按段落以中文形式给出了考点分析。
用途：本资料旨在帮助考生快速掌握文章的大意和核心考点，考试时，如果考到原文，可以凭借对文章和考点分析的印象快速作答题目，即便更换了题型也可以更容易应对。
其实，职称英语考试所选文章如果翻译成中文，其难度大多只相当于小学水平。
因此，掌握了文章大意和考点，考试时只需要看懂题目和选项，拿到分数并不难。
第2 页/共52 页理工B 文章出处：阅读判断第六篇本文出题可能性：中Microchip Research Center Created 微芯片研究中心成立A research center has been set upin this Far Eastern country to develop advanced microchip productiontechnology.The center, which will start out with about US $14 million, will help the country develop itschip industry without alwaysdepending on imported technology.为了开发先进的微芯片生产技术，这个远东国家建立了一个研究中心，该中心启动资金为一千四百万美元，可以帮助该国开发自己的芯片工业，不必总是依赖于进口技术。
【深度考点分析】这段内容主要是在说一个远东国家耗资多少建立研究微芯片的研究中心，考点如下：1、这个远东国家耗资多少建立研究中心：一千四百万美元。
6. Wafer平坦度確認此章説明測定Wafer平坦度的方法。
Wafer平坦度的測定使用DIAGNOSE指令内所包含的WAFLAT。
WAFLAT将測定中使用的Wafer搬送到Wafer stage上、利用自動対焦機構、按以下所示的順序測定Wafer平坦度。
………在作為測定基準的Wafer中心、実行自動対焦。
(之後、Wafer上下保持不動)………将Wafer内的各測定点移動到縮小投影鏡頭下。
(自動対焦実行位置)………利用自動対焦機構、測定Wafer表面的高度有多大的変化。
………将相対Wafer中心有多大的変化、以Map形式、顕示到CRT画面内。
WAFLAT不僅能測定Wafer平坦度、而且還包含有其他測定功能。
《WAFLAT功能》(1) 測定Wafer平坦度(2) 測定芯片内平坦度(3) 測定芯片内平坦度(Leveling確認用)(4) 測定自動対焦重複性6.1 Wafer 平坦度的測定順序① 選択DIAGNOSE 指令② 選択Wafer 指令③ 指定Wafer 平坦度測定WAFLAT 可以進行四種測量。
(参照6.2)測定Wafer 平坦度、需要将Wafer flatness mode 設定成Normal 。
④ 設定測定参数設定対照由③決定的測量項目中的測定用参数。
(参照6.3)⑤ 按下PF1鍵、開始進行測定⑥ 顕示測定結果顕示結果以Wafer 中心為基準“0”、用相対値顕示。
而且、顕示単位為0.1μm 。
⑦確認測定結果、選択下一個処理Array PF1 : 再次進行測定(Retry)PF2 : 搬出Wafer、結束WAFLAT(Exit)PF3 : 顕示Spot菜単(Spot menu)PF4 : 搬出Wafer、回到④的状態(Unload & To menu)在此選択PF3鍵。
⑧从所顕示的Spot菜単中、選択下一個処理1 : 回到④的状態2 : 留下Wafer、結束WAFLAT3 : 進行図形顕示4 : 実行芯片内平坦度-15 : 移動到芯片内平坦度-2的設定画面6 : 実行数据解析功能在此選択3. Graphics。
课时跟踪检测（二）鸟啼一、语言表达专练1．依次填入下列各句横线处的词语，最恰当的一组是()①严寒________了好几个星期，鸟儿很快地死去了。
②春天来到我们中间，银色的泉流在心底________，这喜悦，我们禁不住。
③那些破碎不堪的毁灭了的生命，意味着冬天疲倦而残缺不全的队伍的________。
A．持续奔流撤退B．持续奔涌撤退C．继续奔涌消退D．继续奔流消退解析：选B①持续：延续不断，侧重指状态上的延续。
继续：指活动延长下去，不间断。
②奔涌：奔流涌出。
奔流：流得很急。
③消退：减退；逐渐消失。
撤退：(军队)从阵地或占领的地区退出。
2．下列各句中加点成语使用恰当的一项是()A．美国白宫22日发表声明称，这是针对无辜平民“卑劣”且“耸人听闻．．．．”的暴力袭击事件，美国坚决反对一切形式的恐怖主义。
B．在被歹徒连伤三刀的危急关头，巡逻警察赶到，及时将他送到了医院救治，他向死．．而生．．后，内心充满了对人民警察无尽的感激之情。
C．翡翠童子拜观音，是用一整块翡翠雕刻而成，制作精良，表现手法独特，人物刻画得生机勃勃．．．．。
D．中国的崛起是大势所趋，中国人实现民族伟大复兴的雄心势不可挡．．．．。
解析：选D A项，“耸人听闻”指故意说夸大或惊奇的话，使人震惊。
句中应用“骇人听闻”。
B项，“向死而生”意指明白了生与死的关系，因而能勇敢地面对死亡，积极地生活。
句中使用不合语境。
C项，“生机勃勃”形容有旺盛的生命力，不能形容雕刻作品。
句中应用“栩栩如生”。
3．下列句子没有语病的一项是()A．马基雅维利在16世纪初失去所有的政治地位后，将多年在共和政府中任职的感受化为文字，完成了惊世骇俗之作《君王论》，具有极高的思想性和学术性。
B．《美的历程》是中国美学的经典之作，作者李泽厚先生将他多年的研究付诸于笔端，把中国人古往今来对美的感觉玲珑剔透地展现在大家眼前，感性而亲切。
C．近日，中国青年报社会调查中心通过课题调查网和民意中国网进行的一项调查显示，81.7%的人感觉房地产调控措施及各地配套细则影响婚姻，60.2%的人认为，为规避政策或某些利益而离婚是对婚姻的亵渎。
解密03 细胞的物质输入和输出（分层训练)A组：基础练第I卷（选择题）一、单选题1．（2021·全国·高一课时练习）一种物质进行跨膜运输的方式与该物质的分子大小等性质有关。
下列有关物质跨膜运输的相关表述中正确的是（）A．相对分子质量小的物质都可以通过自由扩散进入细胞B．葡萄糖进入红细胞的方式属于需要借助转运蛋白并消耗能量的协助扩散C．胞吞形成的囊泡，在细胞内可以被溶酶体降解D．萎蔫的菜叶放到清水中，菜叶细胞全靠自由扩散恢复含水量【答案】C【分析】自由扩散的特点：顺浓度梯度运输、不需要载体、不消耗能量；协助扩散的特点：顺浓度梯度运输、需要载体、不消耗能量；主动运输的特点：逆浓度梯度运输、需要载体、消耗能量。
此外，大分子物质跨膜运输的方式是胞吞或胞吐。
【详解】A、有的小分子需要通过协助扩散或主动运输进入细胞，A错误；B、葡萄糖进入红细胞的方式是协助扩散，需要借助转运蛋白但不消耗能量，B错误；C、胞吞形成的囊泡，在细胞内可以被溶酶体中的水解酶降解，C正确；D、水分进入细胞的方式包括自由扩散和协助扩散，D错误。
故选C。
2．（2022·江苏·灌南华侨高级中学高二阶段练习）细胞内的生物大分子(如胃蛋白酶原)运出细胞的方式是（）A．胞吐B．自由扩散C．协助扩散D．被动运输【答案】A【分析】物质运输方式：(1)被动运输：分为自由扩散和协助扩散：①自由扩散：顺相对含量梯度运输；不需要载体；不需要消耗能量。
①协助扩散：顺相对含量梯度运输；需要转运蛋白（包括载体蛋白和通道蛋白）参与；不需要消耗能量。
(2)主动运输：能逆相对含量梯度运输；需要载体；需要消耗能量。
(3)胞吞胞吐：物质以囊泡包裹的形式通过细胞膜，从细胞外进或出细胞内的过程。
【详解】细胞膜是一种选择透过性膜，水分子以及细胞要选择吸收的离子、小分子物质可以通过，对于生物大分子物质，则不能以跨膜运输的方式进出细胞，只能以胞吞和胞吐的形式进出细胞，因此细胞内的生物大分子(如胃蛋白酶原)运出细胞的方式是胞吐。
微型全分析系统(µTAS)中的微分离技术徐溢1,2张晓凤1海显来1兰宇卫1(1重庆大学化学化工学院 2 光电技术及系统教育部重点实验室重庆 400044)摘要介绍了微型全分析系统(µTAS)中微分离的重要性和它的概念对其它诸如萃取分离色谱并对微流控芯片上微分离技术的进展作了评述和展望它涉及到分析化学计算机材料学其最终目标是在微芯片上实现化学全分析系统成为近年来分析化学研究热点随着µTAS迅猛发展和应用前景不断扩大新药合成与筛选以及食品和商品检验刑事科学其应用领域将逐步扩大到涉及化学成分分析的所有方面[1]ÌرðÊǶԻ·¾³¿ÆѧÉúÎïҽѧµÈÁìÓòÖеÄÑùÆ··ÖÎön g/g目前虽然有许多灵敏度很高的分析方法38岁从事分析化学和应用化学科研和教学工作国家自然科学基金(20007005)以及教育部光电技术及系统教育部重点实验室访问学者基金资助项目2003-04-24收稿但常由于存在基体效应以及其它各种干扰而难以得到准确的分析结果有可能获得选择性更高且准确可靠的分析结果在µTAS中消除干扰组分样品的分离富集是必不可少的一步其它为系统中样品的分离富集等预处理过程都是在微芯片外实现的同时也不利于微型分析系统集成化这也是µTAS发展的必然趋势更高的台阶提出电泳芯片微分离学的平台特征指出微芯片上的微分离在材质上较毛细管电泳有更多的选择余地同时也影响分离通道中的电渗流杂质种类和含量从理论上比较微小尺寸效应对分离的影响Murrihy等[5]将微芯片上离子色谱都称作微分离(Micro-separation)ÕâÀïÎÒÃǽ«ÕâÖÖÔÚµTAS基础上提出来的在几厘米大小微流控芯片上实现样品分离与富集等预处理过程使整个分析过程实现真正意义上的微型化集成化和便携化的技术统统归入到为微分离学中国内外学者在µTAS方面做了大量研究反应现阶段微分离方面研究又主要集中在毛细管电泳芯片目前也只是一些初步研究1.1 电泳芯片微分离技术电泳芯片(EC)微分离技术是当今的研究热点国际上在其制作工艺方面的进展与在生化快速分析中的应用微芯片上毛细管电泳(CE)是利用微型制造技术在几平方厘米大小的芯片上刻蚀出扁平管道和其它功能单元实现样品分离高效由于EC属于电场驱动微管道分离因此相应技术和装置较易微型化容易移植金亚[7]等已对微芯片上的毛细管电泳技术进行了相关综述目前以激光诱导荧光(LIF)µ«ÊǵçÉøÁ÷±ÃÖ»ÊÊÓÚÀë×ÓÐÔÒºÌå¶øÇÒÕû¸öϵͳÐè¸ßѹµçÔ´½øÑùºÍ¼ì²âµÈ·½ÃæµÄ½øÒ»²½·¢Õ¹ºÍÓ¦ÓÃÌرðÊÇLIFÕâЩ²»×ãÖ®´¦ÎªEC的发展带来诸多不便诸如液-液萃取色谱分离做了大量的研究共同促进微分离技术和微分析系统整体的发展1.2 萃取技术微流控芯片上萃取技术涉及到固相萃取(SPE)和液-液萃取(LLE)ÓëÑùÆ·»ùÌåºÍ¸ÉÈÅ»¯ºÏÎï·ÖÀë´ïµ½·ÖÀ븻¼¯Ä¿±ê»¯ºÏÎïµÄÄ¿µÄ¶øÇÒ¿ÉÒÔ·ÖÀë¸ÉÈÅ×é·ÖÓлúÈܼÁÏûºÄµÍÈÝÒ×ÊÕ¼¯·ÖÎöÎïOleschuk等[9]在微芯片上采用电渗流泵４µm的十八烷基硅烷(ODS)颗粒从管道一端引入特意设计的空穴中填充满ODS后的空穴作为分离床富集后样品浓缩500倍Broyles等[10]将C18固定相涂覆在深5µm长30mm微管道内分离富集多环芳香烃利用紫外(UV)激发原位聚合反应并通过改变正己烷和甲醇混合液的比例分离富集了疏水四肽和绿色荧光蛋白质它不受液流驱动方式和检测技术限制通常将SPE接到微芯片上改善样品处理范围所以在其上制作SPE比较困难图1多离子传感仪的操作原理[14]Fig.1 Operation principle of the multi-ion sensing device[14]LLE是一种利用物质在互不混溶的两相中不同分配特性进行分离的方法借助萃取剂的作用而另外一些组分仍留在水相中LLE是一种常用的分离富集方法回收率高设备简单快速这种分离方式适用于所有液体Hisamoto等[12~14]在30mm×60mm微流控芯片上采用多种有机相分段注射法中性离子载体只能萃取特定离子随着液流在管道中流动如图1所示的该系统可同时萃取分离多种离子微芯片管道宽250µm所需最小试剂量125nLÒò΢¹ÜµÀÀ©É¢¾àÀë¶ÌËùÒÔÐźÅÏì¿ì采用的TLM检测器可检测荧光物质和非荧光物质虽然分离管道缩微化了分子扩散距离减小而且试剂消耗量少减少环境污染但是微芯片上LLE的基材必须采用耐有机溶剂的玻璃或石英1.3 膜分离技术膜分离是以选择性透过膜为分离介质浓度差所需组分选择性地透过膜膜分离可以通过控制膜孔径且分离过程中大多无相变化有高效简便等特点１０µm65µm的电泳芯片上硅酸钠聚缩后１２µm宽的硅酸钠多孔膜离子可以透过该膜富集后的DNA进入分离管道DNA浓度提高了2个数量级而对于粒径相近的物质就显得无能为力了用核径迹刻蚀(nuclear track-etched)聚碳酸酯膜孔径15nm孔密度1×108cm－26×108cm－2的膜作为分子门如图2所示PDMS管道宽100µm穿过微流管道传递区与分子门相连这种分离技术的特点是通过控制分子门膜的物理和化学性质因此可以作为一种高选择的而且通过控制分子门的连接可实现智能分子筛选图2 在微流控管道中夹纳孔膜组成3D微流控系统[17]Fig.2 Simplified schematic of three-dimensional microfluidic system comprising of a nanoluidic porousmembrane sandwiched between two microfluidic channels[17]1.4 色谱技术色谱是基于不同组分在两相间具有不同分配系数和溶解度或按分子大小而进行的分离早在上世纪70年代芯片上的气相色谱但由于技术不成熟目前有关微流控芯片上的色谱只是一些初步研究作为微型色谱分离管道并用反相液相色谱法进行评估,其柱压是常规柱的1/25可在非常低的压力下产生100000理论塔板数,克服了传统HPLC颗粒填充柱的限制ＨＤＣ）在狭窄管道中大分子跑得比小分子快宽0.5mmºÏ³É¸ß·Ö×ÓºÍÁ£×ÓÒò´Ë·ÖÀëËٶȿìMurrihy[5]等完成了芯片上离子色谱对无机阴离子的分离芯片管道为0.5分离样品和固定相之间相互作用在芯片外进样(20nL)和紫外检测Ｌ－1KCl作为洗脱剂分离了NO2－I－和硫脲NO3－的线性范围为5L－1L－1如图3所示柱长20cmÒÒÍéÒÒȲºÍ¸ß»Ó·¢ÐÔÓлúÎïͨ¹ý¼ÓÈÈ΢оƬÉϵľøÈÈĤ½øÈëGC柱中进行分离分析分离低挥发性物质炸药该方法可分离从气体到低挥发性的物质图3微型气相化学分析系统[22]Fig.3 Schematic of gas phase µChemLab TM system[22]微流控芯片上的色谱技术涉及的方法很多发展和挑战集成化因此其发展潜力是无法估量的Chronis等[23]提出了生物磁化分离的概念即基于H形管道中两种缓冲溶液平行流动另一种不含生物磁珠的液流位于管道中靠近电磁场的一面远离磁场液流的磁珠受磁场吸引迁移到靠近磁场的液流中这种分离技术不同于集成免疫磁分离技术也无需复杂的设备处理能力强Furdui等[24]利用磁分离它是根据磁性的蛋白质粒子A(1µ±µ°°×ÖÊ´ÅÖéA与CD3溶液混合时而CD3接受器对T细胞有专一性T细胞可被选择性捕获分离分离后样品必须转移到微芯片外去检测图4 平流液流的分离(图中黑色的为磁珠)[23]Fig.4 Hydrodynamic parallel flow separation(magnetic beads shown in black)[23]工业上磁分离技术已经比较成熟其研究和应用是对磁分离技术的一种挑战1.6 其它Gaudioso等[25]开发了一种利用扩散井分离的微制造模型待测样品扩散的越快扩散较慢的后进入井中成功的分离了Ce19A和Ce15A纤维素酶有利用大分子和小分子扩散速度的差异无膜渗析[27]其它已经开始介入的分离技术还有离心剪切等[3]΢·ÖÀë¼¼ÊõÊÇ×ÔµTAS问世以来芯片上的实验室(Lab-on-chip)ÔÚ΢Á÷¿ØоƬÉÏʵÏÖ΢·ÖÀë¼¼ÊõÒѳÉΪµTAS不可或缺的部分同时微分离的研究离不开µTAS理论方面的指导芯片上的检测技术等方面的配合微芯片的加工与制作[31]ÔÚÑо¿¹ý³ÌÖÐÒ²Öð²½·¢ÏÖºÍÈÏʶµ½µTAS中微分离的必要性和可行性目前国内外学者在微分离技术中所做的工作也证明了其尚未开发的巨大潜力集成到芯片上的微分离技术参考文献[1] 方肇伦, 方群. 现代科学仪器, 2001, (4): 3~6.[2] 周春山. 化学分离富集方法及应用. 长沙: 中南工业大学出版社, 1997: 1~12.[3] 林柄承. 现代科学仪器, 2001, (4): 21~24.[4] J A Jankowski, S T Racht, J V Sweedler. Trends in Analytical Chemistry, 1995, 14(4): 170~176.[5] J P Murrihy, M C Breadmore, A Tan et al. J. Chromatogr. A, 2001, 924: 233~238.[6] 陆豪杰, 阮宗琴, 康经武等. 分析测试技术与仪器, 1999, 5(3): 129~134.[7] 金亚, 罗国安, 王如骥. 色谱, 2000, 18(4): 313~317.[8] 王辉, 林炳承. 分析化学, 2002, 30(3): 359~364.[9] R D Oleschuk, L L Shultz-Lockyear, L Y Ning et al. Anal. Chem., 2000, 72: 585~590.[10] B S Broyles, S C Jacobson, J M Ramsey. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer Academic Publishers,p537~538.[11] Y Cong, M H Davey, F Svec et al. Anal. Chem., 2001, 73: 5088~5096.[12] H Hisamoto, T Horiuchi, M Tokeshi et al. Anal. Chem., 2001, 73: 1382~1386.[13] H Hisamoto, T Horiuchi, K Uchiyama et al. Anal. Chem., 2001, 73: 5551~5556.[14] H Hisamoto, T Horiuchi, K Uchiyama et al. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer AcademicPublishers, p667~669.[15] 刘茉娥. 膜分离技术. 北京: 化学工业出版社, 2000: 1~10.[16] J Khandurina, S C Jacobson, L C Waters et al., Anal. Chem., 1999, 71: 1815~1819.[17] D M Cannon Jr , T C Kuo, W Feng et al. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer Academic Publishers,p199~200.[18] M G Spencer, B R Flachsbart, T Yasunaga et al. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer AcademicPublishers, p195~196.[19] 孙彦平, 孟晓雄. 分析测试技术与仪器, 1997, 3(3): 168~173.[20] N Ishizuka, H Minakuchi, K Nakanishi et al. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer AcademicPublishers, p555~556.[21] E Chmela, R Tijssen, M T Blom et al. Anal. Chem., 2002, 74: 3470~3475.[22] G Frye-Mason, R Kottenstette, C Mowry et al. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer AcademicPublishers, p658~660.[23] N Chronis, W Lam, L Lee. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer Academic Publishers, p497~498.[24] V I Furdui, D J Harrison. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer Academic Publishers, p289~290[25] J Gaudioso, D E Miller, S W P Turner et al. In Proceedings of Micro Total Analysis System 2001, Netherlands: Kluwer AcademicPublishers, p107~108.[26] N Xu, Y Lin, S A Hofstadler et al. Anal. Chem., 1998, 70: 3553~3556.[27] A E Kamholz, B H Weigl , B A Finlayson et al. Anal. Chem., 1999, 71: 5340~5347.[28] Van den Berg, W A Olthuis, P Bergveld(Eds.), In Proceedings of Micro Total Analysis System 2000, Netherlands: Kluver AcademicPublishers: 473.[29] 徐溢, Jan C T Eijkel, A Manz. 分析化学, 2000, 28(10): 1295~1299.[30] 徐溢. 重庆大学学报(自然科学版), 2002, 25(1): 150~153.[31] 徐溢, 唐守渊. 压电与声光, 2001, 23(5): 124~126.[32] 徐溢, F Bessoth, A Manz. 分析化学, 2000, 28(7): 876~878.。
Hi-C：高通量染色体构象分析技术作者：***来源：《科学》2019年第01期Hi-C是一种分析染色体空间构象的高通量测序技水，它有助于研究者理解染色体三维空间结构、染色体之间相互作用以及基因表达的空间调控机制，相关结果深化了对组织发育和瘩症发生等过程的认识，而这种技术的诞生，缘起千科学家对染色体及其结构持续不断之探素。
染色体是一种存在于真核细胞核内的特殊结构，通过影响遗传物质DNA活性而对细胞行为的各方面发挥关键性影响。
根据“结构决定功能”原则，染色体二维（three-dimension，3D）结构自然成为理解其生物学功能的基础，然而限于技术上的原因，对染色体3D结构的解析，进展一直较为缓慢。
染色体：遗传的物质和结构基础首先回顾一下染色体研究的历程。
1879年，德国细胞生物学家弗莱明（W.Flemming）在研究细胞时发现，细胞核内存在可被碱性染料高度着色的物质，根据这一特性于次年将其命名为染色质（chromatin）;1888年，另一位德国解剖学家冯.瓦尔代耶一哈茨（H.W： G.von Waldeyer-Hartz）创造出染色体（chromosome）一词。
染色质和染色体两个术语存在一定差异。
首先所描绘的状态不同：在细胞分裂间期，核内结构较为松散，无固定形态，一般称为染色质;在细胞分裂期，结构浓缩，产生可明显辨识的形态，称染色体。
其次侧重点不同：染色质侧重于物质组成（类似“蛋白质”命名），而染色体倾向于结构（类似“线粒体”命名），因此提及二维结构时更多使用染色体一词。
早在1869年，瑞士医生米歇尔（F.Miescher）鉴定出染色质的核心成分——核酸（主要是DNA）;而1884年，德国科学家科赛尔（A.Kossel）进一步发现染色质的另一关键成分——组蛋白，从而明确了染色质的物质基础。
19世纪末，德国科学家博韦里（T.H.Boveri）和美国遗传学家萨顿（W.S.Sutton）基于细胞分裂过程中的染色体变化，提出“遗传的染色体决定”学说。
计算机生物信息学1. 生物信息学中，用于存储和管理生物数据的常见数据库是（）A. GenBankB. MySQLC. SQL ServerD. Oracle答案：A解析：GenBank 是常见的生物数据存储数据库。
2. 以下哪种算法常用于序列比对（）A. 冒泡排序B. 快速排序C. 动态规划D. 贪心算法答案：C解析：动态规划常用于序列比对。
3. 在蛋白质结构预测中，从头预测方法基于（）A. 已知蛋白质结构B. 物理化学原理C. 同源建模D. 机器学习答案：B解析：从头预测基于物理化学原理。
4. 生物信息学中分析基因表达数据常用的方法是（）A. 聚类分析B. 关联规则挖掘C. 分类算法D. 以上都是答案：D解析：聚类分析、关联规则挖掘、分类算法都常用于分析基因表达数据。
5. 以下哪种数据结构常用于存储生物序列（）A. 栈B. 队列C. 链表D. 数组答案：C解析：链表常用于存储生物序列。
6. 系统发生分析中，构建进化树常用的方法是（）A. 邻接法B. 冒泡排序法C. 插入排序法D. 选择排序法答案：A解析：邻接法常用于构建进化树。
7. 蛋白质二级结构预测的方法不包括（）A. 基于规则B. 基于机器学习C. 基于物理模型D. 基于随机猜测答案：D解析：随机猜测不是正规的预测方法。
8. 以下哪种编程语言在生物信息学中应用广泛（）A. PythonB. JavaC. C++D. 以上都是答案：D解析：Python、Java、C++ 在生物信息学中都有广泛应用。
9. 基因芯片数据处理中，标准化的目的是（）A. 消除误差B. 统一量纲C. 提高精度D. 以上都是答案：D解析：标准化可消除误差、统一量纲、提高精度。
10. 生物信息学中，序列相似性搜索常用的工具是（）A. BLASTB. FASTAC. 以上都是D. 以上都不是答案：C解析：BLAST 和FASTA 都是常用的序列相似性搜索工具。
11. 以下哪种文件格式常用于存储蛋白质序列（）A..txtB..fastaC..docD..xls答案：B解析：.fasta 常用于存储蛋白质序列。
转录组学主要技术
转录组学技术的发展与各种高通量测序技术的出现密不可分。
常用的转录组分析技术包括：
1、序列比对法：利用同源序列比对参考基因组上已知的基因的CDS（开放阅读框）序列来鉴定特定物种的基因，以找到其基因组被表达的部分。
2、差异表达分析:指的是利用反转录PCR（RT-PCR），定量PCR（qPCR），DNA平板来比较两个样本组之间某一特定基因的表达差异，也可以是全基因组范围RNA表达水平之间的差异。
3、定量比对组学（RNA-Seq）：是通过多种技术（测序，反转录，分析，计算），在特定样品中分析和定量整体基因组级别的表达水平。
4、DNA甲基化组学（MeDIP-Seq）：利用体外修饰（5-Methyl-Cytosine）标记的DNA 片段对物种的原位甲基化进行检测，该技术可用来解析基因组上的甲基化结构以及其对基因表达和功能的影响。
5、ChIPSeq技术：利用常用的介导DNA修饰，如乙酰化，甲基化，....的的蛋白质的修饰鉴定出具有特定修饰功能的基因片段，主要用于分析转录调节因子蛋白质与细胞调节功能关系。
6、miRNA测序技术：指利用多种技术，包括在线高通量测序，实验室直接测序，反转录定量报告，PCR半定量等，来定量检测各种微小RNA的表达特征，其中最常用的是miRNA测序，用于分析miRNA的功能，以及其调节作用。
7、元基因组学（metagenomics）：是对某一分群或环境中微生物组成及功能进行分析，包括16S rRNA测序，宿主及外源基因分析，细菌功能基因组研究等，主要用于探索各种未知细菌群落或功能。
专题29 全国卷语法填空根底巩固1.阅读下面短文，在标有序号的空白处填入一个适当的词，或填入括号中单词的正确形式The Water Splashing Festival (泼水节) of the Dai ethnic minority falls in April. It is the most important festival ________ (observe) by the Dai people in the Dehong area of Xishuangbanna, Yunnan Province.During the festival ________lasts three or four days, people are dressed in their best clothes and participate in a variety of rich and colorful ________(activity). Dragon boat racing, fireworks displays and other performances such as Peacock Dance ________(hold) on the first day. And the most popular event ________(be) water-splashing on the second day. People splash water on each other, hoping to take away sicknesses and disasters. The wetter you get, the ________(lucky) you will be. The last day is usually for the young people to play games as a way ________(express) their love for each other.The Water Splashing Festival ________(vivid) exhibits the Dai's respect for water and the culture of music and dance, food, and costumes. It is also a cultural bridge ________Xishuangbanna and Southeast Asian countries that share ________same festival culture of water-splashing.【答案】 observed；which/that；activities；are held；is；luckier；to express；vividly；between；the【解析】〔1〕考查非谓语动词。
ChIP实验步骤第一天：（一）、细胞的甲醛交联与超声破碎。
1、取出1平皿细胞（10cm平皿），加入243ul 37％甲醛，使得甲醛的终浓度为1％。
（培养基共有9ml）2、37摄氏度孵育10min。
3、终止交联：加甘氨酸至终浓度为0.125M。
450ul 2.5M甘氨酸于平皿中。
混匀后，在室温下放置5min即可。
4、吸尽培养基，用冰冷的PBS清洗细胞2次。
5、细胞刮刀收集细胞于15ml离心管中（PBS依次为5ml，3ml和3ml）。
预冷后2000rpm 5min 收集细胞。
6、倒去上清。
按照细胞量，加入SDS Lysis Buffer。
使得细胞终浓度为每200ul含2×106个细胞。
这样每100ul溶液含1×106个细胞。
再加入蛋白酶抑制剂复合物。
假设MCF7长满板为5×106个细胞。
本次细胞长得约为80％。
即为4×106个细胞。
因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。
将2管混在一起，共800ul。
7、超声破碎：VCX750，25％功率，4.5S冲击，9S间隙。
共14次。
（二）、除杂及抗体哺育。
8、超声破碎结束后，10，000g 4度离心10min。
去除不溶物质。
留取300ul做实验，其余保存于－80度。
300ul中，100ul加抗体做为实验组；100ul不加抗体做为对照组；100ul加入4ul 5M NaCl （NaCl 终浓度为0.2M），65度处理3h解交联，跑电泳，检测超声破碎的效果。
9、在100ul的超声破碎产物中，加入900ul ChIP Dilution Buffer和20ul的50×PIC。
再各加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。
4度颠转混匀1h。
10、1h后，在4度静置10min沉淀，700rpm离心1min。
11、取上清。
各留取20ul做为input。
一管中加入1ul 抗体，另一管中则不加抗体。
4度颠转过夜。
（三）、检验超声破碎的效果。
取100ul超声破碎后产物，加入4ul 5M NaCl，65度处理2h解交联。
分出一半用酚/氯仿抽提。
电泳检测超声效果。
第二天：（一）、免疫复合物的沉淀及清洗。
12、孵育过夜后，每管中加入60ul Protein A Agarose/Salmon Sperm DNA。
4度颠转2h。
13、4度静置10min后，700rpm离心1min。
除去上清。
14、依次用下列溶液清洗沉淀复合物。
清洗的步骤：加入溶液，在4度颠转10min，4度静置10min沉淀，700rpm离心1min，除去上清。
洗涤溶液：a. low salt wash buffer----one washb. high salt wash buffer-----one washc. LiCl wash buffer------one washd. TE buffer------two wash15、清洗完毕后，开始洗脱。
洗脱液的配方：100ul 10％SDS， 100ul 1M NaHCO3， 800ul ddH2O，共1ml。
每管加入250ul洗脱buffer，室温下颠转15min，静置离心后，收集上清。
重复洗涤一次。
最终的洗脱液为每管500ul。
16、解交联：每管中加入20ul 5M NaCl（NaCl终浓度为0.2M）。
混匀，65度解交联过夜。
第三天：（一）、DNA样品的回收17、解交联结束后，每管加入1ul RNaseA（MBI），37度孵育1h。
18、每管加入10ul 0.5M EDTA， 20ul 1M Tris.HCl（PH 6.5），2ul 10mg/ml 蛋白酶K。
45度处理2h。
19、DNA片段的回收―――omega胶回收试剂盒。
最终的样品溶于100ul ddH2O。
（二）、PCR分析二、技术总结（一）、关于细胞细胞的生长状态要好。
因为细胞的生长状态直接影响细胞内部的基因表达调控网络，也很有可能影响你所研究的TF与其靶Promoter的结合。
一般细胞长到75％－80％比较好。
（二）、关于抗体！抗体是实验成败的致命因素之一！必须是IP级别的抗体，另外如果经济条件许可的话，尽量买大厂的抗体。
不推荐国产抗体和santa cruz的抗体，即使是IP级别的。
单抗与多抗的选择也需要仔细考虑。
两种抗体各有利弊。
单抗特异性强，背景低。
但是单抗有一个致命的弱点，就是识别位点单一，而在ChIP甲醛交联的过程中，很有可能该位点被其它蛋白或核酸结合而被封闭，导致单抗不能识别靶蛋白。
多抗虽然没有这个问题，但是多抗特异性较差，背景可能会偏高。
一般而言，如果没有十足把握（单抗的识别位点远离靶蛋白与核酸结合的区域），选择多抗比较稳妥一些。
（三）、关于交联与超声破碎！这一块的确是ChIP实验中比较难把握的部分。
交联的程度会影响到超声破碎的效果，交联的程度越高，超声破碎就越不易把基因组打碎成小片段。
交联不充分，只有一部分靶蛋白与其Promoter相结合，富集得到的Promoter的量不高，实验假阴性。
交联过充分，基因组上结合了太多的蛋白，对超声破碎造成障碍。
另外也会增加背景。
一般来讲，按照我的经验，交联条件取决于细胞类型。
不同的细胞系，交联的条件也不一样。
例如：NIH－3T3的交联条件是室温（25摄氏度）下15min，1％的甲醛浓度，而别的细胞系则可能完全不一样。
而超声破碎的条件，机器不一样，条件也不一样。
当然如果你有bioruptor这样的神器，那么超声破碎对你而言就是小菜一碟了。
一般，理想的超声破碎得到的片段大小是200bp－1000bp。
但是200bp－2000bp的范围也是可以接受的。
（四）、关于操作希望尽可能的保持低温（4度）。
沉淀的时候可以先在4度放置一会，等它自然沉降一些，再超低转速（500rpm等）离心使其完全沉降。
虽然说明书上说ChIP实验的过程中有几个可以停顿的地方，我还是希望你能够连续把它做完，直到PCR结果出来为止。
尽量避免实验中不可预知的影响因素。
（五）、关于解交联虽然说明书上说4小时已经足够，但是我还是希望你可以解交联过夜。
因为在那样的环境里，DNA不会降解，过夜解交联更充分些。
只是不要忘记在EP管口封上封口膜。
（六）、关于DNA片段的回收需要注意的是：样品中SDS样品较高，普通的PCR产物回收试剂盒回收，很有可能会在最终的样品中混入SDS，影响PCR实验结果。
小Tip：过柱前，在样品中加入一定量的异丙醇，能有效的消除SDS沉淀一、ChIP是一项比较流行的研究转录因子（transcription factor, TF）与启动子（promoter）相互结合的实验技术。
由于ChIP采用甲醛固定活细胞或者组织的方法，所以能比较真实的反映细胞内TF与Promoter的结合情况。
这个优势是EMSA这个体外研究核酸与蛋白相互结合的实验方法所不能比拟的。
当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白，蛋白与核酸（DNA或RNA）之间会产生共价键。
细胞内，当TF与Promoter相互结合（生物意义上的结合）时，它们必然靠的比较近，或者契合在一起，这个时候用甲醛处理，能使它们之间产生共价键。
一般ChIP的流程是：甲醛处理细胞——收集细胞，超声破碎——加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合——加入Protein A，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀——对沉淀下来的复合物进行清洗，除去一些非特异性结合——洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物——解交联，纯化富集的DNA片断——PCR分析。
在PCR分析这一块，比较传统的做法是半定量－PCR。
但是现在随着荧光定量PCR的普及，大家也越来越倾向于Q－PCR了。
此外还有一些由ChIP衍生出来的方法。
例如RIP（其实就是用ChIP 的方法研究细胞内蛋白与RNA的相互结合，具体方法和ChIP差不多，只是实验过程中要注意防止RNase，最后分析的时候需要先将RNA逆转录成为cDNA）；还有ChIP-chip（其实就是ChIP富集得到的DNA片段，拿去做芯片分析，做法在ChIP的基础上有所改变，不同的公司有不同的做法，要根据公司的要求来准备样品）。
ChIP assay: Chromatin immunoprecipitation assay was performed according to the protocol of ChIP assay kit (Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY).1, For cells cultured in 2D, about 1-2X107 S1 cells were growth in 100mm dish, and were cross-linked by adding formaldehyde to final concentration of 1% and incubated in room temperature for 10 minutes. For cells growth in 3D, cells were isolated from EHS using PBS/EDTA, and also cross-linked as cells growth in 2D.2, Wash cells twice using ice cold PBS containing protease inhibitors (1mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), 1microgram/ml aprotinin and 1microgram/ml pepstatin A). Note: Add protease inhibitors to PBS just prior to use. PMSF has a half-life of approximately 30 minutes in aqueous solutions.3, Scrape cells into conical tube, Pellet cells for 4 minutes at 2000 rpm at 4℃.4, Cells were washed with PBS and resuspended in ChIP lysis buffer (1% SDS, 10mM EDTA, 50 mM Tris-HCl pH8.0) add protease inhibitors (inhibitors: 1mM PMSF, 1microgram/ml aprotinin and 1microgram/ml pepstatin A).. After incubated 10 minutes on ice, cells were sonicated to shear DNA to lengths between 200 and 1000 basepairs being sure to keep samples ice cold.5, Centrifuge samples (part A, step 7) for 10 minutes at 13,000 rpm at 4℃, and detected the OD260 of the lysates.6, Sonicated lysates were then diluted to OD260 2 with ChIP dilution buffer (). 60 ul protein A-agarose beads (Upstate Catalog # 16-157) was added to sonicated lysates and rotated at 4 for one hour to reduce the non-specific dinding.7, Pellet agarose by brief centrifugation and collect the supernatant fraction, 20ul of lystates were taken out as input control.9, Add the immunoprecipitating antibody (the amount will vary per antibody) to the 2ml supernatant fraction and incubate 2h at 4℃with rotation. For a negative control, perform a no-antibody immunoprecipitation by incubating the supernatant fraction with 60 microliters of Salmon Sperm DNA/Protein A Agarose Slurry for one hour at 4℃with rotation.10, Pellet agarose by gentle centrifugation (700 to 1000 rpm at 4℃, ~1min). Carefully remove the supernatant that contains unbound, non-specific DNA. Wash the protein A agarose/antibody/histone complex for 3-5 minutes on a rotating platform with 1ml of each of the buffers listed in the order as given below:Low salt wash buffer (0.1% SDS, 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 20 mM Tris-HCl pH8.0, 150 mM NaCl); High salt wash buffer (0.1% SDS, 1% Triton X-100, 2 mM EDTA, 20 mM Tris-HCl pH8.0, 500 mM NaCl); LiCl buffer (0.25 M LiCl, 1% NP-40, 1% SDC, 1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCl pH8.0); TE buffer (20 mM Tris-HCl pH8.0, 1 mM EDTA pH8.0).11, Elute the histone complex from the antibody by adding 250 microliter elution buffer (1%SDS, 0.1M NaHCO3) to the pelleted protein A agarose/antibody/histone complex from step 10 above. Vortex briefly to mix and incubate at room temperature for 15 minutes with rotation. Spin down agarose, and carefully transfer the supernatant fraction (eluate) to another tube and repeat elution. Combine eluates (total volume=approximately 500 microliters.)12, Add 20 microliters 5M NaCl to the combined eluates (500 microliters) and reverse histone-DNA crosslinks by heating at 65℃for 4 hours.Note: Include the input DNA from this step.13, Add 10 microliters of 0.5M EDTA, 20 microliters 1M Tris-HCl, pH 6.5 and 2 microliters of 10mg/ml Proteinase K to the combined eluates and incubate for one hour at 45℃.14, Recover DNA by phenol/chloroform extraction and ethanol precipitation. Addition of an inert carrier, such as 20 microgramsglycogen, helps visualize the DNA pellet. Wash pellets with 70% ethanol and air dry.15, Resuspend pellets in an appropriate buffer for PCR or slot-blot reactions. PCR or slot-blot conditions must be determined empirically. （本文来源于爱番茄 , 原文地址：/archives/399.html）染色质免疫沉淀（ChIP）实验中应注意的细节问题仅供参考使用，最好实验条件需要自己摸索：1、cell counting：尽量做到准确，会影响input结果。
