高纯度质粒大量快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书

高纯质粒小量提取试剂盒（柱离心型）(Plasmid Minispin HP Kit Ver.2)产品说明：本试剂盒在常规柱离心质粒提取技术的基础上，改进了硅基质膜材料和试剂配方，使质粒DNA获得高效、专一吸附。

经过两步洗涤，可清除蛋白质、基因组DNA、RNA和其他杂质。

新增基质平衡液处理步骤，可进一步提高硅胶膜的DNA吸附能力，获得稳定的质粒产量。

适合于从1~3 ml培养液中提取质粒DNA。

高拷贝菌液可获得质粒DNA约5~30 μg，可应用于各种常规实验如酶切、PCR、测序、连接、转化和体外转录等操作，并可用于细胞转染工作。

产品内容与储存方法：名称数量保存条件Buffer P1（重悬液）20 ml RTBuffer P2（裂解液）20 ml RTBuffer P3（结合液）30 ml RTBuffer PE（平衡液）30 ml RTBuffer PWT （洗涤液T）* 30 ml RTBuffer PW （洗涤液）** 20 ml RTElution Buffer（洗脱液）10 ml RT离心柱及套管100套RTRNase A 20 mg/ml 0.1 ml -20℃试剂盒可作100次质粒小量提取。

常温运输，室温保存。

RNase A于-20℃保存，首次使用时加入Buffer P1中混匀，置4℃保存。

*Buffer PWT（洗涤液T）在首次使用时加入异丙醇30 ml混匀。

**Buffer PW（洗涤液）在首次使用时加入无水乙醇80 ml混匀。

有效期1年。

所需其它试剂：使用者需准备加入洗涤液的无水乙醇和异丙醇。

操作方法：1)收菌：取过夜培养菌1~3 ml菌液，装入1.5ml 或2ml离心管中，12,000 x g于室温离心2 min沉淀菌体，完全弃除上清。

2)重悬：加入200 µl Buffer P1，充分混悬震荡菌体沉淀10~15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。

3)裂解：加入200 µl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3~5次，室温放置2~3 min，使细菌完全裂解，溶液透明。

质粒快速提取试剂盒试剂盒组成●STE缓冲液（溶液1）●Lysis Buffer（溶液2）●3M NaAc，pH 4.8（溶液3）●结合缓冲液●浓缩漂洗液●洗脱缓冲液●离心吸附柱●废液收集管●RNaseA （10mg/ml）●产品说明书实验准备：●使用本试剂盒之前，请在每5ml溶液1中加入150ul RNaseA（10mg/ml），使RNaseA终浓度达到0.2mg/ml。

溶液1使用完毕后，请立即至于4℃保存。

如果溶液1放置时间过长（超过两个月），提取的质粒可能会有RNA污染。

这时可在步骤一后直接加入1－5ul RNaseA（10mg/ml），即可除尽RNA的污染。

有RNA污染的质粒，可加入0.5ul RNaseA（10mg/ml），37℃作用10分钟，此操作不会影响其他后续实验。

●浓缩漂洗液在使用前请按照1：3的比例加入无水乙醇，混匀后方可使用。

●在每次提取质粒实验前，请检查溶液2及结合缓冲液是否有高盐结晶。

如有结晶，请将其瓶盖拧松后置于微波炉中档连续加热约30秒，高盐结晶充分溶解后再使用。

实验操作步骤：1．收集2－3ml菌液沉淀于1.5ml离心管中。

加入100ul溶液1，振荡至彻底悬浮。

●为了获得高质量的质粒DNA，培养细菌的时间不宜过长，一般为12小时；●细菌沉淀中加入溶液1后，一定要彻底悬浮，否则抽提质粒DNA的纯度及得率会大大降低2．加入150ul溶液2，立即轻柔颠倒离心管数次，使菌体充分裂解，裂解后得菌体变得清亮。

随后将离心管室温放置1－2分钟（时间勿超）。

3．加入150ul溶液3，立即温和颠倒离心管数次，室温放置5分钟。

12000rpm离心12分钟。

●要获得更好得质粒提取效果，请于步骤2和步骤3后，冰上放置。

4．将500ul结合缓冲液加入离心柱中。

然后将步骤3的上清加入离心吸附柱中（尽量去除杂质），混匀。

12000rpm离心30秒钟。

倒掉废液收集管中得溶液。

5．加入750ul漂洗液于离心吸附柱中，12000rpm离心1分钟。

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。

若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。

加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。

产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。

菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。

通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。

北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。

所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。

产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。

2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。

质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。

实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

详细内容请参考《分子克隆实验指南》。

另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。

碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。

将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。

尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。

只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。

在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。

当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。

在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。

煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。

加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。

但是。

闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。

当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。

质粒提取试剂盒提取步骤1、用1.5 ml离心管收集5-6 ml菌液。

12,000 rpm离心1min，弃上清。

●应根据所培养菌体的浓度与质粒的拷贝数，确定收集的菌液量。

菌量过大可能导致溶菌不充分，纯化时会影响质粒纯度。

菌体的体积与质粒拷贝数参见注意事项。

2 、加入250 μl溶液Ⅰ/RNase A混合液，漩涡剧烈振荡直至菌体完全重新悬浮。

室温静置1- 2min。

●初次使用本试剂盒时，请将RNase A全部加入到溶液Ⅰ中，均匀混合后于 4℃保存。

可保存6 个月。

●不要残留细小菌块。

菌体悬浮充分与否将决定质粒DNA 得率的高低。

●室温静置1-2 min 是为使溶液中的RNA 被充分降解。

3 、加入250 μl溶液Ⅱ，轻柔地反复颠倒混匀5-6次。

室温放置1-2 min，使菌体充分裂解，直至形成澄清的裂解溶液。

●若溶液Ⅱ出现沉淀，请于37℃保温溶解。

待恢复至室温后使用。

沉淀的出现不会影响质粒DNA 的纯化结果。

●不可剧烈混和，否则会使染色体DNA 断裂。

●此步骤不宜超过5 min。

4、加入350 μl溶液Ⅲ，立即轻柔地反复颠倒混匀5-6次。

此时会出现白色絮状沉淀。

5 、12,000 rpm 室温离心10 min，收集上清。

6 、将上清置于DNA纯化柱中，静置1-2 min。

●如果收集的上清液过多，超过DNA 纯化柱容积（800 μl），可将上清分次加入DNA 纯化柱中。

7、 12,000 rpm 离心1 min，弃滤液。

●此时质粒DNA 被吸附于DNA 纯化柱的硅胶膜上。

8 、加入500 μl 溶液HB（异丙醇），12,000 rpm 离心1 min，弃滤液。

●此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱，以获得高质量质粒DNA。

9 、加入500 μl溶液Wash DNA buffer，12,000 rpm 离心1 min，弃滤液。

●溶液W 初次使用前用无水乙醇按1: 1.5 稀释，即含60%乙醇。

北京索莱宝科技有限公司质粒大提试剂盒说明书货号：D1110规格：10次保存：常温保存，复检期一年。

试剂盒内容：RNaseA(10mg/ml)1ml溶液Ⅰ60ml溶液Ⅱ60ml溶液Ⅲ80ml漂洗液2×15ml洗脱液30ml吸附柱10个收集管(50ml)20个说明书1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，一般从50-100ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取200-300μg高纯度高拷贝的质粒DNA，提取率达85-90%。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤:第1页共3页1.收集50-100ml过夜培养的菌液11000rpm离心10分钟，尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

2.向留有菌体沉淀的离心管中加入5ml溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3.向离心管中加入5ml溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意：①翻转一定要温和，以免污染细菌基因组DNA。

②作用时间不要超过5分钟，以免质粒受到破坏。

4.向离心管中加入7ml溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀(如菌液过多，可在此步放置5分钟，以尽可能的降解RNA)。

11000rpm离心10分钟，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，注意尽量不要吸出沉淀。

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EndoFree Plasmid Maxi Kit无内毒素质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL13试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1301)RNaseA（10mg/ml）-20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml内毒素清除剂-20℃25 ml漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

内毒素清除剂常温运输，4度可以保存一个月，长期保存放-20℃。

储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于4℃保存。

如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会混杂有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

快速，方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90 %。

高纯总RNA快速提取试剂盒（RLT-离心柱型）GK3091 20次GK3092 50次一.试剂盒组成Components GK3091 GK3092GenClean Column 2.0-ml Collection TubeRLT Solution aRW SolutionRPE Solution bDEPC-WaterProtocol202014ml15ml5ml2ml1copy505035ml30ml12ml4ml1copya. 在收到试剂盒后，应将RLT Solution取出存放于4ºC。

b. RPE Solution在首次使用前，必须加入4倍体积的无水乙醇。

无水乙醇必须是新开封的，保证无RNase污染。

用户自备试剂、材料：无水乙醇、70%乙醇(DEPC-H2O配制，植物和丝状真菌用)、PBS(动物细胞用)、液氮(植物和丝状真菌用)、RNase-free的Eppendorf管和Tips。

二．基本原理幼嫩组织和对数生长期的细胞生长旺盛，含有大量的RNA。

RLT Solution能使细胞裂解，释放出RNA的同时灭活RNase。

GenClean柱中的膜能选择性的与RNA结合，而蛋白等杂质不能结合，经RW Solution和RPE Solution的几步洗涤后结合在膜上的RNA用DEPC-H2O洗脱，可用于各种分子生物学实验。

三. 主要特点1. 安全，整个过程没有用酚和氯仿抽提，无须担心酚和氯仿对皮肤和呼吸道的腐蚀。

2. 纯度高，本试剂盒抽提得到的RNA样品可用于任何分子生物学操作。

3. 快速，整个抽提过程只需要20分钟。

四. 操作步骤表1 不同组织和细胞最大使用量样品最大使用量动物细胞 1x107动物组织 50mg细菌 1x109酵母 1x107植物组织 100mg丝状真菌 100mg为获得最佳的结果，采用的样品数量一定要合适。

可以参考表1。

细胞培养物、细菌菌体、酵母以及真菌菌丝应该在对数生长期收集，动物和植物样品应该取生长旺盛的幼嫩部位。

AxyPrep质粒大量提取试剂盒操作步骤AxyPrep Maxi Plasmid Kit (AXYGEN) AxyPrep质粒大量提取试剂盒操作说明实验准备:, 检查Buffer S1中是否已加入RNaseA。

, 检查Buffer W2中是否已加入无水乙醇。

, 检查Buffer S2是否出现沉淀，如有沉淀，在37?水浴中溶解沉淀，再平衡至室温。

,注意,Buffer S2不用时请立即盖紧，防止被空气中的CO中和。

, 2, 将Buffer S1，Buffer S3K和Buffer B放置4?预冷。

, 将洗脱液Eluent放置65?水浴中预热。

实验步骤:1. 将待提取的质粒对应菌液在5mL含有对应抗性的LB培养液中扩增培养过夜。

2. 次日，将5mL培养后的菌液接种至200mL含有对应抗性的LB培养液中扩增培养过夜。

3. 将菌液分装至5个50mL离心管中，每管40mL，4? 3000×g离心5min，彻底弃净上清。

4. 加入Buffer S1(已加RNaseA，4?预冷)，每管4mL，共20mL，涡旋充分重悬菌体。

5. 加入Buffer S2，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀，室温作用5min。

6. 加入Buffer S3K(4?预冷)，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀，室温作用5min。

7. 加入Buffer B(4?预冷)，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀。

8. 4?10000×g离心10min，小心取上清至新管，最终合并为2管。

9. (可选步骤)再次4? 10000×g离心10min，小心取上清至新管。

10. 将上步收集的上清全部加入Maxiprep syringe filter中，将注射器芯从上方推入，下方用纯化柱(Maxiprep column)盛接滤液。

11. 推注注射器芯，将液体滤至纯化柱中，同时在纯化柱下方连接输液器(预先剪除输液针)，并用10mL注射器负压反复抽吸，直至液体滤尽。