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实验四高效液相色谱法检测食品中对羟基苯甲酸酯类苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂，广泛存在于酱油、醋、化妆品中。
对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。
它们对食品均有防止腐败的作用，苯甲酸的杀菌、抑菌效力随介质的酸度增高而增强，在碱性介质中则失去杀菌、抑菌效力。
山梨酸是使用最多的防腐剂，也是酸性防腐剂。
对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇、乙腈等强极性溶液中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。
虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，则会危害人体健康。
各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760《食品添加剂使用卫生标准》明确规定了使用范围和最大使用量。
不同商品中的最大限量：苯甲酸0.2-1g/kg（中），山梨酸0.2-1g/kg（中），甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。
本方法可同时检测食品中上述8种防腐剂。
本实验检测溶液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。
一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；2、熟悉超高压液相色谱的分析操作规程；3、学习高效液相色谱检测食品中的防腐剂的方法。
二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸酯类，它们都是强极性化合物，可采用高效液相色谱进行分析。
以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯甲酸酯类含量。
X=(A2×C)/A1（为样品中对羟基苯甲酸酯类的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样对羟基苯甲酸酯类的峰面积；A2为样品中对羟基苯甲酸酯类峰面积；C为对羟基苯甲酸酯类标准液质量浓度。
食品中对羟基苯甲酸酯类的检测摘要：文章采用超声提取-高效液相色谱法同时测定食品中3种对羟基苯甲酸酯（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯）含量的方法。
对羟基苯甲酸酯类属于防腐剂，按gb/t5009.31-2003国家推荐方法检测[1]，样品提取比较繁琐、费时，且回收效果欠佳。
本文利用较为常见的紫外检测器通过优化条件，摸索出一个简捷、快速、经济、灵敏，又能保证一定精度的测定方法。
本方法加标回收率在86.08%～112.71%之间，线性系数r>0.9998，检出限可达0.10ug/ml，分析时间短，完全能够满足分析要求，可广泛应用于食品中对羟基苯甲酸酯类检测分析。
关键词：对羟基苯甲酸酯类；高效液相色谱法中图分类号：o657.7+2 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0064-21 实验部分1.1 仪器和试剂1.1.1 仪器 shimadzu lc 10vp plus高效液相色谱系统（日本shimadzu公司），配紫外检测器及lc solution色谱工作站；分析天平：感量0.1mg；氮吹仪：美国organomation n-evap112型；均质机：ikar werke t25型均质机；溶剂过滤装置；0.45μm和0.22μm过滤膜和过滤头；milli-q超纯水机。
1.1.2 试剂甲醇、乙腈为hplc级；乙醇为分析纯；水为超纯水。
标准品：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯，纯度为99.0%，美国进口，购于上海安谱。
1.2 标准溶液的配制[2]标准贮备液：精密称取三种标准物质0.05g，用无水乙醇溶解并定容于50ml容量瓶中，配制成浓度为1mg/ml的标准贮备液，贮于4℃冰箱中备用。
标准使用液：用刻度吸管准确吸取三种标准贮备液，根据需要用无水乙醇配制成不同浓度的标准溶液系列，待用。
1.3 色谱条件色谱柱：diamonsil c18，粒度5μm，4.6mm×250mm（id×l）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；进样量：20 μl；流动相：水-乙腈（体积比为45：55）；柱温：室温。
食品中对羟基苯甲酸酯类的测定高效液相色谱法1 范围本标准适用于酱油、醋、果酱、糕点、腌制品、果酒及饮料等食品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。
本标准检出限：对羟基苯甲酸甲酯：1.8 mg/kg；对羟基苯甲酸乙酯：1.2 mg/kg；对羟基苯甲酸丙酯：0.9 mg/kg；对羟基苯甲酸丁酯：1.3 mg/kg。
2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3 原理试样用乙醇超声波提取，取上清液过滤，以高效液相色谱法分离，二极管或紫外检测器检测，外标法定量。
4 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 甲醇（色谱纯）。
4.2 乙酸铵（分析纯）。
4.3 20 mmol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54 g乙酸铵（4.2）用水定容至1000 ml，过0.45μm 滤膜。
4.4 无水乙醇（分析纯）。
4.5 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯：99 %以上。
4.6 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准储备溶液：准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯各0.050 g于50 mL容量瓶中，用甲醇（4.1）稀释至刻度，该溶液每毫升相当于1 mg的对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。
4.7 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准工作溶液：将混合标准溶液用甲醇（4.1）依次稀释成1.0 μg/ml、10.0 μg/ml、25.0 μg/ml、50.0 μg/ml、100.0 μg/ml的系列标准溶液，使用前配制。
应用报告 文档编号：LC-AR-0202003HPLC 法测定五种常用防腐剂的含量摘要：防腐剂是用于保持食品原有品质和营养价值为目的的食品添加剂，它能抑制微生物的生长繁殖，防止食品腐败变质而延长保质期。
本文应用RIGOL L-3000高效液相色谱系统，对苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯进行了含量测定，获得了理想的分析结果，方法验证实验表明，RIGOL L-3000高效液相色谱系统完全符合方法的要求，数据结果准确，可靠。
关键词：苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、HPLC 色谱条件及谱图：仪器：RIGOL L-3000高效液相色谱仪色谱柱：RIGOL Compass C18, 5μm, 4.6mm ×250 mm ； 柱温：30℃流动相：A: 乙睛；B: 0.02mol/L 乙酸铵溶液pH=4（梯度洗脱）检测波长：波长时间程序流速：1.0mL/min图1. 苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯对照品的色谱图结论：本文中测试结果为：以苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯计理论塔板数分别为14022；18237；38387；70338；113816。
定量限分别为：0.466µg/mL ；0.173µg/mL ；0.339µg/mL ；0.324µg/mL ；0.365µg/mL 。
线性范围分别为84µg/mL-1680µg/mL (r=0.9991)；82.8µg/mL-1656µg/mL (r=0.9995)；72.4µg/mL-1448µg/mL (r=0.9993)；76.4µg/mL-1528µg/mL (r=0.9994)；88µg/mL-1760µg/mL (r=0.9998)。
实验报告课程名称：环境监测实验实验类型：综合实验实验项目名称：对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法、GC---白酒中酒精度的测定实验地点：环资B座实验日期：2018年12月06日一、实验目的和要求1.掌握HPLC的保留值定性方法与归一法定量2.熟悉液相色谱仪的操作过程二、实验内容和原理<对羟基苯甲酸酯类物质的测定--HPLC法>1.高效液相色谱HPLC：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。
高效液相色谱法有“四高一广”的特点：高压、高速、高效、高灵敏度、应用范围广。
其组成包含“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。
2.测定原理：在一定的实验条件下，组分的保留值保持恒定，测得的来知物的各纽分保留时间，与已知纯物质各组分的保留时间进行对照，即可确定未知物中各纽分存在与否。
这种利用纯物质对照进行定性的方法，适用于来源已知。
且组分简单的混合物。
3.归一法定量：要求试样中的各个组分都能得到完全分离。
并且在色谱图上应都能出峰，计算公式:c1=fiAi/ΣfiAi*100。
因为对羟基苯甲酸酯类属于同系物，它们在紫外光度检测器上具有相同的校正因子，故上式可简化为: c1=Ai/ΣAi*100< GC---白酒中酒精度的测定 >1. 气相色谱：气相色谱（gas chromatography 简称GC）是指用气体作为流动相的色谱法。
对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析液相色谱分析是一种常用的分离和定量化合物的方法。
在对羟基苯甲酸酯类混合物进行液相色谱分析时，需要选择合适的色谱柱、流动相和检测方法，以实现有效的分离和定量。
首先，选择合适的色谱柱非常重要。
对于羟基苯甲酸酯类混合物的分析，可以选择反相色谱柱。
反相色谱柱具有较好的选择性和分离能力，可以有效分离羟基苯甲酸酯类化合物。
在选择色谱柱时，需要考虑样品的性质、分析目标以及分离需求。
其次，选择合适的流动相也非常重要。
在反相色谱中，流动相通常是由有机溶剂和水组成的混合物。
不同的羟基苯甲酸酯类化合物对流动相的溶解度和解离常数有所不同，因此需要根据样品的特性来选择合适的流动相。
通常情况下，可以通过尝试不同比例的有机溶剂和水来找到合适的流动相条件。
同时，还可以探索其他添加剂如缓冲剂、pH调节剂来改善分离效果。
在液相色谱分析中，还需要选择合适的检测方法。
对羟基苯甲酸酯类混合物的定量分析，常用的检测方法包括UV-Vis吸收检测、荧光检测和电化学检测等。
UV-Vis吸收检测是最常用的检测方法之一，可以通过样品对紫外或可见光的吸收来定量分析。
荧光检测可以增强灵敏度，适用于分析浓度较低的样品。
电化学检测可以通过电化学信号（如电流、电势）来定量分析。
在进行液相色谱分析时，还需要优化一些实验条件来提高分离和定量的准确性和重复性。
例如，需要确定合适的进样量、流速和柱温等实验参数。
还可以采用梯度洗脱方法来进一步改善分离效果。
最后，在分析结束后，对数据进行处理和解释也是非常重要的。
可以使用标准曲线法来定量分析得到的色谱峰，通过峰面积或高度与标准品的浓度进行线性拟合，计算出样品中羟基苯甲酸酯类化合物的含量。
同时，还可以采用质谱联用技术对色谱峰进行鉴定和确认。
总之，对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析需要选择合适的色谱柱、流动相和检测方法，并进行实验参数的优化和数据处理，以获得准确的分离和定量结果。
这些方法可以用于不同范围内的样品检测，如医药、环境和食品等领域的分析研究中。
对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种广泛应用于化学、生命科学以及环境监测等领域的分离和分析技术。
对羟基苯甲酸酯类混合物的液相色谱分析，主要应用高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）进行分离和定量。
高效液相色谱是一种常见的液相色谱方法，通过应用高压将溶液推入柱中进行分离。
在对羟基苯甲酸酯类混合物进行液相色谱分析时，以下是一个可能的实验步骤：1.样品制备：将待分析的羟基苯甲酸酯类混合物溶解在合适的溶剂中，并进行必要的稀释。
2.色谱柱选择：选择适合分离目标化合物的色谱柱。
在HPLC中常用的色谱柱有反相柱、离子交换柱和正相柱等。
3.流动相制备：根据实际需要选择合适的流动相组分。
常用的流动相包括纯有机溶剂、水和其它缓冲液等。
4.色谱条件设置：设置合适的色谱条件，包括流速、柱温和检测器波长等。
这些条件通常需要根据待分析化合物的特性和色谱柱的要求进行优化。
5.样品进样：将样品加入自动进样器中，设定进样量并进行进样。
6.色谱分离：开启色谱仪，控制流速和柱温等条件，进行色谱分离。
在此过程中，目标化合物会在柱中与流动相发生相互作用，并在柱中保留一定的时间。
7.检测和定量：通过连接的检测器获得色谱图谱，并根据峰面积或峰高测定目标化合物的浓度。
选择合适的检测器可以根据化合物的性质来确定，常见的检测器包括紫外可见光检测器、荧光检测器和质谱检测器。
8.数据处理：利用色谱软件对得到的数据进行处理分析，生成峰面积、峰高、保留时间等结果。
需要注意的是，在实际的液相色谱分析中，可能需要对不同的样品进行前处理或者使用不同的溶剂体系进行优化。
同时，还需要注意校准曲线的制备和样品浓度的合理选择，以保证分析结果的准确性和可靠性。
总结起来，液相色谱是一种重要的分离和分析技术，对于对羟基苯甲酸酯类混合物的分析有着广泛的应用。
实验四高效液相色谱法检测食品中对羟基苯甲酸酯类苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是食品中常用的防腐剂，广泛存在于酱油、醋、化妆品中。
对羟基苯甲酸酯类有：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丁酯。
它们对食品均有防止腐败的作用，苯甲酸的杀菌、抑菌效力随介质的酸度增高而增强，在碱性介质中则失去杀菌、抑菌效力。
山梨酸是使用最多的防腐剂，也是酸性防腐剂。
对羟基苯甲酸酯类以丁酯的防腐作用最好，由于对羟基苯甲酸酯类都难溶于水，所以通常是将它们先溶于乙酸、乙醇、乙腈等强极性溶液中，然后使用，为更好发挥防腐作用，最好是将两种或两种以上的该酯类混合使用。
虽然在限量范围内食用上述防腐剂对人体影响不大，但若大量摄入，则会危害人体健康。
各国都对食品中可以使用的防腐剂种类和用量有严格的要求，如中国的GB2760《食品添加剂使用卫生标准》明确规定了使用范围和最大使用量。
不同商品中的最大限量：苯甲酸0.2-1g/kg（中），山梨酸0.2-1g/kg（中），甲酯1g/kg（中），乙酯0.1-0.25g/kg（中），丙酯0.012-0.2g/kg（中），丁酯0.25g/kg（日），异丁酯0.25g/kg（日）。
本方法可同时检测食品中上述8种防腐剂。
本实验检测溶液中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。
一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；2、熟悉超高压液相色谱的分析操作规程；3、学习高效液相色谱检测食品中的防腐剂的方法。
二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸酯类，它们都是强极性化合物，可采用高效液相色谱进行分析。
以对羟基苯甲酸酯类标样保留时间定性，采用外标法定量对羟基苯甲酸酯类含量。
X=(A2×C)/A1（为样品中对羟基苯甲酸酯类的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样对羟基苯甲酸酯类的峰面积；A2为样品中对羟基苯甲酸酯类峰面积；C为对羟基苯甲酸酯类标准液质量浓度。
对羟基苯甲酸酯类混合物的反相高效液相色谱分析引言：羟基苯甲酸酯类化合物广泛应用于医药、农药、染料、涂料等领域。
分析羟基苯甲酸酯类混合物的组分和含量对质量控制和新产品研发具有重要意义。
反相高效液相色谱作为一种广泛应用的分析方法，能够有效分离和测定羟基苯甲酸酯类混合物。
一、反相高效液相色谱的原理反相高效液相色谱通过利用固定相相对于流动相的更强亲和性，通过分子大小、亲水性和亲油性的差异，实现混合物的分离。
反相色谱固定相通常是碳链比较长的疏水性物质，流动相是亲水性的有机溶剂和缓冲溶液。
二、反相高效液相色谱仪器和试剂的准备1.反相高效液相色谱仪器：常见的仪器有普通液相色谱仪和高压液相色谱仪，具体选择根据实验需要。
2.柱和固定相：反相高效液相色谱柱可选择C18柱，其主要成分是碳链较长的疏水性物质。
柱的长短和内径的选择应根据分析目的确定。
3.流动相：在反相高效液相色谱中，流动相通常为亲水性有机溶剂和缓冲溶液的混合物，比如乙腈/水和甲醇/水的混合物。
4.标准样品：准备一系列不同浓度的羟基苯甲酸酯类化合物的标准溶液。
标准样品的纯度以及溶解度要得到验证。
三、反相高效液相色谱方法的优化1.流动相组成的优化：通过试验确定最佳流动相体系，优化色谱条件。
2.流速的优化：试验确认最佳流速，保证分离和分析的准确性。
3.柱温的优化：试验确定最佳柱温，保证分离的效果和色谱峰形。
4.检测器选择：选择合适的检测器，根据实验要求确定检测器的灵敏度和线性范围。
四、反相高效液相色谱条件的确定1.建立标准曲线：根据一系列不同浓度的标准溶液，进行色谱分析，绘制出峰面积与浓度的线性关系曲线。
2.样品预处理：将待测样品进行提取或者稀释，以达到合适浓度的范围。
3.优化反相高效液相色谱条件：根据实验目的和样品特点，选择和优化最佳流动相、流速、柱温等条件。
五、反相高效液相色谱分析结果的处理和表达1.色谱峰面积的积分：根据色谱图中峰的面积大小，进行峰面积的积分。
以对羟基苯甲酸甲酯为内标用HPLC作者:孟玲，王永庆，李娜，贾楠，陈玲【摘要】目的建立用内标法测定人血浆中氟康唑浓度的H PLC-UV方法。
方法以对羟基苯甲酸甲酯为内标，血浆用氨水碱化后，用乙酸乙酯提取，测定血浆中氟康唑的浓度。
结果血浆中杂质不干扰样品峰和内标峰，、、μg/ml的回收率分别为%，%及%；批内精密度均小于8%(高、中、低浓度分别为%，%及%)，批间精密度均小于10%(高、中、低浓度分别为%，%及%)，最低检测限为μg/ml，线性范围为～μg/ml；血浆中氟康唑冻融是稳定的；精密度也符合要求。
结论该方法稳定且精密度好，准确可靠，适用于氟康唑血浆浓度测定。
【关键词】氟康唑；对羟基苯甲酸甲酯；高效液相色谱-紫外；内标Det erminationth ehumanplasma contentofflu conazoleusin gthemethylpa rahy-droxybe nzoateasaint ernalstandar dbyHPLC-UVme thod【Abs tract】Objec tive Toestab lishthedeter minationmeth odoffluconaz oleinhealthy volunteerspl asma.Methods Theplasmawa salkalifiedb yammoniumhyd roxide，andfl uconazolewas extractedbya ceticether；andmethylpar ahydroxybenz oatewasusedasinternalsta ndard.Plasma concentratio nsoffluconaz oleandintern alstandardwe redetermined byHPLC-UV.Re sults Thechr omatographic peakofflucon azoleandinte rnalstandard wasnotinterf eredbyforEig nmatter.Reco veryrateof、、μg/mlwas%，%a nd%，respecti vely.Precisi oninorbetwee nbatchwasles sthan%and%，r espectively. Lowestdetect ablelimitwasμg/mlandline arrangewas～μg/ml.Thefree zethawingofp lasmawasstab le.Conclusio n Themethodw asreliablean dstable，itwa ssuitablefor determinatio ntheconcentr ationoffluco nazoleinplas ma.【Keyword s】fluconazo le；methylpar ahydroxybenz oate；HPLC-UV；internalsta ndard氟康唑是新型抗真菌药物，由于其穿透力强，分布容积大，血清消除半衰期长，故具有长效特点，可用于多种组织器官深部真菌感染的治疗，具有一定的临床价值。
HPLC法检测乳品中对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素万鹏;赵贞;李翠枝;邵建波;王云霞;刘春霞【期刊名称】《乳业科学与技术》【年(卷),期】2013(036)003【摘要】建立了乳制品中的对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素的高效液相色谱分析方法.样品用甲醇提取后,使用C18反相色谱柱分离,以甲醇-醋酸水溶液为流动相,紫外检测器检测,检测波长256nm和305nm条件下5种防腐剂在35min之内完全分离.在一定条件下各组分的相关系数均大于0.9990,线形范围1～100mg/kg,回收率为83.7％～103％.【总页数】3页(P9-11)【作者】万鹏;赵贞;李翠枝;邵建波;王云霞;刘春霞【作者单位】内蒙古伊利实业集团股份有限公司,内蒙古呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,内蒙古呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,内蒙古呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,内蒙古呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,内蒙古呼和浩特 010010;内蒙古伊利实业集团股份有限公司,内蒙古呼和浩特 010010【正文语种】中文【中图分类】TS252.7【相关文献】1.基于气相色谱法检测食品中对羟基苯甲酸酯类残留量 [J], 夏爱萍;占立明2.HPLC法测定罗红霉素颗粒中3种对羟基苯甲酸酯类防腐剂 [J], 王帆3.HPLC法同时测定对羟基苯甲酸酯类及对羟基苯甲酸含量 [J], 闫妍;刘永明;朱晓琼4.食品中对羟基苯甲酸酯类的检测方法研究进展 [J], 傅群; 黄强; 曾远; 李华勇5.食品中对羟基苯甲酸酯类的检测—高效液相色谱法 [J], 张艳达; 修丽华; 赵华礼; 朱欣桐; 赵超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验三、对羟基苯甲酸酯类混合物的RP-HPLC 分析一、实验目的1. 学习高效液相色谱保留值定性方法和归一化法定量；2. 熟悉高效液相色谱分析操作。
3. 复习并掌握高效液相色谱的应用原理。
二、实验原理在对羟基苯甲酸酯类混合物中含有对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯，它们都是强极性化合物，可采用反相高效液相色谱进行分析，选用非极性的C-18柱，甲醇和水按一定的配比做流动相。
由于在一定的实验条件下，酯类各组分的保留值保持恒定，因此在同样条件下，将测得的未知物的各组分保留时间，与已知纯酯类各组分的保留时间进行对照，即可确定未知物中各组分存在与否。
这种利用纯物质对照进行定性的方法，适宜来源已知且组分简单的混合物。
本实验采用归一化法定量，归一化法使用条件及计算公式，与气相色谱分析相同：100%1⨯∑==n i fiAifiAici对羟基苯甲酸酯类混合物属于同系物，具有相同的生色团和助色团，因此它们在紫外光度检测器上具有相同的校正因子，故上式可简化为：100%1⨯∑==n i AiAici三、仪器与试剂1. Agilent 1100 和Agilent 1200 高效液相色谱仪2. 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯均为分析纯3. 超纯水由纯水机制得，甲醇为色谱纯四、实验条件1. 色谱柱（XDB-C 18） 颗粒度为5 um 的固定相，长150 mm 内径4.6 mm2. 流动相 甲醇 : 水 = 60 : 40，流量 1 mL/min3. 检测器 紫外光度检测器，254 nm4. 进样量 10 uL五、实验步骤1. 将流动相甲醇和水分别过滤后于超声波发生器上脱气15 min 。
2. 将配置好的分析试样分别过滤后于超声波发生器上脱气15 min 。
3. 接通仪器和电脑电源，打开计算机，自动出现并运行Bootp Server程序（1200 LC 没有出现此界面）。
4. 从上到下依次打开LC各模块电源。
