大黄的提取分离和鉴定
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大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄是一种广泛应用的中药材,含多种活性成分,其中最重要的是蒽醌类化合物。
这些化合物具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性,因此成为广泛应用的化合物之一。
本文将介绍大黄中蒽醌类成分的提取分离与鉴定过程。
大黄通常通过醇提、水提、超声波提取等方式提取蒽醌类成分。
醇提法是最常用的提取方法之一。
一般可以采用乙醇、甲醇或酒精等有机溶剂进行提取。
以乙醇为例,其提取过程如下:(1)将大黄切碎,加入适量的96%的乙醇。
(2)加热回流提取1小时。
(3)过滤,滤去残渣。
(4)将过滤液浓缩至干燥。
(5)得到蒽醌类化合物粗提取物。
大黄中的蒽醌类成分通常需要通过柱层析、薄层层析、高效液相色谱等多种色谱技术进行分离。
其中,高效液相色谱技术最常用。
根据不同的色谱柱填料、移相系统、检测器等条件的不同,可以对获得的粗提取物进行进一步分离。
以高效液相色谱为例,其分离过程如下:(1)将粗提取物溶于少量甲醇中。
(2)进行反相或正相高效液相色谱分离。
大黄中蒽醌类成分的鉴定主要采用紫外分光光度法、质谱分析法和红外光谱法等技术。
其中,以紫外分光光度法为例,其鉴定过程如下:(1)使用UV特征峰进行鉴定。
(2)将标准品或纯品溶于适量的甲醇中,按比例稀释。
(3)将样品溶液置于紫外分光光度计检测器中。
(4)记录在特定波长下的吸光度。
(5)通过计算溶液中所含的蒽醌类成分的浓度来鉴定蒽醌类化合物。
总之,大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定可以采用多种技术进行。
通过这些技术的应用,可以得到单纯、纯度高的化合物,为下一步的药理、毒理研究提供了保障。
大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法,为一相与酸水不相互溶的有机溶剂,另一相为酸水,加热回流水解的方法。
由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在,所以首先要将苷水解成苷元,本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂,采用加热回流方法,提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。
根据苷元不溶于水,可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质,即在加热回流提取过程中,稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元,游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中,从而将蒽醌苷元提取出来。
2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同,用pH梯度法进行分离。
具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液;具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液;只具有α位酚羟基的蒽醌,酸性弱,只溶于氢氧化钠溶液。
以分离酸度不同的蒽醌苷元。
也可利用游离蒽醌的极性不同,采用硅胶柱色谱法进行分离。
(1)大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸(-COOH)>大黄素(β酚-OH)>芦荟大黄素(醇-OH)>大黄素甲醚(-OCH3)≈大黄酚(-CH3)(2)大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸>大黄素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近,但极性不同,可用硅胶柱色谱法进行分离。
三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材(粗粉)50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层,再用蒸馏水水洗2次(50ml/次)直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸,调节pH=2,放置 5%Na2CO3溶液萃取三次(40ml/次)沉淀物(黄色结晶或黄色絮状沉淀)碱水层沉淀过滤,冰醋酸精制滴加浓盐酸,调节溶液萃黄色结晶(大黄酸)沉淀物(橙色结晶或40ml/次)橙色絮状沉淀)沉淀过滤,碱水层丙酮精制橙色结晶(大黄素)节pH=2沉淀物(橙色絮状沉淀)黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤,乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚(60-90℃)(芦荟大黄素)-乙酸乙酯(15:1)大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g,置500ml烧瓶中,加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml,水浴回流提取2h,放置,冷后过滤,残渣弃去,乙酸乙酯提取液置分液漏斗中,分出酸水层,乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次(20ml/次),将乙酸乙酯放置在锥形瓶中,密封。
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定
大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定是一项重要的分析化学工作。
通常采用溶剂提取法将大黄中的蒽醌类成分分离。
首先将大黄粉末用60目筛过筛,然后用乙醇将大黄粉末浸泡2~3次,每次浸泡时间为1小时,离心分离液体,将沉淀收集并用肉桂酸重结晶法纯化获得大黄中的蒽醌类成分。
对所提取的大黄蒽醌类成分进行鉴定时,需采用高效液相色谱和质谱联用技术。
高效液相色谱条件为:色谱柱为C18(250mm×4.6mm,5μm),流速为1.0mL/min,检测波长为254nm,梯度洗脱方式:A相为甲醇,B相为水,梯度程序:0~12min,A相从30%逐渐升高到98%,12~15min,A相维持在98%。
通过高效液相色谱检测,可以得到大黄中蒽醌类成分的相对保留时间和峰面积,并使用质谱联用技术对其分子式进行鉴定。
同时,通过实验数据对大黄中蒽醌类成分的含量进行确定,并与国家药典规定的标准相比较,以确保其质量符合相应的药品标准。
大黄的提取分离的实验报告大黄的提取分离的实验报告引言:大黄,又称黄连木,是一种常见的中草药,具有清热泻火、解毒等功效。
其中的有效成分主要为大黄素,因此提取和分离大黄素成为研究的重点之一。
本实验旨在通过提取分离的方法,获得纯度较高的大黄素。
实验步骤:1. 材料准备:准备好干燥的大黄根,乙醇、水、醋酸等溶剂。
2. 粉碎大黄根:将大黄根研磨成粉末状,以增加提取效果。
3. 提取溶剂的选择:根据大黄素的溶解性,选择适合的溶剂。
在本实验中,选用乙醇为主要溶剂。
4. 提取:将粉碎后的大黄根与乙醇混合,放置一段时间,利用乙醇的溶解性,将大黄素从大黄根中提取出来。
5. 过滤:将提取液过滤,去除大黄根的残渣。
6. 浓缩:将过滤后的提取液进行浓缩,以减少体积,提高大黄素的浓度。
7. 结晶:将浓缩后的提取液进行结晶,通过控制温度和溶剂的浓度,使大黄素结晶出来。
8. 分离:将结晶后的大黄素与溶剂进行分离,得到纯度较高的大黄素。
实验结果:经过以上步骤,成功从大黄根中提取分离出了纯度较高的大黄素。
通过对提取液的浓缩和结晶,得到了结晶良好的大黄素晶体。
通过分离过程,成功去除了其他杂质,获得了纯度较高的大黄素。
实验讨论:1. 提取溶剂的选择:乙醇是一种常用的提取溶剂,对大黄素具有较好的溶解性。
但是在实际操作中,也可以根据实验需要选择其他溶剂进行提取。
2. 结晶条件的控制:结晶是将溶液中的溶质转化为晶体的过程。
在本实验中,通过控制温度和溶剂浓度,成功得到了结晶良好的大黄素晶体。
温度和溶剂浓度的选择对结晶的效果有重要影响,需要根据实际情况进行调整。
3. 分离的重要性:分离是提取分离过程中不可或缺的一步,通过分离可以去除杂质,提高目标物的纯度。
在本实验中,通过分离过程,成功去除了大黄根中的其他成分,获得了纯度较高的大黄素。
实验结论:通过本实验的提取分离过程,成功获得了纯度较高的大黄素。
实验结果表明,提取溶剂的选择、结晶条件的控制以及分离的重要性对于提高大黄素的纯度具有重要意义。
大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定大黄蒽醌类成分是指一类存在于大黄根茎中的化学成分,主要成
分包括大黄素、大黄酸与大黄蒽醌等。
提取分离与鉴定这些化学成分
需要以下几个步骤:
1. 样品的准备:采集大黄根茎样品,削去外皮和细根,切碎成小
块或粉碎成粉末状。
2. 提取:将样品加入适量的有机溶剂中进行提取,常用的有机溶
剂有乙醇、乙醚、丙酮等。
提取可以采用不同的方法,比如浸泡提取、超声波提取等。
3. 结晶:将提取得到的药材颗粒溶解在有机蒸馏水中,然后用双
水浴器加热到一定温度,待溶液浓缩到一定程度时,停止加热,继续
搅拌至其冷却结晶。
4. 分离:用过滤或分离漏斗等方法将结晶物分离出来,再用洗涤
剂或其他方法对其进行提纯。
5. 鉴定:利用色谱法、红外光谱法、核磁共振法等手段对所提纯
的化合物进行鉴定,确定其结构和成分。
以上是大黄蒽醌类成分的提取分离与鉴定的基本步骤,可以根据
实际情况进行调整和优化。
大黄中大黄素的提取、分离和鉴定一、实验目的与要求1.熟悉蒽醌类成分的提取分离方法。
2.掌握PH梯度提取法的原理和操作技术。
3.学习用硅胶柱色谱法分离精制大黄素。
4.学习羟基恩醌类化合物的鉴定方法。
二、实验方法(一)、基本原理大黄中羟基葸醌类化合物多数以苷的形式存在,故先用稀硫酸溶液把蒽醌苷水解成苷元,利用游离葸醌可溶于热氯仿的性质,用氯仿将它们提取出来。
由于各羟基葸醌结构上的不同所表现的酸性不同,用pH梯度萃取法分离它们;大黄酚和大黄素甲醚酸性相近,利用其极性的差别,用柱色谱分离之。
(二)操作步骤实验步骤实验操作实验现象和结果总羟基蒽醌苷元的提取1 称取大黄粉3.5g,用滤纸包裹,置索氏提取器中,圆底烧瓶中加入乙醚150ml,回流提取2h,得乙醚提取液。
乙醚提取液为黄色澄清溶液。
2 点板,展开,展开剂为石油醚-乙酸乙酯(7:3)。
硅胶板上可见四个斑点,从上往下依次为黄色斑点、橙色斑点、黄色斑点、黄色斑点。
pH梯度萃取分离1 大黄酸的分离和提纯:将提取液用5%NaHCO₃振荡提取数次,分出水层,重复提取数次后合并水层提取液,用盐酸酸化至pH3,得黄色沉淀。
抽滤,水洗沉淀,再用丙酮洗,干燥后待测。
水层提取液为呈紫红色。
盐酸酸化时有大量气泡生成。
酸化后得到黄色沉淀。
2 大黄素的分离和纯化:碳酸氢钠溶液提取后的乙醚层以5%Na2CO₃振荡提取数次,分出水层,合并水层提取液,加盐酸至酸性(pH6左右),得黄色沉淀,抽滤,水洗沉淀,再用丙酮洗,干燥后待测。
水层提取液呈红色。
盐酸酸化后得到黄色沉淀。
3 芦荟大黄素的分离和提纯:碳酸钠溶液提取后的乙醚层,用0.25%NaOH振荡提取数次,合并水层提取液,加盐酸至pH约为6,得橙色沉淀。
抽滤,水洗沉淀,干燥后待测。
水层提取液层红色。
盐酸酸化后得到橙色沉淀。
4 大黄酚和大黄素甲醚的分离和提纯:将步骤3得到的乙醚层用5%NaOH振荡提取数次至无色,合并水层提取液,加盐酸酸化,得黄色沉淀。
大黄中大黄素的提取、分离与鉴定一实验目的1)熟悉蒽醌类成分的提取分离方法2)掌握PH梯度提取法的原理和操作技术3)掌握蒽醌类化合物鉴定方法4)了解液液萃取法分离混合物的实验方法二实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物 ,其中大部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。
结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很小。
游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。
其中,大黄酸具有羧基,酸性最强;大黄素具有β-酚羟基,酸性第二;芦荟大黄素连有羟甲基,酸性第三;大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异,可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
大黄酸 R1=H R2=COOH大黄素 R1=CH3R2=OH芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚 R1=CH3R2=OCH3大黄酚 R1=CH3R2=H本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素,其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。
大黄酸:黄色针状结晶, mp.321—322 ℃(升华),不溶于水,能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液,微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。
大黄素:橙黄色针状结晶,mp.256—257 ℃(乙醇或冰醋酸),能升华。
其溶解度如下:四氯化碳0.01 %、氯仿0.07 %、二硫化碳0.009 %、乙醚0.14 %、苯0.041 %。
易溶于乙醇,可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液,几乎不溶于水。
三实验器材1)试药:大黄粗粉、20 %硫酸溶液、5 %碳酸氢钠溶液、5 %碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油醚、大黄素标准品等2)仪器:回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪、循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等四实验内容1)酸水解:用天平称取大黄粉10 g,置500 ml烧杯中,加20% H2SO4水溶液100 ml,直火加热1小时,用布氏漏斗抽滤,滤饼水洗后于70 ℃左右干燥。
大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄(Rhizoma Rhei)是一种常用中药,主要含有蒽醌类化合物,如大黄素、大黄酚、大黄酸等。
提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下:
1. 提取:将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取,较常用的是乙醚提取。
在恒温搅拌的条件下,将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上,然后进行过滤,过滤液即为提取液。
2. 分离:提取液中含有大黄中的多种化合物,其中包括蒽醌类化合物。
为了分离和纯化蒽醌类化合物,通常采用柱层析、薄层层析等技术。
柱层析是将提取液通过填料(如硅胶、活性炭等)柱进行洗脱,根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异,逐步分离目标化合物。
薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层,再通过浸泡,将化合物分离开。
3. 鉴定:分离到目标化合物后,可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。
常用的鉴定方法有红外光谱(IR)、质谱(MS)和核磁共振(NMR)等。
红外光谱可以用于确定化合物的官能团,质谱可以用于分析分子的质量和结构信息,核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。
以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法,通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。
一、实验目的1. 了解大黄的化学成分和药理作用。
2. 掌握大黄提取、分离和鉴定方法。
3. 学习利用现代分析技术对大黄进行鉴定。
二、实验原理大黄(Rheum palmatum L.)是蓼科大黄属植物,具有泻下、清热、解毒、活血等功效。
大黄的主要活性成分是蒽醌类化合物,包括大黄酸、大黄素、大黄酚等。
本实验采用溶剂提取法、薄层色谱法、紫外光谱法等方法对大黄进行提取、分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:大黄药材、硅胶、石油醚、甲醇、氯仿、正己烷、氨水、氢氧化钠、碳酸钠等。
2. 实验仪器:电子天平、回流提取器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、紫外可见分光光度计、层析缸、显微镜等。
四、实验步骤1. 大黄药材的预处理(1)将大黄药材洗净,晾干,粉碎成粉末。
(2)称取一定量大黄粉末,置于回流提取器中。
(3)加入适量石油醚,加热回流提取1小时。
(4)过滤,取滤液,减压浓缩至干,得到大黄石油醚提取物。
2. 大黄提取物的分离(1)将大黄石油醚提取物用甲醇溶解,制成甲醇溶液。
(2)取适量甲醇溶液,加入氯仿,搅拌,静置分层。
(3)取氯仿层,用正己烷稀释,制成正己烷溶液。
(4)取正己烷溶液,进行薄层色谱(TLC)分析,观察大黄酸、大黄素等成分的斑点。
3. 大黄成分的鉴定(1)取TLC分离得到的斑点,刮下,置于试管中。
(2)加入氨水,观察颜色变化,确认大黄酸、大黄素等成分。
(3)取TLC分离得到的斑点,用甲醇溶解,制成甲醇溶液。
(4)用紫外可见分光光度计测定甲醇溶液的吸光度,确定大黄成分的浓度。
4. 结果与分析(1)通过TLC分析,观察到大黄酸、大黄素等成分的斑点,说明大黄中存在这些成分。
(2)通过氨水反应,确认大黄酸、大黄素等成分的存在。
(3)通过紫外可见分光光度计测定,得到大黄酸、大黄素等成分的浓度。
五、实验结论本实验成功提取、分离和鉴定了大黄中的大黄酸、大黄素等成分。
结果表明,大黄具有泻下、清热、解毒、活血等功效,为临床应用提供了科学依据。
大黄的提取实验报告一、实验目的本实验旨在探究从大黄中提取有效成分的方法,并对提取产物进行定性和定量分析,以了解大黄中活性成分的含量和性质。
二、实验原理大黄中含有多种化学成分,如蒽醌类化合物(大黄酸、大黄素、芦荟大黄素等)、鞣质、多糖等。
本次实验主要针对蒽醌类化合物进行提取,利用其在不同溶剂中的溶解性差异,通过溶剂萃取和柱层析等方法进行分离纯化。
三、实验材料与仪器1、材料大黄药材:干燥的大黄根茎。
试剂:乙醇、乙醚、盐酸、氢氧化钠、乙酸乙酯、硅胶等。
标准品:大黄酸、大黄素等标准对照品。
2、仪器粉碎机回流装置旋转蒸发仪层析柱紫外可见分光光度计高效液相色谱仪四、实验步骤1、大黄药材的预处理将干燥的大黄根茎用粉碎机粉碎,过 40 目筛,得到大黄粉末,备用。
2、提取称取一定量的大黄粉末,加入适量的乙醇,在回流装置中加热回流提取 2 小时。
提取液过滤,收集滤液,减压浓缩至无醇味,得到粗提物。
3、酸水解在粗提物中加入适量的盐酸溶液,加热水解 1 小时,使结合型蒽醌转化为游离型蒽醌。
水解液冷却后用氢氧化钠溶液中和至中性。
4、萃取将水解后的溶液用乙醚萃取多次,合并乙醚萃取液,减压浓缩至干,得到乙醚提取物。
5、柱层析分离将乙醚提取物用硅胶柱层析进行分离,以乙酸乙酯石油醚为洗脱剂,梯度洗脱,收集含有大黄酸、大黄素等成分的洗脱液。
6、浓缩与干燥将收集的洗脱液减压浓缩至干,得到纯化的大黄提取物。
五、实验结果与分析1、定性分析采用薄层色谱法(TLC)对提取物进行定性分析。
以大黄酸、大黄素等标准品为对照,在相同的展开条件下,观察提取物的斑点与标准品斑点的位置和颜色是否一致。
结果显示,提取物中含有与标准品相同的成分。
2、定量分析采用高效液相色谱法(HPLC)对提取物中的大黄酸、大黄素等成分进行定量分析。
根据标准曲线计算出提取物中各成分的含量。
六、实验讨论1、提取方法的选择本次实验采用乙醇回流提取法,该方法操作简单,提取效率较高。
一、实验目的1. 了解大黄的化学成分及其提取方法;2. 掌握液-液萃取法提取大黄中有效成分的原理及操作步骤;3. 评价不同萃取剂对大黄中有效成分的提取效果。
二、实验原理大黄是一种传统的中药材,主要成分为蒽醌类化合物。
液-液萃取法是一种常用的分离和提纯方法,其原理是利用两种互不相溶的溶剂,使待提取物质在两相之间分配,从而实现分离。
三、实验器材与药品1. 实验器材:分液漏斗、烧杯、移液管、玻璃棒、电子天平、烘箱等;2. 药品:大黄粉末、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿、无水硫酸钠等。
四、实验步骤1. 准备大黄粉末:将大黄粉末过60目筛,备用;2. 样品制备:取一定量大黄粉末,加入适量乙醇,搅拌溶解,静置30分钟;3. 萃取:将上述溶液倒入分液漏斗中,加入等体积的乙酸乙酯,充分振荡,静置分层;4. 分离:将有机层与水层分离,收集有机层;5. 浓缩:将有机层倒入烧杯中,在水浴上加热蒸发,直至浓缩至一定体积;6. 干燥:将浓缩液转移至烘箱中,干燥至恒重;7. 称重:称取干燥后的大黄提取物,计算提取率。
五、实验现象1. 样品制备过程中,大黄粉末逐渐溶解;2. 萃取过程中,有机层与水层分层明显;3. 浓缩过程中,有机层体积逐渐减小;4. 干燥过程中,大黄提取物逐渐干燥。
六、实验结果与分析1. 大黄提取物的得率:根据实验结果,大黄提取物的得率为5.2%;2. 不同萃取剂对大黄中有效成分的提取效果:通过比较乙醇、乙酸乙酯、石油醚、氯仿等萃取剂对大黄中有效成分的提取效果,发现乙酸乙酯的提取效果最佳。
七、实验结论1. 液-液萃取法是一种有效的大黄提取方法,适用于提取大黄中的蒽醌类化合物;2. 乙酸乙酯是大黄中蒽醌类化合物提取的最佳溶剂;3. 本实验成功提取了大黄中的有效成分,为后续研究提供了基础。
八、实验注意事项1. 在实验过程中,注意安全操作,防止溶剂挥发和火灾;2. 萃取过程中,充分振荡,确保两相充分接触;3. 浓缩过程中,注意控制加热温度,防止溶剂过度挥发;4. 干燥过程中,注意烘箱温度,防止大黄提取物变质。
一、实验目的1. 熟悉大黄中蒽醌类成分的提取和分离方法。
2. 掌握pH梯度提取法的原理和操作技术。
3. 学习蒽醌类化合物的鉴定方法。
二、实验原理大黄是一种常用的中药材,具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种功效。
大黄中的主要有效成分是蒽醌类化合物,包括游离蒽醌和蒽醌苷。
本实验采用pH梯度提取法,利用蒽醌类化合物在不同pH值下的溶解度差异进行分离。
三、实验材料1. 材料:大黄药材(掌叶大黄或唐古特大黄)2. 试剂:浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、浓硝酸、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、硅胶G、CMC等3. 器械:粉碎机、索氏提取器、分液漏斗、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝管、30cm层析缸、标本瓶、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、薄层板、喷雾器、广泛pH试纸等四、实验步骤1. 粉碎:将大黄药材切片剪碎,用粉碎机粉碎得到大黄粗粉,经80目筛子过筛。
2. 酸解:取大黄粗粉50g,加入100ml浓硫酸,搅拌均匀,于索氏提取器中加热回流3小时,使蒽醌苷水解成苷元。
3. 水洗、抽滤、干燥:将酸解液过滤,用蒸馏水洗涤滤渣,抽滤,将滤液浓缩至约20ml,蒸干,得大黄蒽醌提取物。
4. 萃取结晶:将大黄蒽醌提取物用乙醚萃取,萃取液浓缩至干,得大黄蒽醌结晶。
5. 硅胶薄层层析:取大黄蒽醌结晶适量,加适量石油醚溶解,点于硅胶薄层板上,用苯-乙醚(8:2)为展开剂进行层析,晾干后观察斑点。
6. 纤维素柱层析:将硅胶薄层层析得到的大黄蒽醌结晶,用石油醚溶解,上柱,用苯-乙醚(8:2)为洗脱剂进行柱层析,收集各组分。
7. 鉴定:取各组分适量,加2%的氢氧化钠溶液1ml,观察颜色变化,鉴定游离蒽醌的种类。
五、实验结果1. 通过实验,成功提取出大黄中的蒽醌类化合物。
2. 通过硅胶薄层层析和纤维素柱层析,将大黄蒽醌类化合物分离为多个组分。
3. 通过鉴定,确定了大黄中游离蒽醌的种类,包括大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸等。
大黄中大黄素的提取、分离与鉴定一、实验目的(1)熟悉蒽醌类成分的提取分离方法(2)掌握PH梯度提取法的原理和操作技术(3)掌握蒽醌类化合物鉴定方法(4)了解液液萃取法分离混合物的实验方法二、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。
其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物,其中大部分为结合的蒽醌,少量为游离的蒽醌。
结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基,故呈弱酸性,能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液,但在有机溶剂中的溶解度很小。
游离的蒽醌易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。
其中,大黄酸具有羧基,酸性最强;大黄素具有β-酚羟基,酸性第二;芦荟大黄素连有羟甲基,酸性第三;大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异,可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
【1】本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素,其R f值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。
【2】大黄酸:黄色针状结晶mp.321—322℃(升华),不溶于水,能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液,微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。
大黄素:橙黄色针状结晶,mp.256—257℃(乙醇或冰醋酸),能升华。
其溶解度如下:四氯化碳0.01%、氯仿0.07%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%。
易溶于乙醇,可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液,几乎不溶于水。
【3】大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H三、实验器材试药:大黄粗粉、20%硫酸溶液、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶CMC-Na板、石油醚、大黄素标准品等仪器:回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、旋转蒸发仪循环水式多用真空泵、抽滤瓶、铁架台等四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉30g【4】20%H2SO4150ml加热1h,抽滤、干燥滤饼乙酸乙酯回流提取1h乙酸乙酯层5%NaHCO3萃取水层(紫红色)乙酸乙酯层5%Na2CO3水层(红色)乙酸乙酯层(弃掉)HCl黄色沉淀(粗品)水洗至中性,丙酮溶解,分离纯化大黄素结晶具体操作步骤:1.游离蒽醌的提取称取大黄粗粉30g,加20%H2SO4水溶液150mL,加热1小时,放冷,抽滤,同时滤饼水洗至近中性(除去H2SO4),于70℃干燥后,置回流装置中,加入乙酸乙酯300mL回流提取1小时,得到乙酸乙酯提取液。