bcl-2和bax蛋白在颈椎稳定性异常小鼠脑组织中表达的变化及其意义

口腔黏膜白斑凋亡相关蛋白 Bcl－2和 Bax 的表达及意义满一;钟良军;徐巍巍【摘要】目的：通过探讨凋亡相关蛋白在口腔白斑病变过程中细胞凋亡状况和凋亡蛋白 Bcl－2、Bax 的表达的研究，探讨白斑发病机制及恶变机理。

方法采用免疫组织化学检测法，与正常口腔粘膜对照，观察分析29例口腔白斑中 Bcl－2、Bax 蛋白的表达水平。

结果上皮异常增生各组的凋亡指数均高于正常，Bcl－2、Bax 在上皮单纯增生、异常增生显过度表达，表达强度、分布也发生了改变。

结论癌前病变中，上皮细胞凋亡状况发生了改变，Bcl－2可能对增生组织向恶变的转化发挥阶段性的促进作用，促凋亡因子 Bax 作用加强；凋亡因子的发挥即相互协同又相互制约。

%Objective To investigate the expression and significance of apoptosis -related protein Bcl-2,Bax in oral leukoplakia (OLK),and to explore the mechanism of pathogenesis and cancerization of oral leukoplakia.Methods The expression levels of Bcl-2 and Bax were detected by immunohistochemistry in 29 cases OLK and 25 cases of healthy oral mucosa.Results The apoptosis indexes (AI) of OLK epithelial cells in simple hyperplasia, dysplasia ( mild,moderate, severe degrees ) were significantly increased, as compared with those in normal mucosa.In OLK epithelium, the overexpressions of Bcl-2,Bax in positive cells were observed,and the intensity and distribution of apoptosis-related protein were significantly changed.Conclusion In precancerous lesions,Bcl-2 may promote the progression of canceration of hyperplastic tissue, enhance the effects of Bax in inducing cell apoptosis,moreover,the effects of apoptosis-related proteins are not only cooperative but also restrict each other.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】4页(P1297-1300)【关键词】白斑;凋亡蛋白;Bcl-2;Bax【作者】满一;钟良军;徐巍巍【作者单位】065000 河北省廊坊市，中国石油天然气集团公司中心医院口腔科;杭州师范大学医学院口腔医学系;065000 河北省廊坊市，中国石油天然气集团公司中心医院口腔科【正文语种】中文【中图分类】R780.2口腔黏膜白斑是最常见癌前病损，处于向恶性转化的不稳定状态，以不同程度的上皮增殖和不典型上皮增生为基本特征，在细胞异常增殖中，凋亡相关蛋白都有质与量的变化。

caspase-3在颈椎稳定性异常小鼠脑组织中表达的变化及其意义颈椎病是开始于单个或多个颈椎间盘的进行性退行性病变，并可导致周围骨和软组织的结构改变，影响相关血管、神经根或/和脊髓，患者常伴头痛、血压升高、心率增快，老年病人常伴组织器官衰老病症。

为深入探讨颈椎稳定性异常导致脑细胞凋亡机制，采用免疫组化、逆转录聚合酶链反应和Western blot观察caspase-3蛋白在在小鼠颈椎稳定性异常病理模型[1]脑组织中的表达变化，探讨颈椎稳定性异常与AD发病的分子生物学机制。

1.主要试剂配置和方法1.1 主要试剂的配制PBS溶液：称取8g氯化钠、0.2g氯化钾l、1.44g磷酸氢二钠和0.24g磷酸二氢钾溶于800ml蒸馏水，用HCl调节溶液pH值至7.4，加蒸馏水定容至1L。

0.01M柠檬酸缓冲液：3g柠檬酸三钠+0.4g柠檬酸溶入1000m1蒸馏水，用0.1M氢氧化钠溶液调定pH至6.0。

4%多聚甲醛溶液：40g多聚甲醛溶于1000mlPBS溶液，加热溶解。

DAB配制：1ml蒸馏水中加入一滴浓缩缓冲液，均匀混合；滴加DAB溶液和浓缩过氧化氢溶液各一滴，再次混匀，避光保存，30分钟内使用。

Hams苏木素染色液：用200ml蒸馏水加热溶解15g硫酸铝钾，用l0ml无水乙醇溶解1g苏木精，再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中，煮沸1分钟后，稍冷却，慢慢加入0.5g红色氧化汞，继续加热至染液变为紫红色，用纱布盖瓶口，用前滤纸过滤后每100ml加冰醋酸10ml。

1.2 RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳1.2.1总RNA提取每组取双侧海马和皮层组织各100mg（每组4只小鼠，每只鼠取25mg）置5ml离心管，加1ml预冷异硫氰酸胍变性溶液，匀浆。

加0.1mlNaAc（2mol/L，pH4.0），1ml酚-氯仿-异丙醇混合液，震荡，4℃10000g离心20min。

吸取上清，加等容积异丙醇，-20℃放置2h以上，4℃10000g离心15min。

胃癌组织中Bcl-2、Bax的表达及其与细胞凋亡的关系伊心浩;吴健民;吴起嵩【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2007(47)12【摘要】目的观察Bcl-2及Bax在胃癌组织中的表达变化及其与细胞凋亡的关系.方法选择70例慢性胃炎、49例肠上皮化生、64例异型增生及81例胃癌手术切除标本,用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白,用TUNEL技术检测凋亡细胞.结果Bcl-2、Bax在重度异型增生中阳性表达率最高,在肠化生与异型增生中的阳性表达率较慢性胃炎和胃癌高.从慢性胃炎到肠化生,再到异型增生的演变过程中,细胞凋亡指数逐渐增高,至中度异型增生时达最高峰,随后开始下降,至胃癌时最低.Bcl-2、Bax蛋白表达与胃癌细胞凋亡指数呈负相关(r分别为-0.760、-0.844,P均＜0.01).结论 Bcl-2的表达可能是胃癌发生过程中的早期行为.Bax对Bcl-2的抑凋亡功能有对抗作用.【总页数】2页(P17-18)【作者】伊心浩;吴健民;吴起嵩【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院,湖北,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R681.1【相关文献】1.细胞凋亡相关基因bcl-2与bax在胃癌组织中表达探讨 [J], 岑延增;罗云生;孙涛;马小干2.胃癌组织中Ezrin表达与Bcl-2/Bax关系及其预后 [J], 杨洪颖;张文军;左燕红;3.胃癌组织中Ezrin表达与Bcl-2/Bax关系及其预后 [J], 杨洪颖;张文军;左燕红4.胃癌组织中细胞凋亡与bcl-2、bax基因蛋白表达的关系 [J], 李西启;徐廷香;王涛;刘方军;计磊5.Survivin在胃癌组织中的表达及其与Bcl-2、Bax表达的关系 [J], 赵宇;王宇令;吴琦;王强;寇有为因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

喉鳞癌组织中!"#$%和!&’蛋白表达的临床意义郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科(郑州)*++*%,刘善廷-娄卫华桑建忠赵铭-孟昭忠-摘要目的.探讨基因!"#$%在喉鳞癌中的表达及其与!&’的关系/以及在喉癌发生0发展中的作用1方法.应用免疫组化法测定22+例喉鳞癌标本及%+例正常粘膜中!"#$%及!&’的表达1结果.正常粘膜几乎不表达!"#$%/喉鳞癌标本中表达率)3456/和病理分级0淋巴结转移情况相关7!&’蛋白在喉鳞癌阳性表达率为884)67!"#$%和!&’呈负相关1结论. !"#$%与!&’关系密切/在与喉癌的发生0发展中起作用/有望作为早期诊断的指标基因治疗靶点1主题词喉肿瘤基因/!"#$%基因/!&’免疫组织化学9:;<=>>?@A@B C D E F%G A H C G:?A E G<I A J=G E>K G L@M>D=E E D G<D?A@L G N O P&Q R SO T R U V W&Q X T Y U#U Y X/R Z O[\]R^V V\#\&R O_‘U]P\R&#/a Z O T Y b Z U cd T\e O Q]\R X(a Z O T Y b Z U c)*++*%,W\cf Z&T R\T Y W U cgO\Z c&f&T Y h\&T b Z U T Y O R&#i j k l m i n l o!p O"R\e O.q U\T e O]R\Y&R OR Z O O’P Q O]]\U TU V!"#$%&T_!&’&T_R Z O\Q Q O#&R\U T]Z\P/ &T_R Z O\QQ U#O]\T R Z O Y O T O Q&R\U T&T__O e O#U P S O T RU V#&Q X T Y O&#]r&S U c]"O##"&Q"\T U S&4sO R Z U_]. t S S c T U Z\]R U"Z O S\"&#S O R Z U_]u&]c]O_R U]R c_X22+"&]O]U V#&Q X T Y O&#"&Q"\T U S&&T_2*"&]O]T U Q S&# #&Q X T Y O&#R\]]c O]R U_O R O"RR Z OO’P Q O]]\U T U V!"#$%&T_!&’4v O]c#R].^S U T Y22+"&]O]U V#&Q X T 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t期%*例/t&期2$例1病理类型.高分化鳞癌)5例/中分化鳞癌*2例/低分化鳞癌28例1淋巴结转移情况.颈部淋巴结转移者)$例/无颈淋巴结转移8%例1另于术中取正常粘膜%+例为对照1%方法所用试剂购自武汉博士德生物工程有限公司1石蜡切片脱蜡和水化后/用’w f冲洗1加第一抗体/)(冰箱过夜1’w f冲洗/加生物素标记的二抗/室温下孵育5+S\T1’w f冲洗/加链亲和素$过氧化物酶/室温下孵育5+S\T1’w f冲洗5次/加滴新鲜配制的N^w溶液/显微镜下观察/冲洗/苏木素复染1梯度酒精脱水干燥/二甲苯透明/中性树胶封固1282陕西医学杂志%++3年%月第58卷第%期!结果判断"#$%&和"’(的阳性表现为棕黄色颗粒状或弥漫片状分布)标本中无阳性细胞或反应细胞*+,-者统计为阴性)大于+,-者统计为阳性./统计方法"#$%&表达与临床参数的关系采用0&检验)"#$%&和"’(相关性检验用123’45’6相关分析.统计学软件为7’789,)显著性水准为:;,9,<.结果正常喉黏膜中几乎不表达"#$%&)个别标本可见基底层细胞弱阳性表达."#$%&在喉癌中表达率为/=9!-)阳性者为棕黄色颗粒)主要表达在细胞浆中和核膜上)和病理分级>有无颈淋巴结转移有关)与年龄>性别>临床分型>临床分期无关?见表+@."’(的表达主要在细胞浆中)胞质呈棕黄色颗粒状."’(在正常喉黏膜组的表达+,,-)在喉鳞状细胞癌组的表达为A A 9/-)和"#$%&表达呈负相关?见表&@.表+"#$%&表达与临床参数的关系组别B "#$%&表达阳性阴性0&C年龄DA ,/E &!&<FA ,A &&8!!,9,+/&,98,!<性别男+,&/=<<女E <!,9E ,&A ,9!=,!G H I 分期,JKJL A =!+!A MJN/!&+&&,9,A 8!,9=8&!临床类型声门型/=&&&<声门上型<E &E !,,9+!!A,98!</声门下型<&!组织分化高分化/!+<&E 中分化<+&<&A =9A /<!,9,&+8低分化+A +&/淋巴结无转移A &&/!E 转移/E&E&,/9+=8E,9,/,8表&"#$%&与"’(相关性"#$%&表达B "’(表达阳性阴性OC"#$%&?J@<&&8&!"#$%&?%@<E//+/%,9&+&,9,&A讨论从细胞凋亡角度来理解肿瘤的发生机制)是由于肿瘤细胞的凋亡机制被抑制)肿瘤细胞减少受阻所致P &Q."#$%&家族对细胞凋亡的调控起着重要作用P +)!Q )"#$%&是在R 细胞淋巴瘤中发现一种原癌基因)这些R 细胞淋巴瘤常常具有特征性的S ?+/T+E @基因转位)+E U &+的"#$%&基因在这个转位过程中被转位到+/U !&)而与V W 重链基因相邻)V W 重链基因具有强的启动子和增强子)从而使"#$%&基因异常高表达)抑制细胞凋亡)进而形成肿瘤细胞.本组资料提示)正常喉黏膜中几乎不表达"#$%&)"#$%&在喉癌中表达率为/=9!-.一组+=A 例喉癌的研究发现)"#$%&表达和病理分级>有无颈淋巴结转移有关)和本组资料结果相一致P /Q .本组资料还显示X "#$%&表达和年龄>性别>临床分型>临床分期无关.高表达于喉癌组织中的"#$%&)在细胞凋亡受到抑制以至于癌变的过程中)起到了重要作用)我们推测)不同程度的"#$%&表达)抑制凋亡的程度也可能不同)细胞损伤的积累程度也不同)从而引起不同的病理分级等恶性表型."’(是"#$%&家族成员)一般认为能促进凋亡)其在凋亡过程的作用并非Y 促进Z 能够解释)"’(具有"#$%&家族特有的同源区R [+和R [&)通过同源区形成二聚体)"#$%&和"’(结合形成"#$%&\"’(异源二聚体)抑制细胞凋亡)"’(形成"’(\"’(同源二聚体)细胞凋亡增强.本组++,例喉癌组织中)"’(阳性率A A 9/-)正常组织中则+,,-阳性表达)癌组织中表达率明显低于正常组织)和"#$%&表达呈负相关."#$%&和"’(关系密切并且在凋亡过程中协同作用P <Q )"#$%&高表达并和"’(?下转第&+<页@&A +陕西医学杂志&,,=年&月第!A 卷第&期附表!组治疗结果比较组别"治愈未愈治愈率#$%复发率#$%对照组&’(&()’!*!&+*,白介素)组&,!+)),+*+(!*&白介素(组&+!&)(,!*-(+*)引起的性传播疾病.主要是通过性接触传播/目前临床上治疗尖锐湿疣的方法虽然很多.包括激光0电灼0冷冻0微波以及外涂药物腐蚀等方法1(2.但都只是去除肉眼可见的疣体.很难完全根除潜伏在疣体周围的乳头瘤病毒.这是其复发率高的原因之一/目前临床上研究尖锐湿疣复发的原因多倾向于亚临床感染0潜伏感染及机体的细胞免疫功能低下1!2/因此治疗尖锐湿疣.在去除疣体的同时.应积极采用调节机体免疫功能的药物.提高机体免疫力杀灭病毒.才能有效的防止复发/目前.调节机体免疫功能的药物较多.例如干扰素0胸腺肽0转移因子0卡介苗等.我们选择重组人白细胞介素3(配合电离子治疗尖锐湿疣/白细胞介素3(是一种淋巴因子.可以使细胞毒性4细胞0自然杀伤细胞和淋巴因子活化的杀伤细胞增殖.并使其杀伤活性增强.还可以促进淋巴细胞分泌抗体和干扰素.具有抗病毒0抗肿瘤和增强机体免疫功能等作用/我们通过不同方法应用重组人白细胞介素3(来治疗尖锐湿疣.来观察重组人白细胞介素3(对尖锐湿疣的实际疗效/从本研究的结果可以看出.应用白细胞介素3(的两组与不应用白细胞介素3(的对照组比较.治愈率和复发率差异有显著性.因此.我们认为电离子加白细胞介素3(联合治疗尖锐湿疣较为理想/但是本研究同时提示局部基底注射和臀部肌肉注射白细胞介素3(.对于防止尖锐湿疣复发差异无显著性/我们分析.局部皮损基底注射白细胞介素3(不一定是通过增强局部组织的抗病毒能力.有可能是通过组织吸收后提高机体整体的免疫水平.从而增强了抗病毒能力.有效控制亚临床感染和潜在的病原体.降低了复发率/总之.应用白细胞介素3(可以降低尖锐湿疣的复发率.但是疗效与注射部位无关/因而建议选择臀部肌肉注射.可降低局部注射疼痛敏感性.患者更容易接受/参考文献1)2吴绍熙*皮肤性病诊断治疗指南*北京5协和医科大学出版社.(66(5(7(8(7+1(2杨国亮*皮肤病学*上海5上海医科大学出版社.)--(5(--1!2杨健*尖锐湿疣的复发与细胞免疫功能*中华皮肤科杂志.)---9!(5!#收稿5(66+36,3)7%#上接第)+(页%结合可能是抑制凋亡的直接原因/对于受损伤的机体细胞.凋亡是其终末事件.对于癌变组织.凋亡抑制是其早期事件.并贯穿整个癌变过程.基于此.有关学者提出:;<3(作为药物治疗靶点治疗恶性肿瘤1+2/我们也认为.:;<3(和:=>在癌组织中的特异表达.有希望作为早期诊断的指标.随着对其研究的深入.相信有可能作为一个新的治疗靶点/参考文献1)2?=;@A<BC.D A<<E=F F G.H I J K K A L D.M NO P*Q R I S F I K T U;K U S F U L U;=F;A I L A>V R A K K U I F I L V’!:;<3(=F W:=>U FK X J E=I J K A V U T Y A<U=<;=R;U F I E=I L T Y A<=R Z F>3=EJ<T U[=R U=T A=F=<Z K U K*\]^.(66)9&-#!%5(6)1(2_A=R W K E I R A‘B.a A R:A@AC D.‘=[U A K C G.M N O P*b V I V T I T U;=F W V R I<U L A R=T U[A U F W A>A K U FA K I V Y=S A=<c;=F;A R5V R A W U;T I R K I L R A K V I F K A T IF A I=W d J[=F T T Y A R=V Z;I R R A;T A W*e=K T R I U F T A K TD J R S.(66!9,5,,1!2e A I R S U I J b.e I E=T I Kf Q.g A R A@U W U Kh.M NO P* Q R I S F I K T U;K U S F U L U;=F;A I L V’!.:=>=F W:;<3(S A F AA>V R A K K U I F U F V=T U A F T K i U T Y<=R Z F S A=<;=R;U F F I E=*h J R?D J R S^F;I<.(66)9(,#+%5’,& 1&2H J A F b Q.G=E j H.C Y I Z?4.M NO P*4Y A ;<U F U;I V=T Y I<I S U;=<K U S F U L U;=F;A I L_;<3(A>V R A K K U I FU FT Y A K J R S U;=<T R A=T E A F T I L<=R Z F S A=<;=R;U F I E=*C<U F^T I<=R Z F S I<.(66)9(+#(%5)(-1’2e I:A e.k J:U F B.lU<<U=E K e.M N O P*b V I V T I K U K=F WA>V R A K K U I FI L_;<3(._;<3m G.=F W_=>U FR A F=<;A<<;=R;U F I E=K*C=F;A R f F[K A K T.(66(9(65!(&1+2D J T T A R b Q.n A U T o B.D;Y A R J:<\*k A;A F T R A K J<T K U F J F W A R K T=F W U F S EI<A;J<=R V=T Y i=Z K U F T Y A E A W U;=<T R A=T E A F TI L c A K I V Y=S A=<=F W S=K T R U;;=F;A R*^F@I<I S U A.(66&9(,5),#收稿5(66+3673)6%’)(陕西医学杂志(66,年(月第!+卷第(期。

Bcl-2 抗凋亡的机制目前认为主要有：①拮抗促凋亡基因bax；②抑制促凋亡的蛋白质细胞色素c 自线粒体释放到胞质；③阻止胞质中的细胞色素c 激活caspase；④有抗氧化及维持细胞内钙稳态等作用。

bax 基因属于bcl-2 基因家族，编码的Bax 蛋白可与Bcl-2 形成异二聚体，对Bcl-2 产生阻抑作用。

研究发现Bax/Bcl-2 两蛋白之间的比例关系是决定对细胞凋亡抑制作用强弱的关键因素，因此认为，bax 是极重要的促细胞凋亡基因之一。

Bax 的表达更为广泛，它可出现在肝细胞、肾小管上皮细胞、呼吸系上皮细胞和支气管平滑肌、血管平滑肌细胞中。

我们在创伤失血性休克大鼠发现，创伤后1 h 肝、肾、肺、肠组织中Bax 表达显著增强，于创伤后3 h 达高峰，持续24 h 以上，并与组织细胞的凋亡发生率显著相关。

创伤前后Bcl-2 在肝、肺、心、肾、小肠平滑肌细胞中均未表达。

我们在肠缺血再灌注损伤大鼠观察到，肝小叶中央静脉周围的血液灌注不良区域肝细胞凋亡多，Bcl-2 表达逐渐减弱直至不表达，而外围区表达则增强。

付小兵报道，在肠缺血再灌注损伤大鼠，损伤早期细胞凋亡与Bcl-2 表达均明显增加，随着再灌注时间延长，Bcl-2 表达增多，凋亡减少，肠黏膜结构损伤减轻。

提示内在的抗凋亡机制激活，并在减轻组织损伤中起作用。

bcl-2 基因启动子具有NF-κB 的结合位点并受其调控，故NF-κB可活化通过诱导bcl-2 及其他抗凋亡基因而阻止细胞凋亡。

也可通过刺激IL-1β转化蛋白酶、c-myc 和TNF-α基因表达而导致细胞凋亡。

长期停训大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的表达赵永寿;田振军;白建超【摘要】The influence on the expression of Bax、Bcl-2 in the hippocampus neuron of stopping training 28 weeks rats is studied.Refered to the training scheme of Bedford,the training model of SD rats is established.All rats in the normal cage live 28 weeks and the expression change of Bax and Bcl-2 in the Hippocampus Neuron is observed.The results show that aerobic training promotes the ratio of Bcl-2/Bax in CA1 area and CA3 area of hippocampus,fatigue training restrain the ratio ofBcl-2/Bax in CA1 area and CA3 area of hippocampus after stopping training.It is analyzed that aerobic training has taken good care of the hippocampus neuron of the aged rats,fatigue training has effected the function of the hippocampus neuron of the aged rats.%以不同强度训练大鼠停训28周为对象,应用免疫组织化学技术,探讨运动对大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响.参照Bedford训练方案,建立起Sprague dawley（SD）大鼠有氧训练与疲劳训练动物模型,停训28周后,观察大鼠海马神经元Bax、Bcl-2的表达变化.结果表明：长期有氧训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2/Bax比值升高,长期疲劳训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2/Bax比值下降.这是因为长期有氧训练促进了大鼠海马神经元产生了良好的适应,对大鼠老年期海马神经元起到保护和延缓其衰老的作用.而长期疲劳训练会影响到大鼠老年期海马神经细胞的功能状态.【期刊名称】《陕西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】5页(P104-108)【关键词】运动训练;海马;细胞凋亡因子;停训;免疫组织化学【作者】赵永寿;田振军;白建超【作者单位】陕西教育学院体育系,陕西西安710061;陕西师范大学体育学院,陕西西安710062;陕西教育学院体育系,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】G804.5细胞凋亡现象普遍存在于中枢神经系统的诸多疾病中.因此，神经细胞也涉及到复杂的凋亡机制.细胞凋亡与许多基因的表达状况密切相关，如Bax、p53、ced9、Bcl-2等.Bcl-2与Bax是细胞凋亡中两个重要基因调控的表达产物.Bcl-2的高表达可抑制细胞凋亡的发生，而Bax则起拮抗作用.Bcl-2和Bax蛋白之间的比例是决定细胞凋亡或抑制的关键因素.不同强度运动训练对海马细胞凋亡影响的研究近年时有报道［1-3］.实验研究显示，大强度运动训练后大鼠海马CA1区神经元凋亡显著增加，而中等强度运动训练后大鼠海马CA1区神经元凋亡不明显［4］.也有研究认为，中等强度运动可促进Bcl-2蛋白的表达，使Bax／Bcl-2比率显著降低，从而抑制了细胞凋亡；大强度运动促进Bax蛋白的表达，使Bax／Bcl-2比率显著升高，促进细胞凋亡.但有关长期运动训练停训后对中枢神经细胞凋亡的影响还未见报道.早年进行大强度运动训练后，由于种种原因停止训练，运动员往往出现一些不适应的临床表现，运动员晚年机体的健康问题受到广泛关注.早年进行不同强度的系统训练，停训后运动员晚年期的健康问题是否受早年训练的继续影响，值得研究.本研究以实验大鼠为对象，应用免疫组织化学技术探讨早年运动对停训大鼠老年期海马CA1和CA3区细胞凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响.雄性SD大鼠（3月龄，西安交通大学医学院动物管理中心提供）24只，体重248±24g，国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养，自由饮食，温度为22℃～27℃，湿度为40%～60%.适应性喂养1周，然后进行实验.将SD大鼠随机分为安静对照组、有氧训练组和疲劳训练组，每组各8只.采用递增强度的跑台运动方式，运动负荷参照Bedford跑台训练法.对照组为正常笼内生活，不参与运动训练.有氧训练与疲劳训练组预先适应性训练3 d，起始训练速度为15 m／min，时间为15 min.有氧训练组每周训练5 d，共8周.递增速度为3 m／min，时间为5 min，运动至速度为20 m／min后增加跑台坡度至5°，训练时间为60 min.疲劳训练组每周训练6 d，共8周.递增速度为3 m／min，时间为5 min，运动速度至20 m／min后，增加跑台坡度到5°，运动速度至35 m ／min后跑台坡度增为10°，运动时间为60 min.训练8周后有氧与疲劳组停止训练，和对照组同处笼内，正常生活状态下饲养28周.乌拉坦（10%）腹腔注射麻醉，开胸左心室插管.中性甲醛固定液灌注40min，快速开颅取材，多聚甲醛（4%）固定，常规脱水，二甲苯透明石蜡包埋.切片厚为5μm，HE染色定位.Santa Cruz公司生产的兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗体Bax，兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗体Bcl-2.采用免疫组织化学SABC法，按试剂盒（博士德）说明书操作步骤进行.Bax、Bcl-2微波抗原修复.Bax、Bcl-2（1∶100），4℃过夜，37℃复温，PBS冲洗.滴加二抗37℃，20 min后PBS冲洗.滴加SABC 20 min，Tween＋PBS混合液冲洗2 h.DAB显色，苏木精复染、分化、脱水、透明、中性树胶封片.每次染色设阴性对照染色，PBS取代一抗，其他程序相同.Olympus 光学显微镜观察，数码相机照相，IPP图像分析软件进行分析处理，计算灰度值.免疫组织化学指标计算平均灰度值，结果以均数±标准差表示，所有数据采用SPSS软件分析，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义.由表1可知，海马CA1区，Bax的阳性表达疲劳组＞对照组＞有氧训练组，各组间未见显著性差异（P＜0.05）；海马CA3区Bax阳性表达疲劳组＞对照组＞有氧训练组，各组间未见显著性差异.不同强度训练长期停训大鼠海马神经元Bax阳性表达显示，疲劳训练促进了Bax在CA1和CA3区阳性表达，而有氧训练抑制了Bax在CA1和CA3区的阳性表达.由表2可知，在海马CA1和CA3区神经元，Bcl-2的阳性表达为有氧训练组＞对照组＞疲劳组.在海马CA1区，疲劳训练组与对照组有显著性差异；疲劳训练抑制了长期停训大鼠海马神经元Bcl-2的阳性表达，在CA1区更为显著.有氧训练促进了长期停训大鼠海马神经元Bcl-2的阳性表达.细胞凋亡的作用机制比较复杂，受多重凋亡促进或抑制因素的影响.Bax蛋白的表达与维持脑缺血再灌注后细胞的存活相关［5］.Bax与Bc1-2的比值与细胞受刺激后发生凋亡的比率成正相关［6］.Bax的促细胞凋亡机制可能是其具有Ca2＋通道的活性，这一活性参与了细胞凋亡相关的线粒体通透性转变和凋亡发生的蛋白酶激活因子的过程［7-8］.Bax也可能通过控制释放细胞色素C这一通道而促进凋亡发生.Bc1-2的作用机制可能是通过线粒体外膜上的Bcl-2蛋白来稳定线粒体膜，防止线粒体促凋亡蛋白泄漏至胞质及阻断Ca2＋从内质网的释放，使依赖Ca2＋的核酸内切酶活性下降等途径阻断细胞凋亡［9］.此外，血小板激活因子、氧自由基、兴奋性氨基酸（如谷氨酸）、Ca2＋等都参与了细胞凋亡的过程［10］.Zhong等研究发现，在ionophore处理的PC1-2细胞中，Bcl-2过量表达并不能阻止胞内游离Ca2＋升高.它显示Bcl-2可以通过阻止Ca2＋升高事件下游的凋亡信号来抑制凋亡.因此，Bcl-2抗凋亡功能的发挥很大程度上依赖于它与别的蛋白的结合及相互作用.已证实有多种蛋白均可与Bcl-2发生结合性相互作用.另有研究称，氧化作用与细胞凋亡相关［11-12］.有人提出 Bcl-2可以通过一种抗氧化剂的作用或者通过抑制氧自由基的生成来抑制细胞的死亡［13］.在接受许多不同凋亡信号而发生凋亡的造血细胞中，Bcl-2的过度表达与组织细胞氧化损伤的降低程度相关联，而与活性氧中间体的生成、减少无关［14］.在因缺少谷胱甘肽而坏死的神经元细胞中，Bcl-2的表达与氧自由基的生成减少和对细胞组织氧化损伤的降低均相关.可见，Bcl-2似乎起一种抗氧化剂的作用，但仍不清楚Bcl-2是否保护内活性氧物质特异诱导的细胞死亡.通常，Bcl-2和Bax的比值决定着细胞凋亡的发生与否，当该比值上升时抑制细胞凋亡；比值下降时则促进细胞凋亡［15］.张梅等研究认为，大强度训练与海马神经元凋亡增加、海马神经元Bax基因表达增加及海马神经元Bcl-2／bax下降密切相关［4］.相关实验研究显示，不同强度运动长期停训后，Bax和Bcl-2在胸腺皮质淋巴细胞的胞浆髓质区表达不明显，有氧运动形成的生物学效应在长期停训后消失；疲劳训练产生生物学效应.长期停训后，伴随胸腺器官增龄性变化而呈下降趋向［16］.疲劳训练使大鼠海马区自由基过量，神经细胞受损.也可能缺血性脑损伤使兴奋性氨基酸（如谷氨酸）含量增加，过量的谷氨酸对神经元具有明显的损伤作用，致使细胞凋亡［17］.而长期间歇性训练使机体增强了抗氧化及自身的调节适应力，通过增强抗凋亡基因的表达来强化机体对运动的适应能力［18］.研究显示，长期适量运动可使脑细胞的存活能力和活动调节功能得到改善.该实验结果显示，疲劳训练抑制了长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区Bcl-2的阳性表达.而有氧训练促进了海马神经元CA1、CA3区Bcl-2的阳性表达.在长期停训大鼠海马CA1、CA3区，疲劳训练促进了神经元Bax的阳性表达，有氧训练抑制了神经元Bax的阳性表达.可见，疲劳训练致使长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区Bcl-2／Bax的比值降低，神经细胞趋于凋亡.其可能机制为：在长期疲劳训练的状态下，大脑处于相对的缺血、缺氧状态，海马神经元自由基含量升高，出现了神经细胞的线粒体钙超载，导致了海马神经细胞的缺血、缺氧性损伤，这成为了脑细胞凋亡的诱因.脑细胞长期的缺血、缺氧状态可使机体产生一种保护性抑制，通过细胞凋亡的形式将那些受到运动损伤、功能相对较差的细胞进行清除，以满足中枢神经系统对内外环境的适应需要，从而维持了中枢神经系统的功能，此一机制会持续到训练恢复后的较长一段时间.实验表明，有氧训练使长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区 Bcl-2／Bax的比值升高，海马神经元趋向于存活.可能机制为：（1）长期有氧运动可使脑细胞的存活能力和活动调节功能得到改善.Bcl-2可能通过调整其线粒体巯基的氧化还原水平控制其膜电位，进而达成对海马神经元的凋亡抑制；（2）Bcl-2也可通过对线粒体膜调节，改变其凋亡蛋白前体的通透性水平来发挥抗凋亡作用.分析认为，有氧训练使长期停训大鼠海马神经元产生了良好的适应能力，从而起到了保护脑神经细胞、延缓其衰老的作用.早年长期运动训练可影响到大鼠老年期海马神经元的功能状态.长期有氧训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2／Bax比值升高，对海马神经细胞起到了保护作用，对延缓海马神经元衰老及促进其生理功能的正常发挥具有积极意义.长期疲劳训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2／Bax比值下降，促进了细胞凋亡的发生，可能会影响到大鼠老年期海马神经细胞的功能状态.提示健身人群身体锻炼的运动量不宜过大；运动员早年应避免疲劳训练及其引起的机体组织器官的运动性应激损伤.【相关文献】［1］Oltvai Z N，Milliman C L，Korsmeyer S J.Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog Bax that accelerates programmed cell-death［J］.Cell，1993，74（4）：609-619..［2］Kroener G.The protonco gene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis［J］.Nat Medicine，1997，3（6）：614-620.［3］Gervais F G，Singaraia R，Xanthoudakis S，et al.Recruitment and activation of caspase-8 by the huntingtininteracting protein hip-1 and a noxel partner hippi［J］.Nature Cell Biology，2002，4（2）：95-105.［4］张梅，何叶.不同强度运动训练对大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响［J］.天津体育学院学报，2006，21（2）：151-153.［5］Currie R W，Ellison J 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中文摘要目的近年来人们对研究ｃｉｒｑ（宫颈上皮内瘤样病变）中细胞凋亡所扮演的角色很感兴趣，并认识到启动及调节凋亡的机制在决定何种ＣＩＮ病变有可能进展为浸润癌时的重要价值。

目前了解比较深入，较为公认的是ｂｃｌ一２基因及其相关蛋白与凋亡的关系。

本实验通过免疫组化的方法检测ｂｃｌ一２、ｂｏｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白在正常宫颈上皮、ＣＩＮ以及宫颈癌中的表达情况来研究ｂｃｌ一２家族基因对凋亡的调节情况以及他们三者与疾病进展的关系。

方法检测对象为中国医科大学附属第一医院２０００—２００３年手术及宫颈活检组织、ＬＥＥＰ刀手术标本蜡块７９例，患者年龄２ｌ一５６岁，平均年龄４１．６４±２．８６岁，其中正常宫颈组织（ＮＥ）１７例，宫颈上皮内瘤样病变—低度（ＣＩＮ—Ｌ）２１例，宫颈上皮内瘤样病变一高度（ＣＩＮ—Ｈ）１９例，宫颈浸润鳞癌组织（ＳＣＣ）２２例。

凋亡相关基因ｂｃｌ一２、ｂａｘ及ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白的表达采用单克隆抗体免疫组化法。

所有标本均经１０％福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片厚３—５¨ｍ，主要试剂兔抗人ｂｃｌ一２、ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白单克隆抗体。

ｂｃｌ一２、ｂｏｘ、ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白表达均定位于细胞浆，阳性细胞数兰１０％判定为蛋白表达阳性。

采用ＳＰＳＳ软件中卡方检验方法进行统计学分析。

结果１、Ｂｅｌ一２在正常宫颈上皮中无表达．其在ＣＩＮ—Ｌ及ＣＩＮ—Ｈ中的阳性率分别为２８．５７％和６８．４２％，随着ＣＩＮ病变的进展ｂｃｌ－２基因蛋白的表达率呈明显的上升趋势（Ｐ＜Ｏ．０５）。

在宫颈癌中ｂｃｌ—２的阳性表达率仅为２２．７３％，与ＣＩＮ—Ｈ相比明显降低（Ｐ＜Ｏ．０５）。

２．ｂｏｘ在正常宫颈上皮中少量表达，表达率为５．８８％。

其在ＣＩＮ—Ｌ及ＣＩＮ—Ｈ中的阳性率分别为８０．９５％和６３．１６％，随着ＣＩＮ病变的进展ｂａｘ基因蛋白的表达率未呈明显的下降趋势（Ｐ＞０．０５）。

在宫颈癌中ｂａｘ的阳性表达率为３１．８２％，与ＣＩＮ—Ｈ相比有显著降低（Ｐ＜０．０５）。

Bcl-2、Bcl-XL和Bax蛋白在结直肠癌中的表达李玉莉;胡静姿;刘惠敏;余宏宇;何金;朱维健【摘要】背景与目的:通过检测结直肠癌与癌旁组织中Bcl-2、Bcl-xL和Bax蛋白的表达,以探讨其在结直肠癌发生发展中的作用.材料与方法:应用免疫组化S-P法检测39例结直肠癌组织与癌旁组织中Bcl-2、Bcl-xL和Bax蛋白表达的情况.结果:Bcl-2、Bcl-xL和Bax的阳性颗粒均主要分布于细胞质/膜,在癌旁组织中,Bcl-2阳性颗粒主要分布于陷窝的底部,Bax主要分布在靠近表面的上皮细胞,Bcl-xL则分布于整个陷窝.Bcl-2蛋白的表达在癌组织和癌旁组织都很低,两者之间差异无统计学意义(Z=0.072,P＞0.05);Bcl-xL蛋白的表达均较高,且癌组织高于癌旁组织(Z=3.157,P＜0.05);Bax蛋白的表达最强,但在癌组织和癌旁组织之间差异无统计学意义(P＞0.05);只有Bcl-2蛋白表达与Dukes分期和TNM分期均成负相关(分别为rs=-0.389,-0.396,P＜0.05),Bcl-xL和Bax蛋白表达与临床病理相关因素(性别、年龄、肿瘤大小、发生部位、组织学类型、分化程度、Dukes分期及TNM分期)均无关(P＞0.05).结论:Bcl-2可能只在结直肠癌发生发展的早期起重要作用,丽后期可能Bcl-xL起更主要的作用,而Bcl-2蛋白表达可能会与预后有关.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2007(019)001【总页数】3页(P53-55)【关键词】结直肠癌;Bcl-2;Bcl-xL;Bax;免疫组织化学;细胞凋亡【作者】李玉莉;胡静姿;刘惠敏;余宏宇;何金;朱维健【作者单位】第二军医大学长征医院病理科,上海,200003;第二军医大学长征医院病理科,上海,200003;第二军医大学长征医院病理科,上海,200003;第二军医大学长征医院病理科,上海,200003;第二军医大学长征医院病理科,上海,200003;第二军医大学长征医院病理科,上海,200003【正文语种】中文【中图分类】R73结直肠癌是临床最常见的恶性肿瘤之一。