第五章目的基因的获得10上
- 格式:ppt
- 大小:2.97 MB
- 文档页数:115
第一章基因工程概述一、名词解释基因、基因操作、基因工程、重组DNA技术二、思考题1、简述基因工程操作的基本步骤。
2、简述基因工程操作的理论依据。
3、简述基因工程诞生理论上的三大发现和技术上的三大发明。
第二章基因工程的工具酶一、名词解释限制性内切酶、同裂酶、同尾酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、逆转录酶二、思考题1、简述限制性内切酶命名的基本原则。
2、影响限制性内切酶活性的因素主要有哪些?3、影响连接反应效率的因素主要有哪些?4、大肠杆菌DNA聚合酶有哪些活性?分别简要说明其主要用途。
5、简述切口平移法标记DNA的原理。
答:首先,在Mg2+存在下利用低限量的DNase I处理双链DNA,随机产生少量切口;然后,利用大肠杆菌DNA聚合酶I的5'→3'外切酶活性在切口处向3'端平移去除核苷酸,同时,其5'→3'聚合酶活性则将切口作为引物沿5'→3'方向催化DNA合成;随着反应的进行,5'端核苷酸不断去除,3'端核苷酸不断掺入,导致切口沿着DNA合成方向移动,即切口平移。
如果在反应体系中加入标记dNTP,则这些标记dNTP将取代原有的核苷酸残基,产生带标记的DNA分子。
6、简述交换(置换)法标记DNA的原理。
答:反应体系中只有一种标记的dNTP存在时,可利用大肠杆菌DNA聚合酶I或T4/T7 DNA 聚合酶的3’→5’外切酶活性从3’端降解DNA,当露出与该标记dNTP互补的碱基时,上述酶的5'→3'聚合酶活性则催化该位置发生合成反应,用标记的dNTP置换原来的核苷酸残基,产生3’端标记的DNA。
第三章基因工程的载体一、名词解释载体、质粒、噬菌体、噬菌体溶菌周期、噬菌体溶原周期、克隆载体、表达载体、穿梭载体、整合载体、表达标签二、思考题1、简述克隆载体具备的基本条件。
2、以大肠杆菌为例,解释利用α互补筛选重组质粒的原理。