血细胞计数板PPT

精度高
血球计数板由精密的网格构成，能够精确地 计算细胞数量，误差较小。
样本用量少
血球计数板计数法需要的样本量较少，适用 于珍贵样本的计数。
缺点
主观性强
血球计数板计数法需要人工识别和计数细胞，因此容易受到主观因素 的影响，不同操作者之间可能存在差异。
无法计数非网格区域细胞
血球计数板上的网格区域有限，对于非网格区域的细胞无法计数，可 能会造成计数误差。
改进样本处理方法，提高细胞分散效果，降低细胞聚集现象， 提高计数的准确性。
增加血球计数板的网格密度，以减少计数误差，提高计数的准 确性。
将血球计数板计数法与其他检测方法相结合，如染色法、流式 细胞术等，以提高计数的准确性和可靠性。
06 血球计数板计数法：血常规检测中的血细胞计数
红细胞计数降低
常见于缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、溶血性贫血等，也 可见于慢性病、肿瘤、月经期、孕妇等生理性贫血。
白细胞计数结果解读
白细胞计数正常值
成人（4.0~10.0） × 10^9/L，新生儿 （15.0~20.0） × 10^9/L。
白细胞计数升高
常见于感染、炎症、组织损伤、恶性肿瘤等，也可 见于生理性升高，如剧烈运动、体力劳动、月经期 和排卵期等。
常见于免疫性血小板减少症、再 生障碍性贫血、骨髓增生异常综 合征等，也可见于某些药物影响 或放化疗后骨髓抑制。
05 血球计数板计数法的优缺点
CHAPTER
优点
操作简便
血球计数板计数法是一种直接、快速的细胞 计数方法，操作简便，易于掌握。
适用范围广
该方法适用于各种类型的细胞计数，包括细 菌、红细胞、白细胞等。
总结词
血球计数板计数法在血常规检测中广 泛应用，用于准确计数红细胞、白细 胞和血小板等血细胞数量，为临床诊 断提供重要依据。

价贵；环境 健康人群普查； 要求较高 大批量标本筛检
.
11
质量保证（显微镜法）
显微镜法红细胞计数误差来源有三个
技术误差 仪器误差 分布误差
.
12
技术误差
31 2 3 4
采血部位不当 稀释倍数不当
充液不当 血液凝固
.
13
参考值
RBC存在年龄 与性别的差异
成年男性：（4.09～5.74）×1012/L 成年女性：（3.68～5.13）×1012/L 新生儿：（5.2～6.4）×1012/L 婴儿： （4.0～4.3）×1012/L 儿童： （4.0～4.5）×1012/L
显微镜计数法 血液分析仪法
.
6
检测原理
显微镜计数法（重点）
RBC未排除 白细胞数量影响
用等渗液稀释血液后，滴入 血细胞计数板，计数一定范 围内的红细胞，经换算得每 升血液中的红细胞数。
.
7
操作
10ul末梢血或EDTA抗凝静脉血
加入2ml等渗液中，混匀
混悬液充入改良牛鲍计数板
高倍镜下计数中央大方格的四角及中央五个 中方格内的红细胞总数A。
女性 87～112 g/L
.
40
临床意义（同红细胞计数）
判断贫血程度优于红细胞计数 临床应用注意事项
.
34
方法学评价
SDS-Hb测定法（ HiCN替代方法）
优点：操作简单 ，试剂无毒，结果准确， 重复性好 。
缺点：SDS质量差异大；消光系数未定， 不能直接计算Hb浓度；不能测定SHb ；
SDS破坏白细胞。
.
35
方法学评价
AHD575测定法
优点：试剂简易无毒、呈色稳定、准 确性与精密性较高。

血球计数板生物实验用具血球计数板是显微镜上的外挂物件,可用来测量细胞,细菌等一些微小物体的长度,还有就是测量数量,如单位体积细胞的数量.血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.实验六微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。

评估治疗效果
抗生素治疗效果评估
通过血细胞计数板监测白细胞数量变 化，有助于评估抗生素治疗效果，指
导抗生素的合理使用。
贫血治疗效果评估
通过血细胞计数板监测红细胞参数变 化，有助于评估贫血治疗效果，指导
贫血治疗方案的调整。
血液肿瘤治疗效果评估
通过血细胞计数板监测异常细胞数量 变化，有助于评估血液肿瘤治疗效果，
02
血细胞计数板使用步骤
准备阶段
01
02
03
04
清洁与准备
确保计数板和盖玻片清洁，无 污渍和尘埃。
标记与编号
在血细胞计数板的每个大方格 上标记样本编号，以便后续识
别。
样本制备
将待测血液样本进行稀释，通 常使用等量稀释法，即将一滴 血液加入等量的稀释液中。
温度与时间
确保实验室温度适宜，避免温 度波动影响实验结果。
03
血细胞计数板使用注意事 项
清洁度要求
清洁计数板
每次使用前，应确保计数板清洁 无污染，避免杂质干扰计数结果 。
清洗方法
使用温和的洗涤剂清洗，然后用 清水冲洗干净，最后用干净的纱 布擦干。
操作规范
样本制备
将待测血液样本稀释至适当浓度，以便在计数板 上进行准确计数。
计数步骤
按照规定的操作步骤，逐格进行计数，并记录每 个格子中的血细胞数量。
血细胞计数板使用原理基于血细胞的体积和数量之间的关系 。由于不同种类的血细胞具有不同的体积，因此可以通过测 量一定体积的血液样本中包含的血细胞数量来计算各种血细 胞的浓度。
通过将血液样本滴入计数板的网格中，并使用显微镜观察， 可以计算每个小格中血细胞的数量。然后，通过计算整个血 液样本中包含的血细胞数量，可以得出各种血细胞的浓度。

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汇报人：PPT
01
03
05
02
04
血细胞计数板是一种用于计数血细胞的工具
由多个小方格组成，每个方格内可容纳一定数量的血细胞
通过观察血细胞在方格内的分布情况，可以计算出血细胞的数量和比例
血细胞计数板广泛应用于医学、生物学等领域，用于检测血液中的血细胞数量和比例， 了解血液健康状况。
将盖玻片放在血细胞计数板上，使血液 样本均匀分布
在显微镜下观察血细胞计数板，计数血 细胞数量
根据血细胞计数板的刻度，计算血细胞 数量
记录血细胞计数结果，用于诊断和治疗 疾病
血细胞计数板是一种用于计数红细 胞数量的工具
通过观察血细胞在血细胞计数板上 的分布情况，可以计算出红细胞的 数量
添加标题
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血细胞计数板是诊断血液系统 疾病的重要工具
通过观察血细胞形态和数量， 可以判断血液系统疾病的类型 和严重程度
血细胞计数板可以帮助医生制 定治疗方案
血细胞计数板在血液系统疾病 的诊断中具有较高的准确性和 可靠性
放化疗对血细胞的影响
血细胞计数板在监测放化疗 效果中的应用
血细胞计数板由多个小方格组成， 每个小方格代表一个红细胞
血细胞计数板在实验中具有重要的作 用，可以帮助研究人员更好地了解血 液中的红细胞数量，从而更好地了解 血液的健康状况。
血细胞计数板是一种用于计数血细胞数量的工具 在实验中，血细胞计数板可以帮助我们快速准确地计数白细胞数量 血细胞计数板的使用步骤包括：取样、稀释、涂片、染色、观察和计数 血细胞计数板的使用可以提高实验结果的准确性和可靠性
血细胞计数板在监测放化疗 效果中的注意事项

深度
中格数
400 小格
• 血细胞计数板是一种专门用于计算较大单 细胞微生物的一种仪器。 • 计数时，常采用抽样检测。 计数器大方格规格：
2mm×2mm×0.1mm 或 1mm×1mm×0.1mm 浙科版默认第一种
1mL酵母菌培养液 能盛满多少大格？ 2500
25×16
若5个中格内共有酵母菌数53个，求每 毫升酵母菌培养液中的酵母菌数？
每个方格网共 分九个大方格, 中央的一大方 格作为计数用,
中格
25（中格）×16（小格）型的计数板
每个方格网共 分九个大方格, 中央的一大方 格作为计数用,
计数室（中间大方格）的长和宽各为 1mm ，深度 3 ， 合 0.1 为 0.1mm ， 其 体 积 为 ______mm -4 1 × 10 _________mL。
计数室（中间大方格）的长和宽各为 1mm ，深度 3 ， 合 0.1 为 0.1mm ， 其 体 积 为 ______mm -4 1 × 10 _________mL。
深度
中格数
400 小格
• 血细胞计数板是一种专门用于计算较大单 细胞微生物的一种仪器。 • 计数时，常采用抽样检测。 计数器大方格规格：
2mm×2mm×0.1mm 或 1mm×1mm×0.1mm 浙科版默认第一种
1mL酵母菌培养液 能盛满多少大格？ 2500
25×16
若5个中格内共有酵母菌数53个，求每 毫升酵母菌培养液中的酵母菌数？
血细胞计数板是
一块特制的厚型 载玻片,载玻片上 有四个槽构成三 个平台。中间的 平台较宽,其中间 又被一短横槽分 隔成两半,每个半 边上面各刻有一小 方格网, 计数用,称为计数区。
血细胞计数板是
一块特制的厚型 载玻片,载玻片上 有四个槽构成三 个平台。中间的 平台较宽,其中间 又被一短横槽分 隔成两半,每个半 边上面各刻有一小 方格网, 计数用,称为计数区。

总结与比较
血细胞计数板和细菌计数板常用于测定单细胞或孢子, 相对比较准确;
膜过滤用于测定细胞浓度很低的样品,平板菌落计数对 多数微生物的测定都适用, 但是相对其他计数法要复杂;
比浊法相对准确,但需要作标准曲线; 对于丝状微生物的数量测定,国际上有明确的标准; 而凯氏定氮法和DNA 含量测定法都是通过对微生物细 胞内含量相对稳定的物质进行定量测定, 再算出细胞的数 量,操作相对复杂.
2.活细胞计数法
2.3 霉菌计数法
对于霉菌的计数一般比较困难,由于霉菌生长快, 菌丝叠加导致无法准确计数.国标霉菌计数法的原 理是:将待测菌液进行10 倍梯度系列稀释,利用高 盐察氏培养基(CAO)与待测菌液混匀后倒平板,25 一28℃下培养3d 后开始计数,选择菌落数在10150 之间的平板进行计数,取同稀释度的两个平板 的菌落平均数乘以稀释倍数,即为每g(或 mL)检样 中所含霉菌数。
常见微生物数量测定方法比较
ห้องสมุดไป่ตู้
微生物主要包括原核微生物,真核微生物,病毒等 三大 类,由于多数微生物的个体较小,肉眼无法观察, 对其计数 一般比较困难.在目前的微生物实验教学 中,对微生物计 数的方法主要有三大类:总细胞计数法,活细胞计数法和 微生物生长量测定法.并不是每种方法都是通用的,不同 的微生物种类需要不同的计数方法,目前多用以下8 种方 法进行计数:
1.总细胞计数法
1.3 膜过滤计数法
利用计数板对高浓度的菌液测定比较准确,但当样品中细菌 的数量很低时,如湖水, 海水或饮用水等,用膜过滤计数法更精 确些,可以将一定体积样品溶液加结晶紫染色,再用0.22mm的 聚偏二氟乙烯膜负压过滤,再用无菌水冲洗至无色后,将过滤的 膜进行抽干,将膜放到载玻片上,滴加甘油,盖上盖玻片,即可在 显微镜下计数.一般随机抽取20个视野进行计数,最后算平均数, 计算整个滤膜上的菌的数量,得到原菌液中的微生物数量. 此测 定方法一般只能用于样品中细菌数量很低的。

血细胞计数板在其他医学领域的应用 ，进一步拓展了其在医学诊断和治疗 中的价值。
04
血细胞计数板的维护与保养
血细胞计数板的清洁与保养
清洁
使用柔软的湿布定期擦拭计数板 ，以清除灰尘和污垢。避免使用 含有酒精或化学溶剂的清洁剂， 以免损坏计数板表面。
保养
定期检查计数板的边缘和角落， 确保没有损坏或裂纹。如有需要 ，可以使用薄薄的一层防锈油来 保护金属部分。
血细胞计数板的常见故障及排除方法
读数不准确
可能是由于计数板表面有污垢或 磨损造成的。清洁和检查计数板 表面，确保其清晰、干净且无磨
损。
气泡产生
在计数过程中出现气泡可能是由于 温度变化或液体表面张力问题。确 保在恒温环境下操作，并确保计数 板表面干燥。
计数板松动或移位
检查计数板的安装是否稳固，如有 需要，可以重新安装或更换固定装 置。
科学研究
血细胞计数板可用于科研领域，为疾病发病机制、药物研发和生物 医学研究提供有力支持。
公共卫生
在流行病和公共卫生事件中，血细胞计数板可用于快速大规模筛查 和监测，保障公共卫生安全。
血细胞计数板的研究方向与挑战
新型计数板材料的研发
01
探索新型材料，提高计数板的耐用性和稳定性，降低成本。
计数板标准化的研究
血细胞计数板在临床上的应用，有助于医生快速、准确地获取患者的血液指标，为 制定治疗方案提供依据。
血细胞计数板在血常规检测中的应用
血常规检测是临床常见的检查项目，通过血细胞计数板可以快速准确地测定红细胞、白细胞 和血小板数量。
红细胞计数有助于判断贫血、红细胞增多等病症；白细胞计数有助于判断感染、炎症等病症 ；血小板计数有助于判断出血性疾病。
02

②血盖片应具有一定的重量，平整、光滑、无裂痕，厚薄均匀一致，可使用卡尺多点测量（至少在9个点），不均匀度在0.002mm之内。必要时采用平面平行仪进行测量与评价，要求呈现密集平行的直线干涉条纹。最简单的评价方法是将洁净的盖片紧贴于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的时间不脱落，落下时呈弧线形旋转，表示盖片平整、厚薄均匀。同时，合格的盖片放置在计数室表面后，与支持柱紧密接触的部位可见到彩虹。精选出的盖片与其他盖片紧密重合后，在掠射光线下观察，如见到完整平行的彩虹条纹表示另一枚盖片质量也符合要求。
而由于仪器（计数板、盖片、吸管等）不够准确与精密带来的误差称仪器误差；
由于细胞分布不均匀等因素带来的细胞计数误差属于分布误差或计数域误差（filed error）。
仪器误差和分布误差统称为固有误差或系统误差。技术误差和仪器误差可通过规范操作、提高熟练程度和校正仪器而避免或纠正，但细胞分布误差却难于彻底消除。质量控制一般需采用以下措施。
n为测定例数，∑d2为双样之差的平方和。
3．人员质量评价一般用两差比值法或双样试验标准差评价法进行质量评价或工作人员自我考核；变异百分数法通常用于评价细胞计数的结果。
（1）两差比值法用于考核实验结果的精密度。采用同一稀释样间隔2h后进行重复计数，求出两次镜下计数值之差（取绝对值）与两次计数值标准差的比值，即两差比值（r）。
评分：score=100-20.1×r，20.1为失分系数（40/1.99）。评级：90-100为优秀，80-89为良好，70-79为中等，60-69为及格，<60时为不及格。
（2）细胞稀释液应等渗、新鲜、无杂质微粒，同时应该保证细胞没有明显的团块。
（3）严格操作，从取样、重悬、稀释、充池到计数都应规范，尤其应注意的是样品稀释及充池时既要作到充分混匀，又要防止剧烈震荡为破坏红细胞。必须一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与血盖片之间的矩形边缘为宜。

血球计数板及其使用方法1、血球计数板的构造血球计数板是一种生物学或医学仪器，用以对人体血液中红细胞、白细胞进行显微计数，也常用于一些细菌、真菌、酵母菌等较大细胞或微生物的计数。

血球计数板的形状如图1所示，血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上由4个槽构成3个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一方格网，每个方格网共分9个大方格（大方格用三线隔开），中央的一大方格作为计数用，称为计数室，如图2所示。

计数室的规格常有两种:一种叫希利格式（16×25型），是一个计数室分为16个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成25个小方格;另一种叫汤麦式(25×16型），是一个计数室分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数室都由400个小方格组成。

计数室的边长常为1mm,则计数室的面积为1mm2，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm，所以每个计数室的容积为0.1mm3,每个小方格的边长为0.05mm,每个小方格的容积为1/4000mm3、16×25型的每个中方格的边长为0.25mm，每个中方格的容积为1/160mm3,25×16型的每个中方格的边长为0.2mm，每个中方格的容积为1/250mm3,如图3所示。

另外，有血球计数板规格为计数室边长为2mm,则计数室的面积为4mm2,计数室的高度为0.1mm,所以每个计数室的容积为0.4mm3,每个小方格的边长为0.1mm，每个小方格的容积为1/1000mm3。

16×25型的每个中方格的边长为0.5mm，每个中方格的容积为1/40mm3;25×16型的每个中方格的边长为0.4mm，每个中方格的容积为2/125mm3。

2、血球计数板的使用方法（以计数酵母菌为例）(1)用血球计数板计数培养液中的酵母菌个数。

3mm
白细胞计数区 域
细胞和血小板计数 域
白细胞计数区 域
白细胞计数区 域
1mm
白细胞计数区 域
实验操作(二)：白细胞计数
1.加白细胞稀释液: 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。 2.加血: 用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血20μl，擦去管外余血，轻轻加至白细胞稀
释液底部，再轻吸上清液清洗吸管2～3次，混匀。 3.充池: 混匀后用微量吸管将完全变为棕褐色的细胞悬液冲入计数池，室温下平放
胞下沉后于显微镜下计数。 4. 计数: 用高倍镜依次计数中央大方格内4角和正中共5个中方格内的红细胞数。 5. 计算:
红细胞/L=N×25/5×10×106×200=N×1010 =N/100×1012 N：表示5个中方格内数得的红细胞数。 ×25/5：将5个中方格红细胞数换算成1个大方格红细胞数。 ×10：将1个大方格红细胞数换算成1μl血液内红细胞数。 106： 1L=106μl 200：为血液的稀释倍数
红细胞及白细胞计数
实验目的
掌握显微镜下红细胞和白细胞计数方法
实验原理
用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，冲入计数池 后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量， 经换算求出每升血液中的红细胞数。
用白细胞稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏 溶解红细胞。将稀释的血液冲入计数池后，在显 微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出 每升血液中的白细胞数。
改良牛鲍氏计数板
支柱 计数池 支柱
血细胞计数板正面观
盖玻片
支柱 计数池 支柱
血细胞计数板侧面观
3mm
白细胞计 数区域
红细胞和血 小板计数区 域
白细胞计 数区域
白细胞计 数区域
1mm

2.充液：用小滴管将一小滴 稀释200倍的兔血滴在盖 玻片边缘的玻片上，使稀 释血液借毛细管现象自动 渗入计数室中。
盖玻片
2
计数室
三．实验步骤
1.取血细胞计数板，检查计 数板是否清洁，如有污垢， 应先洗涤干净。然后将计 数板放于低倍镜下，熟悉 计数室的构造。然后加盖 玻片盖住两边的小槽。
2.充液：用小滴管将一小滴 稀释200倍的兔血滴在盖 玻片边缘的玻片上，使稀 释血液借毛细管现象自动 渗入计数室中。
For better resolution when imaging thick cells.
A mitotic fertilized egg from a sea urchin (海胆)
2. 测微尺的使用操作
目镜测微尺
0 10 20 30 40 50
1.取下目镜,将目镜测微尺的刻度 面向下放入目镜中,旋上透镜 (Olympus显微镜目镜中已匀的鸭血红细胞 测量10个鸭血红细胞
四.注意事项
1. 不同物镜下目镜测微尺代表的大小不同。
五.实验结果和作业：
1.分别计算不同物镜放大倍数(10x, 20x, 40x)下 目镜测微尺的单位。
2.用目镜测微尺和镜台测微尺测量一下 鸭血红细胞的长轴和短轴， 分别测量10个鸭血红细胞，求其平均值(多少微米？)。
十字板
分划板
网格板
Figure 9.18 Confocalmicroscopyproduces anin-focus optical sectionthroughthick cells.
9.2 Light Microscopy Fluorescence Microscopy Laser-Scanning Confocal Microscopy(激光扫描共聚焦显微镜)

图为：25中格Ｘ16小格的细胞计数板血球计数板血球计数板的构造和使用血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3.计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.血球计数板的使用以计数酵母菌为例(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数.(2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内.(5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞).(7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数.3.计算公式(1)16格×25格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.血细胞计数板的使用改良牛鲍氏血细胞计数板的使用血细胞计数板的规格较多，在我国多采用改良牛鲍氏血细胞计数板，用于目视法细胞计数。