岛津LC-20AP型高效液相色谱仪SOP

岛津高效液相色谱仪LC-20A操作规程题目LC-20A高效液相色谱仪操作规程编号版本号共 3 页SOP-YQ-009 A 第 1 页制订人审核人批准人生效日期制订日期审核日期批准日期颁发部门分发部门一、目的：为了安全、规范、正确使用岛津LC-20A型高效液相色谱仪，特制订本操作规程。

二、范围：仅适用于岛津LC-20A型高效液相色谱仪。

三、环境要求：温度4 ～35℃，相对湿度为40～80% ，最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。

四、职责：LC-20AT 高效液相色谱仪的使用人员对本规程的实施负责，实训室老师对本规程的实施监督。

五、操作步骤：1. 开机前准备：1.1开机之前，准备好所用的流动相和样品，检查储液器的吸滤头是否在液面以下。

流动相和样品必须通过0.45um过滤器过滤。

1.2 流动相：必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并通过0.45um过滤器过滤。

过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体O2等，如不脱气易产生气泡、基线噪声增加、灵敏度下降，甚至无法分析。

1.3 查看仪器使用记录，了解仪器当前状况。

1.4 样品前处理：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理。

2.开机顺序：A泵→B泵→柱温箱→自动进样器→检测器→系统控制器后→电脑显示器→主机（注：仪器各单元的开关均在左下角）2.1 启动：双击LCsolution，“LCsolution Launcher”启动：此时仪器发出“嘀嘀”两声，表明系统与仪器连接成功2.2 设置系统配置：单击，选择自动配置，检查系统与仪器的实际配置是否相符。

2.3 设定方法：仪器参数视图“高级”处，分别设定数据采集、LC时间程序、泵、荧光检测器、柱温箱、自动进样器、自动排气等参数，保存方法（另存为）。

单击下载，将设置传输到仪器。

如图1：图1：仪器参数视图2.4 排气：点击“自动排气”，出现图2界面。

打开排液阀（逆时针旋转15°），开始排空，检查流动相入口管路中没有气泡后。

1技术参数LC-20AT低压梯度泵梯度方式：低压混合混合溶剂数：4液混合浓度准确度：1%以下SIL-20AC自动进样器：进样量：0.1 L~100^L进样量准确度：1%以下进样量精密度：RSD: 0.3%以下（10mL进样时指定条件下）2适用范围适用于药物的分离、定性、定量分析3操作步骤3.1仪器组成：由DGU-20A5脱气机、LC-20AT低压梯度泵、SIL-20AC自动进样器、CTO-20A 柱温箱、SPD-20A 紫外-可见检测器、RF-20A荧光检测器、CBM-20A系统控制器、LC Solution 工作站等组成。

3.2开机①在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相，标样及样品。

流动相抽滤后超声脱气15分钟，标样和样品0.45um膜过滤。

②接通电源，依次开启A泵、B泵、柱温箱、自动进样器、检测器、系统控制器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。

③泵排空操作：打开LC-20AT泵排空阀（逆时针90度以上），按Purge键，泵开始排空运行。

检查流动相入口Teflon管路没有气泡后，再按Purge键停止排空。

自动进样器排气操作：按Purge键，自动进样器开始排气，系统默认排气时间为25min, 且自动进样器排气过程中可同时进行其他操作。

（除进样外）压力调零：按LC-20ATvp泵Func键选择CONTRO项，按FUN（键直至屏幕显示***ml ZEROADJ项，按Enter键，再按CE键，即完成调零。

然后关紧排空阀（顺时针旋紧）。

④再双击Operation € Analysis 1~4进入实时分析窗口：（根据不同的检测器选择）在开机画面中，User ID选中Admin,不需输入Password,点击OK（可听到峰鸣一声）衣在下面操作中A€ B表示在A菜单下选择B,以此类推。

选中□表示在□中打V号。

3.3参数设置①在左侧助手栏给出了引导顺序操作的图标，自上而下顺序执行即可：（可以跳过执行）•System configuration 系统配置（第一次安装或更换检测器时配置，通常跳过不操作）•System Check编辑仪器检查参数：并且RUN运行检查。

目的PURPOSE建立SPD-20A岛津高效液相色谱仪使用及维护保养操作规程，使设备的使用及维护保养管理规范化、制度化。

责任RESPONSIBILITY质量部QC负责本文件的编写，QC主管审核，质量部经理批准。

QC负责仪器的使用及维护管理，QA负责监督执行。

适用范围SCOPE适用于公司所有SPD-20A岛津高效液相色谱仪操作及维护保养。

内容CONTENT流动相的处理过滤溶剂：溶剂在使用前一定要用0.45μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。

本实验室有水溶性和脂溶性两过滤膜供选择（反光面朝上），缓冲盐先用水膜过滤，和有机相混合后再用有机滤膜过滤，滤前先滤少量纯化水清洗滤器。

保持储液瓶的清洁：用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃清洗瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

保证溶剂的质量：一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

使用前故障及解决方法流动相脱气不充分：流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。

可使用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。

流动相供给不畅：流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。

应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。

输液管上装溶剂滤头，既可使输液管沉至瓶底，又可过滤流动相，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

溶剂滤头阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。

溶剂滤头被微粒所阻塞或长霉，去掉溶剂滤头后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的溶剂滤头则可。

有时候换上新的溶剂滤头仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的溶剂滤头。

不管如何，流动相都需要重新过滤。

流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于溶剂滤头孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。

岛津LC20AT液相色谱操作步骤岛津LC-20AT高效液相色谱操作步骤1､流动相的处理共有5个流动相储液瓶。

一般RP-HPLC中,A(无机相)､B(有机相)为分析流动相;C(水)､D(甲醇)用于柱子后处理清洗;50%甲醇-水用于清洗自动进样针流动相体积V A､B=100+总流速×比例系数×分析时间(mL);Vc≥300mL;VD≈350mL;V50%甲醇≈300mL所有流动相须用0.22um孔径滤膜过滤(根据有机相和无机相选用相应滤膜),清洗储液瓶,不能在清洗过程中留下污迹,并超声30min,超声完成后禁止剧烈摇晃2､开机开启插座电源电脑开机打开仪器电源(LC—20AT最后打开,等待数秒后“control”指示灯亮)打开软件(Labsolution仪器LC—20A),若连接正常则软件显示LC就绪3､自动排气将各流动相过滤头缓慢放入流动相中在简单设置界面设置总流速为0.2mL/min;在自动排气界面设置自动排气参数(A､B､C､D各流动相≥5min,自动进样器≥25min),不勾选“排气结束后运行控制器”“下载”“执行自动排气”等待排气结束4､样品处理稀释后的样品(浓度约1mg/mL,不宜过高)用注射器经0.22um过滤器注入样品瓶样品应≥2/3样品瓶体积(1.5mL样品瓶)按序号依次将样品瓶放入自动进样器的样品架上切记:将样品架推到底!5､系统平衡及设置分析条件自动排气完成后,设置柱温､检测波长等参数(建议柱温高于环境10℃),用梯度洗脱初始流动相平衡柱子(流动相比例与梯度洗脱初始比例一致)“下载”/取消激活仪器”,此时系统显示:等待柱温稳定缓慢增加总流速至样品分析所需流速,Vmax=1ml/min(每隔1分钟增大0.2mL/min,注意每次增大都点击“下载”)在时间程序界面设置梯度洗脱条件若要保存方法文件:文件方法文件另存等待基线平稳(留意泵压力是否稳定),待系统显示:LC就绪,右击,进行。

岛津LC—20AT型高效液相色谱仪操作规程一、流动相及样品的准备1、流动相的选择，有机溶剂必须是色谱级，水必须是超纯水或二次蒸馏水。

2、流动相用0.45μm孔径的滤膜过滤（水和有机相所用的滤膜不同，有机相用F膜，水相用水膜），超声脱气后置于储液瓶中。

3、根据待检测样品的需要更换合适的色谱柱。

4、样品溶液亦必须用0.45μm的微孔滤膜过滤后才能进样。

二、开关机顺序1、开机顺序：先打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器电源，再打开系统控制器的电源，点击电脑中的Lc-solution工作站联机，连上后能听到两次“嘀”的声音。

2、关机顺序：与开机顺序相反，即先关闭Lc-solution工作站→系统控制器→泵、自动进样器、柱温箱、检测器。

3、待设备自检结束后，打开仪器对输液泵及自动进样器进行必要的Purge操作，排出相应流路中的气泡，使新鲜溶剂在流路中得以置换；检查输液泵在动作前的压力显示值，必要时对此压力值进行调零。

三、LC-solution 操作界面的进入及系统的开启1、双击桌面上Lc-solution图标，选择屏幕左侧“操作”项并单击，在弹出的窗口中双击操作仪器所对应的图标，弹出窗口后输入用户名ID及密码，按“确定”进入仪器实时分析界面。

2、点击助手栏中的“仪器参数”进入仪器参数设置界面，设置采样时间，流动相流速及配比，检测波长，柱温等。

在完成后点击“下载”将分析参数传输至主机。

3、分析方法的保存：选择文件→另存方法文件为→选择保存路径→取名保存文件。

该方法即作为当前运行的方法。

4、打开仪器上的排空阀（逆时针方向旋转180°），点击仪器面板上“purge”按钮开始清洗5个流路3分钟。

5、系统的启动：点击“仪器开/关”键开启系统（此时泵开始工作）四、进样准备及单次进样分析1、将样品瓶放入自动进样器中2、观察基线及柱压，待基线平直（-5~30mv），压力稳定（0.5Mpa）时方可进样。

3、点击助手栏中“单次分析”键，出现采样对话框。

岛津LC-20A型高效液相色谱仪操作规程1．实验前的准备1.1准备所需的流动相，自动进样器用的清洗液（甲醇-水50:50），用合适的有机滤膜（0.45 μm）滤过。

流动相装入溶剂储液瓶，确认吸滤头已置于液面以下。

1.2配制样品和标准品溶液，用合适的滤膜(0.45 μm)滤过。

1.3根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（连接时注意方向）。

2．开机2.1接通电源，打开输液泵（脱气机自动打开）、检测器、自动进样器、柱温箱，顺序无关紧要；等待各仪器单元的指示灯变为绿色时进行下一步操作。

2.2 打开电脑，双击桌面“LCsolution”图标，单击“仪器1”，弹出“登录”窗口，单击“确认”，听到两声蜂鸣，表示LCsolution 色谱工作站与仪器联机正常。

2.3在LCSolution工作站“仪器参数视图”中“自动排气”项进行排气时间设置，对输液泵及自动进样器进行必要的Purge操作，排出相应流路中的气泡；检查输液泵在动作前的压力显示值，必要时对此压力进行调零。

3．参数设定点击“仪器参数视图”进入仪器参数设置界面：选中“正常”或“高级”项，分别设定“数据采集”、“LC时间程序”、“检测器A”、“柱温箱”、“控制器”、“自动进样器”等参数。

3.1“泵”参数：“模式”控制送液模式，“泵A总流速”设定流速，“溶剂B（C、D）浓度”为各相所占百分比，“压力限制（泵A）”设置系统所能承受的压力范围，通常将“最大值”设置为18.0，“最小值”设为0。

3.2“柱温箱”参数：若使用柱温箱，则选中“启用柱温箱”复选框，在“柱温箱温度”设定柱温，“最高温度”设定最高保护温度（通常默认85℃）。

3.3“检测器A”参数：“灯”项选“D2”表示将灯打开，选“关”则氘灯关闭；“波长通道1（1）”处设置检测波长；其余保持默认值。

3.4 “数据采集”参数：选中“采集时间（检测器A）”复选框，设置数据采集的“开始时间”和“结束时间”。

3.5 “LC时间程序”参数：如采用梯度洗脱方式，则须编辑泵梯度洗脱程序，也可以通过时间程序控制柱温箱温度，检测波长等参数。

1、目的：建立岛津LC-20A高效液相色谱仪标准操作程序。

2、范围：岛津LC-20A高效液相色谱仪。

3、责任者：操作者。

4、程序：4.1 操作前的准备4.1.1 流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水为新鲜制备的重蒸馏水。

对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，配制好的流动相应通过0.45μm适宜的滤膜滤过，用前脱气10min以上，应配制足量的流动相。

4.1.2 供试溶液的配制供试品用规定溶剂配成供试溶液。

定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份。

供试溶液在注入色谱仪前，一般应经0.45μm适宜的滤膜滤过，必要时，在配制供试溶液前，样品需经提取净化，以免对色谱系统产生污染。

4.1.3 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

检查上次使用记录和仪器状态，根据分析要求，选择合适的色谱柱，色谱柱进出口位置是否与流动相的流向一致，原保存溶剂与现用流动相能否互溶，流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好，仪器的各开关位置是否处于关断的位置。

4.2 开机接通电源，依次开启稳压电源、泵、自动进样器、柱温箱、检测器，待自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。

4.3 选择分析方法4.3.1 在工作站的分析编辑器中编辑新的分析方法，设置流速、流动相名称与比例、等度或梯度洗脱、波长、柱温、采集时间等参数，另存方法文件；对已有的分析方法直接调用。

然后下载方法至液相色谱仪。

4.4 更换流动相并排气泡4.4.1 将欲更换管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；4.4.2 逆时针转动泵的排液阀60°，打开排液阀；4.4.3 在工作站中选择要排气的通道并根据需要设置排气时间（一般5min），选择自动进样器排气（25min），点击工具栏自动排气图标；4.4.4 排气完毕，将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

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LC-20A高效液相色谱仪验证方案1.主题内容与适用范围本方案规定了LC-20A高效液相色谱仪验证的内容、过程和方法。

本方案适用于LC-20A高效液相色谱仪验证。

2.相关文件《岛津LC-20A高效液相色谱仪使用说明书》《中国药典》2010年版二部《药品检验仪器操作规程》2010年版岛津LC-20A高效液相色谱仪的操作及维护保养SOP编号：EMO-R353.验证目的为确认LC-20A高效液相色谱仪能够达到仪器性能指标，能符合检验产品需求，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。

4.职责5.验证内容与方法.预确认.设备基本情况本仪器由日本岛津公司生产，由2台LC-20AT泵、1台SPD-20A检测器、1台CBM-20A控制器,1台CTO-10ASvp柱温箱，岛津LC solution双通道色谱工作站组成。

主要用于各种进厂原料、成品药的含量测定及新方法的开发及其验证。

设备名称：高效液相色谱仪型号：LC-20A生产厂家：日本岛津公司安装日期：2008.4使用部门：研究开发中心.安装确认项目要求：充分通风，附近无火源（当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时，房间应充分通风；当使用易燃溶液时，严禁室内使用明火或其它火源）；安装场所环境温度4-35℃，日温度变化要小（不超过2℃）；湿度保持在45～85%，无灰尘及腐蚀性气体；没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调；电源功率220±10V，50HZ；供电电源应有良好的接地；线路连接各接口连接正确；管线连接各接口连接正确。

5.2.硬件认证硬件认证检查LC系统是否运转正常，仪器是否适用于准备进行的分析，在LC安装、操作和性能鉴定过中进行认证，此后还要定期检查，随着时间的推移，由于易损部件的磨损，LC系统的性能会下降。

因此，从系统安装时起直到系统报废时止，必须定期进行硬件认证。

.柱温箱温度准确度检查检查温度是否控制在设定的温度，特别是，测量柱箱内部热传感器附近的温度，并与设定温度相比较。