芽孢杆菌在水产养殖中的应用研究进展

枯草芽孢杆菌在水产养殖中的研究进展

苏艳莉;孙盛明;朱健;谢骏;戈贤平

【摘 要】枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是革兰氏阳性菌,主要以芽孢形态存在,稳定性和抗逆性强,抗菌性能好,其作为绿色免疫增强剂之一可部分替代抗生素,在水产养殖中适量使用枯草芽孢杆菌已成为一种健康养殖方式.枯草芽孢杆菌通过发挥自身营养功效、分泌抑菌物质等方式调节动物体内微生态平衡、提高免疫力和抗病力,从而促进养殖动物生长、减少病害发生以及改善养殖环境.本文综述了枯草芽孢杆菌的特性、作用机理、适宜添加量以及使用方式和现状,并进一步展望未来的研究方向,使其应用更加广泛,促进中国水产养殖的健康发展.

【期刊名称】《中国渔业质量与标准》

【年(卷),期】2016(006)006

【总页数】8页(P32-39)

【关键词】枯草芽孢杆菌;水产养殖;水质;免疫调节;适宜添加量;作用机理

【作 者】苏艳莉;孙盛明;朱健;谢骏;戈贤平

【作者单位】中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广东广州510380;南京农业大学无锡渔业学院,江苏无锡214081;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,江苏无锡214081;中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,江苏无锡214081;中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广东广州510380;南京农业大学无锡渔业学院,江苏无锡214081 【正文语种】中 文

【中图分类】S96

从20世纪70年代开始，中国水产养殖业集约化、规模化的养殖模式日趋成熟，人们对水产品的需求量以每年8.9%～9.1%的速度增长；高密度、大容量、频繁投饵的养殖方式使养殖水体环境日益恶化，水中及池底有机物沉积，溶解氧减少，氨氮、磷酸盐等有害物质增多，水体微生态平衡被打破，影响鱼类正常生长，导致病害频发，严重时造成大量死亡，损失巨大[1-3]。然而养殖过程中过量且频繁使用抗生素，虽然能有效控制某些疾病的发生，但会导致水产动物体内菌群失调，并让有害微生物产生耐药性，造成水产品药物残留，通过食物链间接对人体健康产生威胁，因此人们迫切地希望能够找到抗生素的替代品来抑制病原菌，减少病害的发生，增大养殖效益[4-5]。

- 1 - 芽孢杆菌在水产养殖中的使用方法

随着水产养殖业的不断发展，水产养殖中出现的各种疾病也越来越多。为了保证水产养殖的健康和安全，我们需要采用一些有效的方法进行防治。其中，芽孢杆菌就是一种比较常用的防治方法。本文将介绍芽孢杆菌在水产养殖中的使用方法。

一、芽孢杆菌的特点

芽孢杆菌是一种常见的益生菌，属于革兰氏阳性菌，形状为短杆状或长杆状。芽孢杆菌能够生长在不同的环境中，包括水中和土壤中。它能够分解有机物质，促进植物生长，还能够抑制其他微生物的生长。因此，芽孢杆菌被广泛应用于农业、水产养殖、环境保护等领域。

二、芽孢杆菌在水产养殖中的作用

芽孢杆菌在水产养殖中的主要作用是防治水产养殖中的疾病。水产养殖中常见的疾病包括细菌性疾病、真菌性疾病、病毒性疾病等。这些疾病会导致水产养殖的损失，影响养殖效益。芽孢杆菌能够抑制这些病原体的生长，提高水产养殖的健康水平。

三、芽孢杆菌的使用方法

1.选用适当的芽孢杆菌制剂

在水产养殖中使用芽孢杆菌，首先需要选用适当的芽孢杆菌制剂。目前市面上有很多不同种类的芽孢杆菌制剂，应根据不同的养殖环境和病害类型选择合适的制剂。一般来说，制剂中活菌数越高，效果越好。

2.按照规定的用药剂量进行投放 - 2 - 在使用芽孢杆菌制剂时，需要按照规定的用药剂量进行投放。一般来说，每亩水面需要投放的芽孢杆菌制剂量为1-2公斤。根据具体情况可以适当调整用药剂量。

3.选择合适的投放方式

芽孢杆菌制剂的投放方式有多种，包括水中投放、饲料添加、浸泡等。在选择投放方式时，需要根据具体情况选择合适的方式。一般来说，水中投放是最常见的方式，可以将芽孢杆菌制剂均匀地投放到水中，使其能够在整个水体中均匀分布。

4.注意投放时间和频率

在使用芽孢杆菌制剂时，还需要注意投放时间和频率。一般来说，最好在春季或秋季进行投放，这样可以最大程度地发挥芽孢杆菌的效果。投放频率一般为每隔一周或两周进行一次。

北京农业　２０１２　年　７　月下旬刊125水产养殖

近年来，随着生活水平的提高，逐渐引起了人们对健康和生态环境的高度重视，无毒、无残留及无抗药性的绿色食品或饲料添加剂成为了研究热点。益生菌是有利于宿主肠道微生物平衡的活菌食品或饲料添加剂，是一类高效且安全的新型的食品或饲料添加剂。作为绿色饲料添加剂的益生菌种类很多。美国FDA（1989）认为，安全的微生物菌株共42种，根据我国农业部公布的结果，允许饲用的芽孢杆菌菌种有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、地衣芽孢杆菌等12种。地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）是芽孢杆菌中较具应用潜力的菌种之一，其在水产养殖生产中的应用的报道也日益增多。１　地衣芽孢杆菌形态与生化特性地衣芽抱杆属于芽孢杆菌属（Bacilius），大小一般为0.6～0.8 mm×l.5～3.0 mm；革兰氏阳性菌；芽孢呈椭圆型或柱状，中生或偏中生，孢囊不膨大或只是轻微膨大。地衣芽抱杆菌能分泌淀粉酶、蛋白酶、植酸酶、甘露聚糖酶、几丁质酶、乙酸乳酸脱氢酶等多种酶，国外许多学者研究表明：地衣芽抱杆菌可作为有效的生防菌控制许多植物病原真菌和细菌的危害。Oita等（1996）报道地衣芽抱杆菌对灰葡萄孢等病菌的拮抗作用。黄绍宁（1999）等应用地衣芽抱杆菌201菌剂黄瓜苗期猝倒病。地衣芽抱杆菌还能分泌一些细菌素类的抑菌物质，抑制有害菌的生长繁殖。Luca Martirani等（2002）从一株地衣芽抱杆菌中分离提纯到一种新细菌素bacnlocin 490，它是核糖体合成的抗菌肤，分子量约为2Kda，用蛋白酶K、蛋白酶E处理易失活，耐热，100℃处理1h还能保持50％活性，在pH4.5-9.0能保持100％活性，对Bacillus anthracis7700、Bacillus smithii等菌株有抑菌效果，可用于牛奶或一些固态食品的防腐。地衣芽抱杆菌还能产生多糖等活性物质。２　地衣芽孢杆菌的作用机理及功能地衣芽孢杆菌与其他益生菌一样，都具有相同的作用机理与功能。地衣芽孢杆菌制剂，能够调整肠道微生态平衡；拮抗致病微生物，改善体内外生态环境，减少疾病的发生；增强动物体的免疫功能；产生多种消化酶，提高日增重和饲料利用率，降低生产成本。２．１　拮抗病原微生物，维持和调节微生态平衡　有研究表明，动物肠道内寄居的微生物主要为厌氧菌。通常情况下，肠道内有益菌和致病菌保持一定比例，当条件发生改变时，这种平衡失调，致病菌大量繁殖，从而导致动物体患病。当需氧型益生菌进入消化道后，生长繁殖消耗肠道内的大量氧气，通过“生物夺氧”使需氧型致病菌数量大幅度下降，因而起到防止动物患病的作用。田允波等（1999）指出，一般情况下，猪、鸡肠道内优势种群为厌氧菌，占99％以上，而需氧菌和兼性厌氧菌只占1％。以益生菌形式添加好氧菌特别是芽孢杆菌能特异性地增殖某些好氧菌，它们在繁殖过程中消耗肠道内的氧气，造成局部厌氧环境，促进有益厌氧菌的生长，同时抑制需氧和兼性厌氧病原菌的生长，从而把失调菌群恢复到正常状态。２．２　产生有益代谢产物　益生菌在动物消化道内可产生水解酶、发酵酶和呼吸酶等多种消化酶，有利于降解饲料中蛋白质、脂肪和复杂的碳水化合物，促进动物的消化吸收，从而提高饲料转化率。Sogarrd（1990）报道，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、淀粉酶活性，同时还能降解木聚糖、地衣聚糖、果胶、羧甲基纤维素、多聚半乳糖醛酸以及其它一些复杂的植物性碳水化合物。邝哲师等（2005）报道，在断奶仔猪基础日粮中添加0.10％芽孢杆菌制剂饲养2周后，添加芽孢杆菌制剂的试验组比对照组胃蛋白酶活性提高58.68％，胰淀粉酶活性提高24.05％，回肠内蛋白酶和淀粉酶活性分别提高61.00％和20.30％，差异均显著（P <0.05）。２．３　增强动物免疫能力　仔猪肠道感染时，肠道的正常微生物调动肠壁固有层的免疫细胞通过免疫反应形成机体的第二道防线。肠道细菌和其它抗原进入机体的主要通道是通过M细胞的传递，M细胞将抗原传递给抗原递呈细胞（位于肠上皮细胞内的巨噬细胞和B细胞），抗原递呈细胞将抗原递呈给邻近的T细胞，引起反应性T细胞的增殖。T细胞被激活的同时，B细地衣芽孢杆菌及其在水产养殖生产中的应用郭荷梅（广东省博罗县农业和林业局， 广东博罗 516100）摘　要　地衣芽孢杆菌是芽孢杆菌中较具应用潜力的菌种之一。近年来, 国内外对于地衣芽孢杆菌各方面应用的研究日益增多。主要对地衣芽孢杆菌的形态、生化特性、作用机理及其在水产养殖生产中的应用进行综述。关键词　地衣芽孢杆菌； 生化特性； 作用机理； 应用中图分类号 TS 201 文献标志码 BBacillus Licheniformis and its Application in Aquaculture ProductionGuo HemeiAbstract　Bacillus licheniformis is bacillus is a potential application of one of the strains. In recent years, domestic and foreign to bacillus licheniformis various aspects of the application research is increasing. Mainly to the bacillus licheniformis form, biochemical characteristics, action mechanism and the application in aquaculture production is summarized in this paper.Keywords　Bacillus licheniformis； biochemical characteristics； mechanism； application

枯草芽孢杆我站技术人员在单位的组织下，将芽孢杆菌应用到实际生产，并做了对比试验。现在将试验介绍如下。一、材料与方法1．试验鱼池2007年年初，我们与新乡郎公庙乡张湾渔场合作，利用他们的70亩鱼塘进行养殖试验。该鱼塘为河南的普通鱼塘，基本代表河南的池塘养殖条件。选择普通池塘，以便我们将来能够普及推广。池塘面积7～10亩，池深1．5～1．8米，池底无大量的淤泥，进排水方便。2．养殖品种由于我省养殖的草鱼和黄河鲤鱼较多，我们针对当地的养殖模式，在不改变他们养殖状况的前提下，进行了养殖指导：35．塞!亩池塘精养草鱼，35亩池塘草鱼和黄河鲤鱼』品种lf混养。l肠渣』3．苗种放养草鱼池每亩放养草鱼苗卜雾}斗一种1000～1200尾，规格100~250克／尾。r__丽汁草、鲤混养池鲤鱼放养1000尾、草鱼800l盗塑l尾。另外，每个池塘每亩放养花、白鲢鱼苗h；筹}卜350尾，规格100克／尾。h五计二、试验方法1．消毒、放苗2007年3月底以前，基本完成了苗种的放养工作。试验鱼池先用漂白粉干池清塘，每亩20千克漂白粉，注水50~60厘米，消毒6天后投放鱼苗。运输放苗严格按照四大家鱼的放养规程进行，放苗过程中没有大量死亡现象发生。2．饲料投喂该渔场有粮机产25型机量。在养殖过程中期发生草鱼三病等疾病，采用敌百虫加硫酸铜泼洒，第二天用鱼毒净泼洒消毒，内服氟哌酸、肠炎灵连喂五天的办法控制病情。全年养殖中大量死鱼很少，苗种成活率85％以上。4．池塘管理草鱼的疾病繁多，养殖管理非常重要，水质要求条件高，过肥不行，过瘦容易感染车轮虫。前期水深0．8～1米，进入7月水深加至1．5米以上。7～8月调水两次，每天加注新水。注意水质的变化，保持水体的透明度在15～25厘米，水质要求“活、肥、嫩、爽”。每个池塘设置3千瓦增氧机两台，夜晚浮头前开启增氧机。草鱼饲料配方而F_—T_—甄虿T1i吾i]表2草鲤色混养饲料配方

器一台。我们在往年饲料配方的基础上添加了芽孢杆菌(每克200亿)，添加量每吨3千克。具体饲料配方见表1、表2(粗略以1吨饲料计)。放养三天后，天然饵料日见减少，根据所放鱼类的大小开始在饲料台驯化投喂饲料。每日投喂4次。在饲养的中、后期，改为三次。每天的池塘管理，视天气的变化灵活掌握，投饵量在3％左右。3．防病治病草鱼的疾病问题是本试验的最关键问题。4月24日草鱼苗患三代虫、车轮虫病。第一天用敌百虫加碱全池泼洒，第二天用硫酸铜全池泼洒，鱼病治愈。平常疾病预防每半月一次，每次每亩1．5千克漂白粉全池泼洒，注意根据水质和漂白粉的质量来确定用单价数量金额品种(元／千克)(千克)(元)豆粕3．9140546菜粕1．8106190．8棉粕1．98415g．6次粉1．3200260麸皮1．263037．8鱼粉6．940276鲤鱼小料3．752593．75玉米粕17272肉粉2740108酵母粉1．234049．2猪油671280．4芝麻粕1．62032柠檬酸渣l_055254．6膨润土0．26205．2DDG1．24048肠渣3．3380266．4芽孢杆菌3合计10042279．75三、试验结果~2007年11月已有池子开始出塘。亩产达到1250~1750千克，养殖成果显著。达到了我们的试验目的。1．由于在饲料中有部分动物蛋白原料和饲料促长剂的添加，所以鱼的出售会带来问题。但从现在出鱼的情况来看，鱼的体质很好，售出的鱼在市场上存放两天，不死鱼、无异常，体表粘液丰富。而在2006年，卖鱼的时候经常死鱼，给渔民带来很大损失。2．2007年鱼药的使用量明显少于往年。2007年该渔场鱼药使用量为每亩100~150元，2006年每亩池塘用药200~300元。3．饵料系数有所降低。到现在出池的饵料系数都在-^_§验￡试用-￡应^Y6口中■-■-I■．，．，■料厨宫除水在菌维普资讯 I豆I墨匦栏旦坌塑旦垂堡培育浮游生物作鱼苗饵料的试验2007年，本人在饲养鱼苗的池塘开展了培育浮游生物技术的试验，通过用浮游生物(红虫)喂养鱼苗，取得了很好的效果。现报告如下：1．准备工作2007年6月上旬，地点在浙江桐乡，选取的鱼塘面积为5．3亩，水深1．7米，东西长，南北宽。经过于塘，池塘淤泥在20~25厘米。消毒时水位15～20厘米，用有效氯30％的漂白粉5千克／亩全池泼洒，保持7天时问，再施无机肥，可用碳酸氢铵30千克／亩。2．培育浮游生物培育浮游生物的池塘最好选取已经养殖一年以上的老池塘，底部积有一定厚度的淤泥。方法上，主要做好灌水关。灌水时，要用60目绢丝袋过滤，防止野杂鱼进入，逐步加深水位，保持池塘水位60~70厘米。由于老池塘淤泥中富含大量的有机肥料，消毒后通过施用无机肥碳酸氢铵进行分解，保持静止水体3～5天1．9左右。而在2006年，饵料系数在2．O左右。4．水质条件大大改善，鱼吃食情况改善。在全年我们不定期地进行水质化验分析，虽然亚硝酸盐含量还高，但水中氨氮、硫化氢含量比往年都大大降低。水环境的改善减少了疾病的发生，到目前该渔场水霉病的发生几乎没有。而往年这个时候却很多。四、讨论分析经过一年的养殖试验，虽然在经济效益上还没有看出明显的成效，这里有鱼价持续低迷的因素，也有原料价格上涨的因素。但是使用微生态制剂对水产养殖的帮助已是不争的事实，值得我们大力推广使用。枯草芽孢杆菌在水产养殖中，主要有以下几方面的作用：①抑制鱼体内有害微生物的生长。枯草芽孢杆菌在动物消化道内产生有益菌群，抑制致病菌的生存、繁殖、定居以及附着。②改善鱼类机体代谢，促进生长。③刺激机体免疫系统，提高机体免疫力。④参与生物降解，消除有机污染物，净化水体环境。河南郑州市水产技术推广站弓飞龙邮编450000河南富道饲料公司李燮阳时间，就能在水体中培育出大量的浮游生物。如果是新开的池塘，必须先施用动物粪便作有机肥底料，再施用无机肥，才能成功培育出浮游生物。所繁殖出的浮游生物品种主要是红虫、藻类等，鱼种下塘后取食时，作为天然的开口饵料。3．放养品种在2007年6月25日从湖州引进鱼种，规格2～3厘米，大小均匀，活泼无病，翘嘴红鲴放养9万尾，花鲋放养2万尾，黄颡鱼放养1．9万尾，共放养鱼种12．9：fi尾，平均每亩放养鱼~24339尾。4．投喂管理鱼种下塘后10多天不投人工配合饵料，少量投些黄豆粉和谷糠，池塘水中出现的大量红虫是鱼取食的主要天然饵料，因此鱼生长快，规格整齐。以后投喂人工配合饵料，规格为O*、l*、2*料，投喂时做到三定：定时、定量、定质，每天投喂分早、中、晚各一次。重点抓“定量”，首先做到看鱼取食，看天气变化，看水质条件，灵活调整投入数量。在管理过程中可投一些鱼药添加剂，增强鱼的免疫、抗病能力。5．水质调节鱼离不开水，更离不开好水，鱼种池塘应掌握水位宜浅不宜满，水质宜浓不宜淡，透明度在20~25厘米之问。根据鱼生长发育，逐步加入新水，形成肥、活、嫩、爽等优良的水质条件，在7～8月份，每周加入新水一次，每次加水10~15厘米，在8月中、下旬每周排出15厘米陈水，再加入20厘米新水。在9～10月份适当调节换水，排与灌相结合，每月调水3～4次，11月后保持达到冬天满水塘。6．鱼种池塘成本与效益详见表1。表1鱼种饲养的成本与效益成本效益品种数量单价金额产量单价金额(尾)(元／尾)(元)(t克)(元／于克)(元)翘嘴红舶900000．02180018002036000花鲋200000．02400334206670黄颡鱼19000O．0917106332415192饲料150包16624900塘租3000电费300药费150人工2100合计34360578627．防病消毒8、9、10月份，可依次用硫酸铜、二溴海因、强氯精进行外泼消毒防病。在养殖过程中规范养殖技术，不用违禁药物，坚持预防为主、不用药、少用药的方针，把养殖环境调节到适合鱼类生长的最佳状态，促进其健康生长，减少疾病的发生。浙江桐乡市大麻镇农业经济服务中心褚建明电话(0573)88499215邮编314514维普资讯