ELISA法检测HBsAg的几种影响因素分析
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文章编号:1005-8486(2004)02-0116-02
・经验交流・
E LISA 法检测HBsAg 的几种影响因素分析
席向红, 贾韶彤, 王 静, 高仲芳
(宁夏医学院附属医院中心实验室,银川 750004)
摘要:为了解E LIS A 法检测H BsAg 操作过程中几种因素对结果的影响,选择H BsAg 阳性血清标本做平行样测定,一份按照H BsAg 试剂说明书进行操作并观察不同时间的显色效果,一份放12℃室温(冬季)显色,或选择自来水洗板,观察酶标记抗体40μl 、50μl 、60μl 三种加入量的检测结果。
结果,E LIS A 检测过程中不同的显色时间、不同的显色温度、洗板方式及酶标记抗体的加入量四种因素都对H BsAg 检测结果产生影响,特别是容易造成假阳性或低值阳性标本的漏检。
因此认为提高试剂质量,严格操作规程是保证E LIS A 法检测H BsAg 成功的关键。
关键词:E LIS A 法;H BsAg ;影响因素;低值阳性标本中图分类号:R446111 文献标识码:B
优良的试剂、正确的操作是保证E LISA 法检
测结果准确可靠的必要条件之一。
而操作环节中反应的温度、时间、洗板等是影响显色的因素,从而对结果产生影响。
笔者通过对不同时间、不同温
度、洗板方式以及酶标记抗体的加入量的显色效果进行分析比较,以阐明E LISA 法检测乙肝HBsAg 过程中这几种因素对结果的影响。
1 材料和方法111 标本收集 取自本院门诊H BsAg 阳性血清标本42例。
试剂仪器:厦门新创E LIS A 检测H BsAg 试剂盒,用国产DG -3022A 型酶联免疫检测仪检测OD 值。
112 方法
11211 12份H BsAg 阳性血清标本按常规检测,并设阴、阳和空白对照各2孔。
加显色剂后,用空白
孔调零,为了解不同时间底物的显色情况,不加终
止剂,在酶标仪上每5min 测一次410nmOD 值。
11212 42份H BsAg 阳性血清标本做上下两排双
孔,按常规检测,对照设置同上。
加显色剂后,一份
放37℃水育15min ,一份放室温(冬季)12℃15min ,
加终止剂,在酶标仪上测定450nmOD 值。
11213 42份H BsAg 阳性血清标本操作设置同上,到温育时间后,一份用试剂盆内备用洗液洗板5次,一份用自来水洗板5次,加显色剂后37℃水育
15min ,终止并测定OD 值。
11214 42份H BsAg 阳性血清标本做三排孔检测,
每排分别加酶标记抗体40μl 、50μl 、60μl ,其余按说
明书操作并测定OD 值。
113 临界值(C 1O 1)的计算 临界值=阴性对照
孔OD 均值N ×211。
阴性对照OD 均值大于011时重新实验,小于0105时以0105计算。
结果判断:样本OD 值S/C 1O 1≥1者为阳性,<1者为阴性。
2 结果211 12份H BsAg 滴度在不同时间测定的平均OD 值(见表1)。
表1 不同时间H BsAg 滴度的平均OD 值时间(m in )
5
10
15
20
25
30
35
40
OD 值01400152016401670168016901710171
从上表可以看出,温育35min 显色效果最好。
212 42份H BsAg 阳性标本不同温度测定的OD 值(见表2)。
表2 两种不同温度H BsAg 滴度的OD 值温度OD 值37℃水育0199±013612℃室温(冬季)0186±0137
从上表看出,两种不同的显色温度对结果也产
生一定的影响。
OD 值差值=0113(临界值=
0111)。
213
42份H BsAg 阳性标本两种不同洗板方式测定的OD 值(见表3)。
表3 不同洗板方式测定的OD 值
洗板方式OD 值洗液
0154±0136自来水
0169±0135
从表3看出,两种不同的洗板方式对结果也有・
611・宁夏医学院学报
Journal of Ningxia Medical College 第26卷 2期 2004年4月
不同加入量测定的OD 值(见表4)。
表4 三种不同的酶标记抗体加入量测定的OD 值
酶加入量(μl )OD 值 400172±0142
500189±0139 60
0177±0144
从表4看出,酶标记抗体的加入量不同对结果也产生不同的影响。
OD 值差值=0112～0115(临界值=0111)。
3 讨论在E LIS A 实验中,有许多因素对实施结果产生不良影响,除了抗原和抗体本身的性质、活性及浓度等,还受到各种实验因素的影响,如电解质、pH
值、温度、洗板等[1～3]。
笔者发现临床定量测定时,
操作者对这些影响因素比较注意,结果准确误差小。
但定性测定时往往对反应的温度(冬季温差较大)、时间和洗板方式等因素容易忽视,其结果对高值阳性标本影响不大,但对一些低值水平阳性标本有较大影响,从而出现此类标本的漏报或错报。
我们通过不同时间的显色效果看出,随着时间
的延长,OD 值越大显色越深,因此要准确把握显色
时间,过早造成低灵敏度的样本漏检,过长浪费时间,最好以15～20min 为宜。
不同温度的显色效果测定的样品OD 值差值/临界值>1,说明显色温度过低,结合反应速度慢,显色不充分,容易造成低值阳性标本的漏检。
洗板虽不是E LIS A 的反应步骤,却决定着实验的成败,通过洗板来分离与固相抗原或抗体结合的和游离的物质,并且可减少检品中与反应无关的蛋
白质和其它杂质的非特异性吸附。
洗板如不彻底,将使本底增高。
E LIS A 测定中的P BS 洗涤液洗涤效果较好,并且有减少特异性吸附和增强抗原抗体
结合的作用[1]。
试验结果提示,用自来水洗板使本
底增高,出现假阳性,因此操作中不能随意用自来水来代替洗液以造成结果不准确。
加样是关键性步骤,加样量的不准造成漏检,笔者在工作中常常发现试剂液瓶的口径不一致,使滴入液体的体积不相同,甚至有的量相差很大,造
成抗原和抗体比例不合适,引起
“前带”或“后带现象”[1],造成低值阳性标本的漏检。
因此,试剂生产厂家应注意每一个生产环节,使滴瓶能够准确定量,避免由于加量不准而造成的误差。
临床检验操作者为了保证实验结果的稳定性,应严格按说明书来进行操作,在规定的时间内
阅读结果,不应盲目讲求
“快速”随意改动操作步骤,出现不应有的错误结果。
参考文献:
[1] 吴键民1临床化学自动化免疫分析[M]1北京:科学
出版社,2000133-69
[2] 许 斌,朱虎定1E LIS A 检测H BsAg 影响因素的探讨
[J ]1临床检验杂志,2000,18(4):232-233
[3] 梁宝铎,曾 真,赵祥胜1乙型肝炎血清学标志间非
特异性交叉反应的研究[J ]1中华医学检验杂志,
1995,18(4):232-234
(责任编辑:路锦绣)
文章编号:1005-8486(2004)02-0117-03
・经验交流・
复方氨基酸注射液细菌内毒素检查法的实验研究
侯 辉, 李伟平, 王锶戒
(宁夏沙赛制药有限公司,银川 750002)
摘要:为验证用细菌内毒素检查法能否代替复方氨基酸注射液(15AA )质量标准中传统的热源检查法,按照《中国药典》
2000版二部附录中的细菌内毒素检查法[XIE]和热源检查法[XI D],对连续生产的三批复方氨基酸注射液进行检测。
结
果,三批复方氨基酸注射液的内毒素均符合标准规定,两种方法的检查结果相符。
用细菌内毒素检查法可以替代复方氨基酸注射液质量标准中传统的热源检查法。
关键词:细菌内毒素检查法;热源检查法;复方氨基酸注射液中图分类号:R44219 文献标识码:B
卫生部标准(二部第六册)规定,用热源检查法检查复方氨基酸注射液中的致热物质。
今参照《中
・
711・第26卷 2期 2004年4月宁夏医学院学报
Journal of Ningxia Medical College。
