生理指标测定方法

小黑豆相关生理指标测定

1. 表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积

鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。

株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。

主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。

叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。

2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定

样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。

总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。

可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）)

蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。

丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450.

植物生理生化指标测定

植物生理生化指标测定是研究植物生长发育和适应环境的重要手段之一、通过测定植物的生理生化指标，可以了解植物的代谢活动、光合作用强度、水分状况、营养状况等，从而为植物生长调控、抗逆性研究提供依据。下面将从光合作用测定、水分状况测定和营养状况测定三个方面对植物生理生化指标测定进行详细介绍。

光合作用是植物生长发育的重要过程之一，也是植物蓄积养分和能量的主要途径。常用的光合作用测定指标有净光合速率、光饱和点、光补偿点和光抑制。净光合速率是指单位时间内单位叶面积净光合产物的量，可以通过测定二氧化碳吸收量和氧气释放量来计算。光饱和点是指植物的净光合速率达到最大值时的光强度，可以通过测定不同光强下的净光合速率来得出。光补偿点是指净光合速率和呼吸速率相等的光强度，可以通过测定不同光强下的净光合速率和呼吸速率来确定。光抑制是指过高或过低的光强度对植物光合作用的影响，可以通过测定光强对净光合速率的影响来评价。

水分状况是植物生理生化指标测定的重要方面之一，也是植物生长发育和适应环境的关键因素之一、常用的水分状况测定指标有相对含水量、蒸腾速率和水分利用效率。相对含水量是指植物组织中的相对含水量与干重的比值，可以通过称量植物组织的湿重和干重来计算。蒸腾速率是指单位时间内单位叶面积水分蒸腾的量，可以通过测定植物的蒸腾量和叶面积来计算。水分利用效率是指植物单位干物质产量所需要的水分量，可以通过测定植物的干物质产量和水分消耗量来计算。

营养状况是植物生理生化指标测定的另一个重要方面，也是植物生长发育和代谢活动的基础。常用的营养状况测定指标有叶绿素含量、叶绿素荧光参数和土壤养分含量。叶绿素含量是评价植物叶绿素合成和叶绿素降解的指标之一，可以通过植物叶片中叶绿素的提取和测定来得出。叶绿素荧光参数是评价光能利用效率和光能转化效率的重要指标之一，可以通过叶绿素荧光仪来测定。土壤养分含量是评价土壤中不同营养元素含量的指标之一，可以通过土壤样品的提取和测定来得出。

小麦叶片生理指标测定

一、种子处理：

1、0.1%氯化汞浸泡小麦种子30分钟，进行消毒，小麦种子放在较大

的培养皿中

2、将氯化汞倒入废液瓶，注意必须戴两层手套，因为氯化汞剧毒，

且用完的手套不能碰实验室里其它的任何东西，以防污染，最好把用

完的手套放到DNA显色室中的废手套收集桶里；

3、然后用无菌蒸馏水冲洗3遍以上

4、最后用倒入适量无菌水（稍微让水浸没种子表面）进行种子萌发，

每天换次新水。

二、小麦培养

1、在种子发芽以后，在芽长1cm左右的时候，将种子放入用网缝好

的塑料泡沫上，然后放入装有自来水的培养盒中

2、大概三天左右的时间，将水倒掉，换上1/2 hoagland 营养液（配

方见下面的附件），每三天换一次营养液。

三、小麦处理及指标测定

1、小麦培养两周后，在两叶一心期，用适当PEG6000浓度的

1/2hoagland营养液换掉原营养液，各设一个对照（即没加PEG6000

的1/2hoagland营养液）

2、每隔24h取一次样，在72h后复水（即将PEG6000溶液倒掉，换

成新配的1/2hoagland 营养液）

四、生理指标测定

1、相对含水量测定 ⒈ 鲜重测定 迅速剪取植物材料，装入已知重量的容器（或塑料袋）中，带入室内，用分析天平称取鲜重

（FW）。

⒉ 饱和鲜重测定 将称过鲜重的植物材料浸入水中，数小时后取出，用吸水纸吸干表面水分，立即称重；

再次将材料放入水中浸泡一段时间后，再次取出，吸干表面水分，称鲜重，直到两次称重的结果基本相等，

最后的结果即为饱和鲜重（SFW）。若事先已知达到水分饱和所用的时间，则可一次取得饱和鲜重的测量定

值。

⒊ 干重测定 提前把烘箱打开，温度升至120℃。把称过鲜重的植物材料装入纸袋中，放入烘箱内，120℃

杀青10min，然后把烘箱的温度降到70℃左右，烘至恒重。取出纸袋和材料，放入干燥器中冷却至室温，称

干重（DW）。

⒋ 取得以上数据后，按公式相对含水量。相对含水量=FW-DW/SFW-DW

生理指标的测定

测定不同时期野生大豆和栽培大豆的游离脯氨酸、丙二醛、过氧化物酶、叶绿素的含量。测定方法如下：

采样：分别在盐处理后，第2天、第7天和第12天，采叶片测量生理指标。

采摘的叶片标准为：成龄、无病虫害、无缺失、鲜绿的叶片。

丙二醛含量的测定（采用双波长硫代巴比妥酸法）

材料提取：称取0.25g左右大豆叶片，加入0.5% TCA 3mL，研磨后所得匀浆3000rpm离心10min。取上清液2mL，加0.5%TBA（称取TBA0.5g溶于0.5% TCA溶液，并用其定容至100mL）2mL，混合后在100℃水浴上煮沸30min，冷却后再离心一次。

样品测定：分别测定上清液在450nm、532nm、600nm处的吸光值，并按公式算出MDA的浓度，再算出单位鲜重组织中MDA含量（μmol·g-1）。

结果计算：

M=C×V/W×1000M为MDA含量（μmol·g-1）；C为MDA浓度（μmol·L-1）；V为提取液体积（mL）；W为样品重量（g）。

游离脯氨酸含量的测定（采用酸性茚三酮法）

样品提取：称取鲜样0.5g左右，放入研钵中，加入80%的乙醇3mL研成匀浆，移入具塞试管中，并用80%的乙醇冲洗研钵，匀浆与洗液合并总量为10mL，加盖后沸水浴煮沸10min，再加活性炭粉末0.25g，振荡过滤（用80%乙醇冲洗滤纸与残渣3次），滤液于80～85℃水浴上蒸去乙醇，残渣用蒸馏水洗济并定容至100mL供测定之用。

样品测定：取具塞刻度试管2只，各加入上述过滤样液2mL、冰醋酸2mL、茚三酮试剂2mL，摇匀后加盖，于沸水浴中煮沸10～15min，冷却后于515nm下比色，记录消光值。

结果计算：A=C×V/WA为样品脯氨酸含量（μg·g-1）；C为从标准曲线上查得脯氨酸浓度（μg·ml-1）；V为样品稀释体积（ml）；W为样品重量（g）。

过氧化物酶活性的测定（采用愈创木酚比色法）

酶液制备：称取大豆叶片0.3g，加入适量的pH7.0的磷酸缓冲液（准确称取0.156g