高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量-药学论文-基础医学论文-医学论文

高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量本文采用高效液相色谱法（HPLC-VWD）对阿司匹林肠溶片中成分阿司匹林进行测定，对方法的系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系和线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）进行验证，证实本方法确实可靠。

本方法可测定浓度在0.999862mg/mL-0.01999724 mg/mL间的阿司匹林，检测下限可达0.1ug/mL。

标签：阿司匹林;HPLC-VWD;方法验证阿司匹林肠溶片的质量标准中，监测阿司匹林肠溶片中的阿司匹林含量是一项重要指标[1]。

本文采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中的阿司匹林，分别对系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系和线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）进行验证[2]。

一、仪器与材料1.1 样品阿司匹林肠溶片（25mg）市售样品。

1.2 仪器及试药高效液相色谱仪：Thermo Fisher Ultimate 3000（VWD检测器）。

超声仪：上海科导SK7210LHC超声仪，35KHz。

色谱柱：Welch Xtimate C18（5um，150×4.6mm）。

0.45um有机性样品滤膜。

天平：赛多利斯电子天平（BSA224S-CW）（100g，0.01mg;220g，0.1g）;梅特勒-托利多电子天平（MX5）（3g，0.001mg）。

试剂：甲醇，色谱级，德国默克，I866432 601。

乙腈：色谱纯，德国默克，JA050820。

四氢呋喃，色谱纯，德国默克，I826801615。

冰醋酸，分析纯，国药集团化学试剂有限公司，20140326。

水，为GB/T6682中规定的一级水。

阿司匹林，中国食品药品检定研究院，批号：100113-201405，纯度：99.8%。

水杨酸，中国食品药品检定研究院，批号：100106-201104，纯度：99.9%。

高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量
一、目的
1.熟悉HPLC法测定的原理及操作。

2.掌握外标法测定阿司匹林片含量。

二、仪器与试药
1.仪器
美国PE型高效液相色谱仪Mettler AL204电子天平
容量瓶规格：50mL、100mL 刻度移液管规格：5mL
漏斗定量滤纸（直径10cm）
超声仪
2.试药
阿司匹林片规格：0.3g 阿司匹林对照品冰醋酸
氢氧化钾色谱甲醇超纯水
三、实验内容
1.色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%冰醋酸（50：50）为流动相；流速为每分钟约1.0mL；检测波长280nm。

理论板数按阿莫西林峰计算应不低于1500。

2.对照溶液配制：取阿莫西林对照品适量，精密称定后，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含50μg的溶液
3.样品测定：精密称取细粉适量（约相当于阿司匹林细粉0.05g），置50mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液3mL,置50 mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照溶液同法测定。

按外标法以峰面积计算出样品中阿司匹林（C9H8O4）的含量。

本品含阿莫西林（C9H8O4）应为标示量的93.0%～107.0%。

四、注意事项：
1.高效液相色谱仪严格按照仪器操作规程操作。

2.小心进样操作，以免进样失败或损坏进样器。

五、思考题
高效液相色谱仪操作的注意事项有哪些？
六、参考文献
《中国药典》2010年版二部，285，化学工业出版社。

实验四阿司匹林药物的高效液相色谱法测定[目的要求]1、了解高效液相色谱法分离有机化合物的基本原理及操作条件；2、知道高效液相色谱仪的基本结构及作用；3、掌握色谱定量、定性分析的方法。

[基本原理]高效液相色谱法是20世纪70年代急剧发展起来的一项高效、快速的分离分析技术。

液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。

在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论基础，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。

这种柱色谱技术称做高效液相色谱法。

它可用来作液固吸附，液液分配，离子交换和空间排阻色谱（即凝胶渗透色谱）分析，应用非常广泛。

据估计，世界上几百万种化合物中除20%宜用气相色谱(Gc) 分离分析外，其余80%的化合物，包括大(高)分子化合物、离子型化合物、热不稳定化合物以及有生物活性的化合物都可以用不同模式的HPLC ( ~ HiE相HPLC、反相HPLC、离子交换色谱和离子色谱、体积排除色谱、亲合色谱等等) 进行分离分析。

而且高效液相色谱法还具有以下几个突出的特点:（1）分离效能高由于新型高效微粒固体相填料的使用，液相色谱填充柱的柱效可达5000~30000块/m理论塔板数，远远高于气相色谱填充柱的1000块/m 理论塔板数的柱效；（2）选择性高由于液相色谱具有高柱效，并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性，因此高效液相色谱不仅可以分析不同类型的有机化合物及其同分异构体，还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体；（3）检测灵敏度高高效液相色谱法使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度，紫外检测器灵敏度可达10-9g，荧光检测器灵敏度可达10-12g；（4）分析速度快由于高压泵的使用，相对于经典液相（柱）色谱法其分析时间大大缩短。

高效液相色谱仪器系统的主要部件:储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置（色谱工作站）：(1) 输液系统输液系统要为HPLC仪器提供流量恒定、准确、无脉冲的流动相，流量的精度和长期的重复性要好，同时还要提供精度好、准确度高、重现性好的多元溶剂梯度。

检测认证高效液相色谱法在阿司匹林检验中的应用及对不确定度标准的估算■ 马文学（甘肃省临夏州药品检验检测中心）摘 要：目的：研究利用高效液相色谱法检验阿司匹林的具体应用，并且分析不确定度的标准。

方法：在阿司匹林的检验中应用高效液相色谱法，选择的仪器为岛津安捷伦液相色谱仪。

结果：阿司匹林肠溶片在1.964min为峰值。

此外可知，重复性测定结果RSD是0.68%，阿司匹林浓度处于0.01mg/mL到0.05mg/mL范围之间具有良好的线性关系，平均回收率是101.80%。

结论：由此可知，高效液相色谱法测定阿司匹林含量方便简单、操作便捷，省时省力，结果准确可靠，专属性高，重复性好，稳定性高，回收率高，适用范围广，所以可以在临床上进行推广。

关键词： 高效液相色谱法，阿司匹林，检验，应用，不确定度标准，估算DOI编码：10.3969/j.issn.1002-5944.2021.04.040The Application of HPLC in Aspirin Test and Uncertainty StandardAssessmentMA Wen-xue(Linxia Drug Test and Inspection Center, Gansu）Abstract: Objective: To study the application of high-performance liquid chromatography (HPLC) in the test of aspirin and analyze uncertainty standards. Method: Shimadzu and Agilent liquid chromatograph was adopted for the test of aspirin. Result: Aspirin enteric-coated tablets reached the peak after 1.964 min. RSD was 0.68%. Good linear relation showed at the aspirin concentration of 0.01-0.05 mg/mL. Average recovery was 101.80%. Conclusion: HPLC is simple to operate in the test of aspirin, with reliable results, high repeatability, specificity, stability and recovery. It is worthy of clinical promotion.Keywords: high-performance liquid chromatography, aspirin, test, application, uncertainty standard, assessment阿司匹林在临床上的应用率很高，而且应用范围很广，在临床上占据非常重要的地位[1]。

【思考题】1.供试品溶液制备中，为什么要选用1%冰醋酸甲醇溶液作为溶剂？为什么供试品溶液需要临用新制？为什么供试品溶液需要过滤，取续滤液使用？除滤膜过滤外，还有什么方法可以达到同样的目的？①防止阿司匹林水解。

②由于供试品溶液室温下不稳定, 因此需要临用新制。

③过滤是为了除去其中的不溶性辅料等杂质。

续滤液指过滤时去掉前几滴后的滤液，可以保证待测药物的浓度与均一度。

前面的部分溶液需要对滤膜润洗，因而影响了药物的浓度，最终影响峰面积或峰高。

④………………2.为什么流动相需要过滤和超声波脱气？过滤是为了除去流动相中的杂质，保护系统和柱子。

主要是过滤掉不溶性微粒和气体，（尤其是有机相和水相混合的时候，会产生大量的气泡），防止堵住仪器和色谱柱。

脱气是为了除去溶解在流动相中的气泡。

防止气泡影响色谱柱的分离效率、检测器的灵敏度、基线的稳定性。

此外，溶解在流动相中的氧可以与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）发生反应。

溶解气体也会引起溶剂pH值的变化，从而导致分离或分析结果的误差。

3.系统适用性试验的目的是什么？系统适应性试验参数和合格标准是建立基础是：仪器，电子元件，分析操作和待测样品是个不可分割的整体。

系统适应性实验确保系统在样品分析的时候能很好地运行。

在分析方法中应当要包括适当的系统适应性合格标准。

按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。

色谱分析做系统适用性试验主要是为了确定分析使用的色谱系统是有效的、适用的。

系统适用性通常用四个参数来确定系统的适用性：分离度，柱效，重复性和拖尾因子。

其中分离度和柱效是两个最重要，也更具有实用意义的参数。

分离度是判断两物质在一个方法中分离的程度，虽然与柱效相关，但在衡量系统适用性时，强调的应该是分离度，只有当色谱图中仅有一个色谱峰或测定微量成分时，规定柱效才有其特殊重要性。

高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量-药学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——阿司匹林肠溶片为非甾体类抗炎药，临床可用于抗血栓，也可用于治疗不稳定性心绞痛，是《国家基本药物目录》列入的品种。

本文采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量，该方法简单，快速，重现性好，回收率高，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药1.1 仪器：大连依利特P230 型高效液相色谱仪；UV230+紫外可见检测器；手动进样器；超声仪（型号KQ5200E，功率200W，频率40KHz）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司，0.0001g）。

1.2 试药：阿司匹林对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100113）；阿司匹林肠溶片（亚宝药业太原制药有限公司，批号：131210；石家庄康力药业有限公司，批号：121037；神威药业集团有限公司，批号：1306072），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件：色谱柱为Hypersil ODS2 柱（250mm4.6mm，5m）；流动相：甲醇∶0.5%乙酸溶液（37∶63）；流速：0.8mlmin-1；柱温：25∶；检测波长：267nm；理论板数按阿司匹林计不得少于3000。

2.2 溶液的制备：对照品溶液的制备：精密称取一定量阿司匹林对照品，置100ml 量瓶中，加1%醋酸甲醇溶解并定容制成100gml-1的对照品溶液。

供试品溶液的制备：取供试品（石家庄康力药业有限公司，批号：121037）约0.03g，精密称定，置100ml 量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液溶解并定容，过滤，取续滤液，作为供试品溶液。

阴性样品溶液的制备：按处方比例取辅料制成空白制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。

2.3 专属性实验：在2.1色谱条件下，分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各10L，注入液相色谱仪，记录色谱图。

科技论坛高效液相色谱法测定复方阿司匹林片中阿司匹林的溶出度杨云雷1宋金环2（1、哈药集团制药总厂，黑龙江哈尔滨1500002、哈尔滨誉衡药业有限公司，黑龙江哈尔滨150000）复方阿司匹林片为一复方解热镇痛药,能恢复体温调节中枢感受神经元的正常反应性而起退热镇痛作用。

阿司匹林是一种历史悠久的解热镇痛药。

阿司匹林用于治感冒、发热、关节痛、风湿病,用于预防和治疗缺血性心脏病、心肺梗塞、脑血栓形成。

溶出度是指药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。

高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \HPLC)以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。

本文采用高效液相法,又根据本实验采用高效液相色谱法对复方阿司匹林片中的阿司匹林的溶出度进行了含量测定。

1仪器与试药1.1仪器:RC806溶出试验仪(北京中西远大科技有限公司);U-PLC 超高效液相色谱系统(沃特世科技(上海)有限公司);瑞士梅特勒-托利多M S 精密天平(梅特勒-托利多中国公司);GW-UN 超纯水器(北京普析通用仪器有限责任公司);DOA-P504-BN 无油隔膜真空泵(上海洽姆仪器科技有限公司);SCQ-1020超声波清洗器(上海声彦超声仪器有限公司);TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。

1.2色谱柱:奥泰公司C18色谱柱(284mm ×4.6mm,5μm)。

1.3对照品:阿司匹林购自中国药品生物制品检定所。

1.4试剂:甲醇为色谱纯;水为纯化水,其它试剂均为分析纯。

1.5试药:复方阿司匹林片。

1.6人工胃液配置:取氯化钠2.0g,加盐酸7mL,加水至1000mL 。

2测定方法确定2.1色谱条件依据查阅文献及考查的结果,确定色谱条件如下。

7,9mL分别置10m L量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀配成系列对照品溶液,分别取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图及峰面积。

以浓度C(mg·mL-1)对峰面积A进行线性回归得方程(n=5)C=225436A-3930,r=0.9995。

结果表明唑来膦酸在流动相中浓度在0.2～1.8mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

我们拟定的进样浓度为1.0mg/mL。

4.2　进样精密度试验取唑来膦酸对照品适量,加流动相制成每1m L中约含1.0mg的溶液,在上述色谱条件下,连续重复进样五次,记录色谱图及峰面积,结果峰面积的RSD为0.3%,表明唑来膦酸进样精密度良好。

4.3　回收率试验采用加样回收法进行回收率的测定。

精密称取唑来膦酸20011021批样品(含量99.04%)适量,加入对照品同置50m L量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度,摇匀,分别取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图及峰面积,计算回收率。

结果唑来膦酸的平均回收率为99.39%,RSD=0.6%(n=5) 4.4　重现性试验精密称取唑来膦酸20010821批样品适量(40,50,60mg 各三份)置50mL量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下依法进样测定,结果RSD为0.5%。

5　样品的测定结果采用上述色谱条件,对6批唑来膦酸的含量进行了测定,采用杂质自身对照法计算1H-咪唑-1-乙酸的含量,供试品中杂质和均小于1%,结果表明,唑来膦酸原料样品具有较高的化学纯度。

结果见表1。

表1　样品测定结果(%,n=6)Tab1　Determination results of samples批　号含　量有关物质2001102199.040.362001110399.650.422001110999.400.672002012299.460.392002020499.060.542002021099.800.626　讨论6.1　含量分析方法的选择根据唑来膦酸分子结构和化学性质,我们进行了以下方法学研究用于测定本品的含量。

高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量高效液相色谱法测定阿司匹林片的含量一、目的1.熟悉HPLC法测定的原理及操作。

2.掌握外标法测定阿司匹林片含量。

二、仪器与试药1.仪器美国PE型高效液相色谱仪Mettler AL204电子天平容量瓶规格：50mL、100mL 刻度移液管规格：5mL漏斗定量滤纸（直径10cm）超声仪2.试药阿司匹林片规格：0.3g 阿司匹林对照品冰醋酸氢氧化钾色谱甲醇超纯水三、实验内容1.色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%冰醋酸（50：50）为流动相；流速为每分钟约1.0mL；检测波长280nm。

理论板数按阿莫西林峰计算应不低于1500。

2.对照溶液配制：取阿莫西林对照品适量，精密称定后，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含50μg的溶液3.样品测定：精密称取细粉适量（约相当于阿司匹林细粉0.05g），置50mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液3mL,置50 mL量瓶中，加1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照溶液同法测定。

按外标法以峰面积计算出样品中阿司匹林（C9H8O4）的含量。

本品含阿莫西林（C9H8O4）应为标示量的93.0%～107.0%。

四、注意事项：1.高效液相色谱仪严格按照仪器操作规程操作。

2.小心进样操作，以免进样失败或损坏进样器。

五、思考题高效液相色谱仪操作的注意事项有哪些？六、参考文献《中国药典》2010年版二部，285，化学工业出版社。

高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林的含量型进行计算的如近红外漫反射技术,其原理是根据标样集中样品的近红外光谱运用化学计量学方法建立光谱特征值(如吸光度)与待测成分之间的数学关系(简称数学模型)1．阿司匹林及阿司匹林制剂的含量测定阿司匹林及阿司匹林制剂的含量测定有多种方法,其中包括药典所载的酸、碱中和滴定法及紫外分光光度法,高效液相法等。

1．1阿司匹林酸碱滴定法：直接滴定：方法：取本品0。

4g,精密称定,加中性乙醇20ml,溶解,加酚酞指示液3d,用氢氧化钠滴定液（0。

1mol/l）滴定。

每1ml 滴定液相当于18。

02mg的C9H8O4水解后剩余滴定：方法：取本品1。

5g,精密称定加氢氧化钠滴定液（0。

5mol/l）50。

0ml,混合,缓缓煮沸10min,放冷,加酚酞指示液,用硫酸滴定液（0。

25mol/l）滴定剩余的氢氧化钠。

两步滴定法：取本品10片,精密称定,研细,精密称取片粉适量（约相当于阿司匹林）,加中性乙醇20ml,振摇使阿司匹林溶解,加酚酞指示液3d,滴加氢氧化钠滴定液（0。

1mol/l）至溶液显粉红色。

加定量过量的氢氧化钠滴定液（0。

1mol/l）40ml,置水浴上加热15min并时时振摇,迅速放冷至室温,用硫酸滴定液（0。

05mol/l）滴定剩余的碱。

根据消耗的滴定液体积及滴定度计算含量1．2阿司匹林制剂的电极法测定仪器与试剂：电极电位和溶液酸度测试均使用pHs—loC型数字式酸度离子计；参比电极为232型饱和甘汞电极；试剂均为分析纯,实验用水为去离子水经高锰酸钾处理后蒸馏而得。

电极制备：将载体物质三苄基锡辛酸酯20mgl聚氯乙烯（PVC）0．33g和增塑剂邻硝基苯基辛醚o．65g溶解于四氢呋喃（THF）3g 中,搅拌澄清后将其倾倒于40mm×40mm的水平玻璃板上。

待THF挥发完后(约需l2h)即得到具有弹性的PVC膜。

用打孔器切下直径10mm的圆片并用含5％PVC的THF溶液粘于PVC电极杆端,放置数小时,晾干后电极杆内充以0。

高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片含量实验教学的探讨陈云艳;王绍臻;胡琦艳【摘要】阿司匹林肠溶片含量的测定是药物分析课程中一个常见的实验内容,HPLC法测定阿司匹林肠溶片含量的实验难以开展,而两步滴定法实验开展要求较低,是各大高校药物分析课程的常用教学方案.为提高本校药物分析实验课程中高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片含量的教学效果的探讨,本文首先分析了高校中现有阿司匹林肠溶片含量测定的实验教学的现状,探究了HPLC法的教学内容及其优势,最后阐述了HPLC法测定阿司匹林肠溶片含量的实验教学效果.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2019(047)007【总页数】2页(P153-154)【关键词】HPLC;药物分析课程;实验教学【作者】陈云艳;王绍臻;胡琦艳【作者单位】皖南医学院药学院, 安徽芜湖 241002;皖南医学院药学院, 安徽芜湖241002;皖南医学院药学院, 安徽芜湖 241002【正文语种】中文【中图分类】TQ914.1阿司匹林肠溶片为常用的解热镇痛药，广泛应用于治疗伤风、感冒、头痛、神经痛、关节痛、风湿及类风湿痛等，高效液相色谱法作为其含量测定方法被收载于2015版《中国药典》[1]。

阿司匹林含量测定的常用方法包括高效液相色谱法(HPLC)、紫外分光光度法(UV-vis)、两步酸碱滴定法等[2-4]。

其中，高效液相色谱法法测定结果更加精确，适用范围更广，可作为大面积开展药物分析实验教学的最佳方案。

本文首先阐述了药物分析课程阿司匹林肠溶片含量测定的实验教学的现状及教学内容，并阐述了采用高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片含量的实验教学效果。

1 药物分析课程阿司匹林肠溶片含量测定的实验教学的现状药物分析课程中，阿司匹林肠溶片含量的测定作为一个常见的实验内容进行开展，由于教学条件的限制，大部分高校高效液相色谱法法测定阿司匹林肠溶片含量难以开展，而经典的两步滴定法操作简单，易于大面积开展，常作为各大药学相关高校中药物分析课程中学生实验教学的常用方案。

高效液相法测定阿司匹林肠溶片中阿司匹林含量
郑凯;潘延宁
【期刊名称】《微生物学杂志》
【年(卷),期】2009(29)1
【摘要】建立阿司匹林片HPLC含量测定方法.采用Kromasil (C18 150 mm×4.6 mm,5 μ)色谱柱,以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水(23:5:5:61)为流动相;检测波长为 280 nm;流速 1.0 mL/min;进样量20 μL,柱温:室温.阿司匹林在 12.5～250 μg/mL范围内有良好的线性关系.平均回收率100.22%,RSD为1.2%.本法操作简便、快速、结果准确、专属性强.
【总页数】3页(P110-112)
【作者】郑凯;潘延宁
【作者单位】朝阳市药品检验所,辽宁,朝阳,122000;朝阳市药品检验所,辽宁,朝阳,122000
【正文语种】中文
【中图分类】R912
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