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下呼吸道感染细菌学检验操作规范—、相关临床知识临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。
下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。
病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。
下呼吸道感染患者可有发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，可伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音、白细胞总数及嗜中性粒细胞比例明显增高，x线检查提示肺部有炎症性浸润或胸腔积液等体症，严重时可导致感染性休克和呼吸衰竭，因此临床诊断一般不难；细菌学检验能明确感染病原，并提供有关抗菌药物对分离菌的抗菌活性等信息，有助于疾病治疗、流行病学调查研究和医院感染的监测。
临床呼吸道标本中常见分离细菌见表1表1呼吸道标本中的常见分离细菌二、标本米集本室必须注意生物安全防护。
（一）采集方法1 •自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。
尽可能在用抗菌药物之前采集标本。
用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应》lml。
标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存w 2h o2•支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。
3 •小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。
幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
（二）标本验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
下呼吸道标本验收与拒收见表2o三、实验室检查（一）肉眼观察 观察痰液的颜色、粘度、有无血丝和是否呈脓性，如见有颗粒存在，则应注意可能 与放线菌属及奴卡菌属感染有关。
Standard for Bacterial Culture Procedures 标本European Manual Microbiology.1罗斯菌属（Rothia spp.) `脑膜炎奈瑟菌草绿色链球菌草绿色链球菌、奈瑟菌属嗜血杆菌属、莫拉菌属常见引起细菌性社区感染典型肺炎病原菌：•肺炎链球菌•流感嗜血杆菌上呼吸道正常菌群•金黄色葡萄球•卡他莫拉菌细胞内病原引起非典型肺炎：•肺炎支原体•肺炎/鹦鹉热衣原体•嗜肺军团菌•柯克斯体（Q 热）痰的来源？是否被上呼吸道污染？hospitalization.Clin.Infec.Dis.31:869-874.9Gleckman,R.,J.DeVita,D.Hibert,C.Pelletier,and R.Martin.1988.Sputum gram stain assessment in community-acquired bacteremic pneumonia.J.Clin.Microbiol.26:846-849.内容特异性82%～91%，诊断价值远高于痰标本；附录B:“适合诊断的病原及检验项目”5.下呼吸道感染细菌培养的局限性培养结果假阴性、假阳性的原因球菌、流感嗜血杆菌（具侵袭性）定植数量会增加；`基础条件变化：使用免疫抑制剂、慢性肺病、广谱抗菌药物治疗或住院患者等人群中，革兰阴性杆菌的优势明显增加。
1）肺部感染的最常见机制：肺泡内吸入了口咽部定植菌；¾吸入性肺炎患者咽部菌群种类：多侵袭性细菌或耐药细菌，如肺炎链球菌或革兰阴性杆菌。
¾清除机制：健康宿主吸入口腔定植菌后常无临床症状，细菌通常被粘液柱状纤维清除。
¾吸入能否引起肺部感染取决于：吸入菌的致病性及数量；患者免疫系统；呼吸道功能等诸方面的因素。
2）吸入气溶胶肺部感染占第二位：主因：使用了不清洁的呼吸机。
3）血液播散性肺炎占第三位：感染通常造成双肺下叶肺炎。
2014/5/933.2 标本运送注1：若送检标本超过2h ，将导致有临床意义的致病菌数量减少，非苛养的口咽部定植 菌过度生长。
为防止口咽部正常菌群的过度生长，可将标本放置2℃～8℃环境，但 培养分离到肺炎链球菌等苛养菌的机会和数量会减少。
注2：若标本延迟送检超过2h 后未冷藏（超过2h ～24h ，2℃～8℃），应在报告中说明因 延误送检标本，可能对培养结果造成的影响。
3.3 筛选并拒收下呼吸道细菌培养标本❝拒收24h 内重复采集的痰细菌培养标本 ❝唾液❝鼻冲洗液和分泌物、鼻孔拭子 ❝咽部标本❝未经保护套管收集的支气管刷培养标本 ❝痰的厌氧菌培养标本注：除支气管穿刺吸出物、PSB 、活检标本、胸水或其他未经污染以外的标本做厌氧菌培养均不合格。
❝诱导痰注：诱导痰标本只适用于检测卡氏肺孢子菌和结核分枝杆菌，对其他病原菌检出效果差。
4.1 痰及气管吸出物标本处理 4.1.1标本处理要求❝接种标本及涂片操作必须在Ⅱ级生物安全柜中进行；❝应尽快处理所有标本，特别是来自急诊、新入院患者和有创方法采集的标本（如：BAL 和肺活检标本），以保证致病菌的活性，避免造成重复采集标本；❝使用全自动接种前处理系统的实验室按厂家说明书处理标本，洗痰、液化后自动接种和涂片革兰染色。
4.1.2 接种标本 4.1.3 培养4.1.4 标本涂片及革兰染色注1：革兰染色脱色时间因选用不同的脱色剂而异。
1）95%乙醇脱色时间为30s ；2）丙酮- 乙醇（体积比为3:7,棕色瓶室温保存，有效期1年）脱色时间1s ～5s ，脱色效果一致性 好；3）丙酮（试剂纯）脱色时间最短，当标本中含大量宿主细胞时脱色效果好。
注2：使用革兰染色仪染色的实验室按照厂家操作说明书进行，注意条件优化，使涂片染色结果达到满意效果。
4.1.5显微镜观察革兰染色结果注：低倍镜下细胞计数、油镜下细菌计数半定量指标；❝4.2 气管镜标本处理4.2.1 支气管肺泡灌洗液定量培养 4.2.2 保护毛刷定量培养4.2.3 接种其他培养基并培养 4.2.4 革兰染色标本处理4.2.5 剩余BAL 标本可用于其他病原检测（标本珍贵）对剩余BAL 标本离心后，可根据需要进行病毒、分枝杆菌、军团菌和真菌培养；或做病毒、卡氏肺孢子菌、抗酸染色和真菌涂片染色（见参考文献4的第六篇相关章节）（修改解释）。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范一、相关临床知识临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。
下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染(肺炎、肺脓肿)等。
病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。
下呼吸道感染患者可有发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，可伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音、白细胞总数及嗜中性粒细胞比例明显增高，x线检查提示肺部有炎症性浸润或胸腔积液等体症，严重时可导致感染性休克和呼吸衰竭，因此临床诊断一般不难；细菌学检验能明确感染病原，并提供有关抗菌药物对分离菌的抗菌活性等信息，有助于疾病治疗、流行病学调查研究和医院感染的监测。
临床呼吸道标本中常见分离细菌见表1二、标本采集本室必须注意生物安全防护。
(一)采集方法1．自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。
尽可能在用抗菌药物之前采集标本。
用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应≥lml。
标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存≤2h。
2．支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。
3．小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。
幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
(二)标本验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
下呼吸道标本验收与拒收见表2。
三、实验室检查(一)肉眼观察观察痰液的颜色、粘度、有无血丝和是否呈脓性，如见有颗粒存在，则应注意可能与放线菌属及奴卡菌属感染有关。
下呼吸道感染宏基因组二代测序报告临床解读路径专家共识摘要近年来，宏基因组二代测序（mNGS）技术在下呼吸道感染（LRTI）病原诊断领域得到了广泛应用，国内临床医师在mNGS的临床应用方面已积累了一定的经验和证据。
但mNGS在LRTI病原诊断中的适用场景仍缺乏规范，mNGS报告的临床意义解读也缺乏专业的指导意见。
本共识基于mNGS在我国LRTI病原诊断方面的应用实践，梳理mNGS在LRTI应用领域的瓶颈问题，汇总本领域专家意见，明确了mNGS在LRTI病原诊断中的适用场景，为mNGS报告临床意义提供了一条合理可行的解读路径，以期规范mNGS在LRTI中科学合理应用。
宏基因组二代测序是近年来兴起的基于核酸检测的微生物鉴定技术，由于其非预设性、高通量等优点而得到广泛应用。
下呼吸道感染主要包括社区获得性肺炎、医院获得性肺炎、免疫抑制宿主肺炎、慢性阻塞性肺疾病急性加重、支气管扩张症合并感染等类型，临床表现多样，感染微生物种类复杂，感染和定植鉴别困难，加之mNGS技术本身存在的局限性，mNGS诊断效力的发挥有赖于选择恰当患者、采用适宜标本以及进行合理的解读。
尽管国内就mNGS的技术要点和临床应用已有数部专家共识，但尚缺乏针对LRTI临床实践中具体问题的指导意见。
为此，中华医学会呼吸病学分会发起并组织呼吸与危重症、临床微生物检验、感染等多学科的专家撰写本共识，以期规范mNGS在LRTI中的临床应用，为更好地规范解读mNGS报告提供指引。
LRTI诊断要点、主要病原谱及特定致病微生物的危险因素本共识不再赘述，可参考相关指南或共识。
本共识采用问答的形式，首先提出需要阐明的问题，经共识写作组讨论后确定入选问题，在梳理临床证据的基础上给出每个问题的推荐意见及理由，并附上典型应用案例及其解析，方便读者掌握共识要点。
本共识适用于青少年和成人LRTI。
一、LRTI病原学诊断方法学问题1：mNGS 和传统微生物检测方法相比的优势与不足是什么？传统微生物检测方法技术成熟，可靠性较高，临床应用实践多；mNGS技术理论上能非预设性、一次性检测未知病原，检测范围更广，但存在技术复杂、报告解读困难等不足。
下呼吸道感染细菌培养及药敏分析（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的分析下呼吸道感染病原菌的分布及耐药情况，以及对常用抗菌药的敏感情况。
方法选取我院呼吸内科患者580份痰液标本，对感染细菌进行鉴定、分类，同时进行药敏实验。
结果580例痰培养革兰阴性杆菌为主占56.03%，呈阳性结果的占43.97%。
其中位居革兰阴性杆菌前三位的是大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌。
革兰阴性菌对第三代头孢类药物敏感率高。
讨论下呼吸道感染以革兰阴性菌为主，对常用抗生素有较高的耐药率，临床用药时要选用敏感抗菌药物治疗，避免滥用抗生素。
【关键词】下呼吸道细菌培养革兰阴性菌药敏分析下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，随着抗生素的广泛使用，各种病原菌对抗生素均产生了不同程度的耐药性，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素，是降低下呼吸道感染发病率和病死率的关键[1]。
本文选取我院580例下呼吸道感染患者的痰培养并对其药物敏感性情况进行了分析。
1资料与方法1.1一般资料选取在我院诊治的2009年10月至2010年10月的下呼吸道感染患者580例，男性287例（49.48%），女性293例（50.52%），年龄在35～71岁,平均年龄为48.8岁。
支气管炎（308例）、哮喘伴感染（192例）、支气管肺炎（80例）。
1.2操作方法采用法国ATB半自动细菌生化鉴定仪，在患者未使用任何抗生素前，晨起用无菌生理盐水漱口3次后，咳痰于无菌器皿内立即送检。
采用KB纸片扩散法对临床标本分离的铜绿假单胞菌，进行抗生素敏感性测定，阿米卡星等17种抗生素纸片均购自北京天坛药品生物技术开发公司，部分药敏纸片来自英国OXOID。
2结果2.1感染细菌的种类和分布580例痰培养呈革兰阴性杆菌结果者共325例占56.03%，呈阳性结果者共255例，阳性率为43.97%。
其中位居革兰阴性杆菌前三位的是大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌。
关于下呼吸道感染细菌培养及药敏分析 2012-12-12 【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。
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关于下呼吸道感染细菌培养及药敏分析 【摘要】目的分析下呼吸道感染病原菌的分布及耐药情况，以及对常用抗菌药的敏感情况。
方法选取我院呼吸内科患者580份痰液标本，对感染细菌进行鉴定、分类，同时进行药敏实验。
结果580例痰培养革兰阴性杆菌为主占56.03%，呈阳性结果的占43.97%。
其中位居革兰阴性杆菌前三位的是大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌。
革兰阴性菌对第三代头孢类药物敏感率高。
讨论下呼吸道感染以革兰阴性菌为主，对常用抗生素有较高的耐药率，临床用药时要选用敏感抗菌药物治疗，避免滥用抗生素。
【关键词】下呼吸道细菌培养革兰阴性菌药敏分析 下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，随着抗生素的广泛使用，各种病原菌对抗生素均产生了不同程度的耐药性，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素，是降低下呼吸道感染发病率和病死率的关键[1]。
本文选取我院580例下呼吸道感染患者的痰培养并对其药物敏感性情况进行了分析。
1 资料与方法 1.1一般资料 选取在我院诊治的2009年10月至2010年10月的下呼吸道感染患者580例，男性287例(49.48%)，女性293例(50.52%)，年龄在35～71岁,平均年龄为48.8岁。
支气管炎(308例)、哮喘伴感染(192例)、支气管肺炎(80例)。
1.2操作方法 采用法国ATB半自动细菌生化鉴定仪，在患者未使用任何抗生素前，晨起用无菌生理盐水漱口3次后，咳痰于无菌器皿内立即送检。
采用KB纸片扩散法对临床标本分离的铜绿假单胞菌，进行抗生素敏感性测定，阿米卡星等17种抗生素纸片均购自北京天坛药品生物技术开发公司，部分药敏纸片来自英国OXOID。
下呼吸道感染的病原菌谱及耐药性研究作者：常海荣来源：《现代养生·下半月版》 2014年第3期常海荣克东县润津乡卫生院黑龙江省克东县164800【摘要】目的：针对呼吸内科下呼吸道感染患者病原菌谱及耐药性进行研究，配合临床治疗选择合适的抗菌药物。
方法：收集2005-2010 年呼吸内科下呼吸道感染患者分离痰标本中的病原菌及耐药性。
结果：革兰阴性杆菌约为47.5%-55.8%，其中铜绿假单胞菌及大肠埃希菌分别占14.6% 及8.7%，对亚胺培南、哌拉西林/ 他唑巴坦及阿米卡星耐药率为2.3%-36.7%；革兰阳性球菌约为22.8%-35.6%，金黄色葡萄球菌及凝固酶阴性葡萄球菌分别占16.8% 和7.4%，只是对万古霉素耐药率为0；真菌占14.9%-23.8%。
结论：呼吸内科下呼吸道感染主要是革兰阴性杆菌，革兰阳性球菌呈现增高趋势，真菌具有一定比例，耐药率增高，对于耐药性监测的加强，抗菌药物的合理使用都具有重要意义。
【关键词】病原菌谱；下呼吸道感染；呼吸内科1 前言随着近些年先进医疗技术的发展，广谱抗菌激素、药物及免疫抑制剂的应用日益广泛，病原菌耐药性逐渐严重，为在临床中对用药的合理性进行指导，收集2007-2010 年之间的下呼吸道感染患者送检痰标本中培养分离826 株病原菌，并鉴定病原菌、分析耐药性，现将具体情况总结如下。
2 材料与方法2.1 标本来源采用无菌方法收集2007-2010 年之间的下呼吸道感染患者送检痰标本中培养分离826株病原菌，进行细菌培养及药敏试验。
2.2 鉴定菌株与药敏试验血平板及麦康凯平板接种于标本，选取优势菌实施分纯及生化鉴定工作。
分离株采用K-B法进行药敏试验，根据NCCL 推荐的标准分析结果。
2.3 质量控制大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌都是质控菌。
2.4 数据处理采用软件对数据进行统计。
3 结果3.1 病原菌分布病原菌种类分布构成为，杆菌约占50.4%，球菌约占28.7%，真菌约占20.9%。
下呼吸道感染细菌培养操作规范ICS点击此处添加中国标准文献分类号WS中华人民共和国卫生行业标准XX/TXXXXX—XXXX下呼吸道感染细菌培养操作规范StandardforBacterialCultureProceduresofLowerRespiratoryTractInfections点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（报批稿）（本稿完成日期：）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施中华人民共和国国家卫生计生委员会发布XX/TXXXXX—XXXX1目次前言 (4)引言 (5)1范围 (7)2术语及定义 (7)2.1支气管肺泡灌洗液 (7)2.2保护毛刷标本 (7)2.3库什曼螺旋纤维 (7)2.4夏科雷登结晶 (7)2.5弹性纤维 (7)2.6纤毛柱状上皮细胞 (8)2.7肺泡巨噬细胞 (8)3分析前 (8)3.1标本采集 (8)3.1.1咳痰 (8)3.1.4诱导痰（通常不用于细菌培养） (8)3.1.5气管镜标本 (8)3.2标本运送 (9)3.3筛选并拒收下呼吸道细菌培养标本 (9)4分析中 (9)4.1痰及气管吸出物标本处理 (9)4.1.1标本处理要求 (9)4.1.2接种标本 (9)4.1.3培养 (9)4.1.4标本涂片及革兰染色 (10)4.1.5显微镜观察革兰染色结果 (10)4.2气管镜标本处理 (10)4.2.1支气管肺泡灌洗液定量培养 (10)4.2.2保护毛刷定量培养 (11)4.2.3接种其他培养基及培养 (11)4.2.4革兰染色标本处理 (11)4.2.5剩余BAL标本检测其他病原 (11)4.3连续培养并观察慢生长菌 (11)4.4分离并鉴定下呼吸道重要致病菌（参见附录C） (11)XX/TXXXXX—XXXX24.4.1链球菌属 (11)4.4.2苛养革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上难生长） (12)4.4.3革兰阴性双球菌 (12)4.4.4革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上生长良好） (12)4.4.5葡萄球菌属 (13)4.4.6肠球菌属 (13)4.4.7革兰阳性杆菌 (13)4.4.8鉴定丝状真菌 (13)4.4.9涂片时可见但培养不生长的细菌 (13)4.5质量控制 (13)4.5.1革兰染色 (13)4.5.4试剂 (14)5分析后报告结果 (14)5.1革兰染色报告 (14)5.1.1痰标本报告原则（见表1） (14)5.1.2BAL细胞离心涂片报告 (15)5.2报告有临床意义的微生物 (16)5.2.1报告的病原菌 (16)5.2.2培养和涂片相符合时报告的病原菌 (16)5.2.3有临床意义的数量 (16)5.2.4报告有临床意义数量的非优势菌 (16)5.2.5报告有临床意义数量的优势菌 (16)5.3对非致病菌的报告 (17)5.3.1报告“肠杆菌科革兰阴性菌” (17)5.3.2报告“非发酵革兰阴性杆菌” (17)5.3.3只生长肠球菌和凝固酶阴性葡萄球菌 (17)5.3.4报告“分离到口咽部正常菌群” (17)5.4平板上无细菌生长 (17)5.5结果解释 (17)附录A（规范性附录）下呼吸道感染主要类型及常见病原体 (18)附录B（规范性附录）支气管镜采集的标本适合诊断的病原体和检验项目 (19)附录C（规范性附录）常见可疑菌落形态及经典快速鉴定方法 (20)参考文献 (22)XX/TXXXXX—XXXX3前言本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。
呼吸内科下呼吸道感染革兰阴性菌分布及耐药性的分析金晶;李红斌;侯小玲【摘要】目的了解呼吸内科下呼吸道感染病原菌的分布情况以及耐药特点,为临床用药提供参考.方法对本院近3年呼吸内科送检的下呼吸道标本进行常规细菌培养,对培养出的病原菌进行鉴定和药敏试验,采用WHONET 5.4软件进行统计分析.结果共分离出1548株病原菌,检出率为29.54％,其中革兰阴性杆菌1239株,占80.04％,以肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌为主,主要革兰阴性杆菌对碳青霉烯类、氨基糖苷类和哌拉西林/他唑巴坦耐药率较低.结论本院呼吸内科下呼吸道感染病原菌以革兰阴性杆菌为主,主要病原菌的耐药性较高,临床治疗应根据药敏结果合理选用抗菌药物以减少耐药菌株的产生.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2016(014)022【总页数】2页(P99-100)【关键词】呼吸内科;下呼吸道;病原菌;耐药率【作者】金晶;李红斌;侯小玲【作者单位】石门县人民医院检验科,湖南常德415300;石门县人民医院检验科,湖南常德415300;石门县人民医院检验科,湖南常德415300【正文语种】中文【中图分类】R446.5呼吸内科下呼吸道感染是医院感染最常见感染性疾病，该病发生率较高，多见于机体免疫功能低下、重症患者以及接受侵入性诊疗者，治疗难度较大。
其病原菌分布特点和细菌耐药性在不同的国家和地区存在一定的差异。
了解本院呼吸内科下呼吸道感染病原菌的耐药现状对指导临床合理用药起着重要的作用。
现对本院呼吸内科2012年1月至2014年12月本院住院患者下呼吸道感染病原菌的分布和耐药情况进行报道。
1.1 菌株来源：2012年1月至2014年12月本院住院患者临床送检标本（重复株不计算在内）。
1.2 方法：平皿购自郑州安图生物工程有限公司，按《全国临床检验操作规程》进行常规培养分离。
细菌的鉴定与药敏试验均采用梅里埃公司的VITEK3D-120微生物分析仪及其配套的鉴定和药敏卡进行分析，补充实验采用K-B法。
