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骨髓间充质干细胞颅内移植联合应用促红细胞生成素治疗创伤性颅脑损伤的实验探究

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中文摘要
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
骨髓间充质千细胞颅内移植联合应用促红细胞 生成素治疗创伤性颅脑损伤的实验研究
硕士研究生：万兴 指导老师：王文宏
东南大学医学院（２１０００９）
中文摘要
目的 本实验通过体外分离并培养大鼠的骨髓问充质干细胞（ｂｏｎｅ
ｍａｒｒｏｗ ｓｔｅｍ
ｉｒｏｎ
ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ），对其进行鉴定后并应用超顺磁性氧化铁（ｓｕｐｅｒｐａｒａｍａｇｎｅｔｉｃ ｏｘｉｄ，ＳＰＩＯ）对其进行标记，并通过Ｆｅｅｎｅｙ’Ｓ法建立大鼠创伤性颅脑损伤（ｔｒａｕｍａｔｉｃ 用重组人促红细胞生成素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
４
５ ６
万方数据
东南大学硕士学位论文
７
于各时间点进行颅脑ＭＲＩ检查，动态观察标记的ＢＭＳＣｓ的分布及迁移，最后于移 植后第２８ｄ每组取２只大鼠处死后行脑组织普鲁士蓝染色，验证标记细胞在脑内的 存活及迁移情况。
结果
ｌ
通过全骨髓贴壁筛选法培养细胞，培养２４ｈ后，可见部分细胞开始贴壁，多呈圆球 形和梭形；当培养至第７ｄ时，细胞呈集落样贴壁生长，集落逐渐扩大，相邻细胞 间相互融合，排列紧密，细胞胞体增大，多呈梭形。细胞经培养传代后，细胞呈梭 形成纤维样生长，形态单一，分布均匀。流式细胞仪检测结果显示，第３代的ＢＭＳＣｓ 表面ＣＤ２９、ＣＤ９０表达阳性，而ＣＤ３４、ＣＤ４５表达阴性。 Ｆｅ浓度为２５ｕｇ／ｍｌ的ＳＰＩＯ标记ＢＭＳＣｓ后４８ｈ，经细胞涂片行普鲁士蓝染色，倒置 显微镜下观察见所有标记细胞内均可看到蓝色的铁颗粒，颗粒在细胞质中，呈簇状 或散在分布，细胞标记率为１００％。标记ＳＰＩＯ和未标记ＳＰＩＯ的ＢＭＳＣｓ的活细胞 比率分别为９８．５％、９９％，差异无统计学意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。 各组大鼠在细胞移植术后随着时间延长ＮＳＳ评分不断降低，不同时间点差异有统
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ
Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｍａｙ
２０１４
万方数据
二趔导师签名： 研究生签名：二丕型日期：
万方数据 期： 东南大学学位论文使用授权声明 日期： 么２五） 研究生签名： 东南大学学位论文独创性声明 研究生签名： 的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研究生院办理。 以公布（包括以电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文 容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可 复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内 东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的 并表示了谢意。 过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用 成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究
ｂｒａｉｎ
ｉｎｊｕｒｙ，ＴＢＤ模型，然后将ＳＰＩＯ标记的ＢＭＳＣｓ移植到ＴＢＩ模型大鼠脑组织内，并联合应
ｈｕｍａｎ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，ｒｈＥＰＯ），从大鼠的行为学、
影像学及组织学方面综合评价大鼠神经功能的恢复情况，并探讨两者联合应用的神经保 护的作用及其机制，为临床应用ｒｈＥＰＯ联合ＢＭＳＣｓ治疗ＴＢＩ提供实验依据。
方法
１
采用全骨髓贴壁筛选法分离、培养大鼠ＢＭＳＣｓ，培养过程中在倒置相差显微镜下 观察细胞形态变化，并应用流式细胞仪技术鉴定细胞的表面抗原ＣＤ２９、ＣＤ３４、ＣＤ４５ 和ＣＤ９０。将培养的第３代细胞用于后续实验。 采用一定浓度的ＳＰＩＯ标记培养的第３代ＢＭＳＣｓ，运用普鲁士蓝染色检测其标记率， 并检测细胞在标记前后活力变化。
４
脑组织含水量测定结果显示：大鼠颅脑损伤后第３ｄ脑组织含水量最高。移植后第 ７ｄ各组脑组织含水量较第３ｄ明显降低，存在显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５）；第１４ｄ时各 组脑组织含水量与第７ｄ相比降低，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；第７ｄ、１４ｄ
时此ＰＯ治疗组、ＢＭＳＣｓ治疗组、她ＰＯ＋ＢＭＳＣｓ治疗组脑组织含水量与对照组
２
３
取１２０只ＳＤ雄性大鼠，采用Ｆｅｅｎｅｙ’Ｓ法建立大鼠ＴＢＩ模型，随机分为４组，每组 ３０只。Ａ组：对照组，ＴＢＩ模型建立后不给予任何治疗；Ｂ组：ＴＢＩ模型建立后给 予腹腔注射ｒｈＥＰＯ治疗；Ｃ组：ＴＢＩ模型大鼠给予ＳＰＩＯ标记的ＢＭＳＣｓ脑内移植； Ｄ组：ＴＢＩ模型大鼠给予ＳＰＩＯ标记的ＢＭＳＣｓ脑内移植及联合注射删巳ＰＯ治疗。 各组实验大鼠在细胞移植后第１ｄ、３ｄ、７ｄ、１４ｄ和２８ｄ采用改良的神经功能缺损法 （ＮＳＳ）进行神经功能评分，评价ＢＭＳＣｓ移植及应用ｒｈＥＰＯ的疗效。 采用干湿法测定不同时间点损伤周围脑组织的含水量。 分别于ＴＢＩ模型建立后２４ｈ、细胞移植后２８ｄ，对大鼠脑组织进行苏木精．伊红染色 以观察损伤脑组织的病理改变及恢复情况。
ＥＸＰＥＲ．ＩＭＥＮＴＡＬ ＳＴＵＤＹ
０Ｆ ＢＯＮＥ
ＭＡＲＲＯＷ ＭＥＳＥＮＣＨ、ＭＡＩ，ＳＴＥＭ
ＣＥＬＬＳ’ＩＮＴＲＡＣＲ ＡＮｌＡＩ，ＴＲＡＮＳＰＬＡＮＴＡＴＩＯＮ
ＣＯＭＢＩＮＥＤ ＷＩＴＨ
ＴＨＥ ＵＳＥ ＯＦ ＥＲＹＴＨＲＯＰＯＩＥＴＩＮ ＩＮ ＴＲＡＩ ＢＲ ＡＩＮ ＩＮＪＩ】＿ＲＹＥＤ ＲＡＴＳ
ＭＡＴＩＣ
Ａ Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ Ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ ｔｏ Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ Ｍａｓｔｅｒ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
ＢＹ
ＷＡＮ ｘｉｎｇ
—
Ｓｕｐｅｒｖｉｓｅｄ ｄｅｓｌｖｒｅｐｕＳｙｂ ｂ
Ｐｒｏｆ．ＷＡＮＧ
ｗｅｎ—ｈｏｎｇ
２
３
计学意义（Ｐ＜０．０５）；ｒｈＥＰＯ治疗组、ＢＭＳＣｓ治疗组、眦ＰＯ＋ＢＭＳＣｓ治疗组术后
不同时间点评分明显低于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；砌巳ＰＯ＋ＢＭＳＣｓ 治疗组在不同时间点评分明显低于ｒｈＥＰＯ治疗组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）； ｒｈＥＰＯ＋ＢＭＳＣｓ治疗组在移植后第７ｄ、１４ｄ、２８ｄ三个时间点评分明显低于ＢＭＳＣｓ 治疗组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。

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在复合成分培养基中骨髓间充质干细胞的诱导成骨

在复合成分培养基中骨髓间充质干细胞的诱导成骨

在复合成分培养基中骨髓间充质干细胞的诱导成骨徐丽丽;孙晓娟;郝秀仙;谢婷婷;杨乃龙【摘要】背景：研究显示骨质疏松多伴有成骨细胞的减少，成骨细胞替代疗法成为治疗骨质疏松症的新靶点。

目的：观察人骨髓间充质干细胞在含地塞米松、维生素C及β-甘油磷酸钠培养基中向成骨细胞分化的能力。

方法：采用人淋巴细胞分离液从成人骨髓血中分离纯化间充质干细胞，应用流式细胞仪检测其表面标志物的活性，透射电镜观察骨髓间充质干细胞的超微结构；将骨髓间充质干细胞在含有地塞米松、维生素 C 与β-甘油磷酸钠的成骨诱导培养基中诱导分化， RT-PCR检测骨髓间充质干细胞成骨诱导后骨形态发生蛋白2 mRNA的表达情况。

结果与结论：培养2周后可见细胞呈成纤维状生长，强表达 CD44，CD29，不表达 CD34，CD45，具有向成骨细胞诱导分化的潜能，茜素红及碱性磷酸酶染色阳性，骨形态发生蛋白2 mRNA表达阳性，说明人骨髓间充质干细胞在含地塞米松、维生素C及β-甘油磷酸钠培养基中可向成骨细胞诱导分化，具有治疗骨质疏松症的潜能。

%BACKGROUND:Studies have shown that the number of osteoblasts is often decreased after osteoporosis, and osteoblast replacement therapy becomes a new target for the treatment of osteoporosis. OBJECTIVE:To observe the osteogenic differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cels cultured in dexamethasone, vitamin C and beta-glycerophosphate. METHODS:Mesenchymal stem cels were isolated and purified from adult bone marrow using human lymphocyte separation medium. The expression of cel surface markers was detected by flow cytometry. Cel ultrastructure was observed by transmission electron microscope. Then, the bone marrow mesenchymal stem cels were culturedin osteogenic induction medium containing dexamethasone, vitamin C andβ-glycerophosphate, and RT-PCR was used to detect the bone morphogenetic protein-2 mRNA expression after osteogenic induction. RESULTS AND CONCLUSION:A large number of adherent cels were visible as fibrous growth at 2 weeks after culture and strongly expressed CD44, CD29, but did not express CD34, CD45. These cels could be induced to differentiate into osteoblasts, and express bone morphogenetic protein-2 mRNA. Alizarin red staining and alkaline phosphatase staining were positive for the cels. These findings suggest that human bone marrow mesenchymal stem cels cultured in dexamethasone, vitamin C and beta-glycerophosphate can differentiate into osteoblasts, and has a potential for the treatment of osteoporosis.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(000)010【总页数】5页(P1501-1505)【关键词】干细胞;骨髓干细胞;人骨髓间充质干细胞;成骨细胞;诱导分化【作者】徐丽丽;孙晓娟;郝秀仙;谢婷婷;杨乃龙【作者单位】青岛大学医学院附属医院内分泌科，山东省青岛市 266003;青岛大学医学院附属医院内分泌科，山东省青岛市 266003;青岛大学医学院附属医院内分泌科，山东省青岛市 266003;青岛大学医学院附属医院内分泌科，山东省青岛市 266003;青岛大学医学院附属医院内分泌科，山东省青岛市 266003【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章亮点：1 碱性磷酸酶是成骨细胞的标志性酶之一，也是成骨细胞活动的副产物，而且在体内的钙化中也起关键性作用，可以破坏钙化抑制剂，从而启动钙化。

骨髓间充质干细胞研究与应用概况

骨髓间充质干细胞研究与应用概况

骨髓间充质干细胞研究与应用概况于雷;高俊玲【摘要】骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells,BMSCs)是当下热点研究对象之一。

1867年德国病理学家Cohnheim教授[1]在研究创口愈合过程中发现骨髓中存在一种非造血系统的多潜能细胞,但研究因为条件原因未能深入。

后来有研究者[2]在20世纪60年代开展一系列开创性研究,发现从骨髓中分离得到长梭状、成纤维细胞样的细胞群,在塑料培养皿中呈集落样贴壁生长;1987年,又发现这种骨髓单核细胞可在一定的条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。

培养增殖二十代后仍保有其多向分化的潜能。

于是把这种多能细胞称为间充质干细胞(mesenchyma stem cell,MSC)。

【期刊名称】《华北理工大学学报：医学版》【年(卷),期】2018(020)002【总页数】5页(P164-168)【关键词】骨髓间充质干细胞;肺纤维化;缺血性脑卒中【作者】于雷;高俊玲【作者单位】[1]华北理工大学基础医学院,河北唐山063000;[1]华北理工大学基础医学院,河北唐山063000;【正文语种】中文【中图分类】R329.2骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal cells，BMSCs)是当下热点研究对象之一。

1867年德国病理学家Cohnheim教授[1]在研究创口愈合过程中发现骨髓中存在一种非造血系统的多潜能细胞，但研究因为条件原因未能深入。

后来有研究者[2]在20世纪60年代开展一系列开创性研究，发现从骨髓中分离得到长梭状、成纤维细胞样的细胞群，在塑料培养皿中呈集落样贴壁生长；1987年，又发现这种骨髓单核细胞可在一定的条件下分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞。

培养增殖二十代后仍保有其多向分化的潜能。

于是把这种多能细胞称为间充质干细胞(mesenchyma stem cell，MSC)。

神经科论文神经内科医学论文神经内科论文：脑缺血恢复期骨髓间充质干细胞移植对神经功能和促血管生成素-1、

神经科论文神经内科医学论文神经内科论文：脑缺血恢复期骨髓间充质干细胞移植对神经功能和促血管生成素-1、

神经科论文神经内科医学论文神经内科论文：脑缺血恢复期骨髓间充质干细胞移植对神经功能和促血管生成素-1、2及其受体表达的影响【摘要】目的探讨脑缺血恢复期骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对神经功能和促血管生成素(Ang)-1、Ang-2及酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)表达的影响。

方法42只SD大鼠随机分为脑缺血对照组(对照组，12只)、BMSC移植组(15只)及假手术组(15只)，各组又分为缺血后28 d、35 d、42 d 3个亚组。

用线栓法制作脑缺血大鼠模型，用改良黏附物移除试验(MST)评估大鼠神经功能。

在脑缺血后21 d，给BMSCs 移植组大鼠尾静脉注射BMSCs，对照组大鼠注射等体积PBS。

在脑缺血后28 d、35 d、42 d(移植后7 d、14 d、21 d)，用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western Blotting法检测大鼠缺血周围脑组织Ang-1、Ang-2及Tie-2 mRNA和蛋白的水平。

结果BMSCs移植组大鼠各时间点亚组的MST评分均显著高于对照组(均P＜0.05);BM-SCs移植组及对照组各时间点亚组脑组织的Ang-1、Tie-2 mRNA和蛋白水平明显高于假手术组(P＜0．05～0.01)，脑缺血后28 d、35 d，BMSCs 移植组脑组织Ang-1、Tie-2 mRNA及蛋白水平均明显高于对照组(均P＜0.01)，而脑缺血后42 d两组之间的差异无统计学意义;3组各时间点亚组脑组织Ang-2 mRNA及蛋白水平的差异均无统计学意义。

结论脑缺血恢复期BMSCs移植能改善神经功能，并使缺血周围脑组织Ang-1、Tie-2的表达水平明显增高，而对Ang-2表达无明显影响。

【关键词】骨髓间充质干细胞;脑缺血;促血管生成素-1;促血管生成素-2;酪氨酸激酶受体-2促血管生成素(Ang)-1、Ang-2及酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)是介导脑缺血后血管源性水肿、血管生成和血管成熟稳定的关键因子。

生血宝合剂联合蔗糖铁治疗血液透析患者肾性贫血的疗效观察

生血宝合剂联合蔗糖铁治疗血液透析患者肾性贫血的疗效观察

生血宝合剂联合蔗糖铁治疗血液透析患者肾性贫血的疗效观察徐云发彭倩（宜春市第二人民医院，江西宜春336000）【摘要】目的探讨生血宝合剂联合蔗糖铁治疗血液透析患者肾性贫血的疗效。

方法选取2019年1月—2020年5月于宜春市第二人民医院行血液透析的肾性贫血患者60例，按随机数字表法分为2组，各30例。

给予对照组蔗糖铁注射液，基于此给予观察组生血宝合剂进行治疗，2组疗程均为3个月。

比较2组治疗前后贫血状态[血红蛋白（Hb）、血清铁蛋白（SF）、转铁蛋白饱和度（TSAT）]、营养状况[肱三头肌皮皱（TSF）、上臂肌围（AMC）、血清白蛋白（ALB）]及不良反应发生情况。

结果治疗后，2组Hb、SF、TSAT、ALB、TSF、AMC水平均上升，且观察组较对照组高，差异有统计学意义（P<0.05）；2组不良反应发生率对比，差异无统计学意义（P>0.05）。

结论生血宝合剂联合蔗糖铁可有效改善血液透析患者肾性贫血状态和营养状况，且安全性较高。

【关键词】血液透析肾性贫血蔗糖铁生血宝合剂贫血状态营养状况中图分类号：R4文献标识码：A文章编号：1672-1721（2021）13-1852-03DOI：10.19435/j.1672-1721.2021.13.036肾性贫血为肾功能不全维持透析患者常见并发症，多由患者残余肾功能下降、促红细胞生成素减少造成，可导致患者畏寒、嗜睡、肌无力，严重影响其日常生活质量[1]。

目前，针对此类患者，临床常用蔗糖铁来调节促红细胞生成素水平，继而减轻不适症状，但由于起效较慢，常难以快速获得理想治疗预期。

本研究将生血宝合剂与蔗糖铁联合应用于血液透析肾性贫血患者，探究其对贫血状态、营养状况及不良反应的影响，现报道如下。

1资料与方法1.1一般资料选择2019年1月—2020年5月宜春市第二人民医院60例血液透析肾性贫血患者，采用随机数字表法将其分成2组各30例，排除患有严重并发症、心脑血管病、高血压等患者。