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Luxol Fast Blue髓鞘染色液（伊红法）使用说明书货号：G3240有效期：12个月有效。
产品内容：产品名称规格Storage试剂(A):Luxol Fast Blue染色液50ml RT避光试剂(B):Luxol分化液50ml RT试剂(C):伊红染色液50ml RT避光产品简介：髓鞘（myelin sheath）是包裹在神经细胞轴突外面的一层膜，即髓鞘由髓鞘细胞和细胞膜组成，是神经细胞的质膜沿着轴索的轴心螺旋缠绕形成的多层脂双层结构，髓鞘上有郎飞氏结，可使神经冲动跳跃传递。
髓鞘染色在病理诊断中有一定意义，髓鞘的病理变化分为早期、中期和晚期。
在早期着色较深；病变中期阶段的髓鞘变性形成脂滴，可用脂质染色加以显示，后期彻底溃变并被吞噬细胞清除，故不再有髓鞘的阳性结果。
很多疾病都可以引起髓鞘的变化，Luxol Fast Blue髓鞘染色可以显示病理情况下髓鞘是否完整、变性、坏死程度及修复情况，对神经组织的病理诊断和研究均有意义，例如神经纤维受损时，髓鞘可出现膨胀、曲折成球形、断裂或脱鞘完全消失等改变。
操作步骤（仅供参考）：1.石蜡切片5～8μm，脱蜡至水；2.95%乙醇稍洗；3.入Luxol Fast Blue染色液，室温过夜（冰冻切片染色时间不超过16h）；4.入95%乙醇洗去多余染色液；5.蒸馏水冲洗；6.入Luxol分化液分色15s；7.入70%乙醇分色30s至灰白质清晰；8.蒸馏水冲洗。
（如果分色不足，可重复6～7步骤）；9.入伊红染色液，复染30s～2min，水洗；10.用95%、100%乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果：髓鞘呈蓝色，背景呈红色。
注意事项：1.分化这一步很关键，应严格控制分化时间，可在镜下观察分化程度。
2.固定液以10%的福尔马林为佳。
3.切片不宜太厚，应控制在8～9μm以内，否则易出现脱片或过染等现象。
4、如室温染色效果不佳或者缩短染色时间，可在56℃下染色。
髓鞘染色液使用说明
规格：100ml×2
有效期：室温保存，6个月有效。
产品简介：
本产品是运用固蓝（luxol fast blue）染色法染脑和髓鞘。
髓鞘（myelin sheath）是一层脂肪组织，包裹在某些神经元的轴突外，具有绝缘作用并提高神经冲动的传导速度，在中枢和外周神经系统中起保护轴突作用。
本染色法可显示正常的髓鞘。
自备材料：
产品名称规格
髓鞘染液A100ml
髓鞘染液B100ml
操作步骤（仅供参考）：
1、石蜡切片脱蜡至水；
2、无水乙醇5min；
3、浸入髓鞘染液A在58-60℃条件下染色14h；
4、流水冲洗10min；
5、放入70%乙醇中（无固定时间）
6、浸入髓鞘染液B中，至分色完全（可见中间灰质部分颜色变淡）；
7、第5步、6步交替进行；
8、流水冲洗5min；
9、伊红复染数秒（可选）；
10，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。
染色结果：
正常髓鞘呈蓝色，脱髓鞘无色，余呈淡红色。
注意事项：
1、髓鞘染液常温密封放置，可保存6个月；100ml髓鞘染液染150张片子为宜，染液可重复利用。
因髓鞘染液中含有酒精所以加温染色时宜密封，不然溶液蒸发，影响染色效果；
2、酒精和髓鞘染液B分化为关键步骤，应交替分化，镜下观察，控制分色；
3、伊红复染可选，如选，宜浅染。
[文章编号]1000-2057(2008)01-0005-03南通大学学报(医学版)Journal of Nantong University (Medical S ciences)2008∶28(1)长期以来,脊髓损伤后皮质脊髓束的再生修复研究一直是神经科学研究的热点。
最近有人尝试运用微电子芯片技术重建皮质脊髓束功能[1]。
此项研究中一个关键指标就是皮质脊髓束在脊髓内定位和走行情况。
常用的组织学染色方法不能显示皮质脊髓束,本实验采用Luxo l Fast Blue 染色法对大鼠皮质脊髓束进行形态学研究,取得良好效果。
1材料和方法1.1材料选用健康成年SD 大鼠6只,清洁级,体重250~300g,雌雄不拘,由南通大学实验动物中心提供。
0.1%L ux ol Fast Blue 液(Sigma 公司),L eicaCM 1900冰冻切片机,显微镜为Leica DM R 显微镜(L 公司,德国)。
1.2方法切片制备:给予大鼠复合麻醉剂(0.2ml/100g 体重),腹腔注射麻醉后开胸,穿心脏经升主动脉灌注,先用温(37℃)生理盐水200ml 冲净血液,再用预冷(4℃)的含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液500ml 快速灌注固定,1h 后取脑和脊髓放入含4%多聚甲醛的PB 溶液中后固定4~6h,再移入30%蔗糖的PB 溶液中4℃过夜,待组织沉底后取脑(延髓)和脊髓颈、胸、腰、荐段行连续横切面冰冻切片,切片厚度为30μm ,直接贴于预先涂有明胶的载玻片上,置室温下晾干待用。
L ux ol Fast Blue 染色:(1)将切片放入乙醇∶氯仿溶液(无水乙醇和氯仿的体积比为1∶1)中5min ;(2)将切片置入95%乙醇溶液中5min ;(3)0.1%L ux olF B 液中56℃过夜;()5%乙醇溶液5;大鼠皮质脊髓束Luxol Fast Blue 染色*1吕广明**,1吴辉群,2栗卓,3刘苏,1韩笑,1季达峰(1南通大学人体解剖学教研室,神经生物学研究所,江苏省神经再生重点实验室南通226001;2北京朝阳区第二医院耳鼻喉科;3南通大学附属医院康复医学科)[摘要]目的:探讨显示大鼠皮质脊髓束的特殊染色方法。
实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点张健;曾育琦;张静;康德勇;黄天文;陈晓春【摘要】目的：建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽（MOG35‐55）诱发的实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型，并观察其病理特点。
方法应用M OG35‐55多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫雌性C56BL／6小鼠，观察其临床症状、病理改变及影像学变化。
结果模型组小鼠发病时间为免疫后（12±4）d （8～16d ），发病率83．3％，呈慢性单向过程；H‐E染色模型鼠脊髓白质见大量炎症细胞浸润；罗克沙尔坚牢蓝染色显示，脊髓白质呈片状髓鞘脱失；电镜显示，髓鞘内层呈板层剥脱，轴索肿胀，结构疏松；脊髓M RI检查可见髓内斑片状T2异常高信号。
结论慢性EAE模型具有发病率高、死亡率低、模型稳定、重复性高、制作方便的特点，模型病理改变接近多发性硬化（MS），是研究MS较为理想的动物模型。
%Objective To establish mouse models of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by peptide myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35‐55 ) and study their pathological characterization . Methods The female EAE model of C57BL/6 mice (10~12 weeks) were immunized subcutaneously at four sites into the flanks with 300 μg of myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide (MOG35‐55 ) with the assistance of Complete Freund's Adjuvant(CFA) and Pertussis toxin (PTX) . We observed the clinical symptoms , histopathologic changes and changes on magnetic resonance scan . Results The experimental group developed the typical symptoms of EAE on (12 ± 4) days after immuniza‐tion with the incidence of 83 .3% and showed a chronic monophasic course . There was a large number of inflammatory cells infiltration and demylination inthelum bar spinal cord . Electron micrographs demon‐strated a considerable amount of the myelin sheaths displayed loose ,vacuoles and splitting . Intramedul‐lary spinal MRI study showed patchy T2 hyperintensityin EAE mice . Conclusion Our study reports a MOG‐indu ced EAE model that has a high incidence and its pathologic changes were similar to multiple sclerosis (MS) ,so it might be an ideal model for the research on MS .【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】4页(P16-19)【关键词】少突神经胶质/免疫学;髓鞘;糖蛋白类/免疫学;脑脊髓炎,自身免疫性,实验性;模型,动物【作者】张健;曾育琦;张静;康德勇;黄天文;陈晓春【作者单位】福建医科大学附属协和医院神经内科，福州350001; 福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州 350001;福建医科大学附属协和医院神经内科，福州350001; 福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州 350001;福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州 350001; 福建省高校老化与变性病重点实验室，福州350001;福建医科大学附属协和医院病理科，福州 350001;福建医科大学附属协和医院神经内科，福州350001; 福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州 350001;福建医科大学附属协和医院神经内科，福州350001; 福建省老年医学研究所，福州350001; 福建省高校老化与变性病重点实验室，福州350001【正文语种】中文【中图分类】R-332;R341.32;R392.11;R744.3;R9712. 福建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001；3. 福建省老年医学研究所，福州350001；4. 福建省高校老化与变性病重点实验室，福州350001；5. 福建医科大学附属协和医院病理科，福州350001多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是一种病因不明的、主要累及中枢神经系统白质的慢性炎性脱髓鞘疾病。
LFB髓鞘染色一、LFB髓鞘染色实验简介劳克坚牢蓝(LuxolFastBlueLFB)属于铜－酞箐染料，在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。
应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。
二、染色步骤1、切片经蒸馏水清洗后，入0.1% LFB溶液，于60℃密封浸染8-16h2、经蒸馏水清洗后，入95%酒精3、以0.05%碳酸锂水溶液分色10s以上4、经70%酒精继续分色，直至显微镜下观察灰、白质区分清晰为止5、蒸馏水洗片后，用0.25%焦油紫溶液加数滴冰醋酸染液复染10min6、70%酒精将复染颜色分至细胞核及尼氏体呈红色三、样本说明1、石蜡切片取材：1、组织离体后需及时固定；2、组织标本不宜过大、过厚。
固定：1、固定液：10%福尔马林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般固定液的量与组织体积比为10:1～20:1；3、固定：适宜的固定时间，主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存：切片经60℃烤片3-5小时后，可于常温或4℃干燥保存。
2、冰冻切片取材：取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定：样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存：固定好的切片自然风干，密封后置于-80℃、-20℃保存，尽快用于后续实验。
3、细胞块石蜡切片细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
4、细胞爬片在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次（根据研究目的，PBS洗涤可选择不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20℃保存。
若在短时间内即开展实验，可在加固定液后，于4℃冰箱中放置一段时间。
5、细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精（最为常用）、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。
四、注意事项1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛，能使大多数抗原保存良好，适用于免疫组织化学。
luxol fast blue染色简易流程( 适用于石蜡、冰冻切片)（1）石蜡切片脱蜡，脱水至95%酒精，同时将LFB放置56度预热。
（冰冻切片可能需要脱脂：将切片放入乙醇：氯仿溶液（无水乙醇和氯仿的体积比1：1，现配）中2h，冰冻切片为了防止掉片，可以在37度烘烤2小时）；（2）将切片置入95%乙醇溶液中5min；（3）0.1%luxol fast blue溶液中56℃过夜；（冰冻切片不超过16小时，或者45度过夜为好！可以62度左右1-2h）（4）95%乙醇溶液5min；（5）双蒸水3min；（6）0.05%碳酸锂溶液（现配）分化3-5min，70%乙醇溶液继续分化30s；（7）双蒸水洗片；（8）镜下观察脊髓灰、白质分界是否清晰，若分界不清晰，则重复（6）、（7）两个步骤，直至分化清晰为止；（9）70%乙醇溶液3min；（10）0.5%伊红溶液30s；（9，10省略）（11）双蒸水洗片；（12）0.1%焦油紫溶液复染1min；焦油紫复染也可以省略，这样白质灰质分化更清晰。
（13）双蒸水洗片；（14）95%乙醇溶液5min；（15）常规脱水（100%乙醇）、透明（二甲苯）、中性树胶封片。
试剂配方：0.1%LFB（100ml）LFB ：0.1g （luxol fast blue：solvent blue 38 （Sigma,S3382））95% ETOH：100ml10%醋酸（冰醋酸）：500ul 过滤，避光，室温保存0.1% Cresyl violet solution（结晶紫，100ml）Cresyl violet ：0.1gddH2O:100ml10%醋酸（冰醋酸）：500ul 过滤0.05%LiCO3溶液（碳酸锂，200ml）：LiCO3: 0.1gddH2O:100mlResults:Myelin, including phospholipids ------------------ blue to greenNeuron ---------------------------------------------- pink to violet Positive Controls:Brain, spinal cord.。
《中国组织工程研究》Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2019)31-04979-074979www.CRTER .org·研究原著·柏秋实，男，1997年生，山东省济南市人，汉族，吉林大学白求恩医学部临床医学院在读本科。
并列第一作者：苏胜，男，1997年生，吉林省吉林市人，汉族，吉林大学白求恩医学部临床医学院在读本科。
通讯作者：池光范，博士，博士生导师，副教授，吉林大学基础医学院病理学系，吉林省长春市130021文献标识码:B稿件接受：2019-05-17Bai Qiushi,School of Clinical Medicine,Bethune Medical College,Jilin University,Changchun 130021,JilinProvince,China;Department of Pathology,College of Basic Medical Sciences,KeyLaboratory of Pathophysiology,Ministry of Education,JilinUniversity,Changchun 130021,Jilin Province,ChinaSu Sheng,School of Clinical Medicine,Bethune Medical College,Jilin University,Changchun 130021,JilinProvince,China;Department of Pathology,College of Basic Medical Sciences,KeyLaboratory of Pathophysiology,Ministry of Education,JilinUniversity,Changchun 130021,Jilin Province,ChinaBai Qiushi and Su Shengcontributed equally to this work.Corresponding author:Chi Guangfan,MD,Doctoral supervisor,Associate professor,Department of Pathology,College of Basic Medical Sciences,Key Laboratory of Pathophysiology,Ministry of Education,Jilin University,Changchun 130021,Jilin Province,China脊髓损伤模型大鼠软脊膜下注射2型腺相关病毒免疫荧光染色分析柏秋实1，2，苏胜1，2，王亮佳1，2，郑洋洋2，康娟娟2，徐金影2，池光范2(1吉林大学白求恩医学部临床医学院，吉林省长春市130021；2吉林大学基础医学院病理学系病理生物学教育部重点实验室，吉林省长春市130021)DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.1481ORCID:0000-0001-5022-4115(柏秋实)；0000-0001-9107-079X(苏胜)文章快速阅读：文题释义：软脊膜：软脊膜是一富有血管的薄膜，由2层组成。
大鼠骨骼双染标本的制作方法张宏;李啸红【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)002【摘要】目的探讨大鼠骨骼双染方法,为制作教学陈列用标本或研究胚胎正常骨骼形态发育以及胚胎骨骼畸形提供基本的实验方法.方法将18 d胎鼠及生后1 d仔鼠去除皮肤、皮下脂肪组织及内脏,用阿利新蓝染液染软骨,再用含氢氧化钾的茜素红染液染骨,最后通过逐级甘油脱水、透明并保存.结果已骨化的骨被茜素红染成红色或紫红色,软骨被阿利新蓝染成蓝色,其他组织为无色透明状,在体视镜下可清楚地观察到骨骼的发育形态.结论采用茜素红和阿利新蓝双染法,可使去除皮肤、皮下脂肪组织及内脏的整体胎鼠和仔鼠骨和软骨获得最佳染色效果,是研究骨和软骨发育较为直观的方法,也是制作教学陈列标本的好方法.%Objective To discuss the methods of rat skeleton double stain,in order to provide basic testing methods for making display samples for teaching or studying the normal skeleton morphological development and the skeletal deformity of embryos. Methods The 18 d fetal rat and filial rat 1 d after birth were removed skin,subcutaneous adipose tissue and viscera,and their cartilages were first dyed by the dye solution of Alcian blue,and then dyed by the dye solution of alizarin red containing potassium hydroxide, and finally dehydratsed by several levels of glycerin,made transparent and stored. Results The ossificated skeletons were dyed to red or amaranth by the alizarin red,the cartilages were dyed to blue by the Alcian blue,and othertissues were transparent. The development morphology of the skeleton could be clearly observed through stereoscope. Conclusion The dual dying method that adopts alizarin red Alcian blue could achieve the best dying effect on the skeletons and cartilages of complete fetal rats and filial rats whoes skins,subcutaneous adipose tissue and viscera had been removed,so it is a relatively direct method to study the development of skeletons and cartilages,and also a good method for making display samples for teaching.【总页数】3页(P153-154,157)【作者】张宏;李啸红【作者单位】遵义医学院珠海校区人体解剖与组织胚胎学教研室,广东珠海,519041;遵义医学院珠海校区人体解剖与组织胚胎学教研室,广东珠海,519041【正文语种】中文【相关文献】1.大鼠骨骼双染标本制作方法及要点 [J], 张宏;李啸红2.大鼠与家兔胎仔骨骼的批量单染和双染法 [J], 荆淑芳;吴纯启;廖明阳3.蛇类浸制标本,剥制标本和骨骼标本的制作方法 [J],4.一种高效又环保的动物骨骼标本制作方法——以猫骨骼标本为例 [J], 谈晓梅;田鑫;杜丽超;牛德彪;惠旭洁;韩若羽;郑吉昌;柳东阳;杨雪峰5.双染法在大鼠骨骼发育毒性研究中的应用 [J], 罗聪;任榕娜;胡渝华;陈新民;叶礼燕;黄隽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
神经组织染色方法的研究概况顾兵1，金建波2，李华南2，王烁宇2【摘要】摘要:神经组织染色是研究神经退行性疾病所必需的一项关键的实验技术。
但是，由于染色步骤的复杂和外界因素的干扰，时常导致染色结果的不稳定。
该文就目前国内外建立的神经组织染色方法，包括尼氏染色、神经元染色、神经胶质细胞染色、髓鞘染色、突触染色和神经纤维染色的原理、优缺点及其应用作一概述，以便指导研究者选用合适的染色方法。
【期刊名称】中国药理学通报【年(卷),期】2011(027)010【总页数】4【关键词】关键词:神经组织;染色方法;尼氏染色;铜银染色;FJ染色;髓鞘染色神经退行性疾病(neurodegenerative diseases)是由大脑或脊髓的神经元或其髓鞘的丧失所致，随着时间的推移而恶化，以导致功能障碍［1］。
采用常规染色技术，如HE染色，疾病的某些特殊病理变化难以完全准确的显现，而借助一些特殊染色可对某一特定结构改变进行选择性的浸染。
但是，由于后者染色步骤过于复杂，流程相对繁琐，受外界因素的干扰比较大，经常导致染色结果的不稳定，进而难以反映病理改变。
目前，系统介绍神经组织染色技术进展的文献甚少，使得神经病理学研究人员，尤其是初学者，难以领会各种染色方法的精髓。
根据浸染组织的不同，将神经组织染色分为尼氏染色、神经元染色、神经胶质细胞染色、髓鞘染色、突触染色和神经纤维染色6种。
本文就发展成熟的神经组织染色方法原理、优缺点及其病理学应用作一综述，并简述其在神经退行性疾病研究中的应用，旨在指导研究者选用合适的染色方法。
1 尼氏染色(Nissl staining)尼氏染色方法是德国病理学家Nissl于1892年创立，其主要根据是神经元胞体内含有大量嗜碱性的尼氏小体。
当组织与某些碱性染料(甲粉紫、甲苯胺蓝、硫堇、焦油紫等)作用时，细胞中的尼氏体能够选择性与其结合而着色。
Lindroos［2］对尼氏染色方法进行了改良，并应用于颅脑组织切片的病理研究。
大鼠皮质脊髓束Luxol Fast Blue染色
作者：吕广明，吴辉群，栗卓，刘苏，韩笑，季达峰
【摘要】目的：探讨显示大鼠皮质脊髓束的特殊染色方法。
方法：选用正常成年SD大鼠延髓和脊髓冰冻切片，应用Luxol Fast Blue 染色法进行染色。
结果：Luxol Fast Blue染色后，在延髓和脊髓切片中可见灰质呈淡红色，白质呈蓝色，延髓锥体染成深蓝色。
锥体中Luxol Fast Blue标记的深蓝色阳性纤维，经锥体交叉后至脊髓灰质后连合背侧，沿脊髓后索腹侧深层下行，至荐段后逐渐消失。
在延髓锥体和脊髓颈、胸、腰段后索中，深蓝色的Luxol Fast Blue阳性纤维边界清晰，与周围结构区分明显。
结论：运用Luxol Fast Blue 染色可清楚显示大鼠皮质脊髓束在脊髓内的定位，是一种简便可靠的皮质脊髓束形态学研究方法。
【关键词】皮质脊髓束；Luxol Fast Blue；髓鞘染色；大鼠
[Abstract] Objective: To explore the special staining method for revealing the localization of corticospinal tract in rats. Methods: Luxol Fast Blue staining method was utilized to stain the sections of medulla oblongta and spinal cord of the normal adult Sprague-Dawley rats. Results: In Luxol Fast Blue
staining sections, the gray matter of medulla oblongta and spinal cord was stained in light red, while the white matter around the gray matter was dyed in blue. The dark blue stained Luxol Fast Blue labeled fibers in the pyramid passed through the pyramidal decussation to the contralateral side, descended at the ventral part of posterior funiculus just dorsal to the gray commissure throughout most of the length of the spinal cord and progressively diminished to end at the sacral spinal segments. The Luxol Fast Blue positive fibers in the pyramid and the ventral part of posterior funiculus at cervical, thoracic, lumbar spinal segments were easily discriminated from the surrounding structures. Conclusion: Using Luxol Fast Blue staining method may demonstrate the localization and distribution of corticospinal tract in the spinal cord of rats, which is an easy and effective method in morphological study of corticospinal tract.
[Key Words] Corticospinal tract；Luxol Fast Blue；Myelin stain；Rat
长期以来，脊髓损伤后皮质脊髓束的再生修复研究一直是神经科学研究的热点。
最近有人尝试运用微电子芯片技术重建皮质脊髓束功
能[1]。
此项研究中一个关键指标就是皮质脊髓束在脊髓内定位和走行情况。
常用的组织学染色方法不能显示皮质脊髓束，本实验采用Luxol Fast Blue染色法对大鼠皮质脊髓束进行形态学研究，取得良好效果。
1 材料和方法
1.1 材料选用健康成年SD大鼠6只，清洁级，体重250~300g,雌雄不拘，由南通大学实验动物中心提供。
0.1 % Luxol Fast Blue 液（Sigma公司），Leica CM1900冰冻切片机，显微镜为Leica DMR 显微镜（Leica公司，德国）。
1.2 方法切片制备：给予大鼠复合麻醉剂（0.2 ml/100g体重），腹腔注射麻醉后开胸，穿心脏经升主动脉灌注，先用温（37℃）生理盐水200 ml冲净血液，再用预冷（4℃）的含4%多聚甲醛的磷酸盐缓冲液500 ml快速灌注固定，1 h后取脑和脊髓放入含4%多聚甲醛的PB溶液中后固定4~6 h,再移入30%蔗糖的PB溶液中4℃过夜，待组织沉底后取脑（延髓）和脊髓颈、胸、腰、荐段行连续横切面冰冻切片，切片厚度为30 μm，直接贴于预先涂有明胶的载玻片上，置室温下晾干待用。
Luxol Fast Blue 染色：（1）将切片放入乙醇∶氯仿溶液（无水乙醇和氯仿的体积比为1∶1）中5 min；（2）将切片置入 95%乙醇溶。
