生物样品的采集制备和预处理

生物样品预处理的方法一、生物样品预处理的重要性。

1.1 生物样品的复杂性。

生物样品那可是相当复杂的呀。

就拿血液来说吧，里面有各种各样的成分，像血细胞、血浆蛋白、各种离子、代谢产物等等。

这些成分混在一起就像一锅大杂烩，如果不进行预处理，想要准确分析其中特定的物质，那简直就是大海捞针，难上加难。

1.2 提高分析准确性。

预处理就像是给我们的分析工作打基础。

如果不把那些干扰的成分去除或者分离，分析仪器可能就会被误导。

比如说在检测血液中的某种药物成分时，如果血浆蛋白没有处理好，蛋白可能会包裹药物，导致检测到的药物含量比实际的少很多，这就会得出错误的结论。

所以预处理是让我们的分析结果更靠谱的关键一步。

二、常见的生物样品预处理方法。

2.1 蛋白质沉淀法。

这是一种比较简单粗暴但很有效的方法。

就像把混在沙子里的石子挑出来一样，我们通过加入一些试剂，像有机溶剂（如甲醇、乙腈）或者酸，让蛋白质沉淀下来。

这就好比给蛋白质使了个“定身术”，让它们从溶液里分离出来。

这样一来，那些被蛋白质包裹或者干扰的目标物质就能够更好地被检测到。

不过这种方法也有缺点，有时候会把一些小分子的目标物质也一起沉淀了，就像打扫卫生的时候不小心把有用的小物件也扫走了一样。

2.2 液液萃取法。

这就有点像油和水分离的感觉。

我们利用目标物质在两种互不相溶的溶剂中的溶解度差异，把目标物质从生物样品所在的溶剂中转移到另一种溶剂里。

比如说，我们要从血液的水溶液中提取一种脂溶性的药物，就可以加入一种有机溶剂，像氯仿，药物就会跑到氯仿层里，就像孩子找妈妈一样，然后我们把氯仿层分离出来，就得到了相对纯净的含有目标药物的溶液。

但是这个方法操作起来有点麻烦，就像走迷宫一样，要小心翼翼地确保每一步都准确。

2.3 固相萃取法。

这个方法可以说是比较高端大气上档次的。

我们把一种特殊的吸附剂装在一个小柱子里，然后让生物样品溶液通过这个柱子。

目标物质就像被磁石吸引一样，吸附在柱子里的吸附剂上，而那些杂质就流走了。

微生物日常工作流程
微生物实验室的日常工作流程包括样品采集、样品准备、细菌培养、菌落计数、细菌鉴定等步骤。

1. 样品采集
根据实验目的,从不同的源头采集样品,如空气、水、食物、患者等。

采集时要注意无菌操作,避免样品被外源污染。

2. 样品准备
将采集的样品进行留取、稀释等预处理,配制成适合微生物培养的状态。

3. 细菌培养
将处理后的样品接种到培养基上,置于恒温培养箱进行培养。

控制培养条件如温度、湿度等,为微生物生长创造最佳环境。

4. 菌落计数
培养结束后,观察培养皿上菌落的数量、大小、颜色等,进行定量记录。

5. 细菌鉴定
通过菌落形态特征、生化试验等方法,鉴定培养皿上生长的细菌属种。

6. 数据记录
将实验过程和结果详细记录,以便后期分析。

以上是微生物实验室的基本日常工作流程。

根据不同实验目的,流程中可能还包括抗生素敏感性测试、致病性检测等步骤。

样品预处理4.1.5.1准备工作若必要时将冷冻样在冰箱（-2-4C）中放置过夜，使部分解冻以便切片。

用合成洗涤剂清洗塑料刀、碟、镊子、塑料板及尺和称重塑料膜，用蒸馏水或清洁海水漂洗干净。

工作台用洗净的塑料膜罩上。

用合成洗涤剂(4.1.2-2)仔细地洗手，后用蒸馏水或漂洗干净。

PF一胸鳍；DF一脊鳍，虚线表示刀切位置图3鱼体简图中小型鱼样制备4.1.5.4.1单个体样品：测量鱼的叉长，并于聚乙烯称样膜上称重。

记下叉长和体重。

用蒸馏水或清洁表层海水（4.1.2.1)洗涤鱼样，将它放在工作台上，用塑料刀切除胸鳍并切开背鳍附近自头至尾部的鱼皮（图3),在鳃附近和尾部，横过鱼体各切一刀；在腹部，鳃和尾部两侧各切一刀。

四刀只切在鱼体一侧，且不得切太深，以免切开内脏，沾污肉片。

最好在切片时，由另一人帮助按住鱼的头尾。

用镊子将鱼皮与肉片分离，谨防外表皮沾污肉片。

用另一把塑料刀将肌肉与脊椎分离，并用镊子取下肌肉。

将组织盛于塑料容器中，称重并记录重量。

若一侧的肌肉量不能满足分析用量，取另一侧肌肉补充。

盖紧容器，贴上标签或记号，记录各所有数据，于低温冰箱中保存。

鉴定性腺性别。

4.1.5.4.2多个体试样：制备方法如下。

仔细记下各个体体长、鲜重、肌肉重。

鉴定性别。

个体数不应少于6个，且性别应相同，大小相近。

用匀浆器匀化鱼组织，将匀浆转入已知重量的塑料容器中，盖紧，贴上标签并称重，记下匀浆重和其他数据。

置于低温冰箱中存放。

干样制备将部分新鲜试样按4.1.6.1或4.1.6.2步骤烘干，计算干／湿比，以校正水分含量。

干燥后的样品用玛脑研钵磨碎，全部筛过80-100目（尼龙筛），供痕量元素分析用。

4.1．6干重测定41.6.1烘干半开称量瓶的磨口盖，放入105℃烘箱中。

2h后，取出称量瓶，置于干燥器中冷却30min. 盖好瓶盖，用分析天平称重，记下重量。

取5^10g生物制备样（4.1.5)于称量瓶中，盖好瓶盖，再称重（士0.5mg）并记下重量。

第二章生物样品的制备§2. 1 生物分析化学分析对象的复杂性生物样品往往是一种具有高度复杂性的体系，这种复杂性表现在组成、含量、动力学范围、时空依存性等各个方面，这使得生物样品的处理有很大的难度。

因此，与经典分析化学的样品制备相比，生物分析化学的样品制备有以下特点：（1）生物样品的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物。

如人类血浆蛋白质组学的阶段性研究结果表明，正常人血浆中的蛋白质至2005 年时已鉴定了3020 种。

有的生物分子在分离过程中还在不断的代谢，所以生物分子的分离纯化方法差别极大，想找到一种适合各种生物大分子分离制备的标准方法是很困难的。

（2）许多生物分子在生物材料中的含量极微，只有万分之一、几十万分之一，甚至几百万分之一。

分离纯化的步骤繁多，流程长，有的目的产物要经过十几步、几十步的操作才能达到所需纯度的要求。

（3）生物分子往往有很宽的动力学浓度范围。

如不同的蛋白质在细胞内的浓度分布范围相差106〜1010倍，而同一种蛋白质在不同的生理或病理状态下浓度相差有时也很大。

（4）许多生物分子一旦离开了生物体内的环境时就极易失活，因此分离过程中如何防止其失活，就是生物分子提取制备最困难之处。

过酸、过碱、高温、剧烈的搅拌、强辐射及本身的自溶等都会使生物大分子变性而失活。

（5）生物分子的分离和制备几乎都是在溶液中进行的，很难准确估计和判断温度、pH 值、离子强度等各种参数对溶液中各种成分的综合影响，因而实验结果常常带有很大的经验成份，实验的重复性较差，分析仪器、分析方法学、乃至个人的实验技术水平和经验对实验结果会有较大的影响。

制备生物分子的基本原则是：以尽可能少的步骤、尽可能短的时间，获得尽可能多的目标产品。

通常包括以下步骤：①确定要制备的生物分子的目的和要求；②通过文献调研和预备性实验，掌握目标产物的物理、化学以及生物学性质；③生物材料的破碎和预处理；④分离纯化方案的选择和探索；⑤选择相应的、可靠的分析技术，建立鉴定生物分子制备物的均一性（即纯度）的方法；⑥产物的浓缩、干燥和保存。