全骨髓法培养大鼠骨髓间充质干细胞及其生物学特性【摘要】目的建立一种简便有效的体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(MSC) 的方法，研究MSC的生物学特性。
方法贴壁培养法分离纯化大鼠MSC，体外培养和连续传代, 在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化；利用四唑盐比色（MTT）法测定MSC的生长曲线；流式细胞仪（FCM）鉴定MSC膜抗原。
结果原代分离的MSC在接种后48 h贴壁,细胞形态为椭圆形、多角形及短梭形,12天时细胞呈长梭形并达到90%单层融合。
经传代扩增,细胞进一步纯化。
细胞传代后2天内处于潜伏期, 3天后进入生长期,7天后进入平台期。
论文百事通FCM检测CD45、CD90阳性率分别为19.60%、95.38%。
结论贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSC,用此方法培养的细胞生长稳定,增殖能力活跃,具有MSC的一般生物学特性,为其成为组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持。
【关键词】间充质干细胞;骨髓;贴壁法分离培养Abstract:Objective To establish a simple and effective method of isolation, purification and cultivation of rat bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSC) in vitro, and explore their biologicalcharacteristics.Methods MSC were isolated and purified for culture in vitro and serial passage by the attachment culture method. The morphological changes of the MSC were continuously observed under the inverted microscope. The cell growth curve was measured by MTT method, and membrane antigens were detected with flow cytometry (FCM).Results The MSC in primary culture which were adhered to plastic surface within 48 h after displacement took the oval, asteroid, short and fusiform shapes. 12 days after culture in DMEM-F12 medium containing 10% FBS, the cells reached 90% confluence in single layers, taking a long and fusiform shape. Further purification was achieved by expansion at serial passages. MSC were in latency for 2 days, converted into growth period on the 3rd day and entered the stationary phase on the 7 th day. FCM results indicated that the positive rate of CD45 and CD90 was 19.60% and 95.38%, respectively.Conclusion The attachment culture method can be effectively used to isolate and purify rat MSC. The cultured MSC are stable in growth with active proliferation and share the general biological characteristics of MSC, which will further make them ideal seed cells for tissue engineering.Key words: mesenchymal stem cells; bone marrow; attachment culture骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC) 是骨髓内除造血干细胞外另一种具有多向分化潜能的成体干细胞，在特定的条件下能分化为多种组织细胞，如成骨细胞、软骨细胞、肌腱、脂肪细胞、成纤维细胞及神经星状细胞等，且具有极强的自我修复能力。
大鼠骨髓基质干细胞在与成骨细胞共育环境下的成骨特性【摘要】目的在与成骨细胞(OB)共培育的条件下，观看大鼠骨髓基质干细胞(MSCs)的成骨特性。
方式取自3月龄大鼠骨髓分离MSCs，扩增后以避免疫组化法鉴定其表型，OB取自1日龄乳鼠，酶消化法取得。
传代后的MSCs消化后分为MSCs/OB共培育组与一般培育组，观看MSCs的形态学转变及矿化能力，20 d后半定量RT PCR方式检测两组骨钙素的表达，茜素红染色后显微镜下计数钙化结节。
结果共培育组的MSCs形成的钙化结节数高于一般培育组(P<;共培育组的MSCs，其细胞内骨钙素表达量明显高于一般培育组(P<。
结论与OB共培育的MSCs成骨能力增强。
【关键词】骨髓基质干细胞;成骨细胞;共培育老年性骨质疏松是一种退行性病变，其病理基础是由破骨细胞引发的“骨吸收”大于成骨细胞(OB)引发的“骨形成”。
OB来源于多潜能骨髓基质干细胞(MSCs)，既往研究偏向于研究MSCs向OB分化，和分化进程中的阻碍条件，关于OB对MSCs分化的阻碍的研究较少，因此，本研究设计并成立了MSCs/OB共培育模型，并观看OB对MSCs分化的阻碍。
1 材料与方式材料 3月龄SPF级SD大鼠6只(购自广州中医药大学动物实验中心，动物合格证号：0025183)，1日龄之内清洁级SD乳鼠10只(购自中山大学动物实验中心，动物合格证号：0023787)。
双层细胞培育板，一般细胞培育板(Corning)，DMEM(Gibco)，胎牛血清 (杭州四季青)，淋巴细胞分离液 g/ml, 天津TBD公司)，乙二胺四乙酸(EDTA)、胰蛋白酶，Rna酶(Sigma)。
Trizol试剂盒(R&D)。
GAPDH 正链：5′GTGGAGGAGCTCTTCAGGGA3′，反链：5′AGGCACCCAGGGTGATGCAA3′;骨钙素正链：5′GCCCTCTCCAAGACATATA3′，反链：5′CCATGATCACGTCGATATCC 3′。
