一、步骤
1. 在离心管中加入适量淋巴细胞分离液。
2. 取肝素抗凝静脉血与等量Hank‘s液或RPMI1640 充分混 匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清 楚的界面,水平离心2000rpm×20分钟。
3. 离心后管内分为三层,上层为血浆和Hank‘s液,下层主 要为红细胞和粒细胞,中层为淋巴细胞分离液,在上、 中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层狭窄带 ,单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。此外,还含有 血小板。
Ø 分离、纯化样品; Ø 对已纯化的样品进行结构和性质的分析。
.
2
一、离心的一般原理
颗 颗粒的密度、形状、大小
粒
运 液体介质的密度、粘度和重力场
动
的 的强度
方
向 悬浮颗粒在液体介质的扩散运动
和
速
颗粒越小,则沉降越慢,
度
扩散. 现象越严重。
3
1、离心力和相对离心力
离心力(centrifugal force,F)
.
9
离心机的构造
†转头 †驱动装置 †速度控制系统 †冷却装置 †真空装置 †光学检测系统
preparative
ultracentrifuge
.
10
离 心 转 头
a 水平转头
b 角式转头 c 垂直转头
角度在14-40℃ 之间
.
11
实验中常用的是普通离心机(转速一般 不高于4000rpm),用于分离血清和 沉淀细胞、大的沉淀物等。
等特性的影响。
†预计沉降时间;
†测定物质相对分. 子质量。
6
3、沉降速度(sedimentation velocity, v)
沉降速度是指在离心力作用下,单位 时间内颗粒沉降的距离。