不同DNA提取法对腺病毒和细小病毒PCR检测效果评估

PCR试验结果疫苗免疫效果评估PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，可用于检测DNA序列的存在与否，以及定量分析DNA的含量。

在研究疫苗免疫效果时，PCR试验结果是评估疫苗应答的关键指标之一。

本文将从PCR试验结果的相关理论、实验方法和结果解读等方面，对疫苗免疫效果进行评估。

一、PCR试验结果的相关理论PCR试验是通过酶切DNA的方式在试管中扩增目标DNA序列，其重要理论基础是DNA的双链结构和DNA聚合酶的作用。

DNA由两条互补的链组成，通过控制温度使其解离得到单链模板，然后在较低温度条件下通过加入合适的引物和DNA聚合酶进行扩增，最终得到目标DNA的大量拷贝。

二、PCR试验的实验方法1. 样本收集和提取DNA将与疫苗免疫相关的生物样本（如血液、唾液等）采集，然后使用DNA提取试剂盒或其他方法提取样本中的DNA。

提取的DNA需具备一定的纯度和浓度，以确保PCR反应的准确性和灵敏性。

2. 引物设计和合成根据研究需求和目标DNA序列的特征，设计合适的引物。

引物应能够特异性地结合目标DNA，避免与其他非目标序列的DNA结合。

引物的设计应考虑到其碱基组成、长度和熔解温度等因素。

设计好引物后，可通过合成公司或实验室自行合成。

3. PCR反应体系的构建根据PCR试剂的要求，将DNA样本、引物、DNA聚合酶、缓冲液等试剂按照一定比例混合制备反应混合液。

反应体系的构建应确保各组分充分混合且无污染。

4. PCR反应的条件设置和扩增程序PCR反应的条件设置是保证反应的可靠性和稳定性的关键。

包括反应体系的温度、时间和周期等参数。

常见的PCR程序包括：预变性、变性、退火、扩增等步骤。

反应体系的温度和时间应根据目标所需扩增的DNA片段的长度和碱基组成等因素进行优化。

5. PCR产物的检测和分析反应结束后，通过凝胶电泳、荧光检测等方法检测PCR产物。

凝胶电泳可用于评估扩增效果和目标PCR产物的大小。

荧光检测则可用于定量PCR产物的浓度。

乙肝病毒DNA检测2种不同核酸提取方法的性能验证情况分析董剑;许小华【摘要】目的:对乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测的2种不同核酸提取方法,即手工法(煮沸法)和全自动核酸提取仪法(磁珠法),在使用相同的检测试剂和核酸扩增仪的条件下进行性能验证,以评价其验证结果.方法:依据《医学实验室质量和能力认可准则》《全国临床检验操作规程》等相关文件,由同一操作人员应用中山达安公司生产的HBV-DNA检测试剂盒和ABI7500实时荧光核酸扩增仪,分别采用手工法和全自动核酸提取仪法提取HBV-DNA进行临床样本的批内精密度、批间精密度、正确度、线性范围性能验证实验.结果:手工法的高值血清批内精密度为2.18％,低值血清批内精密度为3.76％;高值质控品批间精密度为3.29％.全自动核酸提取仪法的高值血清批内精密度为1.78％,低值血清批内精密度为2.44％;高值质控品批间精密度为2.84％.正确度验证分别取浓度为2.0×103、2.0×104、2.0×105、2.0×106copies/ml的可溯源标准品进行验证,手工法偏倚分别为-4.88％、-2.51％、-2.46％,-2.12％,全自动核酸提取仪法偏倚分别为-2.37％、-0.95％、0.74％、-1.33％.线性范围验证中,手工法和全自动核酸提取仪法的相关系数分别为0.9660、0.985 8,均能满足临床检测的需求.结论:全自动核酸提取仪法较手工法提取核酸有利于简化HBV-DNA提取流程,实现分子生物实验室自动化提取核酸.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2019(040)006【总页数】4页(P40-43)【关键词】乙型肝炎病毒DNA定量检测;手工(煮沸法);全自动核酸提取仪法(磁珠法);性能验证;血清【作者】董剑;许小华【作者单位】联勤保障部队第909医院检验科,厦门大学附属东南医院检验科,福建漳州363000;联勤保障部队第909医院检验科,厦门大学附属东南医院检验科,福建漳州363000【正文语种】中文【中图分类】R318;R446.10 引言乙型肝炎也被称为乙肝，是目前世界上最常见的一类传染病，据不完全统计[1] ，在全世界范围每年至少有100万以上的患者死于乙肝。

小麦基因组DNA提取方法比较研究王小利【摘要】This paper introduces 4 methods of wheat DNA extraction. The DNA concentration and quality are compared by using agarose gel electrophoresis and protein nucteic acid analyzer. Experimental results show that there is somewhat difference in DNA concentration between the 4 methods. The DNA concentration in Program I is the highest, but the consumption of reagent is the most. The DNA concentration of Program 11 is the lowest, but the process is simple. The extracted DNA concentrat ions are equivalent to Programs Ⅲ and IV. There is protein pollution in Program Ⅲ, but the process is simple. The purity of Program IV is higher than others, but the process is the most complex, Using the same pair of primers and the reaction system, the extracted DNA is amplified by PCR. The results show that the 4 methods all can meet the requirement of molecular marker detection.%用4种方法对小麦基因组DNA 进行提取,采用琼脂糖凝胶电泳法和核酸蛋白分析仪比较DNA的浓度和质量,结果显示,4种DNA提取方法在DNA浓度上有所差别,方法一所提取的DNA浓度最高,但消耗试剂最多；方法二所提取的DNA浓度最低,有蛋白质污染,但过程简单；方法三和方法四所提取的DNA浓度相当,方法三有蛋白质污染,过程简单,方法四纯度高,过程最复杂.采用同一对引物和反应体系对所提取的DNA进行PCR扩增,结果显示4种方法所提取的基因组DNA均能满足分子标记检测的需要.【期刊名称】《实验技术与管理》【年(卷),期】2012(029)010【总页数】4页(P39-42)【关键词】小麦;DNA提取;方法比较【作者】王小利【作者单位】西北农林科技大学农学院,陕西杨凌 71210【正文语种】中文【中图分类】S512.1Abstract：This paper introduces 4methods of wheat DNA extraction.The DNA concentration and quality are compared by using agarose gel electrophoresis and protein nucteic acid analyzer.Experimental results show that there is somewhat difference in DNA concentration between the 4methods.The DNA concentration in Program I is the highest，but the consumption of reagent is the most.The DNA concentration ofProgramⅡis the lowest，but the process is simple.The extracted DNA concentrations are equivalent to ProgramsⅢandⅣ.There is p rotein pollution in ProgramⅢ，but the process is simple.The purity of ProgramⅣis higher than others，but the process is the most complex，Using the same pair of primers and the reaction system，the extracted DNA is amplified by PCR.The results show that the 4methods all can meet the requirement of molecular marker detection.Key words：wheat；DNA extraction；comparison of methods小麦基因组DNA提取是小麦分子标记选择和基因工程育种中最重要、最基本的操作。

多重PCR技术检测儿童呼吸道病原的结果分析及临床应用价值评估多重PCR技术检测儿童呼吸道病原的结果分析及临床应用价值评估引言儿童呼吸道感染是儿科常见的疾病之一，通常由各种病原体引起，包括病毒、细菌和真菌等。

传统的病原体检测方法存在一些缺陷，如操作繁琐、耗时、灵敏度低等。

然而，多重聚合酶链反应（PCR）技术的出现，为儿童呼吸道病原体的检测带来了新的希望。

本文将对多重PCR技术在儿童呼吸道感染中的结果进行分析，并评估其在临床应用中的价值。

多重PCR技术的原理和优势多重PCR技术是一种通过同时引入多个引物，并将其与多个病原体的DNA进行增幅的方法。

相比传统的单一PCR技术，多重PCR技术具有以下几个优势：1. 高度敏感性：多重PCR技术能够同时检测多种病原体，提高了检测的灵敏度。

这对于儿童呼吸道感染而言尤为重要，因为病原体常常多样化，需要检测多个目标才能准确诊断病情。

2. 高效性：多重PCR技术可以在短时间内完成多个目标的检测，大大缩短了检测过程。

这对于儿科医生而言尤为重要，因为他们常常需要尽快获得检测结果，以便进行及时的治疗和干预。

3. 多样性：多重PCR技术可以同时检测多种病原体，包括病毒、细菌和真菌等。

这对于儿童呼吸道感染的诊断和治疗尤为重要，因为病原体的多样性导致病情的复杂性。

多重PCR技术在儿童呼吸道感染中的结果分析针对儿童呼吸道感染，我们进行了一项研究，使用多重PCR技术对100名患有儿童呼吸道感染的儿童进行了病原体检测。

我们将多重PCR技术的结果与传统的病原体检测方法进行了对比，并分析了两种方法的结果一致性和差异性。

结果显示，在100例儿童中，使用多重PCR技术检测到的病原体阳性率为85%，而使用传统的病原体检测方法检测到的阳性率仅为65%。

这说明多重PCR技术具有更高的灵敏度，在儿童呼吸道感染的病原体检测中表现出更好的性能。

此外，我们还发现使用多重PCR技术可以同时检测到多种病原体，而传统的病原体检测方法通常只能检测到单一的病原体。

pcr技术在病原生物鉴定中的应用实验报告PCR技术，在分子生物学研究和临床医学中有着广泛的应用。

PCR通过利用酶在体外合成一条特定DNA序列，从而扩增目标DNA。

PCR技术在病原生物鉴定中特别有用，因为许多病原体的数量太少，不易被传统培养方法检测出来。

本实验报告将描述PCR技术在病原生物鉴定中的应用。

材料和方法材料：1.病原菌：分别收集大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、肺炎支原体和结核分枝杆菌的菌株。

2. PCR试剂盒：包括PCR模板DNA（菌落），PCR反应缓冲液，聚合酶，dNTPs（脱氧核酸三磷酸），MgCl2，PCR引物，溶剂等。

3. 电泳仪：含有10％（w/v）聚丙烯酰胺和TBE缓冲液的平板，以及Agarose凝胶，乙溴化物（EB）等。

方法：1.从培养基上挑出适当的菌落，用管涂器转移到已添加生理盐水的96孔板中。

标记菌株。

抖动并在37℃下催化24小时。

2.收集菌株，将其离心，将细胞沉淀加入200μl 的 Tris-EDTA （TE）缓冲液，用超声波压碎。

使菌株的DNA完全释放，可用乙醇沉淀法纯化DNA。

3.设置PCR反应环境：将PCR反应管中加入20μl PCR反应缓冲液，2μl PCR模板DNA，1μl MgCl2溶液，0.5μl聚合酶（Taq酶），0.5μl PCR 引物，4μl dNTPs，72μl 的水。

混合物在PCR热循环器中按照以下条件扩增目标DNA：先以95℃处理2分钟进行热变性，其次以94℃56秒脱氧，然后以50℃45秒回收，之后以72℃1.5分钟延长扩增。

4.扩增完成后，取出反应体积2μl用于电泳分析，将其与DNA分子量标准品一起电泳于聚丙烯酰胺凝胶上，之后通过紫外线扫描进行可视化。

结果PCR为常用的病原体鉴定方法，以下是病原菌的PCRF结果。

表格一：病原菌的PCR结果菌株名称PCR扩增的目标片段（bp）大肠杆菌640沙门氏菌258金黄色葡萄球菌 583肺炎支原体235结核分枝杆菌386通过对扩增的目标DNA的大小范围进行分析，可以准确确定菌株的种类和数量。

《多重PCR技术检测儿童呼吸道病原的结果分析及临床应用价值评估》篇一一、引言儿童呼吸道疾病是临床常见病之一，其发病原因多与病毒感染、细菌感染及混合感染有关。

为了更有效地诊断和治疗儿童呼吸道疾病，准确的病原学检测显得尤为重要。

近年来，多重PCR 技术作为分子生物学领域的突破性技术，已被广泛应用于临床病原检测。

本文旨在分析多重PCR技术在儿童呼吸道病原检测中的应用效果及临床价值。

二、方法1. 实验设计本研究选取了某医院近一年内收治的儿童呼吸道疾病患者作为研究对象，采用多重PCR技术对呼吸道病原进行检测。

同时，为确保检测结果的准确性，对比了常规培养法和传统PCR法进行数据对比分析。

2. 多重PCR技术介绍多重PCR技术是一种同时扩增多个DNA片段的聚合酶链式反应（PCR）技术。

通过特定的引物设计，一次PCR反应可同时检测多种病原体的存在。

三、结果分析1. 病原检测结果通过对儿童呼吸道标本进行多重PCR检测，成功检测出多种病原体的存在，包括但不限于流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等。

与常规培养法和传统PCR法相比，多重PCR技术具有更高的灵敏度和准确性。

2. 不同病原体的分布特点根据检测结果，不同季节、不同年龄段的儿童呼吸道疾病患者中，主要病原体的分布特点存在差异。

例如，流感病毒在冬季更为常见，而呼吸道合胞病毒在幼儿中更为常见。

3. 混合感染情况分析在部分患者中，存在多种病原体混合感染的情况。

多重PCR 技术能够同时检测出多种病原体，为临床医生提供了更全面的诊断信息，有助于制定更有效的治疗方案。

四、临床应用价值评估1. 提高诊断准确性多重PCR技术具有较高的灵敏度和准确性，能够更准确地检测出儿童呼吸道病原体的存在，从而提高诊断的准确性。

这有助于医生制定更有效的治疗方案，减少误诊和漏诊的发生。

2. 指导临床治疗通过多重PCR技术检测出的多种病原体信息，医生可以更全面地了解患者的病情，从而制定个性化的治疗方案。

试验室啮齿目动物的小鼠细小病毒感染疾病的诊疗防治小鼠细小病毒（Murineminutevirus，MMV）具有高度的传染性，广泛存在于实验小鼠和野生小鼠群之中。

在大多数普通级小鼠群中呈地方性流行。

Crawford（1966）从小鼠腺病毒的种毒中首次分离出MMV。

之后，Parker等（1970）从40日龄Swiss小鼠的肾组织、被污染的白血病病毒种毒和可移植的肿瘤中分离到多株MMV。

1976年Bonnard等从可移植的小鼠淋巴瘤中分离到MMV。

Nettleton等（1980）从污染的牛血清中也分离到MMV。

细小病毒属的有些细小病毒能独立增殖，叫作自主细小病毒；有些只在腺病毒存在的情况下才能增殖，被称为腺联细小病毒。

还没有发现腺联细小病毒有致病性，但自主细小病毒可引起许多重要的疾病。

MMV属自主性细小病毒。

MMV感染小鼠后，通常无明显的临床症状，但在涉及免疫系统、肿瘤和移植的实验中，感染有MMV的实验小鼠会严重影响实验数据的准确性和可信性。

此外，MMV 也极易污染啮齿类细胞系和生物原材料，其中，中国仓鼠卵巢细胞（CHO）和叙利亚仓鼠肾细胞（BHK21）是MMV的易感细胞，它们一旦被MMV污染，将会对生物技术产品造成巨大的经济损失。

近年来，MMV检测已成为国外重组CHO细胞产品外源病毒检测的项目之一，也是重组产品病毒清除/灭活工艺验证的一个重要的指示病毒。

国家标准《GB14922.2—2011实验动物微生物学等级及监测》中规定，MMV是清洁级、SPF级实验小鼠的必检项目。

然而，MMV对肝癌、胃癌、肺癌、肉瘤等多种肿瘤具有明显的杀伤作用，目前欧洲、美国等地正在集中精力深入研究MMV的抗癌机理，以便为肿瘤的防制和癌症的治疗开辟新的途径。

病原MMV在分类上属于细小病毒科、细小病毒属。

它只有1个血清型。

传统的毒株主要包括Crawford株、890株和C2-7株。

Crawford株就是Crawford（1966）从小鼠腺病毒的种毒中首次分离出的MMV毒株。

小鼠感染细小病毒的临床特征分析潘金春;罗银珠;吴瑞可;王静;袁文;何丽芳;黄碧洪;张钰【摘要】Objective To analyze the tissue distribution, viral excretion and serological antibody in BALB/c mice artificially infected with minute virusof mice ( MVM) , and the natural infection status in mice. Methods Thirty-three SPF male 3?week old BALB/c mice were intraperitoneally injected with 0. 2 mL of MVM in 1. 2 × 107 copies/μL concentra?tion. The general status of the animals was observed daily post inoculation. The animals' tissue,faeces and serum samples were taken at 12 time points before and after inoculation (2-3 animals at each time point). QPCR method was used to de?tect the viral nucleic acid in tissues and feces, and the serological antibody against MVM was tested by ELISA. Meanwhile, other clinical samples of 1563 SPF mice and 158 mice in open housing were collected for testing the viral nucleic acid and antibody. Result There were no clinical symptoms and pathological changes among all infected mice. The viral loads of each tissue reached the peak at 4 d or 7 d post inoculation, and then were generally on a declining curve, but were still found at 60 d. Comparing the viral load in tissues showed that the highest tissue was liver, followed by kidney, spleen, stomach, heart, lung, cecum and brain. The viral loads in feces reached the peak at 11 d, and then dropped rapidly, but could be still detected at 60 d. The antibody could be detected at 7 d, and then gradually raised. The antibody dilution de?grees reached 32 at 21 d, and maintained high levels with 16 to 128 during 32 d to 60 d. In theclinical samples, the nu?cleic acid tests were negative in SPF mice, however, a positive rate of 14. 5% was found in mice in open housing. Mean?while, the antibodies of MVM showed a low positive rate in SPF mice, and the positive rate was 68. 3% in the mice in open housing. Conclusions The mice generally present occult infection after inoculation of MVM. However, the infected mice can shed virus in a long period, and viral loads of tissues and serological antibody can be maintained for a long time. Thus, MVM can be detected by testing viral nucleic acid and serological antibody.%目的分析小鼠细小病毒(MVM)在人工感染小鼠体内的分布规律、排毒和抗体变化,以及自然条件下小鼠感染MVM的情况.方法对33只BALB/c小鼠腹腔接种0.2 mL MVM悬浮液,每天观察动物的外观、行为、饮食和精神状态,在接种第0~60天共12个时间点各对2~3只动物进行安乐死,并采取组织、粪便和血清样本进行检测.荧光定量PCR(QPCR)方法检测组织和粪便的病毒核酸,ELISA方法检测血清抗体.同时,采取100只SPF小鼠、76只开放饲养小鼠检测MVM核酸,采取1463只SPF 小鼠、82只开放饲养小鼠检测MVM抗体.结果实验小鼠接种MVM后外观、行为、饮食和精神状态未见异常,剖检无明显病变.各组织在接种后都能检出病毒核酸,并在接种后4~7 d达到峰值,且到60 d仍可检出病毒核酸.各组织间比较,病毒峰值最高的组织是肝,其次是肾、脾、胃、心脏、肺、盲肠和脑.粪便排毒在接种后11 d 可达到峰值,之后迅速下降,但到60 d还可检到.血清抗体在病毒接种后7 d开始产生,之后抗体效价逐渐升高,21 d就可以达到32倍左右,之后至60 d一直处于64倍左右.临床样本中,核酸检测SPF小鼠未检出,开放饲养小鼠的检测阳性率为14.5%,经过测序比较确认为MVM病毒感染;抗体检测SPF小鼠有较低的检出率(0.3%),开放饲养小鼠检出率为68.3%.结论MVM感染小鼠后一般呈隐性感染状态,可长期排毒,主要组织脏器、粪便、血清都能用于MVM的检测,实验小鼠感染MVM可以通过病毒核酸和血清抗体检测方法进行病原检测.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2017(025)001【总页数】6页(P64-69)【关键词】小鼠细小病毒;人工感染;自然感染;临床特征【作者】潘金春;罗银珠;吴瑞可;王静;袁文;何丽芳;黄碧洪;张钰【作者单位】广东省实验动物监测所,广州 510663;广东省实验动物重点实验室,广州 510663;广东省实验动物监测所,广州 510663;广东省实验动物重点实验室,广州510663;广东省实验动物监测所,广州 510663;广东省实验动物重点实验室,广州510663;广东省实验动物监测所,广州 510663;广东省实验动物重点实验室,广州510663;广东省实验动物监测所,广州 510663;广东省实验动物重点实验室,广州510663;广东省实验动物监测所,广州 510663;广东省实验动物重点实验室,广州510663;广东省实验动物监测所,广州 510663;广东省实验动物重点实验室,广州510663;广东省实验动物监测所,广州 510663;广东省实验动物重点实验室,广州510663【正文语种】中文【中图分类】Q95-33细小病毒按其是否能够自主增殖分为腺联病毒和自主性细小病毒，其中小鼠细小病毒(minute virus of mice，MVM)就是一种自主性细小病毒，最初由Crawford从被污染的小鼠腺病毒种毒中首次分离[1]，后来又相继从实验小鼠和野生小鼠从分离到该病毒。

532024.4·试验研究0 引言猪圆环病毒（PCV ）是Circoviridae 科Circovirus 属的一种无囊膜的单链环状DNA 病毒。

在已知的4个血清型中，PCV2为猪易感的致病性病毒[1]。

PCV2感染会诱导宿主免疫抑制引起猪圆环病毒病（PCVD ），包括断奶仔猪多系统衰竭综合征、新生仔猪先天性脑震颤、皮炎与肾病综合征、猪呼吸道病综合征、母猪繁殖障碍等，给全世界养猪业带来较大的经济损失，是世界各国的兽医与养猪业者公认的造成重大影响的猪传染病[2]。

PCV2的感染在猪生长发育的不同阶段有不同的组织嗜性。

但无论是胎儿阶段还是出生后，肝细胞都是PCV2感染和复制的靶细胞。

因此，PCV2也被视为一种能够诱导猪肝炎的病毒[3]。

且PCV2诱导的肝细胞凋亡在PCV2引发的相关病变和疾病的发病机制中具有关键性作用[4]。

因此，方便、快捷地获取大量有活性的猪肝细胞对于研究PCVD 的致病机制具有重大意义。

目前获取肝细胞常用的方法主要包括机械分离细胞法、非酶分离细胞法、离体酶消化法和酶灌流法等[5]。

因此，本试验采用简便、经济、无需特殊设备、仅需部分肝组织的离体酶消化法，比较不同酶消化分离猪原代肝细胞的效果，为一般实验室提取分离大量有活性的猪肝细胞提供参考。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 主要试剂新鲜猪肝组织，Hank's 平衡盐溶液（HBSS ），磷酸盐缓冲液（无菌PBS ），4%多聚甲醛（PFA ），收稿日期：2024-01-27基金项目：国家自然科学基金项目：复杂器官与组织在脾脏内的功能性再生（32230056）作者简介：周徐倩（1999-），女，汉族，浙江温州人，硕士在读，研究方向：组织工程与再生医学。

*通信作者简介：董磊（1978-），男，汉族，安徽阜阳人，博士，教授，研究方向：组织工程与再生医学、生物材料。

周徐倩，董磊．不同酶消化法提取猪原代肝细胞的效果比较[J]．现代畜牧科技，2024，107（4）：53-55．　doi ：10.19369/ki.2095-9737.2024.04.014．　ZHOU Xuqian ，DONG Lei ．Comparison of the Effect of Different Enzyme Digestion Methods on Extraction of Porcine Primary Hepatocytes[J]．Modern Animal Husbandry Science & Technology ，2024，107（4）：53-55．不同酶消化法提取猪原代肝细胞的效果比较周徐倩，董磊*（南京大学，江苏 南京 210023）摘要：猪肝细胞是猪圆环病毒的靶细胞，简单快速地提取猪原代肝细胞对于研究猪圆环病毒病的致病机制具有重要意义。

PCR试验结果解读诊断准确性评估PCR（聚合酶链反应）是一种强大的分子生物学技术，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

在新型冠状病毒（COVID-19）疫情肆虐的当下，PCR试验成为了检测感染者的主要手段之一。

然而，PCR试验结果解读对于诊断准确性的评估至关重要，本文将对此进行探讨。

一、PCR试验原理在深入研究PCR试验结果的解读前，有必要先了解PCR的原理。

PCR试验是通过不断复制目标DNA序列，以使其浓度显著增加，从而能够检测到极微量的DNA。

PCR试验主要由三个基本步骤构成：变性、退火和扩增。

通过这些步骤，PCR试验可以在短时间内复制出数百万甚至数十亿个目标DNA分子。

二、PCR试验结果解读PCR试验结果的解读需要根据具体的目标基因或DNA序列来进行评估。

在COVID-19检测中，常用的目标基因是SARS-CoV-2病毒的核酸序列。

PCR试验结果一般会显示PCR反应体系中是否存在目标DNA序列，并且可以根据信号的强弱来判断病毒的感染程度。

正常情况下，PCR试验结果应该为阴性，即未检测到目标DNA序列。

这意味着被检测者未被感染。

而如果PCR试验结果为阳性，即检测到目标DNA序列，则意味着被检测者存在感染。

然而，需要注意的是，低浓度的目标DNA序列可能会导致PCR试验结果为假阳性。

因此，在解读PCR试验结果时，需要结合临床症状和其他检测结果进行综合分析。

三、PCR试验结果解读的误差尽管PCR试验是一种高度敏感和特异的检测方法，但仍然存在一定的误差。

这些误差可能源于多个方面，包括实验条件、操作技巧、试剂质量和样本质量等。

因此，在进行PCR试验结果解读时，需要考虑这些误差的影响。

一种常见的误差是假阴性结果，即未能检测到实际存在的目标DNA序列。

这可能是由于样本中目标DNA序列的浓度过低、反应条件不理想或操作技巧不当等原因导致的。

此外，PCR试验结果也受到实验设备和试剂的质量影响。

因此，为了提高准确性，需要严格控制实验条件，使用高质量的试剂和设备。

不同取材方法及检测技术在重症肺炎病原学诊断中的应用刘龙群;唐敏;张维维;吴可人;杨艳【期刊名称】《黑龙江医学》【年(卷),期】2024(48)3【摘要】目的:不同取材方法标本的合格率、不同微生物检测技术结果阳性率有差异,探究不同取材方法及检测技术在重症肺炎病原学诊断中的应用,以期提高病原学诊断的准确性。

方法:回顾性分析2018年1月—2020年12月中国人民解放军联勤保障部队第九〇四医院收治的123例重症肺炎患者的临床资料,同时收集患者经鼻或气管插管留痰培养、肺泡灌洗液培养、肺泡灌洗液宏基因组二代测序技术(mNGS)病原检测等数据,对标本的合格率及阳性率进行分析。

结果:123例患者中经鼻或者气管插管留痰标本合格率70%、病原菌生长41例(33.3%),肺泡灌洗液标本合格率92%、病原菌生长76例(61.8%)、肺泡灌洗液mNGS病原菌核酸片段检出107例(86.9%)。

经抗感染、抗休克、器官支持等治疗后,115例患者治愈出院,8例死亡。

结论:肺泡灌洗液mNGS可以提高重症肺炎患者病原诊断阳性率,可为临床治疗提供依据。

【总页数】3页(P271-273)【作者】刘龙群;唐敏;张维维;吴可人;杨艳【作者单位】中国人民解放军联勤保障部队第九〇四医院呼吸内科【正文语种】中文【中图分类】R725.6【相关文献】1.盲式取材技术在呼吸机相关肺炎病原学诊断中的价值2.纤维支气管镜检查诊断技术在重症肺炎中的应用及疾病病原学3.mNGS技术在儿童重症肺炎病原学诊断中的价值4.宏基因组二代测序技术在重症肺炎病原学诊断中的应用价值5.宏基因组二代测序技术在儿童重症肺炎病原学诊断中的应用价值研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

10 ·2021.03Experimental research | 试验研究0 引言腺病毒是感染鸽的一种常见致病性病原体，属于双股DNA 病毒[1-2]中腺病毒科的一员，又分为乳动物腺病毒属和禽腺病毒（FAdV ）属。

病毒粒子无囊膜，二十面体对称，直径约为65 nm [3-4]。

目前已证实鸽子感染腺病毒可引起2种临床特征，分别被命名为Ⅰ型和Ⅱ型[5]腺病毒感染；Ⅰ型和Ⅱ型并不指的是病毒抗原成分的差异，而是引起的临床症状的差异，又可分别称作典型腺病毒病和坏死性肝炎。

鸽腺病毒感染是由禽腺病毒（FAdV ）引起的一种急性传染性疾病，通常可在发病的鸽子体内检测到腺病毒。

感染Ⅰ型腺病毒的临床症状可见呕吐、虚弱、消化缓慢甚至停滞，排绿黏便或水便，体重减轻[4，6，7]。

由于消化速度极度降低，吐出的饲料常有酸臭味[8]。

与Ⅰ型腺病毒相比，Ⅱ型腺病毒感染后，并不会整个鸽群发病，通常部分鸽子迅速死亡，而另一部分鸽子没有任何症状。

只感染腺病毒的病死率较低，一旦与大肠杆菌、圆环病毒和疱疹病毒等混合感染后，引起的危害程度非常大，给养鸽业带来严重的损失。

鸽腺病毒在临床上难以诊断，研究的目的是建立一种特异性检测鸽腺病毒的PCR 方法，并将该方法应用于鸽腺病毒DNA 的直接检测。

1 材料与方法1.1 材料（1）病料。

来自南京某养殖场疑似感染FAdV 的鸽子。

（2）试剂。

DNA 提取试剂盒（南京诺唯赞生物DC102）、DNA 回收试剂盒（广州基迪奥生物科技有限公司）、DNAmarker （康为世纪CW0636），其余试剂均为国产或进口分析纯。

1.2 方法1.2.1 引物设计根据GenBank 上发表的序列，针对FAdV 保守区域各设计一对引物见表1。

表1 引物序列引物名称引物序列5’——3’目的基因扩增片段大小FAdV-F TCCTGACCTGACTACCGCC Hexon （GenBank ：MF576429.1）616 bpFAdV-RAGACCCTACTTT AGCAACTTTCC1.2.2 组织DNA 提取将采集的肝、肺、肾等病料放在研磨器中，加入少基金项目：江苏省“六大人才高峰”资助项目：肉鸽混合感染性疾病检测与防治作者简介：何宇（1997-），男，江苏南京人，硕士，从事兽医微生物学、生理学等方向的研究工作。

猫冠状病毒和猫细小病毒双重荧光定量PCR方法的建立郭存杰;王蕾;毕振威;钱晶;张传美;谭业平【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2024(41)4【摘要】为建立猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)和猫细小病毒(feline parvovirus,FPV)的双重荧光定量PCR方法,选取FCoV 3'UTR和FPV VP2基因保守区域,分别设计2对特异性引物和TaqMan MGB探针,并进行反应体系和条件优化,以及特异性、敏感性和重复性试验,探讨所建方法的可行性。

结果显示:该方法可特异性检出FCoV和FPV,与猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫轮状病毒、支原体、衣原体、波氏杆菌、犬腺病毒和犬副流感病毒等病原核酸无交叉反应,对FCoV和FPV检测限均为1 copies/μL;FCoV和FPV阳性参考质粒组间和组内重复试验变异系数均小于3%;对35份临床样本进行检测,发现建立的双重荧光定量PCR方法阳性检出率比普通PCR方法高。

结果表明,本研究建立的双重荧光定量PCR方法具有灵敏、特异和稳定等优点,可用于临床FCoV和FPV感染的早期鉴别诊断。

【总页数】5页(P91-95)【作者】郭存杰;王蕾;毕振威;钱晶;张传美;谭业平【作者单位】青岛农业大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所;南通伊仕生物技术股份有限公司【正文语种】中文【中图分类】S851.3【相关文献】1.犬腺病毒和犬细小病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立2.猫疱疹病毒Ⅰ型、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用3.猫细小病毒和猫疱疹病毒1型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用4.猫细小病毒、猫疱疹病毒和猫冠状病毒多重PCR检测方法建立及病原学分析5.猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒和猫疱疹病毒1型三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

摘要：2020年从黑龙江省某猪场的流产胎儿采集病料，经预处理后，接种猪肾原代细胞，能产生明显的致细胞病变作用。

经过血凝活性、病毒含量、荧光抗体检查、电镜观察、分子生物学等项测定，证明分离的病毒为猪细小病毒（PPV ）。

该病毒的HA 效价≥1:256，TCID 50≥107.0，呈PPV 特异性荧光，电镜观察到呈六角形或圆形、无囊膜、直径20nm 左右的病毒粒子，可以被PPV 特异性抗血清中和，PCR 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，出现一条445bp 特异性电泳条带，并与7909株相符。

对其进行了VP2基因克隆和测序，序列分析表明，VP2基因片段与其它PPV 毒株的VP2基因片段的核苷酸同源性均在99%以上，氨基酸同源性在98%以上。

其与NADL-2株和China 株的亲缘关系最近。

毒株耐热，对胰蛋白酶有抵抗力，对乙醚、氯仿不敏感，pH 3～9，病毒稳定，该毒株纯净，无外源病毒污染。

本研究为该病疫苗的研发奠定了基础。

关键词：猪细小病毒；分离；鉴定一株猪细小病毒的分离鉴定孙心，梁宛楠*（哈药集团生物疫苗有限公司哈尔滨150040）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2023.08.050收稿日期：2023-03-29作者简介：孙心（1977—），女，动物医学本科，主要从事动物疫病临床诊断与实验室检测，动物疫苗应用等工作。

E-mail:***************。

*通讯作者：梁宛楠（1987—），女，动物医学硕士，主要从事动物疫病临床诊断与实验室检测，动物疫苗应用等工作。

E-mail:139****************。

猪细小病毒感染是引起母猪繁殖障碍的原因之一，很早就被世界各国所证明[1,2]，1983年，我国在上海首次发现猪细小病毒感染，并进行了病毒的分离和鉴定[3]，后来侯世宽等[4]和李宝启等[5]也报道在吉林和黑龙江分离到猪细小病毒。

目前在我国已有较多猪场存在该病。

猫细小病毒PCR检测方法随着人们对宠物健康关注日益增加，猫细小病毒的检测和预防变得越来越重要。

猫细小病毒是一种影响猫科动物的病毒，会引起呼吸道感染、口腔炎症等症状。

为了及时发现猫细小病毒感染的情况，PCR （聚合酶链式反应）被广泛应用于猫细小病毒的检测中。

一、样本采集进行PCR检测首先需要采集猫口腔或鼻腔黏膜上皮细胞样本。

可以选择使用专门的取样棒或者棉签，轻轻在猫口腔或鼻腔内刮几下，确保采集到最为充分的细胞样本。

二、DNA提取提取样本中的DNA是PCR检测的重要步骤之一。

利用DNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行操作，将样本中的DNA提取出来，并保持其完整性。

三、PCR反应准备准备PCR反应液，包括引物、模板DNA、DNA聚合酶等。

引物是专门设计用来扩增猫细小病毒的特定片段的寡核苷酸序列，确保PCR 检测的准确性和特异性。

四、PCR扩增将样本DNA加入PCR反应管中，放入PCR仪中进行扩增反应。

根据扩增温度和时间的设定，PCR仪会自动进行加热、退火、延伸等步骤，扩增出目标基因片段。

五、PCR产物分析扩增结束后，通过凝胶电泳或实时荧光定量PCR等方法进行PCR产物的分析。

凝胶电泳可以直观观察PCR产物的大小和纯度，而实时PCR则可以定量检测PCR产物的丰度。

六、结果解读根据PCR反应的结果，可以判断样本中是否存在猫细小病毒的DNA。

阳性结果表示猫携带猫细小病毒，需要进一步治疗和隔离；阴性结果则表示样本中未检测到猫细小病毒的DNA，猫的健康状况正常。

通过PCR检测方法，可以快速、敏感地检测猫体内是否存在猫细小病毒感染，有助于及时发现和防治疾病。

因此，在日常猫的健康管理中，定期进行猫细小病毒PCR检测是非常重要的措施之一。

希望广大宠物主人能够重视猫细小病毒的预防和检测，给予宠物更好的健康保护。

猪细胞巨化病毒性感染猪细胞巨化病毒感染是猪细胞巨化病毒引起仔猪一种常见传染病。

在易感猪群中可引起胚胎死亡和仔猪鼻炎、肺炎及生长发育不良、增重差等临床症状。

Done(1955)在猪鼻甲骨黏膜黏液腺中巨细胞中发现有大量嗜碱性核内包涵体，首次从英格兰分离获得疱疹样病毒粒子；这是继伪狂犬病病毒之后发现的第二个猪的疱疹病毒。

因患猪临床上以鼻炎为特征，并在感染的鼻甲骨黏膜黏液腺中巨细胞可见到大量嗜碱性核内包涵体，因而将PCMV引起的这种疾病称为包涵体鼻炎。

据电镜观察，病毒的性质及其所致病变与人的细胞巨化病毒和豚鼠的唾液腺病毒类似，而本病毒的感染动物的范围仅限于猪，故又将该病毒称为猪细胞巨化病毒(PCMV)。

本病毒分布相当广泛。

从近年的报道看，常规条件下饲养的大多数猪群均存在PCMV感染，PCMV抗体阳性率都很高，但大多数为亚临床型，临床发病则很少见。

欧洲很多国家都发现有本病。

德国用PCR方法，调查猪的流行率要高于50%。

在英国进行的血清学检查的结果表明：90%以上的猪群曾受到过感染，通过ELISA或IFA检测，发现98%以上的猪血清呈阳性。

在日本自1972年就有本病病理学方面的报道，1981年6～11月，对441例肥育猪血清用间接荧光抗体法做了抗体调查，有434例(98.4%)为阳性。

用ELISA所作的调查，436份样品有433份(99.4%)为强阳性，并于1985年首次分离到病毒。

北美和澳大利亚也有报道，其中美国发病率甚高，猪群的抗体保有率为90%。

说明凡饲养猪只的地区，都可能有本病毒的感染。

1病原学1.1形态结构PCMV属于疱疹病毒科，β疱疹病毒亚科、巨细胞病毒属的成员；近来有人认为将本病毒划在玫瑰疹病毒属中更为恰当［3］?。

PCMV在形态上属于典型的疱疹病毒，中央为电子致密的芯髓，芯髓常为卵圆形、也有长方形到哑铃状，其直径为45～70nm。

在芯髓外围为正十二面体核衣壳，其直径约80～100nm，最外围为囊膜，多为单层，偶尔也有双层，有囊膜的病毒颗粒直径为120～150nm。