单脱氢抗坏血酸还原酶活性测定试剂盒使用说明

琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4333规格：100T/96S微量法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体110mL×1瓶-20℃保存试剂二液体1mL×1支-20℃保存试剂三液体18mL×1瓶4℃保存试剂四粉剂×1支4℃保存试剂五粉剂×1瓶4℃保存试剂六粉剂×1瓶-20℃保存溶液的配制：1、试剂四：临用前加入到试剂三中溶解待用；2、试剂五：临用前加入4mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；3、试剂六：临用前加入3.333mL双蒸水，用不完的试剂4℃保存。

产品说明：SDH（EC1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。

SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。

此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表SDH酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。

NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-4348规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体50mL×1瓶4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2支-20℃保存试剂三粉剂×2支-20℃保存溶液的配制：1.试剂二：临用前加入250μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；2.试剂三：临用前加入300μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。

产品说明：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。

草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。

因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。

根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，NADP-MDH主要存在于真核细胞中。

NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

第1页，共2页硝酸还原酶（NR）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0080规格：50T/24S 产品内容：诱导剂储备液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体40mL×1瓶，-20℃保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，-20℃保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存。

标准液：NaNO 2标准储备液1mL，10μmol/mL，-20℃保存。

诱导剂应用液的配制：用时将诱导剂储备液稀释10倍，即取10mL 诱导剂储备液加90mL 蒸馏水，充分混匀。

标准液的配制：将标准储备液用蒸馏水稀释为1.5、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 浓度的标准溶液。

产品说明：NR（EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。

NR 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO 3ˉ+NADH+H ＋→NO 2ˉ+NAD ＋+H 2O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸α-萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在540nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样品测定的前处理1、取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻30min，取出样本，滤纸吸干。

（根据需要进行诱导处理）2、称取约0.1g 样本，加入1mL 提取液，冰浴研磨，4000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）活性检测试剂盒说明书微量法货号：UPLC-MS-4349规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1.试剂二：临用前加入500μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；2.试剂三：临用前加入600μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。

产品说明：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。

草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。

因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。

根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，NADP-MDH主要存在于真核细胞中。

NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

琥珀酸脱氢酶（SDH ）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0955 规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体110 mL×1瓶 -20℃保存 试剂二 液体0.6mL×2支 -20℃保存 试剂三 液体18 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂四 液体3mL×1瓶 2-8℃保存 试剂五液体3mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存； 产品说明：SDH （EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。

SDH 是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。

此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS ）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP ），并且在600nm 处具有特征吸收峰，通过600nm 吸光度的变化，测定2,6-DCPIP 的还原速度，代表SDH 酶活性。

Succinic Acid + FAD Fumaric Acid + FADHFADH + PMS FAD + PMSH 2PMSH 2 + Dichlorophenolindophenol(600nm) PMS + Reduced Dichlorophenolindophenol 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1. 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g 离心10min ，取上清，置冰上待测。

NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC1040规格：50T/48S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入360μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：粉剂×2支，-20℃保存；临用前加入327μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。

产品说明：MDH（EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。

草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。

因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。

根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。

NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：一、样品测定的准备：1、细菌、细胞样品的制备：细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约0.05g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤和加样表：紫外分光光度计提前预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零，试剂一37℃预热15min。

NADP—苹果酸脱氢酶（NADP—MDH）试剂盒说明书NADP苹果酸脱氢酶（NADPMDH）试剂盒说明书微量法100管/96样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做推测定测定意义：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培育细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。

草酰乙酸是紧要的中心产物，连接多条紧要的代谢途径。

因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演侧紧要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。

依据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD倚靠的MDH和NADP倚靠的MDH，NADPMDH重要存在于真核细胞中。

测定原理：NADPMDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光汲取下降。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的构成和配制：试剂一、提取液100mL×1瓶，在4℃保存；试剂二、液体20mL×1瓶，在4℃保存；试剂三、粉剂×1瓶，20℃保存；样本测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培育细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；依照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波碎裂细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调整波长至340nm，蒸馏水调零。

紫外分光光度法乙醛脱氢酶（ALDH）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4344规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体1mL×1支4℃保存试剂四液体2mL×1瓶4℃保存试剂五液体3mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入6mL蒸馏水溶解，-20℃分装保存；2、试剂五：沸点低，在使用时保持低温以保证正确的吸取量。

产品说明：乙醛脱氢酶(EC1.2.1.10)是醛脱氢酶的一种，广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。

在辅酶I的存在下，它催化乙醇在内的某些一级或二级醇、醛或酮的脱氢反应。

在人类和许多动物体内，线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化，所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注；同时，乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面有较广泛的研究应用。

乙醛脱氢酶催化乙醛和NAD+转化为乙酸和NADH，利用NADH在340nm处吸光值的变化即可计算得到乙醛脱氢酶的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。

细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。

乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒说明书（乳酸→丙酮酸连续监测法）【产品名称】中文名称：乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒（乳酸→丙酮酸连续监测法）英文名称：LACTATE DEHYDROGENASE REAGENT KIT（L→P method）【包装规格】50ml/盒（R-1：40ml×1，R-2：10ml×1），240ml/盒（R-1：64ml×3，R-2：48ml×1），250ml/盒（R-1：40ml×5，R-2：10ml×5），375ml/盒（R-1：100ml×3，R-2：75ml×1），2500ml/盒（R-1：500ml×4，R-2：500ml×1）。

【预期用途】本试剂盒用以测定人血清乳酸脱氢酶(LDH)的活力。

【检验原理】乳酸脱氢酶在催化乳酸生成丙酮酸的同时将NAD+还原成NADH。

通过测定NADH在340nm处吸光度增加的速度可求得乳酸脱氢酶的活力。

LDHL-乳酸+ NAD+─────→丙酮酸+ NADH + H+【主要组成成份】试剂成份含量R-1 L-乳酸锂76mmol/LR-2 NAD ≥31mmol/l *不同批号试剂盒中的各组份，经检验符合产品性能指标的，可以互换。

【储存条件及有效期】本试剂盒在2-8℃下避光保存可稳定一年；试剂R-1、R-2开启后在2-8℃避光保存可稳定一个月。

【适用仪器】本试剂适用于日立7020型、日立7060型、日立7080型、日立7150型、日立7170型、日立7180型、日立7600（D）型、日立7600（P）型自动分析仪以及奥林巴斯AU600、AU2700、东芝-雅培、BECKMAN CX系列、BECKMAN LX-20型等自动分析仪。

本试剂在日立7020自动分析仪上已通过第三方验证，并备有以上各种自动分析仪的参数可供参考。

【样本要求】空腹血清，保存于室温可稳定3小时，保存于0℃以下可稳定1周。

可见分光光度法丙酮酸脱氢酶（PDH）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4318规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体60mL×1瓶4℃保存试剂二液体0.6mL×1支-20℃保存试剂三液体15mL×2瓶4℃保存试剂四液体25mL×1瓶4℃保存试剂五粉剂×2支-20℃保存试剂六粉剂×2支4℃保存试剂七液体8mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1.试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存。

2.试剂六：每支试剂六加入1mL蒸馏水溶解备用。

3.工作液的配制：临用前把11.5mL试剂四、一支试剂五、0.9mL试剂六、3.5mL试剂七转移到一瓶试剂三中混合溶解待用；用不完的试剂-20℃分装保存，可以保存4周。

产品说明：PDH（EC4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。

PDH催化丙酮酸脱氢，同时还原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致605nm光吸收的减少。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g 离心10min，取上清，置冰上待测。

细胞或者细菌样本：先收集500万细胞到离心管内，离心后弃上清；之后加入1mL试剂一和10μL试剂二，冰浴超声波破碎细菌（功率20%或200W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后11000g，4℃，离心10 min，取上清置于冰上待测。

琥珀酸脱氢酶（SDH ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0950 规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体60 mL×1瓶 -20℃保存 试剂二 液体0.6 mL×1支 -20℃保存 试剂三 液体5 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂四 液体4mL×1瓶 2-8℃保存 试剂五液体3mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存； 产品说明：SDH （EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。

SDH 是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。

此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS ）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP ），并且在600nm 处具有特征吸收峰，通过600nm 吸光度的变化，测定2,6-DCPIP 的还原速度，代表SDH 酶活性。

Succinic Acid + FAD Fumaric Acid + FADHFADH + PMS FAD + PMSH 2PMSH 2 + Dichlorophenolindophenol (600nm) PMS + Reduced Dichlorophenolindophenol 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1. 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g 离心10min ，取上清，置冰上待测。

硝酸还原酶（NR）活性检测试剂盒说明书微量法BC0085100T/48S诱导剂储备液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体10mL×1瓶，-20℃保存。

试剂二：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存。

试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。

标准液：NaNO2标准储备液1mL，10μmol/mL，-20℃保存。

诱导剂应用液的配制：用时将诱导剂储备液稀释10倍，即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水，充分混匀。

标准液的配制：将标准储备液稀释为1.5、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL 浓度的标准溶液。

NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋+H2O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

钵、冰和蒸馏水。

一、样品测定的前处理1、取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻30min，取出样本，滤纸吸干。

（根据需要进行诱导处理）2、称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴研磨，4000g，4℃离心10min，取上清冰上放置待测。

二、测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管或96孔板中加入下列试剂）第1页，共2页混匀，显色20min，540nm处比色，计算（A测定-A对照）。

注意：空白管只需测一次。

三、NR活性计算：1. 标准曲线的绘制：以标准溶液浓度为x轴，以ΔA（A标准管-A空白管）为y轴绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b。

将（A测定-A对照）带入方程中，计算出x（μmol/mL）。

保存 GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 底色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃ 冰箱里，GENMED 底色液（Reagent C）避免光照，有效保证 12 月
用户自备
1．5 毫升离心管：用于反应液配制的容器 比色皿：用于比色的容器 分光光度仪：用于比色分析 酶标仪：用于微量样品比色分析
20 次
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4
GMS50051
GMS50052.1
GMS50052.2
GMS50052.3 GMS50006 GMS50007
GMS50008
GMS50009
GMS50010
GMS50083 GMS50090 GMS50092.1
GMS50092.2 GMS50100.1 GMS50100.2 GMS50101.1 GMS50101.2
=
活力单位 样品蛋白浓度
⋅ ml−1 • mg ⋅ ml-1
=
样品活性
• 活力单位
⋅ mg −1
活力单位量纲：mmol·min-1
五、 酶标板测定
1． 在 96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取
微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到相应孔中
2
3． 分别加入
微升 GENMED 阴性液（Reagent D）或待测样品（10 微克蛋白）（注意：样品须清澈，
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 底色液（Reagent C）
1
置入冰槽里融化。GENMED 底色液（Reagent C）避免光照。然后进行下列操作。

谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒说明书谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。

测定意义：GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。

GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。

GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，另外GR还参加抗坏血酸—谷胱甘肽循环途径。

测定原理：GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340nm有特征汲取峰，相反NADP+在该波长无汲取峰；通过测定340nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。

自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水试剂构成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保管。

试剂二：粉剂×2支，20℃保管。

临用前加入1.2mL蒸馏水，混匀。

试剂三：粉剂×2支，20℃保管。

临用前加入0.6mL蒸馏水，混匀。

粗酶液提取：1.组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2.细菌、真菌：依照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波碎裂细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

操作步骤：1.分光光度计/酶标仪预热30min，调整波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min。

在无杂质干扰时，被测溶液还原染料的量与其 中所含抗坏血酸的浓度成正比。
2，6—二氯酚靛酚
H+
2，6—二氯酚靛酚
(碱性－蓝色）
(酸性－红色）
还原
还原型抗坏血酸
还原态2，6—二氯酚靛酚 (无色）
过量2，6—二氯酚靛酚 (酸性－红色）
三、仪器与试剂
（一）仪器 1.组织匀浆机 2.微量滴定管 3.量筒、烧杯、吸管、锥形瓶 4.天平
六、注意事项
1. 操作过程要迅速，因为还原型抗坏血酸易被氧 化，一般不超过2min。
2. 食物匀浆在量筒中振摇可能产生泡沫，可加数 滴异戊醇去除泡沫。
六、注意事项
3. 样品匀浆液有颜色时，应加入一勺白陶土，振 摇脱色，过滤后，再取上层液滴定。
4. 样品中可能含有其它杂质，也能还原2，6-二氯 酚靛酚，但还原染料的速度较抗坏血酸慢，所 以滴定时以15s粉红色不退为终点。
进入实验室要求
1、使用化学试剂时要注意人身安全。 2、注意玻璃器皿的使用，破碎。 3、仪器使用必须按照操作说明及教师指导进行，盲目
操作导致损坏者后果自负。 4、实验器材用过后要及时清洗，实验结束后，要将器
材摆放整齐。 5、课代表每次课均要安排值日生，负责打扫卫生。 6、课代表在每次实验课结束后要填写实验室使用记录、
还原型抗坏血酸 （mg/ 100 g） V C 100 V 20 W
V—滴定时所用2，6-二氯酚靛酚的毫升数
C—1ml 染料相当于抗坏血酸毫克（0.05mg/ml）
W—5ml滤液中含有的样品克数 (0.25g)
100gx10gx5ml 200gx100ml =0.25g
1ml 溶 液 相 当 于 抗 坏 血 酸 0.05mg ， 即 0.05mg/ml

脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）检测
脱氢抗坏血酸还原酶（Dehydroascorbate reductase, DHAR）是植物体内一种重要的抗氧化酶，是抗坏血酸-谷胱甘肽（ASA-GSH）循环中的关键酶，通过抗坏血酸-胱甘肽循环将氧化型抗坏血酸还原为还原型抗坏血酸，在维持植物体内抗坏血酸的正常代谢水平，保护细胞组分抵御氧化损伤方面发挥着重要作用。

迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒，可高效、精准的检测脱氢抗坏血酸还原酶的活性变化。

此外，我们还提供其他ASA-GSH循环类的检测服务，以满足您的不同需求。

生化法测定脱氢抗坏血酸还原酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 脱氢抗坏血酸还原酶活性信息。

NADH氧化酶（NOX可见分光光度法货号：BC0630规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二液体5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体0.5 mL×1支-20℃保存试剂四液体70 mL×1瓶4℃保存试剂五液体10 mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×2瓶-20℃保存溶液的配制：试剂六：临用前加入9 mL双蒸水，用不完的试剂-20℃分装保存。

产品说明：NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD+。

该酶不仅参与NAD+的再生，而且与免疫反应密切相关。

NOX能够将NADH氧化为NAD+，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1.准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10µL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2.将匀浆600g，4℃离心5min。

将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

3.将上清液转移至另一EP管中，即胞浆提取物，用于线粒体中泄露NOX活性测定。

4.沉淀即为线粒体，加入200µL试剂二和2µL试剂三，反复吹打充分混匀，用于NOX活性测定，并用于蛋白浓度测定。