蔗糖合成酶(SS)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase,S-SC）试剂盒使用说明分光光度法50管/24样货号：BC0240产品简介：S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。

S-SC催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3，5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

产品内容：试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入40mL蒸馏水充分溶解备用；试剂四：液体45mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml 蒸馏水溶解备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/ml。

操作步骤：试剂名称测定管对照管标准管风干土样（g）0.10.1-试剂一（μL）1515-振荡混匀，使土样全部湿润，37℃放置15min-试剂二（μL）250250-试剂三（μL）750--蒸馏水（μL）-750-混匀，放入37℃水浴培养24小时，10000g，4℃，离心5min，取上清液，同时准备标准品上清液或标准品（μL）200200200试剂四（μL）500500500充分混匀，放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀。

标准曲线的建立：540nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值A。

以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。

货号：MS2508 规格：100管/96样蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase, SP）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷键，催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基低聚糖。

此外，SP还能催化氢醌合成熊果苷，具有极强的美白效果，在化妆品工业中具有重要应用。

测定原理：SP能够以磷酸为受体，催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖，在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加。

测定340nm吸光度增加速率，即可计算SP活性。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

缓冲液：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体1.5mL×1支，4℃保存。

试剂三：液体1mL×1支，4℃保存。

试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存，临用前加1mL双蒸水溶解。

试剂五：粉剂×1支，-20℃避光保存，临用前加1mL双蒸水溶解。

试剂六：粉剂×1支，-20℃避光保存，临用前加2mL双蒸水溶解。

试剂七：粉剂×1支，-20℃避光保存，临用前加2mL双蒸水溶解。

粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清待测。

2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC4310规格:50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。

临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融。

试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1支，20mg果糖；4℃保存。

临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用。

4℃保存一周。

产品简介：蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。

分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为5、4、3、2、1mg/mL的标准溶液备用。

3、操作表：(在1.5mL离心管中操作)试剂名称（µL）对照管测定管标准管空白管样本2020--标准溶液--20-蒸馏水---20试剂一808080试剂二-80--混匀，30℃水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失）。

蔗糖合成酶的测定方法[方案]蔗糖合成酶的测定方法一、仪器设备冷冻离心机、恒温水浴、分光光度计二、试剂HEPES-NaOH(50mmol/L，pH7.5)缓冲液，包括50mmol/L MgCI;2mmol/LEDTA;20.2%(W/V)BSA;2%PVP;0.1%间苯二酚:称取0.1g溶解并定溶于100ml 95%乙醇中。

30%盐酸、2mol/L NaOH、100mmol/L UDPG、100mmol/L6-磷酸果糖、100mmol/L果糖三、操作方法1、粗酶液制备称取0.5g样品(植物叶片去掉主叶脉)，洗净剪碎，置于预冷的研钵中，加3ml Hepes-NaOH缓冲液，冰浴研磨，10000×g离心10min。

2、酶活性测定依次加入50μL粗酶液，50μLHepes-NaOH缓冲液pH7.5，20μL 50 mmol/LMgCI， 220μL 100mmol/L UDPG，20μL 100mmol/L6-磷酸果糖(20μL 100mmol/L果糖)， 30?中反应30min后，加入200μL 2mol/L NaOH终止反应，沸水煮10min，流水冷却，加入1.5ml 30%盐酸和0.5ml 0.1% 间苯二酚，摇匀后置于80?水浴保温10min，冷却后置于480nm 处，以提前杀死酶活性为空白比色测定蔗糖含量。

同时取50μL粗酶液，加入200μL 2mol/L NaOH，以下同上操作，测定蔗糖含量。

3、蔗糖标线制作:取0、40、80、120、160、200μg/ml的蔗糖溶液50μL，操作同上，然后以蔗糖浓度为纵坐标，以吸光值为横坐标，得方程。

4、计算,1,1样品中酶活性(μg?g?h)=式中 C—反应液催化产生的蔗糖总量(μg);V—提取酶液时加入的缓冲液体积(ml); 1V—酶反应时加入的粗酶液体积(ml) 2淀粉酶活性的测定1方法1.1试剂配制淀粉酶提取缓冲液:0.1mol/L-1柠檬酸溶液(pH 5.6);1%的淀粉溶液:用0.1mol/L-1的柠檬酸缓冲液(pH 5.6)配制;标准麦芽糖溶液(1mg/mL-1);3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS试剂):称取6.5 g 3,5-二硝基水杨酸溶于少量水中，移入1000 mL容量瓶中，加入325 mL 2mol?L-1 NaOH溶液，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容到1000 mL。

蔗糖是重要的光合产物，是植物体内运输的主要物质，优势碳水化合物的暂贮形式之一。

蔗糖合成酶（SS）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）是植物体内催化蔗糖合成的两种酶。

对这两种酶活性的测定，可以了解植物组织合成蔗糖能力的高低。

【实验原理】蔗糖合成酶催化游离果糖与葡萄糖工体UDPG反应生成蔗糖。

UDPG+果糖---蔗糖+UDP这是一个可逆反应，平衡常数为1.3-2.0。

该酶在分解方向的Km值相对较高（30-150mmol/L），细胞中高的蔗糖浓度有利于反应向分解方向进行。

蔗糖合成酶活性测定既可在合成方向进行测定（外加底物UDPG和果糖，测产物蔗糖的量表示酶活性），也可以在分解方向进行测定（外加蔗糖和UPD，测定果糖含量表示酶活性）。

蔗糖磷酸合成酶（SPS）催化UDPG与果糖-6-磷酸（F6P）结合形成磷酸蔗糖：UPDG+F6P---蔗糖-6-P+UDP+H+6-磷酸蔗糖可以经磷酸蔗糖酶（SPP）水解后形成蔗糖。

实际上最近有证据证明SPS 和SPP可以在体内形成一个复合体，因此使得SPS催化的反应基本上是不可逆的。

酶活性测定是外加UDPG和F6P，测定产物蔗糖的量表示酶活性。

一般把SPS-SPP系统看作是蔗糖合成的主要途径，而把蔗糖合成酶看作是催化蔗糖分解的。

果糖是酮糖，可与间苯二酚混合加热反应生成红色产物，在一定范围内糖的含量与反应液颜色成正比。

蔗糖在含有盐酸的间苯二酚中水解成葡萄糖和果糖，也能生成红色产物，在480nm处可比色测定。

【实验材料】植物茎【仪器设备及设备】冷冻离心机，恒温水浴，分光光度计，研钵一套，磁力搅拌器，天平（感量0.01mg），0.1、0.5、1、5ml移液管各1个，10ml具塞试管10支，5ml量瓶一个，冰箱【试剂药品】1.提取缓冲液：100mmol/L Tris-HCl(PH7.0)缓冲液，内含5mmol/LMgCl 2,2mmol/LEDTA-Na 2,2%乙二醇，0.2%牛血清蛋白（BSP），2%PVP，5mmol/LDTT。

植物蔗糖合成酶(SS)试剂盒说明书试验原理：植物蔗糖合成酶(SS)试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

内容及其配制自备材料1）蒸馏水。

2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3）振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1）避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

作注意事项1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3）不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。

使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。

底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

避免用手接触，有毒。

实验完成后应立即读取OD值。

8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。

1000×g离心30分钟去除颗粒。

实验4 蔗糖酶的活性和比活力测定一、实验目的1、掌握酶活性测定的方法和原理2、掌握酶活力及酶比活力计算二、实验原理1、蔗糖＋蔗糖酶（水解酶）→D-果糖＋Ｄ－葡萄糖用测定生成还原糖（葡萄糖和果糖）的量来测定蔗糖水解的速度。

本实验中，蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应５min,每产生１mg葡萄糖所需的酶量。

２、DNS试剂＋Ｄ－葡＋强碱液中＋沸水浴生成氨基化合物（棕红色），540nm比色。

三、实验器材1、试剂：葡萄糖0.1%、蔗糖0.2mol/L、1mol/LNaOH、DNS试剂：酒石酸钾钠18.2g,溶于50ml蒸馏水中，加热（不超过50℃），于热溶液中依次加入3，5-二硝基水杨酸0.63g，NaOH 21.0g，苯酚5.0g，无水亚硫酸钠5.0g，搅拌至溶解完全，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，贮存于棕色瓶中，室温保存。

2、仪器：分光光度计、水浴锅3、材料：实验2所得级分Ⅰ、Ⅱ的蔗糖酶四、实验方法1．工作曲线的制作取６只试管，按下表加入2.0mg∕ml葡萄糖标准液和蒸馏水管号葡标准液(ml) 蒸馏水（ml）葡含量(mg/ml)１０１０２ 0.2 0.8 0.43 0.4 0.6 0.84 0.6 0.4 1.25 0.8 0.2 1.66 1.0 0 2在上述试管中＋ＤＮＳ试剂２ml，沸水浴５min，流动水迅速冷却，各加蒸馏水９ml，摇匀，在540nm波长测光吸收值，以葡萄糖含量（mg∕ml）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

2．酶液的稀释（级分Ⅰ、级分Ⅱ）各取0.2ml稀释10倍，得到2ml稀释液。

3．吸光度的测定取２ml稀释后的酶液＋２ml 0.2mol∕L蔗糖，立即摇匀开始计时，35℃水浴５min,立即加入１ml 1mol/LNaOH中止反应。

取1ml的反应液＋２ml DNS试剂，沸水浴５min，立即用流动的自来水冷却后，加入９ml蒸馏水，进行吸光度的测定。

五结果计算（1）计算酶的活力稀释后的酶活力→原始酶活力酶活力计算：在室温、pH4.5条件下，每分钟水解产生1μmol葡萄糖所需的酶量，定义为酶的1个活力单位（U）（2）计算级分Ⅰ、级分Ⅱ的比活力比活力= 酶活力/1ml蛋白质的含量注意事项：水浴温度，时间要精确分光光度计的使用六实验思考1、什么是比活力？测定比活力的意义是什么？2、试分析级分Ⅰ、级分Ⅱ的比活力的高低和原因。

实验一蔗糖酶活力测定一、目的要求了解蔗糖酶的性质及3,5–二硝基水杨酸比色法测定蔗糖酶活力的实验原理，熟练掌握其测定方法。

二、实验原理蔗糖酶（sucrase, EC 3.2.1.26）又称转化酶，蔗糖在其作用下，水解为D–葡萄糖与D–果糖。

酵母细胞含丰富的蔗糖酶（胞内酶），细胞破壁后释放出来的蔗糖酶可以从果糖末端切开蔗糖的果糖糖苷键，使蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，葡萄糖和果糖是还原糖，其含量可通过3,5–二硝基水杨酸比色法测定，从而度量酶活力的大小。

蔗糖酶活力定义为：在35℃实验缓冲液条件下，每3min释放1mg还原糖的酶量为1酶活单位。

由于蔗糖酶在碱性条件下极易失活，所以可用碱终止酶解反应。

3,5–二硝基水杨酸定糖法实验原理：利用3,5–二硝基水杨酸溶液和还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在520nm波长处有最大吸收峰，在一定范围内其吸光度与还原糖含量呈线性关系，可用于还原糖含量测定。

三、试剂和仪器（一）试剂1、3,5–二硝基水杨酸试剂（DNS）。

甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2mL 10%NaOH，并用水稀释至69 mL，在此溶液中加6.9 g NaHSO3。

乙液：称取255 g酒石酸钾钠置于300 mL 10%NaOH中，再加入880 mL 1%3,5–二硝基水杨酸溶液。

将甲、乙两溶液混合即得到颜色呈黄色的使用液，贮于棕色瓶中，室温下放置7–10天后使用。

1、葡萄糖标准使用液（1mg/mL）：称取干燥的葡萄糖0.1000 g，溶于水并定溶至100 mL。

2、5%蔗糖溶液：称取5.00 g蔗糖用pH5.5 0.1mol/L 醋酸-醋酸钠缓冲溶液配置成100mL。

3、1mol/L NaOH。

(二)仪器1、电热恒温水浴锅。

2、721分光光度计。

1、秒表或手表。

四、操作方法1、标准曲线制备使用1cm比色皿，在520nm波长条件下，以试剂空白条零，测定各管吸光值。

用坐标纸绘制标准曲线；或用回归法计算求出以A520nm值为自变量，葡萄糖含量(mg)为因变量的直线方程。

转化酶和蔗糖合成酶活性的测定方法2 Oct, 2013一、酶的提取：1、组织样品（3 ovary of 0 dap或0.1g叶片）在液氮中磨碎，加入0.6 mL（或1.5 mL）酶提取液，匀浆转入2mL离心管中，用100 uL提取液洗研钵。

每管加入6或15 μL PMSF（100mM）和3或7.5 μL DTT（1M）。

2、14000 g（约12000rpm）离心10 min，取上清液。

3、沉淀用0.5mL提取缓冲液重新悬浮，14000 g离心3 min，弃上清液。

4、沉淀用0.6或1.5 mL提取缓冲液悬浮。

二、酶活性的测定：（一）不溶性酸性转化酶活性的测定：细胞壁转化酶1、取40 μL酶提取液（上清或沉淀悬浮液）加入360 μL酸性转化酶分析液中，30℃水浴保温1 h。

2、加入60 μL 1 M Tris-HCl （pH8.0）进行碱化处理。

3、85℃保温3 min，然后加入等体积（460 μL）氯仿，混匀，14000 g离心5 min，4、取上清140 μL加入380 μL葡萄糖测定液，30℃水浴保温30 min。

5、测定OD340nm，然后根据葡萄糖标准曲线计算出转化酶的活性，表示为mg Gluh-1 g-1 FW。

注：每个测定样品均做一个对照，对照除省略第1步中30℃水浴保温1 h外，其他相同。

（二）可溶性酸性转化酶活性的测定：液泡转化酶1、取40 μL酶提取液（上清或沉淀悬浮液）加入360 μL酸性转化酶分析液中，30℃水浴保温1 h。

2、加入60 μL 1 M Tris-HCl （pH8.0）进行碱化处理。

3、85℃保温3 min，然后加入等体积（460 μL）氯仿，混匀，14000 g离心5 min，4、取上清140 μL加入380 μL葡萄糖测定液（由葡萄糖分析液配制），30℃水浴保温30 min。

5、测定OD340nm，然后根据葡萄糖标准曲线计算出转化酶的活性，表示为mg Gluh-1 g-1 FW。

蔗糖酶测定（比色法）：蔗糖酶是一种可以把土壤中高分子量蔗糖分子分解成能够被植物和土壤微生物吸收利用的葡萄糖和果糖的水解酶，为土壤生物体提供充分能源，其活性反映了土壤有机碳累积与分解转化的规律。

蔗糖酶能酶促蔗糖水解生成葡萄糖和果糖。

因此，蔗糖酶的活性可以根据水解生成物与某些物质（3，5-二硝基水杨酸或磷酸铜）生成有色化合物含量来确定。

现介绍3，5-二硝基水杨酸比色法，该方法以蔗糖为基质，根据葡萄糖与3，5-二硝基水杨酸反应生成黄色产物，来确定土壤蔗糖酶活性。

试剂1）3，5-二硝基水杨酸溶液：称取0.5克二硝基水杨酸，溶于20mL 2mol/L氢氧化钠和50毫升水中，再加入30克酒石酸钾钠，用水稀释至100mL（不超过一周）。

2）pH值为5.5的磷酸缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠（11.867g Na2HPO4·2H2O溶于1升蒸馏水中）0.5毫升加1/15mol/L 磷酸二氢钾（9.078gKH2PO4溶于1升蒸馏水中）9.5毫升配成。

3）8％蔗糖溶液。

4）甲苯5) 标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58℃条件下，真空干燥至恒重。

然后取500mg 溶于100ml蒸馏水中，即成葡萄糖标准溶液（5mg/ml）。

再将此液稀释10倍制成葡萄糖工作液（0.5mg/ml）。

操作步骤称取5g土，置于50mL三角瓶中，加入5滴甲苯，15min后注入15mL 8％蔗糖溶液和5mL pH 5.5磷酸缓冲液，摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。

到时取出，迅速过滤。

从中吸取滤液1mL，注入50mL容量瓶中，加3mL3，5－二硝基水杨酸，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。

溶液因生成3－氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处比色。

每一土壤需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。

在分析样品的同时，取0、1、2、3、4、5、6、7mL葡萄糖工作液，分别注入50mL容量瓶中，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。

货号：QS2504 规格：50管/24样蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。

蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。

研究其合成方向SS-Ⅱ的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。

测定原理：SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水试剂的组成和配制：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体4mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存；样品测定的准备：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅱ活性计算：第1页，共2页1、按照蛋白浓度计算单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷Cpr2、按照样本鲜重计算单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

植物组织蔗糖含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC2465规格：100T/96S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂10mg×1支，4℃保存，临用前加入1mL蒸馏水溶解，用水稀释10倍，备用，即1mg/mL;试剂二：液体2mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂五：粉剂0.5g×1瓶，常温保存。

产品介绍：蔗糖是植物光合作用的主要产物，也是糖分运输和储藏的主要形式。

因此，测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。

此外，蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。

先用碱与样品共热，破坏其中的还原糖。

酸性条件下蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖进一步与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。

所需的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板和蒸馏水。

操作步骤一、样品制备：称取0.1g样本，常温研碎，加入0.5mL提取液，适当研磨后快速转移到离心管中，置于80℃水浴锅中10min，振荡3~5次，冷却后，4000g，25℃离心10min，取上清，加入2mg试剂五，80℃脱色30min，再加入0.5mL提取液，4000g，25℃离心10min，取上清液测定。

二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。

2、样本测定，（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：试剂（μL）空白管标准管测定管样本25试剂一25蒸馏水25试剂二151515混匀，100℃煮沸5min左右（盖紧，防止水分散失）试剂三175175175试剂四505050混匀，沸水浴反应10min左右，冷却后取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中测定480nm处光吸收值，空白管、标准管和测定管分别记为A1、A2和A3。

植物可溶性糖含量试剂盒(可见分光光度法)使用说明货号：SH103规格：50管/48样产品简介：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。

检测原理为蒽酮比色法。

可用于可溶性单糖、寡糖和多糖的含量测定，具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、沸水浴、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、浓硫酸、研钵和蒸馏水。

产品内容：试剂一：粉剂×2瓶，4℃避光保存；试剂二：10mL×1瓶，4℃保存；工作液的配制：临用前在每瓶试剂一中加入2.5mL试剂二。

充分溶解后使用，如较难溶解，可加热搅拌。

操作步骤：一、样品中可溶性糖的提取：称取约0.05g样本，加入0.5mL蒸馏水研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，沸水浴10分钟（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，常温离心10min，取上清液于10ml试管中，用蒸馏水定容至10ml，摇匀备用。

二、测定操作表：试剂（µL）空白管测定管样本200蒸馏水400200工作液100100浓硫酸10001000混匀，置沸水浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，用空白管调零，在620nm波长下读取吸光值。

注意：由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。

可溶性糖含量计算：1、标准条件下测定的回归方程为y=1640x-0.07；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

2、可溶性糖（µg/g鲜重）＝(A测定管＋0.07)÷8.55÷样本鲜重（g/mL）。

3、可溶性糖（µg/mg蛋白）=(A测定管＋0.07)÷8.55÷蛋白浓度（mg/mL）。

可见分光光度法土壤蔗糖酶(S-SC）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4036规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体5mL×1瓶（自备）2-8℃保存试剂二液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2瓶2-8℃保存试剂四液体35mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：自备甲苯；2、试剂三：临用前取1瓶加入15mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂2-8℃保存2周；3、标准品：含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%）。

临用前加入1mL蒸馏水溶解备用，2-8℃可保存2周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。

产品简介：S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。

S-SC催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。

3,5-Dinitrosalicylic AcidSucrose S-SC Reducing Sugare3-Amino-5-Nitrosalicylic Acid(540nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、冰、研钵、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，研磨，过30-50目筛。

1．2．1蔗糖合成酶(SS)、蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性参照於新建[]的方法并稍加改进。

酶液提取：取0.5g左右预冷的水稻叶片(剪碎的去主叶脉的叶片)，加4 mL缓冲液A(50mmol ／L Tris—HC1，pH 7．0、10 mmol／L MgC12、2 mmol／L EDTA-Na2、20 mmol／L巯基乙醇、2％乙二醇)于预冷的研钵中冰浴快速研磨成糊状，倒入离心管中，在低温冷冻离心机上4℃ 10000 r／rmin离心30 min，所得上清液用于酶活性测定。

SS活性的测定：在总体积0.15 mL的反应介质(含50 mmol／L Tris—HCL，pH7.0、10 mmol ／L MgC12, 10 mmol／L果糖、3 mmol／L UDPG)中，加入100uL酶液，30℃水浴中反应10 min，加入2 mol／L NaOH 0.05mL，沸水煮10 min，流水冷却。

再加入1．5 mL浓盐酸和0．5 mL 0．1％的间苯二酚，摇匀后置于80℃水浴保温10 min，冷却后于480nm处比色测定蔗糖的生成。

活性单位以[蔗糖nmol／(g·min)，Fw]表示。

SPS活性的测定：在蔗糖合成酶反应体系中用10 mmol／L果糖-6-磷酸取代10 mmol／L果糖，其余均按蔗糖合成酶的方法。

活性单位以[蔗糖umol／(g·h)，Fw]表示。

药品配制（按100份）酶液提取1 配制缓冲液A---1000ml200mmol／L Tris—HC1----500ml200m mol／L Tris 12.1g----500ml蒸馏水，200m mol／L HC1／L 8.36ml盐酸（37%）加水491.63ml水将250 ml Tris+233.5 ml HC1，在此液中加入MgC12（分子量95.21，0.9521g），EDTA-Na2（含两个结晶水分子量372，g），巯基乙醇（分子量78，ml），乙二醇（分子量，ml），最后加蒸馏水定容到1000ml2 配制缓冲液B---1000ml 5 ml12.5ml Tris+11.65ml HCl，加入MgC12 0.0238g，果糖（259.19分子量，0.1296g），加入UDPG （Uridine 5′-diphosphoglucose disodium salt from Saccharomyces cerevisiae分子量610.27，19.1ug）,定容到25ml 容量瓶12.5ml Tris+11.65ml HCl，加入MgC12 0.0238g，加入果糖-6-磷酸（304.1分子量，0.03041g），UDPG（Uridine 5′-diphosphoglucose disodium salt from Saccharomyces cerevisiae分子量610.27，19.1ug）,定容到25ml 容量瓶3 . 2 mol／L NaOH 50ml 0.4g 定容至50 ml4.0．1％的间苯二酚1g 999ml 蒸馏水5．做蔗糖标准曲线植物组织ATP酶活性测定一、原理ATP酶（adenosinetriphosphatase）可催化ATP水解生成ADP及无机磷的反应，这一反应放出大量能量，以供生物体进行各需能生命过程。

鲜样1g（不同处理天数的第一片真叶或者根系，保存于－80℃冰箱中的）↓加入0.5g pvpP和10mL Hepes冰浴研磨成匀浆（50mMHepes－NaOH pH 7.5缓冲液体系配制1L。

Hepes：11.9150gNaCl：16.0gKCl：0.74gNa2HPO4·12H2O：0.543g葡聚糖： 2gEDTA： 0.3722gMgCl2： 2.0330gDTT： 0.3856gVc： 1.7614g）↓四层纱布过滤↓12000g，4℃，离心20min，用石英砂配平↓弃沉淀，留上清液，加5.6g硫酸铵，加入后充分搅动，充分溶解↓放置15min，用空管加水与离心管配平↓12000g，4℃，离心20min↓弃上清液，沉淀内加入3mLHepes溶解，移到透析袋内↓透析袋放到盛有20mL稀释10倍的Hepes↓4℃冰箱内透析20h即为酶液1.AI活性测定25mL刻度试管内加入0.6mL Na2HPO4（0.1M）柠檬酸调pH到4.8↓加0.2mL（0.1M）蔗糖↓加0.2mL酶提取液↓37℃孵育30min↓每个试管中加入1mL蒸馏水，空白加2mL蒸馏水↓在加1.5mL3,5-二硝基水杨酸（DNS）↓520nm比色（比色前混匀）2.NI活性测定25mL刻度试管内加入0.6mL Na2HPO4（0.1M）柠檬酸调pH到7.2↓加0.2mL（0.1M）蔗糖↓加0.2mL酶提取液↓37℃孵育30min↓沸水浴5min，流水冷却↓每管加21.5mL蒸馏水↓520nm比色（比色前混匀）3.蔗糖合成酶（SS）活性测定25mL刻度试管内加入0.1mL 果糖（0.05M）↓加0.1mLUDPG↓加0.1mLTris（0.1M）↓加0.1mLMgCl2（10mM）↓加0.2mL酶液↓37℃孵育30min↓100℃水浴1min，加0.4mL蒸馏水定容至1mL（空白加1mL蒸馏水）↓加0.1mLNaOH（2N）↓沸水浴10min，流水冷却↓加3.5mLHCl（30%）↓加1mL间苯二酚（0.1%），摇匀↓80℃水浴10min，流水冷却↓480nm比色（比色前混匀）4.蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性测定25mL刻度试管内加入0.1mL 6-磷酸果糖（0.05M）↓加0.1mLUDPG↓加0.1mLTris（0.1M）↓加0.1mLMgCl2（10mM）↓加0.2mL酶液↓37℃孵育30min↓100℃水浴1min，加0.4mL蒸馏水定容至1mL（空白加1mL蒸馏水）↓加0.1mLNaOH（2N）↓沸水浴10min，流水冷却↓加3.5mLHCl（30%）↓加1mL间苯二酚（0.1%），摇匀↓80℃水浴10min，流水冷却↓480nm比色（比色前混匀）。