革兰氏染色实验步骤

革兰氏染色的过程和原理
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，通过此方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。

该染色方法基于不同细菌细胞壁组成的差异，通过特定的染色步骤使细菌在显微镜下呈现不同的颜色。

革兰氏染色的过程包括以下几个步骤：
1. 取一片细菌培养物，涂抹在玻片上，使其形成薄膜。

2. 将涂片在火焰中烘烤，以使细菌附着在玻片上。

3. 将烘烤后的涂片浸入革兰氏紫染色剂中，静置数分钟。

4. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有紫色溢出。

5. 在涂片上滴加碘酒，静置一段时间。

6. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。

7. 滴加脱色剂（乙醇或乙醚）在涂片上，迅速冲洗。

8. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。

9. 滴加革兰氏染色剂（碱性洋红）在涂片上，静置1-2分钟。

10. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。

11. 用纸巾或吹风机轻轻吹干涂片。

12. 使用显微镜观察涂片下的细菌。

革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的差异。

革兰氏阳性菌的细胞壁含有较厚的层状壁，并富含肽聚糖和穿孔蛋白，所以在革兰氏紫染色剂作用下会显现紫色。

而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，内层有脂多糖包裹，所以在革兰氏紫染色剂作用下不易显现出紫色。

革兰氏染色是一种常用的初步细菌分类方法，通过观察细菌在显微镜下的染色特性，可以初步判断细菌的类型，对于临床诊断和细菌研究都有重要意义。

革兰氏染色原理及步骤
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，可根据细菌的染色特性分为革兰氏阳性和革兰氏阴性。

该染色方法主要通过酸碱性染料的交替作用，使革兰氏阳性和阴性细菌能够在显微镜下呈现不同的颜色。

革兰氏染色的步骤分为四个主要过程：准备、染色、洗涤和观察。

1. 准备：首先需要准备好细菌涂片。

将细菌培养物均匀涂布在玻片上，使其干燥。

2. 染色：将涂片先用香精酊固定，使细菌附着在玻片上。

然后将涂片浸入革兰氏碘液中，进行固定。

固定后，将涂片通过酒精醇溶液脱色。

接下来，将涂片浸入革兰氏紫水溶液中，染色时间一般为1分钟。

染色完成后，用水冲洗涂片。

3. 洗涤：将涂片在水龙头下冲洗，直到液体变清澈。

4. 观察：将涂片在显微镜下观察。

革兰氏阳性细菌会呈现紫色，而革兰氏阴性细菌则会呈现粉红色。

总的来说，革兰氏染色方法是一种简便而有效的细菌染色方法。

通过该方法可以区分细菌的革兰氏阳性和阴性，有助于进一步分析细菌的形态结构和鉴定。

革兰氏染色实验步骤革兰氏染色实验是一种常用的细菌染色技术，用于区分细菌的结构特征和形态特点。

本实验主要通过染色剂的作用，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类，以便于细菌的鉴定和分类。

革兰氏染色实验步骤如下：1. 准备工作：a. 准备好所需的试剂和设备，包括革兰染色试剂（碘液、乙醇、靛紫溶液等）、玻璃片、显微镜、高压锅等。

b. 清洗玻璃片和显微镜，确保无尘无油。

c. 培养细菌，选择适宜的培养基和条件培养出细菌。

2. 取一根无菌的铂丝或吸管，在培养基上横划取一些细菌。

3. 将铂丝或吸管上的细菌悬浮于一滴蒸馏水中，均匀涂抹在玻璃片上。

4. 玻璃片上的细菌涂片晾干。

5. 将涂片固定在高压锅中，用碘液浸泡1分钟，使细菌固定。

6. 用纯净水冲洗玻璃片，将多余的碘液冲洗掉。

7. 加入靛紫溶液，浸泡2分钟，使细菌染色。

8. 用纯净水冲洗玻璃片，将多余的靛紫溶液冲洗掉。

9. 加入乙醇或酒精醋酸液，浸泡20-30秒，使细菌去染。

10. 用纯净水冲洗玻璃片，将多余的乙醇或酒精醋酸液冲洗掉。

11. 将玻璃片晾干或用吸纸吸干。

12. 在显微镜下观察染色后的细菌涂片。

通过革兰氏染色实验，我们可以根据细菌的染色情况判断其是革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌。

革兰氏阳性菌在染色后呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌在染色后呈红色或粉红色。

这是因为革兰氏阳性菌具有较厚的胞壁，可以保留靛紫染料，而革兰氏阴性菌具有较薄的胞壁，无法保留靛紫染料。

革兰氏染色实验是微生物学中常用的一种技术，在细菌学研究和临床诊断中有着广泛的应用。

通过这个实验，我们可以快速地鉴定和分类细菌，为后续的研究和治疗提供便利。

同时，在临床诊断中，革兰氏染色实验也可以帮助医生判断感染性疾病的病原体类型，从而指导合理的治疗方案。

总结起来，革兰氏染色实验是一项简单而重要的实验技术，在微生物学和临床诊断中有着广泛的应用。

通过这个实验，我们可以快速地区分细菌类型，为后续的研究和治疗提供便利。

实验方法步骤革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。

2）草酸铵结晶紫染1分钟。

3）自来水冲洗。

4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5）水洗，用吸水纸吸去水分。

6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7）蕃红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。

干燥，镜检。

G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。

呈紫色。

Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。

革兰氏染色法的主要步骤是先用结晶紫进行初染，再加媒染剂—碘液，以增加染料与细胞间的亲和力，使结晶紫与碘形成分子量较大的复合物，然后用脱色剂（乙醇或丙酮）脱色，最后用番红复染。

凡细胞不被脱色而保留初染剂的颜色（紫色）者为革兰氏阳性菌，如被脱色后有染上复染剂的颜色（红色）者为革兰氏阴性菌。

一般乙醇脱色的时间为30s,如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可能被脱去颜色而被误认为是革兰氏阴性菌；相反，如果时间不够，革兰氏阴性菌未被完全脱色而被认为是革兰氏阳性菌。

染色时间一般控制在1min。

革兰氏染色液的配制：第1液：结晶紫溶液结晶紫乙醇饱和溶液100 mlA液：结晶紫 2.5 g95%乙醇25.0 mlB液：1%草酸铵溶液将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成液；将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合即成。

第2液：路（卢）戈碘液碘化钾 2 g碘 1 g蒸馏水300 ml先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶解时可稍加热，最后补充蒸馏水量。

第3液：脱色剂（1）95%乙醇或丙酮乙醇溶液100 ml95%乙醇70 ml丙酮30 ml第4液：番红花红染色液2.5%番红0 （Safranin 0）95%酒精溶液10 ml蒸馏水90 ml。

细菌的革兰氏染色实验操作步骤流程革兰氏染色是一种常用的细菌分类方法，通过染色技术可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

这种染色方法简单快捷，对细菌的形态特征有着重要的观察作用。

本文将介绍细菌的革兰氏染色实验的详细操作步骤流程。

实验所需材料1.革兰氏染色试剂盒：–革兰碘液–革兰染色液–醇解液–洗涤液–脱水液2.细菌培养液3.玻璃载玻片4.导览盖玻片5.消毒棉球6.显微镜实验步骤1.预处理玻片和试管–用肥皂水洗净手并彻底冲洗干净。

–取一块干净的抹布或纸巾，将玻璃载玻片擦拭干净。

–取一块干净的纸巾蘸取少量醇解液擦拭玻璃载玻片表面，以去除可能存在的杂质。

–将试管清洗干净，用蒸馏水冲洗干净，并放置在烘箱中晾干。

2.制备细菌涂片–打开培养液管，将一滴细菌培养液滴在玻璃载玻片上，可略带颜色。

–将玻璃载玻片侧倾45度，用细胞棉棒轻轻均匀地将细菌培养液涂抹在玻璃载玻片上，尽量避免涂片过厚。

–将涂片晾干。

3.固定细菌涂片–将制备好的细菌涂片放入烘箱中，用50摄氏度温度固定5分钟。

–取出固定的细菌涂片，待冷却后准备进行染色处理。

4.革兰氏染色处理–取一滴革兰碘液，滴在细菌涂片上，静置1分钟。

–洗涤液冲洗：将细菌涂片放入洗涤液中，静置20秒，然后将涂片提起，用自来水轻轻冲洗10秒。

–脱水液处理：将细菌涂片放入脱水液中，静置20秒。

–将细菌涂片提起并用洗涤液清洗3次，每次间隔10秒。

–将细菌涂片放入洗涤液中，静置20秒。

–用细胞棉棒从上到下蘸取革兰染色液，均匀地在细菌涂片上涂抹。

–将细菌涂片放入革兰染色液中，静置1分钟。

–将细菌涂片提起并用洗涤液轻轻冲洗10秒。

–将细菌涂片放入醇解液中，静置1分钟。

–将细菌涂片提起并用洗涤液轻轻冲洗10秒。

5.干燥和观察–用吹风机或自然风将细菌涂片吹干。

–涂片完全干燥后，将其放置在显微镜载片夹上。

–用显微镜在低倍镜下观察涂片，然后转换到高倍镜下观察。

观察细菌在镜片上的染色结果和细菌形态。

简述革兰氏染色法的实验步骤一、准备工作1.1 准备细菌培养物：从培养基上取出革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的培养物，注意保证培养物的纯度和活性。

1.2 准备玻璃片：将玻璃片洗净，并用酒精炉烘烤杀菌，确保无菌。

1.3 准备染色试剂：包括革兰碘液、革兰酒精、洗净的蒸馏水和苏木精染色液。

二、制备细菌涂片2.1 取一支无菌的注射针，将其浸入细菌培养物中，沿着玻璃片上划出一条细菌涂片。

2.2 将涂片晾干，避免细菌在涂片上移动。

三、革兰氏染色3.1 将制备好的细菌涂片放在染色盘上，用革兰碘液滴在涂片上，静置一分钟。

3.2 用蒸馏水洗去多余的革兰碘液。

3.3 倾斜染色盘，用革兰酒精沿涂片滴流，停留时间约为30秒，直到滴落的酒精不再有颜色流出。

3.4 用蒸馏水洗去多余的革兰酒精。

3.5 将涂片放在苏木精染色液中，静置1-2分钟。

3.6 用蒸馏水冲洗涂片，直到冲洗液不再有颜色流出。

3.7 用纸巾轻轻吸干涂片上的水分。

四、观察和解读4.1 将制备好的革兰氏染色涂片放在显微镜下，使用100倍或1000倍镜进行观察。

4.2 革兰氏阳性菌：细菌的细胞壁含有大量的革兰染色复合物，因此在显微镜下呈紫色或蓝色。

4.3 革兰氏阴性菌：细菌的细胞壁较薄，不含革兰染色复合物，在显微镜下呈红色或粉红色。

4.4 根据颜色可以初步判断细菌的革兰氏染色特性。

五、注意事项5.1 实验过程中要注意无菌操作，避免外源细菌的污染。

5.2 染色时间要控制好，过长或过短都会影响染色效果。

5.3 在染色过程中要轻柔操作，避免细菌涂片的脱落或损坏。

5.4 染色后的涂片要及时观察，避免颜色的变化影响结果的解读。

通过以上实验步骤，可以使用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。

这对于临床医生和微生物学研究者来说具有重要意义，可以帮助他们快速鉴定细菌种类，并选择合适的治疗方法。

同时，革兰氏染色法也是微生物学实验中常用的基础技术，对于学习和理解细菌的结构和特性有着重要的作用。

革兰氏染色步骤引言：革兰氏染色是一种常用的细菌染色技术，由丹麦细菌学家Hans Christian Gram于1884年发明。

该技术以细菌细胞壁结构的不同为基础，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。

革兰氏染色的步骤简单易行，适用范围广泛，被广泛应用于医学、生物学等领域的细菌鉴定工作中。

本文将对革兰氏染色的步骤进行详细介绍，以帮助读者更好地了解和掌握革兰氏染色技术。

一、准备工作1.1 试剂准备进行革兰氏染色需要的试剂主要包括：革兰碘液、革兰洗涤液、乙醇和碱性紫。

1.2 样品处理将待染菌株铺在平板上，选择好光洁的玻璃片，取少量样品用针头将菌液均匀涂布在玻璃片上。

待菌落完全干燥后，即可开始染色。

二、革兰氏染色步骤2.1 固定将涂布好菌液的玻璃片朝上放置在架子上，使用银夹将玻璃片固定住。

将固定好的玻璃片在灯火或火焰中加热，直至菌液完全干燥。

此步骤的主要目的是固定菌液，使其不易脱落。

2.2 革兰碘液染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入足量的革兰碘液，浸泡5-10分钟。

革兰碘液的作用是增强染色效果，使细菌细胞壁紧密结合革兰紫染料。

2.3 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。

这一步是为了去除多余的碘液。

2.4 乙醇洗涤将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的95%乙醇，浸泡20-30秒。

乙醇的作用是洗去革兰紫颜料。

2.5 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。

这一步是为了去除多余的乙醇。

2.6 碱性紫染色将固定好的玻璃片放入容器中，加入适量的碱性紫，浸泡30-60秒。

碱性紫的作用是染色细菌细胞。

2.7 洗涤用水冲洗玻璃片，直至水澄清。

2.8 水分干燥将玻璃片放置在架子上晾干或用纸巾轻轻吹干。

确保玻璃片完全干燥后，即可进行观察和分析。

三、结果观察和分析革兰氏染色后，观察玻璃片上的细菌染色情况。

革兰阳性菌一般呈紫色或深紫色，革兰阴性菌一般呈粉红色。

通过观察颜色的不同，可以初步判断细菌的分类，并进一步进行鉴定和分析。

需要注意的是，革兰氏染色技术在细菌鉴定中是一种初步的判断方法，对于一些特殊的细菌，染色结果可能会有一定的误差。

革兰氏染色试验步骤所需试剂和设备：1.菲尔水2.结晶紫3. Lugol液4.酒精5.活菌片6.显微镜7.显微制片玻片8.火焰消毒器实验步骤：1.取一枚无菌的显微制片玻片，并用菲尔水清洗干净，以保证玻片无污染。

2.取一滴无菌的水滴在玻片上，将一枚均匀悬浮的细菌样品加入水滴中。

细菌样品可以是培养物中的细菌液体培养物，也可以是细菌单克隆的菌落。

3.用火焰消毒器将显微镜取出并消毒。

将显微镜调整为100倍放大倍数，并将显微镜使用菲尔水沾湿。

4.用火焰消毒器将显微镜片摆放在火焰上加热，待其冷却后再用纸巾擦拭干净。

确保显微镜片无污染。

5.用取有活菌片的设备，在细菌悬液上取片，使细菌均匀分布于显微片的表面上。

待片上的细菌液体干燥后，将片置于火焰中加热数秒，以固定细菌在片上。

6.将固定后的细菌片依次按如下顺序进行染色:用菲尔水冲洗干净玻片上的细菌，倒入1-2滴的结晶紫液，静置1分钟。

7.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下结晶紫。

8. 倒入1-2滴的Lugol液，静置1分钟。

9. 用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下Lugol液。

10.迅速地将细菌片倒入酒精中，进行脱色。

脱色的时间应控制在10-20秒之间，直到从细菌片上冲洗下少量酒精。

11.用菲尔水冲洗细菌片，直到从玻片上冲洗下酒精。

12.将细菌片放在火焰上加热数秒，使其干燥。

13.将细菌片挂在显微镜上，通过100倍的放大倍数观察细菌的形态和染色性质。

在革兰氏染色中，革兰氏阳性细菌呈紫色或紫黑色，而革兰氏阴性细菌呈红色或粉红色。

观察细菌形态和染色性质可以帮助确定细菌的分类。

革兰氏染色实验报告实验目的，通过革兰氏染色实验，观察和比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的显微镜下的形态特征，从而对细菌进行初步鉴定。

实验材料和方法：1. 实验材料，革兰染色试剂（碘液、靛洋红、洗涤液）、玻璃片、无菌吸管、显微镜、革兰氏阳性菌培养液、革兰氏阴性菌培养液。

2. 实验步骤：（1）取一张无菌玻璃片，用无菌吸管分别取革兰氏阳性菌培养液和革兰氏阴性菌培养液滴于玻璃片上。

（2）将玻璃片放在火焰上加热，使细菌液均匀分布在玻璃片上。

（3）用吸管滴加碘液，静置1分钟后倾倒干净。

（4）用吸管滴加靛洋红，静置1分钟后用水冲洗干净。

（5）将玻璃片挂在显微镜载玻片上，用100倍镜观察。

实验结果：在显微镜下观察，革兰氏阳性菌呈紫色或蓝紫色，球菌呈葡萄簇状，链球菌呈链状排列；革兰氏阴性菌呈红色或粉红色，杆菌呈杆状或弯曲状排列。

实验结论：通过本次实验，我们成功地进行了革兰氏染色，观察到了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的形态特征。

革兰氏染色是一种简单而有效的细菌初步鉴定方法，对于临床医学和微生物学研究具有重要意义。

实验注意事项：1. 实验过程中要保持玻璃片的无菌状态，避免外界污染。

2. 染色试剂的使用要按照规定比例和顺序进行，避免试剂浓度不足或过高影响染色效果。

3. 在观察细菌形态时，要注意调节显微镜的焦距和光线，以获得清晰的观察效果。

4. 实验结束后，要及时清洗实验器材，保持实验台面的清洁。

总结：革兰氏染色实验是微生物学实验中常用的一种方法，通过本次实验的学习和实践，我们对革兰氏染色的原理和步骤有了更深入的理解，并且掌握了正确的操作技巧。

革兰氏染色在细菌鉴定和临床诊断中具有重要的应用价值，希望通过今后的学习和实验，能够进一步提高自己的实验操作能力和科研水平。

革兰氏染色过程包括以下几步：
1.取一块无菌载玻片，用无菌的针头或火钳将待检测的细菌接种
于载玻片上。

2.将载玻片放在烘箱中烘干，使细菌附着于载玻片上。

3.用无菌的针头或火钳将烘干后的载玻片在火焰中消毒一下。

4.用滴管滴上革兰染色液，让其覆盖整个载玻片，静置1分钟。

5.用自来水将载玻片洗净，直到水变清。

6.滴上碘酒，静置1分钟。

7.用自来水将载玻片洗净，直到水变清。

8.滴上脱色剂，静置20-30秒钟。

9.用自来水将载玻片洗净，直到水变清。

10.用无菌纸巾轻轻擦干载玻片上的水分。

11.在显微镜下观察载玻片上的细菌。

革兰氏染色的原理是，细菌细胞壁的结构不同，革兰氏阳性菌的细胞壁含有大量的脂肪酸和乙醇胺，容易吸附革兰染色液，并在碘酒作用下形成紫色复合物，脱色剂不能将其去除；而革兰氏阴性菌的细胞壁薄，含有少量脂肪酸和乙醇胺，不易吸附革兰染色液，碘酒作用下形成的复合物可以被脱色剂去除。

因此，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

简述革兰染色法的操作步骤革兰氏染色法：也称革兰氏阴性染色法。

属于活细胞染色法，也是初中阶段接触的细菌学基本技术之一。

此法特别适合观察病毒的形态，故常作为临床微生物实验中重要的染色方法。

简述革兰氏染色法的操作步骤一般方法如下：(1)检查试管，将所需的培养基配制好并检查是否均匀。

(2)液体试剂的制备：取无菌的结晶紫注射液0。

5ml，精氨酸0。

5ml， 0。

01%升汞液2。

5ml，蒸馏水150ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。

(3)固体试剂的制备：取无菌的结晶紫指示液0。

5ml，精氨酸0。

5ml，蒸馏水50ml混匀后再加蒸馏水至1000ml。

(4)稀释：在试管内分别加入精氨酸0。

5ml，无菌水20ml，再加蒸馏水至9ml，摇匀，用结晶紫指示液染色20分钟，并随时注意结晶紫是否变蓝，必要时可轻轻摇动或加热。

(5)加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。

(6)加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。

(1)检查试管，吸出液体试剂，吸干，检查。

(2)准确量取需用量(或先倒在烧杯中，再用量筒量)，检查药液浓度。

(3)用酒精灯火焰点燃试管内的培养基，分别在每管中加入1。

0ml培养基，将试管放回37 ℃温箱中培养。

(4)观察并记录细菌生长情况。

第一，培养时间应足够，以获得足够的细菌数量；第二，以提高对细菌生长曲线的观察能力；第三，缩短细菌培养时间有利于分离、纯化细菌。

(5)取出试管，观察染色的结果。

如果菌落周围染色较浅，表明染料被细菌分泌物包绕，菌体呈现模糊状态；反之，菌落周围染色较深，则表明细菌染色质集中，结构明显。

①加生理盐水到标线内，使高度恰好达到培养基中最低部位。

②加培养液：吸取配制好的液体培养基分别滴到三个试管中，每个试管各加入100μl的纯化蛋白胨培养基，即为含无菌牛血清的生理盐水，分别置于37 ℃温箱中保存备用。

细菌革兰氏染色法标准流程细菌革兰氏染色法是一种常用的鉴别染色法，它能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。

下面是细菌革兰氏染色法的标准流程：
1.涂片固定：将细菌培养物均匀涂布在玻璃片上，并使其干燥。

2.火焰固定：用火焰将涂片上的细菌固定在玻璃片上。

3.草酸铵结晶紫染液染色：将涂片放入草酸铵结晶紫染液中，染1分钟。

4.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的染液。

5.碘液媒染：将涂片放入碘液中，媒染1分钟。

6.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的碘液。

7.脱色：将涂片放入95%酒精中，脱色20秒。

8.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的酒精。

9.蕃红染色液复染：将涂片放入蕃红染色液中，复染2分钟。

10.水洗：用自来水冲洗涂片，洗去未结合的蕃红染色液。

11.干燥：将涂片干燥，以便于显微镜观察。

12.显微镜观察：将涂片放在显微镜下观察，根据细菌的革兰氏染色结果进行分
类鉴定。

需要注意的是，在进行革兰氏染色时，应按照规定的步骤进行操作，每一步的操作时间和温度也需要严格控制。

此外，为了提高革兰氏染色的准确性和可靠性，需要使用新鲜的染液和媒染液，并在使用前进行过滤处理。

同时，对于不同的细菌种类和不同的实验目的，可能需要调整染色时间和媒染时间等参数。

总之，细菌革兰氏染色法是一种重要的细菌鉴别方法，它能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于细菌的分类、鉴定和治疗具有重要的意义。

在进行革兰氏染色时，需要按照规定的流程进行操作，并注意控制实验条件和提高实验技巧，以提高革兰氏染色的准确性和可靠性。

⾰兰⽒染⾊说明⾰兰⽒染⾊【操作步骤】1、操作前准备：戴⼝罩、帽⼦、⼿套，穿⼯作服，准备并清点本试验所需器材。

2、制作涂⽚：细菌涂⽚的制作包括涂⽚、⼲燥、固定3个步骤。

(1)涂⽚：取洁净载玻⽚1张，⽤铅笔标记，并在玻⽚正中间位置滴加⼀滴⽣理盐⽔。

⽤灭菌环挑取菌落少许，均匀涂布于⽣理盐⽔中，并研磨成直径1~1.5cm的菌膜。

若取菌悬液标本涂⽚，则不需加⽣理盐⽔，直接⽤灭菌的接种环取菌液1~2环，直接均匀涂抹成菌膜。

(2)⼲燥：涂⽚最好置室温下⾃然⼲燥，也可将菌膜⾯向上，在酒精灯⽕焰上⽅约10cm处的热空⽓中微微加热烘⼲。

(3)固定：⽤⼿或玻⽚夹夹住载玻⽚⼀端，⼲燥的涂⽚⾯朝上，在酒精灯⽕焰的外焰上尽快对来回通过2~3次，以玻⽚反⾯接触⽪肤热⽽不烫⼿为宜。

3.染⾊（1）初染：在制好的涂⽚上滴加结晶紫染液数滴（以刚好覆盖菌膜为宜），染⾊⼀分钟，倾斜载玻⽚，⽔洗。

甩去积⽔。

（2）媒染：滴加卢⼽碘液数滴，染⾊1分钟，倾斜载玻⽚。

⽔洗，甩去积⽔。

（3）脱⾊：滴加95％⼄醇数滴，轻轻摇动载玻⽚，使其脱⾊。

需10~30s ⾄⽆紫⾊脱出为准。

（4）复染：滴加稀释复红染液数滴，复染0.5min。

倾斜载玻⽚，⽔洗，甩去积⽔。

⽤滤纸吸⼲或者⾃然⼲燥。

4、油镜检查：待标本涂⽚⾃然⼲燥或⽤吸⽔纸吸⼲后，在菌膜上滴加⾹柏油，置油镜下检查。

表⽪葡萄球菌染成紫⾊，为⾰兰阳性菌，呈葡萄球状排列；⼤肠埃希菌染成红⾊，为⾰兰阴性菌，呈散在的杆状。

5、其他：操作后正确处理医疗垃圾，实验器材归回原位。

【注意事项】1、整个操作过程须注意⽆菌操作。

2、因不同菌龄的细菌，⾰兰染⾊的结果也有差异，故⼀般以18~24h的培养物染⾊效果最好。

3、涂⽚若太厚或太薄，固定时菌体过分受热及脱⾊时间长短，都会影响染⾊结果，要严格按要求操作。

4、涂⽚最好在室温下⾃然⼲燥，若置酒精灯上微加热烘⼲时，切勿靠⽕焰太近，以免标本烤枯变形。

5、染⾊时，染液以覆盖标本为宜，不宜过多。