挥发性盐基氮(VBN)测定方法
- 格式:doc
- 大小:26.00 KB
- 文档页数:2
挥发性盐基氮的测定GB/T5009.44-2003一、适用范围本检测方法适用于动物性食品,肉、水产品等二、原理挥发性盐基氮(VBN)是指动物性食品在腐败过程中,由于细菌的作用,使蛋白质分解后产生的氨、伯胺、仲胺及叔胺等碱性含氮物质,且均有挥发性。
挥发性盐基氮在弱碱性条件下分解与水蒸气一起蒸馏出来形成NH3,便可使以上挥发性的碱性含氮物溢出,然后用硼酸吸收,用标准盐酸滴定便可计算出挥发性盐基氮的含量。
1、NH4+OH→NH3↑+H2O2、4H3BO3+ NH3→NH4HB4O7+5H2O3、NH4HB4O7+HCl+5H2O→NH4C1+4H3BO1.实验用试剂2.实验用设备试验内容精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%附录2:盐酸标准溶液的配制与标定参考标准:GB/T601-20021.盐酸标准溶液的配制按下表的规定量取盐酸,注人1000m L 水中,摇匀。
2.盐酸标准溶液的标定按下表的规定称取于270-300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠,溶于50ml 水中,加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液,用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色,煮沸2 min ,冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
同时做空白试验。
3.计算盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCI)].数值以摩尔每升(mol/L 表示,按式(2)计算:MV V m HCl C ⨯-⨯=)21(1000)( m- 无水碳酸钠的质量的准确数值,单位为克(g); V1 -盐酸溶液的体积的数值,单位为毫升(ml);V: -空白试验盐酸溶液的体积的数值,单位为毫升(mL)M- 无水碳酸钠的摩尔质量的数值,单位为克每摩尔(g/mol)注意事项:1.灼烧温度不能超过300度,当温度超过300度时无水碳酸钠分解,可将马福炉的温度调至250,等升温稳定后再调至280,或者将马福炉事先升温至280度,待稳定后再放入无水碳酸钠2.无水碳酸钠的称量质量小于0.2g时要用十万分子之一天平称量。
挥发性盐基氮的测定挥发性盐基氮20.3.1 原理皮蛋中蛋白质分解后产生碱性含氮物质,如氨、伯胺、仲胺等。
此类物质具有挥发性,在弱碱性溶液中加热蒸馏可随水蒸气蒸出,用硼酸吸收后,再用盐酸滴定,可以计算出100g皮蛋中含氮的质量(mg)。
20.3.2 试剂20.3.2.1 氧化镁混悬液(10g/L):将氧化镁经800~900℃灼烧3h,冷至200℃以下,置干燥器冷却后。
称取1g,用100mL水混匀(临用新配)。
20.3.2.2 三氯乙酸溶液(200g/L)。
取三氯乙酸20g加水溶解并稀释至100mL。
20.3.2.3 硼酸吸收液:100mL硼酸溶液(20g/L),加1mL混合指示液,混匀。
20.3.2.4 甲基红-溴甲酚绿混合指示液:同20.2.2.1。
20.3.2.5 盐酸标准滴定溶液(0.01mol/L)。
20.3.3 分析步骤称取15.00g(将5个皮蛋洗净、去壳。
按皮蛋:水为2∶1的比例加入水,在组织捣碎机中捣成匀浆)。
皮蛋匀浆(相当于10.00g样品),置于烧杯中,用50mL水将样品分次洗入100mL具塞量筒中,加10mL三氯乙酸(200g/L),加水至100mL,充分振摇,待蛋白质沉淀后过滤,滤液备用。
收取10.0mL硼酸吸收液,置于50mL锥形瓶中,将半微量定氮器冷凝管下端插入吸收液液面下。
吸取上述滤液2.00mL,加入定氮器反应室中,并以少量水冲洗,立即加入5mL氧化镁混悬液(10g/L),迅速盖塞,并加水以防漏气,夹紧废液排出口橡皮管,蒸馏5min,移动吸收瓶使冷凝管下端离开液面,继续蒸馏1min,取下吸收瓶,用盐酸标准滴定溶液(0.01moL/L)滴定至灰紫色为终点,同时做试剂空白试验。
为防止蒸馏过程中泡沫过多,可加0.5~1mL异戊醇。
20.3.4 计算式中:X8——样品中挥发盐基氮的含量,mg/100g;V8——测定用样品滴定消耗盐酸标准滴定溶液体积,mL;V9——试剂空白滴定消耗盐酸标准滴定溶液体积,mL;c5——盐酸标准滴定溶液的实际浓度,mol/L;14——与1.0mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量,mg;m11——样品质量,g。
挥发性盐基氮的测定:半微量定氮法(参照GB/T5009.44-2003)原理:TVBN 指动物性食品由于酶和细菌的作用,使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
此类物质具有挥发性,在碱性溶液中蒸出后,用标准酸溶液滴定计算含量。
试剂:1、 氧化镁混悬液(10g/L ):称取10.0g 氧化镁,加1000mL 水,振摇成混悬液2、 硼酸吸收液(20g/L ):称取10.0g 硼酸,加500mL 水3、 盐酸(0.01mol/L )的标准滴定溶液4、 溴甲酚绿-甲基红指示液:溶液I :溴甲酚绿-乙醇指示剂(1g/L ):称取0.1g 溴甲酚绿,溶于乙醇(95%),用乙醇(95%)稀释至100 mL溶液II :甲基红-乙醇指示剂(2g/L ):称取0.1g 甲基红,溶于乙醇(95%),用乙醉(95%)稀释至100 ml取50mL 溶液I ,10mL 溶液II ,混匀5、蒸馏水仪器:半微量定氮仪绞肉机、摇床消化管、移液管、锥形瓶、烧杯、酸式滴定管等定性滤纸、保鲜膜等分析步骤:1、 试样处理:将试样除去脂肪、骨及腱后,绞碎搅匀。
称取约10.0g 于锥形瓶中,加100mL蒸馏水,使用保鲜膜将锥形瓶瓶口封住,置于摇床上振摇30min 后过滤,取滤液备用。
2、 蒸馏:将盛有10mL 吸收液及5-6滴混合指示剂的锥形瓶置于冷凝管下端并使其下端浸没入吸收液的液面下;依次准确吸取5.0mL 氧化镁混悬液和5.0mL 上述式样滤液于消化管中,迅速置于通入蒸汽进行蒸馏,计时3min 取下锥形瓶,使冷凝管下端离开吸收液液面,再计时30s ,使用蒸馏水稍清洗冷凝管下端。
3、 滴定:吸收液用盐酸标准滴定溶液滴定,观察指示剂变色情况,记录盐酸体积4、 试剂空白试验。
注意要求先做空白试验。
5、 参考标准:一级鲜度≤15mgmg/100g ,二级鲜度≤20mgmg/100g ,变质肉>20mgmg/100g 结果计算与分析:试样中挥发性盐基氮的含量按下式进行计算:12V -V c X=100m 5/100⨯⨯⨯⨯()14 式中:X :试样中挥发性盐基氮的含量,单位为mg/100gV1:测定用样液消耗盐酸标准溶液体积,单位为mLV2:试剂空白消耗盐酸标准溶液体积,单位为mLc :盐酸标准溶液的实际浓度,单位为mol/L14:与1.00mL 盐酸标准滴定溶液(c (HCl )=1.000mol/L )相当的氮的质量,单位为mg m :试样质量,单位为g计算结果保留三位有效数字。
挥发性盐基氮(VBN)测定方法每次每组的样品溶液都需要进行测定,并记录数据。
(企业标准)一、原理:利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来,用硼酸吸收,再用标准酸滴定,计算出含氮量。
二、仪器与器皿:1、实验室用样品粉碎机或研钵2、分析天平:感量0.001g3、凯氏蒸馏装置:半微量水蒸汽蒸馏式4、振荡机5、锥形瓶:150ml、250mL具塞6、容量瓶:100mL、1000mL7、滴定管:酸式10mL三、试剂:1、0.lmol/L盐酸标准溶液(无水碳酸钠标定):吸取分析纯盐酸8.3mL,用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液:用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液:分析纯硼酸2g溶于98mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂:甲基红0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合,阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液;化学纯氧化镁1.0g溶于99mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定:1、称取1~5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中,加蒸馏水100mL,振荡摇匀30min 后静置,上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中,加混合指示剂2滴,使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,且保持此溶液为橙红色,否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加入10mL%的氧化镁溶液,小心提起玻璃塞使流入反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水封好,防止漏气,蒸馏10min,使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水洗冷凝管末端,洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定,溶液由蓝绿色变为灰红色为终点,同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算:1、计算见下式:X1=[(V1-V2)xC1x14 /( M1xV’/V)]x100式中:X1:样品挥发性盐基氮的含量,mg/100g;V1:滴定试样时所需盐酸标准溶液体积,mL;V2:滴定空白时所需盐酸标准溶液体积,mL;C1:盐酸标准溶液浓度,mol/L;M1:试样重量,g;V’:试样分解液蒸馏用体积,mL;V :样液总体积,mL;14:与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量,mg。
挥发性氨基氮(VBN)检测方法1、VBN是指动物性食物由于酶和细菌的作用,在腐败过程中,蛋白质分解而产生氨以及含氮胺类物质。
此类物质具有挥发性,在碱性溶液中蒸出后.用标准酸液滴定从而计算含量。
本试验根据此原理。
在半微量检测方法的基础上改良,使检测更简易、快捷。
2、仪器设备:(1)分析天平:分度值0.0001g;(2)电炉子;(3)VBN测定设备;(4)5ml酸式滴定管;(5)电动搅拌器;(6)20ml、5ml大肚移液管;(7)150ml锥形瓶。
3、试剂溶液的配制:(1)0.1mol/L盐酸滴定液:取盐酸分析纯9ml置于1000ml容量瓶中,用蒸馏水定溶至刻度,摇匀标定;(2)1%氧化镁溶液:取氧化镁10g置于1000ml聚乙烯瓶中,用蒸馏水定溶至刻度摇匀即可;(3)2%硼酸溶液:取20g硼酸分析纯置于1000ml容器瓶中,先用少许蒸馏水加热溶解,再稀释至刻度即可。
(4)甲基红-溴甲酚绿指示剂:0.125g甲基红,乙醇25ml混合溶解;0.025g溴甲酚绿,乙醇25ml混合溶解,二者混合使用,在阴凉处保存期为3个月。
4、检测步骤:(1)试样液制备:称取样品10g左右,加入100ml蒸馏水,用电动搅拌器搅拌10分钟后,静止1小时。
(2)蒸馏:吸取5ml试样液上清液置于VBN蒸馏器中,再加入1%氧化镁溶液5ml,密封。
用20ml2%硼酸溶液吸收(150ml锥形瓶),蒸馏4分钟,空蒸1分钟,用0.1mol/L盐酸滴定液滴定,由蓝色滴至红色即可。
5、计算公式:(V1-V2) × C × 14VBN = × 100mg/100gM ×(V1/V)注:V1-------滴定试样时所需盐酸标准液的体积,ml;V2-------滴定空白时所需盐酸标准液的体积,ml;V1-------吸取试样液上清液的体积,ml(5ml);V--------稀释试样的总体积,ml(100ml);M-------所测试样液的总质量,g。
挥发性盐基氮的测定(TVB-N)
一、原理:蛋白质分解时,氨基酸脱氨基生成氨,氨基酸脱羧基生成胺,氨与胺在碱液中被蒸发出来,用硼酸吸收,用标准盐酸反滴定,测出其含量。
操作步骤:称取5-10g样品于250ml具塞三角瓶内,准确加入100.00ml水,振荡30min,过滤,取虑液10.00ml,按粗蛋白蒸馏操作,但加入的碱为氧化镁溶液(10g/L、1%)5-8ml。
然后用HCL滴定,滴定终点为灰红色。
二、试剂和仪器:1%氧化镁、2%硼酸溶液、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂:0.2%甲基红乙醇溶液1份与0.2%溴甲酚绿乙醇溶液5份混合、0.01N盐酸标准溶液;半微量定氮器、微量滴定管:最小分度
0.01ml。
四、计算:挥发性盐基氮(TVB-N)(mg/100g)={(V1-V0)× C× 14/〔M ×(10/100)〕}×100 。
式中:TVB-N── 挥发性盐基氮,mg/100g;V1──被测样液消耗盐酸标准溶液的体积,ml;V0──试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积,ml;C──盐酸标准溶液的当量浓度;M──样品重量,g;14── 1N盐酸标准溶液1ml相当氮的毫克数。
五、实例:鱼粉样品8.6706g,VHCL=0.0200mol/L、V=3.93ml、V0=0.015ml. VBN={0.0200*(3.93-0.015)*14/(8.6706*10/100)}*100=126.42mg/100g。
应用:新鲜度好的鱼粉VBN<100mg/100g(40-80),新鲜度差的鱼粉VBN>150mg/100g (180-350)。
挥发性盐基态氮的测定VBN---参照GB/T 5009.44-20031 原理挥发性盐基态氮,英文名称:V olatile Basic Nitrogen,简称:VBN,是指蛋白质因微生物滋长或本身酵素(酶)作用,使其蛋白质分解成较低分子量具有挥发性的氨、二甲胺、三甲基胺等物质,因此根据挥发性物质含量的多寡,可判断出蛋白质的变性程度。
将样品用水萃取,澄清过滤后,放入蒸馏仪中,挥发性盐基态氮在氧化镁的沸点下,被释放出来,用硼酸液吸收,再用盐酸滴定,换算成挥发性盐基态氮的含量。
2 试剂2.1 氧化镁混悬液(10g/L): 称取 1.0g氧化镁,加100mL水,振摇成混悬液。
2.2 硼酸吸收液(20g/L)。
2.3盐酸[c(HCl = 0.010 mol/L」或硫酸[c(1/2H2SO4)=0.010mol/L〕的标准滴定溶液。
(临用新配)2.4 混合指示剂:0.1%甲基红: 0.1%亚甲基蓝= 2:1 < V/V >2份甲基红0.1%乙醇(95%)溶液,与1份亚甲基蓝0.1%乙醇(95%)溶液混合,保存于棕色瓶中。
在阴凉处保存期为三个月。
3 仪器3.1半微量定氮器。
3.2微量滴定管:最小分度0.01mL.4 分析步骤4.1 试样处理称取约10.0g样品,置于150mL烧杯中,加100 mL水,磁力搅拌30min 后,静置,过滤。
4.2 蒸馏滴定将盛有25mL硼酸吸收液的锥形瓶置于冷凝管下端,并使其下端插人吸收液的液面下。
准确吸取 5.0mL 上述试样滤液置于消化管内,加5mL氧化镁混悬液(10g/L)后,迅速放入蒸馏仪中,进行蒸馏。
吸收液用盐酸标准滴定溶液(0.010mol/L) 滴定,颜色由蓝绿色变至灰红色为终点。
同时做试剂空白试验5 结果计算试样中挥发性盐基氮的含量按下式进行计算。
式中:X —试样中挥发性盐基氮的含量,单位为毫克每百克(mg/l00g);V1—测定用样液消耗盐酸标准溶液体积,单位为毫升(mL);V2—试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,单位为毫升(mL);c —盐酸标准溶液的实际浓度,单位为摩尔每升(mol/L);14 —与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HC1)=1.000mol/L〕相当的氮的质量,单位为毫克(mg);m —试样质量,单位为克(g)。
挥发性盐基氮(VBN)测定方法
一、原理:
利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来,用硼酸吸收,再用标准酸滴定,计算出含氮量。
二、仪器与器皿:
实验室用样品粉碎机或研钵
分析天平:感量0.001g
3、凯氏蒸馏装置:半微量水蒸汽蒸馏式
4、振荡机
5、锥形瓶:150ml、250mL具塞
6、容量瓶:100mL、1000mL
7、滴定管:酸式10mL
三、试剂:
1、0.lmol/L盐酸标准溶液(无水碳酸钠标定):吸取分析纯盐酸8.3mL,用蒸馏水定容至1000mL。
2、0.01mol/L盐酸标准溶液:用0.1mol/L盐酸标准溶液稀释获得。
3、2%硼酸溶液:分析纯硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
4、混合指示剂:甲基红0.1%乙醇溶液,溴甲酚绿0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合,阴凉处保存期三个月以内。
5、1%氧化镁溶液;化学纯氧化镁1.0g溶于100mL蒸馏水振接成混悬液。
四、测定:
1、称取1~5g试样(精确到0.001g)于250mL具塞锥形瓶中,加蒸馏水100mL,振荡摇匀30min后静置,上清液为样液。
2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL锥形瓶中,加混合指示剂2滴,使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。
3、蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,且保持此溶液为橙红色,否则补加硫酸。
4、准确移取10mL样液注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口,塞好入口玻璃塞,再加入10mL%的氧化镁溶液,小心提起玻璃塞使流入
反应室,将玻璃塞塞好,且在入口处加水封好,防止漏气,蒸馏10min,使冷凝管末端离开吸收液面,再蒸馏1min,用蒸馏水洗冷凝管末端,洗液均流入吸收液。
5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L盐酸标准液滴定,溶液由蓝绿色变为灰红色为终点,同时进行试剂空白测定。
五、测定结果计算:
1、计算见下式:
X1=[(V1-V2)xC1x14 /( M1xV’/V)]x100
式中:X1:样品挥发性盐基氮的含量,mg/100g;
V1:滴定试样时所需盐酸标准溶液体积,mL;
V2:滴定空白时所需盐酸标准溶液体积,mL;
C1:盐酸标准溶液浓度,mol/L;
M1:试样重量,g;
V’:试样分解液蒸馏用体积,mL;
V :样液总体积,mL;
14:与1.00mL盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相当的氮的质量,mg。
2、重复性:
每个试样取两个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。
允许相对偏差为5%。