转 铁 蛋 白(Transferrin)测定标准操作程序SOP文件

转铁蛋白沉淀
转铁蛋白（transferrin）本身不直接与“沉淀”这一概念关联，但在特定条件下可发生沉淀现象。

转铁蛋白是一种重要的血浆蛋白，负责运输铁离子到身体各部分。

转铁蛋白结合的铁不会催化羟基自由基形成，具有抗氧化和抗菌作用。

在某些情况下，如疾病或化疗过程中，转铁蛋白的铁结合能力可能超载，导致非转铁蛋白结合的铁离子在体内富集，这可能会影响细胞的正常功能。

在实验室研究中，转铁蛋白的测定可能涉及到使其沉淀的步骤，以便于检测和量化。

例如，在进行血浆蛋白电泳时，转铁蛋白可以作为样本的一部分被沉淀并分离出来。

此外，转铁蛋白受体在肿瘤细胞表面过度表达，且能在酸性微环境下释放包载药物，因此在肿瘤治疗中也有应用。

总的来说，转铁蛋白主要涉及铁的运输和相关生理功能，而其沉淀现象可能发生在特定的生物化学分析过程中，或者是由于病理状态下体内铁代谢的改变。

鸡蛋卵转铁蛋白铁结合能力及性质的研究杜华英，吴磊燕，朱丽琴，杨武英，蒋艳，徐明生（江西农业大学食品科学与工程学院，江西省高校天然产物研究与开发重点实验室，江西南昌 330045）摘要：本试验研究了鸡蛋卵转铁蛋白与不同浓度铁离子的结合能力，以及卵转铁蛋白在不同pH值和NaHCO3条件下与铁离子的结合能力；采用差示扫描量热仪(DSC)和圆二色性(CD)光谱分析卵转铁蛋白铁饱和度对其热变性温度和结构的影响。

结果表明，铁离子与卵转铁蛋白的摩尔比值在2.2左右时，卵转铁蛋白铁达到完全饱和；在中性和偏碱性的条件下，卵转铁蛋白对铁结合能力比较高；卵转铁蛋白铁结合能力随着NaHCO3浓度的增加而增强，当其浓度超过75 mmol/L以后，铁结合能力基本保持不变。

卵转铁蛋白铁饱和度越高，其热变性温度越高，由去铁卵转铁蛋白的63.41℃到饱和铁卵转铁蛋白的83.29 ℃；去铁卵转铁蛋白比饱和铁卵转铁蛋白的远紫外CD光谱带更加趋于负值，α-螺旋含量有微小的减少，减少量为4.40%，而β-折叠、β-转角和其它的含量均有所增加，增加量分别：2.80%、1.20%、12.90%；在近紫外CD光谱区，饱和铁卵转铁蛋白的三级结构发生了较为明显的变化。

关键词：卵转铁蛋白；铁结合能力；热变性温度；结构文章篇号：1673-9078(2015)4-109-114 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.4.018 Analysis of the Iron-binding Capacity and Characteristics of Hen Egg Ovotransferrin under Different ConditionsDU Hua-ying, WU Lei-yan, ZHU Li-qin, YANG Wu-ying, JIANG Y an, XU Ming-sheng(College of Food Sci-Eng, Jiangxi Agriculture University, Key Laboratory of Education in Natural Product Research andDevelopment, Nanchang 330045, China)Abstract: The binding capacity of hen egg ovotransferrin (OV T) to different concentrations of iron ions was studied under multiple pH conditions and NaHCO3concentrations. The effects of iron saturation on the thermal denaturation temperature and structure of OV T were analyzed by differential scanning calorimetry (DSC) and circular dichroism (CD) spectrum analysis. The results showed that complete iron saturation was obtained at an approximate iron ion to OV T molar ratio of 2.2. OV T exhibited higher iron-binding capacity under neutral or slightly alkaline pH conditions. The iron-binding capacity of OVT also increased with the increase in NaHCO3concentration; however, a steady-state level was reached at NaHCO3concentrations exceeding 75 mmol/L. The thermal denaturation temperature of OV T increased corresponding to the increase in iron saturation, and was observed to be 63.41 ℃and 83.29 ℃for apo-ovotransferrin (apo-OV T) and holo-ovotransferrin (holo-OV T), respectively. Apo-OVT showed a more negative band in the far-ultraviolet CD spectrum compared to holo-OV T; the α-helical content of apo-OVT decreased by 4.4%, while that of β-sheet strands, β-turns, and other structures increased by 2.80%, 1.20%, and 12.90%, respectively. The tertiary structure of holo-OV T displayed an obvious change in the near-ultraviolet region of the CD spectrum.Key words:ovotransferrin; iron-binding capacity; thermal denaturation temperature; structure转铁蛋白(Transferrin)是单一肽链的蛋白质，是人体内一种重要的铁元素载体，许多疾病都与人血清中转铁蛋白的含量变化有关，如缺铁性贫血、急性肝炎及蛋白质缺乏等。

检验科本周蛋白检测标准操作规程1.【检验目的】2.为了规范本周蛋白定性检测方法, 特制定本规程。

3.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP, 室负责人监督落实。

4. 2.2本SOP的改动, 可由任一使用本SOP的工作人员提出, 并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

5.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型: 新鲜尿液3.2患者准备: 患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。

3.3容器添加剂类型: 配套小便试管3.5实验试剂: 2g/L磺基水杨酸溶液。

2mol/L 醋酸盐缓冲溶液(PH4.9±0.1):取醋酸钠(CH3COONa-3H2O)17.5g,加冰醋酸4.1ml,再加蒸馏水至1ml,调PH至4.9.6.【测定原理】7.本-周氏蛋白又称凝溶蛋白, 是一种免疫球蛋白的轻链或其聚合体。

此种蛋白在一定的PH条件下加热至40-60P时沉淀发生, 温度升高至1P时, 沉淀消失, 再冷却时又可重现沉淀。

8.【操作步骤】5.1将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查, 如呈阴性反应, 也需对尿液标本中本-周氏蛋白进一步检测。

9. 5.2取透明尿液4 ml于试管中, 再加入乙酸缓冲液1 ml, 混匀后放置56P水浴中15分钟, 如有浑浊或出现沉淀, 再将试管放沸水中煮沸3分钟, 观察试管中浑浊或沉淀的变化。

如浑浊变清、减弱或沉淀减少均提示本-周氏蛋白阳性。

若煮沸后, 浑浊增加或沉淀增加, 表明此尿液中还有其他蛋白质, 此时应将试管从沸水中取出, 立即过滤, 如滤液开始透明, 温度下降后浑浊, 再煮沸时又透明, 提示本-周氏蛋白为阳性。

10.【结果计算与判断】如浑浊变清, 浑浊减弱或沉淀减少, 均提示本-周氏蛋白阳性。

11.若煮沸后, 浑浊增加或沉淀增多, 表明此尿液中还有其他蛋白质, 此时应将试管从沸水中取出, 立即过滤。

如过滤开始透明, 温度下降后浑浊, 再煮沸时透明, 提示本-周氏蛋白为阳性。

转铁蛋白检测操作方法
转铁蛋白检测是一种常用的实验方法，用于检测样品中的转铁蛋白含量。

以下是转铁蛋白检测的操作方法：
1. 准备试剂：
a. 细胞裂解液或组织液样品
b. 酸性显色试剂：通常使用巴比特酸或戊二酰亚胺溶液作为酸性显色试剂
2. 样品预处理：
a. 首先，对细胞裂解液或组织液样品进行蛋白质浓度测定，以确保样品在检测范围内。

b. 将样品稀释至合适的浓度，以避免过高的浓度影响检测结果。

3. 进行转铁蛋白检测：
a. 取一部分样品，加入相应的试管或微孔板中。

b. 加入酸性显色试剂，将样品与显色试剂混合。

c. 在适当的温度下孵育反应混合物一段时间，使其发生显色反应。

d. 制备一个空白对照组，其中只包含显色试剂。

e. 使用分光光度计测量每个样品的吸光度，并记录吸光度值。

4. 数据分析：
a. 根据测量的吸光度值绘制标准曲线，曲线上吸光度值与已知转铁蛋白浓度
之间的关系。

b. 将样品的吸光度值与标准曲线进行比较，从而确定样品中转铁蛋白的浓度。

需要注意的是，转铁蛋白检测方法会因实验室和试剂的差异而有所不同。

因此，具体的操作步骤可能会有所不同，建议参考所使用试剂盒的说明书或咨询相关专业人士进行操作。

转铁蛋白（Transferrin）Cas；11096-37-0转铁蛋白是血液中一种主要的糖蛋白, 负责将肝组织(是铁贮藏的主要场所)的铁向其它组织的细胞运输。

没有结合铁的转铁蛋白称作脱铁转铁蛋白(apotransferrin), 它能够紧紧结合两个Fe3 , 此时称为铁结合转铁蛋白(ferrotransferrin)。

所有生长中的细胞表面都有铁结合转铁蛋白的受体,在中性pH条件下转铁蛋白与铁结合, 然后通过内吞作用进入细胞。

在细胞内,在内体的酸性环境下, 转铁蛋白释放出铁, 但是仍与膜受体结合在一起, 并与受体一同回到质膜。

当细胞外环境变成中性时, 转铁蛋白同受体脱离,并自由地结合铁, 然后又开始新一轮循环。

实际上, 转铁蛋白穿梭于细胞外液体和内体之间, 避开了溶酶体, 快速传递细胞生长所需的铁。

基本简介转铁蛋白（transferrin，TRF，siderophilin）是血浆中主要的含铁蛋白质，负责运载由消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁。

以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生成。

TRF分子量约7.7万，为单链糖蛋白，含糖量约6%。

TRF可逆地结合多价离子，包括铁、铜、锌、钴等。

每一分子TRF可结合两个三价铁原子。

TRF主要由肝细胞合成，半寿期为7天。

血浆中TRF的浓度受铁供应的调节，在缺铁状态时，血浆TRF浓度上升，铁有效治疗后恢复到正常水平。

血浆中TRF水平可用于贫血的诊断和对治疗的监测。

在缺铁性的低血色素贫血中TRF的水平增高（由于其合成增加），但其铁的饱和度很低（正常值在30%-38%）。

相反，如果贫血是由于红细胞对铁的利用障碍（如再生障碍性贫血），则血浆中TRF正常或低下，但铁的饱和度增高。

在铁负荷过量时，TRF水平正常，但饱和度可超过50%，甚至达90%。

TRF在急性时相反应中往往降低。

因此在炎症、恶性病变时常随着白蛋白、前白蛋白同时下降。

在慢性肝疾病及营养不良时亦下降，因此可以作为营养状态的一项指标。

生化检测-血清铁测定（SOP）1.目的：检测人体血清铁测定。

2.原理：2.1.方法学：络合显色比色法。

2.2.方法原理：2.2.1.本试剂与铁试剂盒配套使用，用于测定人血清中未饱和，过剩的铁用碱性碳酸镁吸附，沉淀除去，然后按测定铁同样的方法测定铁的含量及末饱和铁结合力。

2.2.2. 铁-转铁蛋白去污剂Fe3++转铁蛋白Fe3+原污剂Fe2.2.3.反应方程式：Fe3++亚铁嗪→红色络合物3.样本采集和处理：3.1.病人准备：病人应处于安静、呼吸稳定的状态，穿刺时应尽量减少病人的疼痛感。

坐位与卧位、睡眠后与清醒时、运动后与进餐后都会产生不同的结果。

3.2.样本种类：生物学的体液样本应该以同样的方式来收集，以便用来测试任何实验室中的试验。

新鲜的、刚被抽出的血清、血浆或脑脊液是最佳的样本选择。

如果用血浆作样本，最好使用草酸钾/ 氟化钠抗凝剂，因为草酸钾/氟化钠抗凝剂可制葡萄糖的酵解。

全血是不被推荐的样本。

3.3.样本采集：除非是卧床的病人，一般在静脉采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。

故在采血前至少应静坐5min 。

一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1m i n ，穿刺成功后立即松开止血带。

采3.4.样本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求（要求封密、无溶血、无杂物）所用试管是否正确、试管标签是否填写完整、并询问采血时间，对不合格标本应退回重采，并填写记录。

3.5.样本保存：3.5.1.采血管应该一直保持垂直、塞住的姿势。

血清或血浆应该立即被分离，防止溶血，避免接触到血球部分。

从采血到上机的最长时间限制是 2 小时。

3.5.2.分离的血清或血浆在 15℃～30℃的环境下不应该保存超过 8 小时。

假如测试无法在 8小时内完成时，血清或血浆应该被保存在 2℃～8℃的环境中；假如测试无法在 48小时内完成，或分离的样本无法储存超过 48 小时，样本应该冰冻在零下 15℃～20℃的环境中。

铁蛋白检测标准操作程序1检验目的本试剂盒用于体外定量测定人血清和（或）血浆中的铁蛋白(FERRITIN)。

2检验原理及方法3性能特征3.1线性范围：1.0 ng/mL-1500 ng/mL；3.2最低检测限：不大于0.5 ng/mL；3.3准确度：相对偏差在±10.0%范围内；3.4重复性:重复性检测的变异系数（CV）不大于10.0%；3.5批间差:3个批号试剂批间变异系数（CV）不大于15.0%4标本4.1检测标本：血清和血浆（肝素锂、肝素钠、EDTA和柠檬酸钠抗凝）是推荐使用的样本类型。

尚未验证其他抗凝剂能否适用。

4.2采集及处理：在进行离心操作前需让血清样本完全凝结（凝结时间不小于1小时）。

所有的待测样本在测试前均应进行离心操作。

顶部含脂质的离心样本，需转移澄清、无脂质的部分到新的样本管中。

在测试前，确保已去除了残余的纤维蛋白和细胞类物质。

应小心处理患者样本，避免交叉污染。

在测试前，确保患者样本、校准品、质控品均已平衡至环境温度（20-25°C）。

为避免蒸发可能带来的影响，样本和校准品应在上机后2小时内完成测试。

4.3样品储存：在室温（20-25°C）下，样本保存时间不得超过8小时。

在室温（20-25°C）下，样本保存时间不得超过8小时。

冷冻样本在融化后必须进行充分混匀。

样本冷冻次数不得超过3次。

5设备仪器：iFlash 3000化学发光免疫分析仪。

6试剂6.1试剂：铁蛋白测定试剂盒（化学发光法）；包装量：2×50人份/盒；6.2储存要求：（1）储存：存放在2-8°C，保持竖直向上。

（2）有效期：试剂瓶及校准品未开封存放于2-8°C：可稳定365天；试剂瓶使用后存放于2-8°C或在机储存：可稳定28天。

7环境和安全7.1激发液中含有氢氧化钠，应避免接触到眼睛。

7.2在处理所有的实验室试剂时应进行常规的预防措施。

白蛋白测定的标准程序【目的】体外检测血清白蛋白（ALB ）的含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况。

孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。

此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂采用澳甲酚绿染料结合法，即在PH4.2条件下，白蛋白与澳甲酚绿结合形成蓝绿色络合物。

反应形成的蓝绿色络合物与样本中白蛋白浓度成正比。

通过在630nm处测定吸光度值的变化值，即可测得样本中白蛋白的浓度。

二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司ALB试剂盒，为液体单试剂，其各组分如下：试剂组分澳甲酚绿0.35 mmol/L丁二酸缓冲液50 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号:449 5 0/4 5 9 5 0对测定进行校准。

2. 2校准间隔2. 2. 1试剂批号变更时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。

2. 2. 2室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。

三、操作按生化分析仪操作要求结合长征试剂说明书输入测定参数，并按校准、质量控制、样本测定的顺序进行常规测定。

四、计算白蛋白浓度（g/L ） 五、质控程序1. 建议采用朗道水平2（正常范围质控）和 水平3 （病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。