下载文档原格式
蛴螬提取物抗肿瘤作用的体外血清药理学实验金龙男;孙抒;杨万山;李基俊【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2008(48)1【摘要】目的探讨蛴螬提取物对人肺癌A549和人宫颈癌HeLa细胞株抗肿瘤作用.方法采用血清药理学实验方法,观察含药血清体外对人肺癌A549和人宫颈癌HeLa细胞株抗增殖作用.结果血清药理学实验结果显示,终浓度分别为20%、25%的灭活的蛴螬提取物含药大白鼠血清对A549细胞株的增殖抑制率分别为18.92%、37.54%;终浓度分别为10%、20%、25%的灭活的蛴螬提取物含药血清对HeLa细胞株的增殖抑制率分别为39.86%、24.86%及26.60%.结论蛴螬提取物含药血清对人肺癌A549和人宫颈癌HeLa细胞株增殖有抑制作用.【总页数】2页(P31-32)【作者】金龙男;孙抒;杨万山;李基俊【作者单位】延边大学基础医学院,吉林延吉,133000;延边大学基础医学院,吉林延吉,133000;延边大学基础医学院,吉林延吉,133000;延边大学基础医学院,吉林延吉,133000【正文语种】中文【中图分类】R979.1【相关文献】1.蛴螬提取物体外对人MGC-803胃癌细胞株凋亡相关基因作用的研究 [J], 金哲;孙抒;李基俊;李雪梅2.泡核桃壳提取物体外抗肿瘤作用研究 [J], 刘成娇;夏盟恺;李杨;王莹3.蛴螬提取物抗肿瘤作用的实验研究 [J], 金龙男;孙抒;杨万山;李基俊4.蛴螬提取物体外对人MGC-803胃癌细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用的形态学观察 [J], 孙抒;金哲;李基俊5.蛴螬提取物体外抗肠道EV-71病毒的研究 [J], 侯宝山;王清;牛文斐;张加泽;周长征因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
（06）蛴螬药性之推论与临床蛴螬药性之推论与临床最近在整理蛴螬这味药的时候，看到一般本草书对于蛴螬这味药的解释，以及一般很多医家对《伤寒论》不论教学或是批注，处理蛴螬这味药的方式，真让人觉得它受尽了污辱。
它其实是很不错的一味药，只是不知道为什么，大家都不太把它放在眼里。
不论是一般中医或是中医教学研究者，大家通常都说：「喔，蛴螬这味药，就是帮忙化瘀而已。
」但我觉得抵当汤里大黄、桃仁、水蛭、虻虫这一个铁四角结构，化瘀血的力量已经是最强的了，根本不需要土鳖虫或蛴螬这些药来帮忙，我就很不理解，为什么它的药性就这么随便地在本草研究中被忽略了？其实从中国古方看来，蛴螬的药性仍是有迹可循的，如果今天是因为不需要蛴螬这个药的药性而不用它，那我觉得这还情有可原；可是如果我们都不搞清楚它的药性，就觉得这味药可有可无，那这样对这个药真是太轻薄了，而且在思考事情的逻辑上也说不过去。
蛴螬这味药《神农本草经》是属于下品：治恶血血瘀、痹气、破折、血在胁下坚满痛、月闭、目中淫肤青翳白膜。
这样的一个药性。
一开始看到这条条文，直接就会使人觉得这个药比较走肝胆，因为它治疗的区块包括了胁下、眼睛。
中国人的五行分类是有粗略概括性看法的，蛴螬这个虫是金龟子的幼虫，古时候的有些书会说「蛴螬脱了壳就变成蝉」，这其实是不对的。
蛴螬是金龟子的幼虫，金龟子的幼虫是吃木头渣长大的，这种吃木头渣的东西在五行里大都是跟风木之气有关的，药性上有一定的倾向──像蚕啦，知了啦，书蠹虫（衣鱼）啦──所以，与其说它治血，不如说它治风；说它化瘀，它化瘀的效果也远比不上前面那几味化瘀大药。
在讲蛴螬的药性之前，我要先讲个完全不负责任、高度童话性质的假设。
这个假设甚至不是中医里的，是比较灵修世界的一个假设。
就是呢，金龟子这种昆虫的幼虫有一个特质，它的幼虫有个特质跟别的虫的幼虫不太一样，同样是肥肥白白的幼虫，金龟子的幼虫蛴螬，跟独角仙、锹形虫的幼虫相比就是不一样，怎么不一样呢？就是它是倒过来走路的，「背行」，用背部走路，就算你把它脚朝下放在桌上，它照样翻过来脚朝天在桌上蠕动前进。
蛴螬多糖对家兔血脂调节作用的研究
归改霞
【期刊名称】《中医临床研究》
【年(卷),期】2017(9)2
【摘要】目的:探讨蛴螬多糖对高脂家兔的血脂是否具有降低的作用。
方法:家兔
2~3kg,随机分为正常组、水蛭素煎剂组和蛴螬多糖组,正常组喂以普通饲料,灌服生理盐水,另外两组喂以高脂饲料,分别灌胃两种药物,药物干预后,取颈动脉血测定TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量,分析蛴螬多糖对血脂的调节作用。
结果:与正常组比较,蛴螬多糖组血脂均有所下降,但下降程度不同;与水蛭素煎剂组比较,蛴螬多糖组血脂下降速度较快,均下降到了正常范围内。
结论:通过实验发现,蛴螬在临床上作为中药治疗多种疾病,蛴螬的活性成分多糖具有降脂作用。
【总页数】2页(P11-12)
【关键词】蛴螬多糖;血脂;调节
【作者】归改霞
【作者单位】南阳医学高等专科学校
【正文语种】中文
【中图分类】R331
【相关文献】
1.降糖通脉宁对实验性高血脂症家兔脂质代谢的调节作用 [J], 倪平;孙明杰
2.菩洱山楂茶饮对家兔高血脂调节作用的实验观察 [J], 刘传慧;王金国;郗颖;吴国
华
3.石榴果实多糖对糖尿病大鼠血糖及血脂的调节作用 [J], 刘晓伟;冯海云
4.血脂散对家兔血脂调节作用的实验研究 [J], 俞发荣;石清芳;连秀珍
5.黑木耳及其多糖对高脂饮食大鼠的降血脂和肠道菌群调节作用 [J], 张廷婷;赵文颖;谢倍珍;刘红
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蛴螬，昆虫开发利用开头文中的蛴螬是爬山的时候，小伙伴发现的，小伙伴叫它土蚕，是个喜欢危害土豆的害虫，我们来看他的用途和相关资料吧。
蛴螬害虫性蛴螬也叫地蚕，可为害的豆科、禾本科、薯类、蔬菜和野生植物达31科，78种之多。
成虫会飞到植株上咬食叶片。
幼虫及成虫都能在土中越冬，一般是成虫在地下40cm，幼虫在90cm以下越冬。
当春季10cm深土层温度上升到14～15℃时幼虫开始活动，喜欢有机质，喜欢在骡马粪中生活。
成虫夜间活动，白天潜藏于土中或作物的根际，具假死性和趋光性。
幼虫有3对胸足，体肥胖，乳白色，常蜷缩成马蹄形，并有假死性。
幼虫有3个龄期，全在土壤中度过，随土壤温度变化而上下迁移，其中以3龄幼虫历期最长，为害最重。
蛴螬药用性蛴螬为金龟子科昆虫朝鲜黑金龟子的干燥幼虫，民族药中朝鲜族的习用药材,朝药图志收载的功能主治具有破血、利水消肿,常用于太阴人跌打损伤、羸瘦腹满、癥瘕、经闭、浮肿等病症。
«中国药典»2015年版一部中收载的大黄虫丸、大黄虫胶囊、大黄虫片处方中均用到蛴螬。
蛴螬中含有尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷等成分,而肌苷在«中国药典»2015版二部收载的剂型有肌甘口服液、肌苷片、肌苷注射液、肌苷胶囊、肌苷葡萄糖注射液、肌苷氯化钠注射液、注射用肌苷。
肌苷用于白细胞或血小板减少症,各种急慢性肝脏疾患、肺原性心脏病等心脏疾患;中心性视网膜炎、视神经萎缩等疾患。
蛴螬具有破血祛瘀、散结通乳、明目等功效,用于胸肋瘀血疼痛、丹毒、疮疡、痔瘘、目中翳膜，肌苷与蛴螬治疗作用具有相似性。
蛴螬在春、夏二季捕捉,用沸水烫死,晒干或烘干。
昆虫临床应用中医认为,昆虫类中药多具有祛风通络、熄风止痉、补肾益精等功效,用于肝阳上亢、肾虚阳痿等的治疗。
临床上常用蜂蜜、蜂乳治疗十二指肠溃疡及胃溃疡,收到了良好的效果；蜂毒具有较强的抗炎、抗过敏作用,用于类风湿性关节炎、支气管哮喘等疾病的治疗,有很好的疗效。
虫类中药蛴螬中含氮化合物研究李林;晏永明;李小年;钟惠民;程永现【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2013(025)003【摘要】Thirteen nitrogenous compounds were isolated from the ethanol extract of a medicinal insect, namely Holotrichia diomphalia Bates. The thirteen compounds were identified as N-[2-(4-hydroxybenzoic)-ethyl]acetamide (1) , cyclo(Tyr-Pro) (2) ,pyridine-3-carboxylic acid amide (3) ,thymidine (4) ,valerolactam (5) ,5-(hydroxmethyl)-1H-pyrrole-2-carbaldehyde (6) ,cyclo(Pro-Val) (7) ,cyclo( Pro-Ala) (8),oxindole (9) ,1,2,3,4-tetrahydro-1 ,3,4-tri-oxo-β-carboline (10) ,indole-3-aldehyde(11),xanthosine (12) and phenylalanine (13) using spectroscopic methods. All these compounds were isolated from this species for the first time.%从虫类中药蛴螬Holotrichia diomphalia Bates的乙醇提取物中分离得到13个化合物,其结构经谱学数据和与已知化合物比较,分别鉴定为N-[2-(4-羟苯基)-乙基]乙酰胺(1)、环(酪氨酸-脯氨酸)(2)、吡啶-3-甲酰胺(3)、胸苷(4)、戊内酰胺(5)、5-(羟甲基)-1H-吡咯-2-醛(6)、环(脯氨酸-缬氨酸)(7)、环(脯氨酸-丙氨酸)(8)、羟吲哚(9)、l,2,3,4-四氢-1,3,4-三氧-β-咔啉(10)、吲哚-3-醛(11)、黄苷(12)和苯基丙氨酸(13).化合物1～13均为首次从该种动物药中分离得到.【总页数】4页(P329-332)【作者】李林;晏永明;李小年;钟惠民;程永现【作者单位】中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室,昆明650204【正文语种】中文【中图分类】R93【相关文献】1.浅述虫类中药在治疗肾纤维化中运用 [J], 丁海波;吴兆东;傅奕;徐江祥2.虫类中药蛴螬的酚性成分 [J], 王静;晏永明;谭睿;程永现3.有毒虫类中药在结直肠癌临床治疗中的运用 [J], 伍谨林; 杨柱; 龙奉玺; 刘薰; 王佳; 余婷; 唐东昕4.归肝经虫类中药在肝癌中的应用 [J], 张稚淳; 王志刚; 王婧; 李加葵; 田劭丹5.归肝经虫类中药在肝癌中的应用 [J], 张稚淳;王志刚;王婧;李加葵;田劭丹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
田间害虫蛴螬的药用价值农民伯伯深恶痛绝的田间害虫蛴螬，竟然是一味很不错的中药。
蛴螬又叫白土蚕、危害多种农作物、经济作物和花卉苗木，喜食刚播种的种子、根、块茎以及幼苗，是世界性的地下害虫，对作物危害很大。
下面我们就聊一聊蛴螬蛴螬：味咸，性微温。
归肝经。
有破瘀，散结，止痛，解毒的功效。
用于血瘀经闭，癓瘕，折伤瘀痛，痛风，破伤风，喉痹，痈疽，丹毒。
功能主治1.小儿脐疮。
用蛴螬研末敷涂。
数次可愈。
2.小儿唇紧。
用蛴螬研末，猪油调搽。
3.丹毒。
用蛴螬捣烂敷涂。
4.痈疽痔漏。
用蛴螬研末敷涂。
每天一次。
5.断酒不饮，用蛴螬研末，酒送服。
6.目中翳障。
用蛴螬捣取滇，滴眼中。
药理作用蛴螬水浸液1：1000以上能兴奋离体兔子宫；1：100能抑制寓体兔肠管。
1：10000浓度对兔冠状血管、离体兔耳血管、蟾蜍肺血管皆有收缩作用；更高浓度（1：1000以上）还能收缩蟾蜍内脏血管。
大剂量有利尿作用，但对血压无影响（急性兔试验）。
1：1000浓度能兴奋离体心脏，浓度更高则导致舒张期停止。
临床应用治理破伤风用法用量：将蛴螬倒置(头向下)，让其自然吐出黄水(如急用，可剪去蛴螬尾，黄水随即流出)。
取黄水搽在伤口上(可使伤口麻木，身上出汗)；重症者可将黄水滴入酒中，炖热内服，以使出汗；牙关紧闭者，可用蛴螬水涂擦牙龈。
亦可将蛴螬捣烂如泥，外敷伤口，干后即换；或以蛴螬10个，焙干为末，分2次用黄酒送服(小儿酌减)。
上述方法每多合并使用。
效果疗效：经治14例，结果痊愈11例，死亡3例。
有效病例均在15～30分钟张口自如，喉痉挛消失或减轻，口腔分泌物显着减少，能吞咽食物和药物。
服药后抽搐虽能减轻，但尚不能制止，仍需配合其他方法治疗。
死亡3例均因年老体弱，并有心肺功能不良。
二烯丙基二硫化物诱导肝癌细胞凋亡的研究目的：研究大蒜提取物二烯丙基二硫化物(DADS)诱导肝癌细胞凋亡过程的影响作用，探讨DADS抗肿瘤的可能机制。
方法：MTT法检测细胞活性及流式细胞术检测细胞凋亡率。
结果：与未处理的对照组相比，随着用药浓度增高,细胞生长抑制率逐渐增高,即细胞活性下降(P＜0.01)。
结论：DADS能诱导肝癌细胞发生细胞凋亡，为肿瘤治疗方面的临床用药奠定基础。
标签：二烯丙基二硫化物；人肝癌细胞株HepG2；细胞凋亡。
近年来,植物来源药物越来越受到重视,充分利用我国药用植物资源,开发新的抗肿瘤药物,已成为肿瘤研究领域的重要内容。
大蒜为百合科植物蒜的鳞茎，目前对大蒜的研究在国内外已经成为热点。
大量研究证实,大蒜有防肿瘤、抗肿瘤作用，其中主要的生物活性物质是大蒜所含有的含硫化合物，现已测得含硫成分多达30余种，DADS就是其中的一种脂溶性的有效成分。
已有研究实,DADS 对CNE2人鼻咽癌细胞、HepG2人肝癌细胞生长有抑制作用[1]。
本实验我们进行了DADS诱导肝癌细胞凋亡的研究，现报告如下：1材料与方法1.1材料高糖型DMEM培养基购自美国Gibco公司；新生小牛血清购自杭州四季青公司；DMSO、MTT均为Sigma公司产品；DADS为Fluka公司产品。
DADS用DMSO配制，处理细胞时,DMSO的最终体积小于或等于0.1%。
1.2方法1.2.1细胞培养人肝癌细胞株HepG2 由南华大学肿瘤研究所提供，置DMEM 培养液中，加10%小牛血清，于37℃5% CO2培养箱中培养。
隔天换液一次。
细胞经传代和收获，取对数生长期细胞进行实验。
1.2.2实验分组①溶媒对照组：二甲亚砜(DMSO)即DADS 0μmol/L；②DADS 浓度梯度组:DADS(20、50、100μmol/L)。
1.2.3MTT 法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法) 测定细胞活性活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化四甲基偶氮唑盐(MTT)形成蓝色甲臜。
蚕蛹虫草多糖对氢化可的松致小鼠肝损伤的保护作用郑贤林;李有贵;钟石;李增智;计东风【摘要】研究用蚕蛹虫草多糖连续灌胃21 d,治疗肌注可的松的小鼠的效果,结果表明,小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝组织丙二醛(MDA)含量显著降低,抗氧化剂超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平显著升高,病理切片检查发现氢化可的松引起的肝小叶结构紊乱、肝窦瘀血及肝索排列紊乱等病理症状得到减轻,说明蚕蛹虫草多糖对氢化可的松致小鼠肝损伤具有明显的保护作用.【期刊名称】《浙江农业科学》【年(卷),期】2011(000)003【总页数】4页(P702-705)【关键词】蚕蛹虫草;多糖;氢化可的松;小鼠;肝损伤【作者】郑贤林;李有贵;钟石;李增智;计东风【作者单位】安徽省微生物防治重点实验室,安徽合肥230036;浙江省农业科学院,浙江杭州310021;浙江省农业科学院,浙江杭州310021;浙江省农业科学院,浙江杭州310021;安徽省微生物防治重点实验室,安徽合肥230036;浙江省农业科学院,浙江杭州310021【正文语种】中文【中图分类】S886.9蛹虫草又名北冬虫夏草、北蛹虫草、虫草等。
蛹虫草为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科，虫草属。
蛹虫草的药用价值与保健价值和冬虫夏草相似，为我国特有的一类珍贵药用真菌［1］。
虫草多糖作为虫草的主要活性成分之一，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎症和免疫调节等功能［2］。
现代药理学研究发现，南沙参多糖［3］、玉郎伞多糖［4］、金针菇多糖［5］、牛膝多糖［6］等对动物化学性和免疫性肝损伤具有一定的保护作用。
外源性糖皮质激素氢化可的松 (HC)造成的动物模型，其病理改变集中发生在肝、肾、脑、胸腺、脾等器官［7］。
实验以氢化可的松致肝损伤小鼠为对象，通过观察蚕蛹虫草多糖对小鼠血清、肝脏中一些生化指标的影响，结合小鼠肝脏病理变化，探讨蚕蛹虫草多糖对氢化可的松致肝损伤小鼠的保护效果及其可能的机制。
口虾蛄总生物碱对人肝癌HepG2细胞抗肿瘤作用实验研究王槐高;孔霞;郭向华;顾帝水;李彬彬;周艳芳【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2017(026)002【摘要】Objective To extract and analyze the anti-tumor function of the total alkaloids of Squilla oratoria against the human hep-atoma HepG2 cell. Methods The total alkaloids of Squilla oratoria were extracted by acid extraction and alkaline deposition,then isolated by ethyl acetate;CCK-8 assay,plate clone formation assay,flow cytometry,were performed to measure the effect of the total alkaloids of Squilla oratoria on the human hepatoma HepG2 cell. Results The IC50 of cell viability on HepG2 cells after treated with S for 24 h,48 h,and 72 h was 746. 72 μg/mL,47. 58 μg/mL or 26. 32 μg/mL,respectively. After treated with S (0 μg/mL, 10 μg/mL,50μg/mL and 100 μg/mL)for tw o weeks,the cloning efficiency of HepG2 cells was 56. 1%,35. 7%,14. 1% or 0,re-spectively;After treated with S for 48h ,the human hepatoma HepG 2 cells in S stage was increased from 26. 14% to 40. 80%. Conclusion The total alkaloids of Squilla oratoria has an inhibitory effect on the cell growth in HepG2 cells through the Pathways of cell cycle arrest.%目的：探讨口虾蛄总生物碱对人肝癌HepG2细胞的抗瘤效果。
中药古今研究：蛴螬一、典籍摘要1.《本草乘雅半偈》:“蛴螬咸，微温，有毒。
主恶血，血瘀，痹气，破折血、在胁下坚满痛、月闭，目中淫肤，青翳白膜。
”2.《本草分经》：“蛴螬咸微寒有毒，治血瘀、痹气胁下坚满、破折、金疮，下乳疗目疾，以背反行者真。
”3.《本草经集注》：“蛴螬味咸，微温、微寒，有毒。
主治恶血，血瘀痹气，破折血在胁下坚满痛，月闭，目中淫肤，青翳白膜。
治吐血在胸腹不去，及破骨折，血结，金疮内塞，产后中寒，下乳汁。
”4.《本草思辨录》：“蛴螬破瘀血,主目中淫肤,青翳白膜。
”5.《本草易读》：“蛴螬咸，平，有毒。
足厥阴药也。
化瘀血而通月经，消症块而破胁血。
”6.《长沙药解》：“蛴螬味咸，微寒，入足厥阴肝经。
能化瘀血，最消癥块。
”7.《神农本草经》：“味咸，微温。
主恶血，血淤，痹气，破折血在胁下坚满痛，月闭，目中淫肤，青翳，白膜。
”8.《得配本草》：“蛴螬微温，有毒。
治折伤恶血瘀在胁下坚满。
”9.《名医别录》：“蛴螬微寒，有毒。
疗吐血在胸腹不去及破骨踒折血结，金疮内塞，产后中寒，下乳汁。
”10《新修本草》：“蛴螬味咸，微温、微寒，有毒。
主恶血，血瘀痹气，破折血在胁下坚满痛，月闭，目中淫肤、青翳白膜。
疗吐血在胸腹不去，及破骨折，血结，金疮内塞，产后中寒，下乳汁。
”11.《医学入门》：“蛴螬无毒。
主破恶瘀在胸腹不去、吐血，通月经血闭，下乳汁，破骨折、血在胁下、坚满疼痛。
汁点目中淫肤、青翳、白膜，点喉痹止痛消肿。
”12.《全国中草药汇编》：“蛴螬咸，微温。
有毒。
破瘀血，消肿止痛，明目。
用于丹毒，痈肿，痔漏，目翳。
”13.《中药大辞典》：“蛴螬破血，行瘀，散结，通乳。
治折损瘀痛，痛风，破伤风，喉痹，目翳，丹毒，痈疽，痔漏。
”14.《药性论》：“汁滴目中，去翳障，主血，止痛。
”15.《本草拾遗》：“主赤白游疹，疹擦破，碎蛴螬取汁涂之。
”16.《日华子本草》：“可敷恶疮。
”17.《中华本草》：“蛴螬味咸；性微温；有毒.破瘀；散结；止痛；解毒。
实验研究基金项目:杨凌示范区产学研用协同创新重大项目(No.2017CXY -19);国家自然科学基金(No.81473329)㊂作者简介:邹绍宇(1998-),男,汉族,本科在读,研究方向为中药学㊂E -mail:598622305@通信作者:曹蔚(1977-),女,汉族,博士,教授,博士研究生导师,研究方向为中药药理学㊂E -mail:caowei@蛴螬多糖的一般药理学及亚急性毒性研究邹绍宇1 宋德鑫1 冯彩霞1 张瑞玲1 杨 鑫1 李小强2,3 曹 蔚1,3∗1.西北农林科技大学化学与药学院药学系,陕西 杨凌 712100;2.空军军医大学药学院药理学教研室,陕西 西安 710032;3.国家中医药管理局中药胃肠药理重点研究室,陕西 西安 710032ʌ摘 要ɔ 目的:观察与评价蛴螬多糖对动物神经系统㊁呼吸系统㊁心血管系统的影响以及其亚急性毒性的作用特点,探讨其一般药理学作用和可能的副作用,为进一步开发与应用蛴螬多糖提供实验依据㊂方法:旷野法观察小鼠自发活动;睡眠时间法观察蛴螬多糖与戊巴比妥钠合用对小鼠的催眠协同作用;疲劳转棒实验观察机能协调活动;使用无创血压分析仪测定血压㊁心电图;对大鼠腹腔注射蛴螬多糖,14d 后进行脏器系数测定㊁血常规检查㊁血液生化指标检查以及组织病理学检查㊂结果:蛴螬多糖50㊁225㊁400mg /kg 腹腔注射,给药1次对小鼠自发活动无影响,给药1周对小鼠的机能协调活动无影响,与阈下剂量戊巴比妥钠无协同催眠作用;33㊁150㊁267mg /kg 腹腔注射1次,对大鼠呼吸频率无影响,但可略升高血压;亚急性毒性试验中,高剂量2周重复给药可明显增加血小板数量,降低清蛋白㊁高密度脂蛋白胆固醇的量,但以上指标均在正常范围内;对其它各项指标和组织结构等没有影响㊂结论:蛴螬多糖对呼吸系统㊁神经系统均无明显影响,对大鼠无明显毒性,是比较安全的蛴螬活性成分㊂ʌ关键词ɔ 蛴螬;多糖;一般药理学;亚急性毒性ʌ中图分类号ɔR285ʌ文献标志码ɔAʌ文章编号ɔ1007-8517(2019)12-0023-08Study on General Pharmacology and Subacute Toxicity of Polysaccharide from Holotrichia diomphalia ZOU Shaoyu 1 SONG Dexin 1 FENG Caixia 1 ZHANG Ruiling 1 YANG Xin 1 LI Xiaoqiang 2,3 CAO Wei 1,3∗1.Department of Pharmacy,School of Chemistry &Pharmacy,Northwest A&F University,Yangling 712100China2.Department of Pharmacology,School of Pharmacy,Fourth Military Medical University,Xi an 710032,China3.Key Laboratory of Gastrointestinal Pharmacology of Chinese Materia Medica of the State Administration ofTraditional Chinese Medicine,Xi an 710032,ChinaAbstract :Objective To observe and evaluate the effects of polysaccharide from Holotrichia diomphalia (PHD)on nervous sys-tem,respiratory system,cardiovascular system and its subacute toxicity in animals,explore its general pharmacological effects and possible side effects,and provide experimental evidence for further development and application of PHD.Methods The spontaneous activity of mice was observed in open filed.Hypnotic synergistic effect of PHD and pentobarbital sodium was observed on sleep time in mice.Coordination of function was observed by fatigue rotating rod test.Blood pressure and electrocardiogram were measured by noninvasive blood pressure an coefficient measurement,blood biochemical index and histopathological examination were performed 14days after intraperitoneally injection of PHD in rats.Results PHD (50,225and 400mg /kg)was injected intraperito-neally once,and had no effect on the spontaneous activity of mice.One week after injection,PHD had no effect on the coordinated activity of mice,and had no synergistic hypnotic effect with the subthreshold dose of sodium pentobarbital.Intraperitoneal injection once at 33,150and 267mg /kg had no effect on respiratory rate,but slightly increased blood pressure.In subacute toxicity test,re-peated injection of high dose for 2weeks could significantly increase the number of platelets and decrease the levels of albumin and high density lipoprotein cholesterol,but the above indexes were within the normal range.It had no effect on other indicators and or-ganizational structure.Conclusion PHD has no obvious effect on respiratory system and nervous system,and has no obvious toxicityto rats.It is a safe active ingredient of Holotrichia diomphalia Bates.Key words:Holotrichia diomphalia Bates;Polysaccharide;General Pharmacology;Subacute toxicity中药蛴螬是朝鲜黑金龟子(Holotrichia di-omphalia Bates)及同属近缘昆虫的干燥幼虫,是较为常用的动物药[1]㊂蛴螬首次收载于‘神农本草经“: 味咸微温㊂主恶血㊁血瘀(‘御览“作血瘴),痹气,破折㊁血在胁下坚满痛,月闭,目中淫肤,青翳白膜㊂ 其后历代典籍如‘名医别录“‘金匮要略“‘证类本草“‘本草纲目“等多有收载[2],如‘名医别录“曰: 生河内人家积粪草中㊂取无时,反行者良㊂ ‘证类本草“云: 味咸,微温㊁微寒,有毒㊂主恶血,血瘀痹气,破折血在胁下坚满痛,月闭,目中淫肤,青翳白膜,疗吐血在胸腹不去及破骨折,血结,金疮内塞,产后中寒,下乳汁㊂ ‘本草纲目“中记载: 蛴螬,释名地蚕㊁乳齐㊁应条,气味咸,微温,有毒㊂ 蛴螬有破血逐淤,明目退翳的功效,可用于折损瘀痛㊁破伤风㊁喉痹㊁目翳等病症[3]㊂现代药理研究表明该药具有抗肿瘤㊁保肝㊁治疗口疮等多种生物活性[4-7]㊂近些年随着研究的深入,蛴螬的化学成分不断得到阐明,现已发现脂肪酸[8-9] (油酸㊁棕榈酸㊁棕榈油酸等)㊁氨基酸(谷氨酸㊁甘氨酸等)㊁糖类(多糖)㊁矿物元素(钙㊁镁㊁铬等)㊁维生素(维生素A㊁维生素B)等[10]㊂同时,越来越多的研究证实蛴螬多糖是一种新活性成分,具有抗肿瘤㊁调节免疫㊁降血脂等多种作用,是蛴螬的药效活性成分之一㊂但是,蛴螬多糖的其它作用还有待于进一步发掘,毒副作用的研究目前也尚未见国内外文献报道㊂为此,本研究对蛴螬多糖一般药理作用,包括其对心血管系统㊁呼吸系统㊁神经系统的影响进行了系统评价,同时对其亚急性毒性也进行了初步探讨,旨在为蛴螬物效基础研究及蛴螬多糖的进一步开发提供实验数据㊂1 材料与方法1.1 仪器与试剂BP-2010A型无创血压分析仪和BPEditU数据处理系统(北京软隆);D3024R 型台式高速冷冻离心机(北京大龙);Chemray240全自动生化分析仪(深圳雷杜);IX73倒置显微镜(奥林巴斯);LT502T型电子秤(常熟市天量仪器有限责任公司),AX224ZH/E分析天平(奥豪斯);自制旷野箱(无盖纸箱55cmˑ40cmˑ30cm,格子数6ˑ10)㊂蛴螬多糖由本实验室制备[1]㊂地西泮(山东信谊制药有限公司);戊巴比妥钠(美国英杰生命技术有限公司),盐酸氯丙嗪注射液(上海禾丰制药有限公司);生理盐水(陕西圣奥动物药业有限公司)㊂谷丙转氨酶(ALT)㊁谷草转氨酶(AST)㊁直接胆红素(D-BIL)㊁总胆红素(T-BIL)㊁尿素氮(BUN)㊁甘油三酯(TG)㊁白蛋白(ALB)㊁糖化血清蛋白(GSP)㊁高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)㊁低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)㊁总胆固醇(TC)㊁葡萄糖(GLU)㊁γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)㊁血清总胆汁酸(TBA)㊁碱性磷酸酶(ALP)㊁尿酸(UA)㊁血清乳酸脱氢酶同工酶(LDHi)㊁血清乳酸脱氢酶L(LDH-L)㊁肌酸激酶(CK)㊁肌酐(CRE)试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司㊂1.2 实验动物BALB/c小鼠,雌雄各半,18~ 22g;SD大鼠,雌雄各半,180~250g,购于第四军医大学实验动物中心,生产合格证号:SCXK (军)字第2007-007号㊂1.3 一般药理学评价给药剂量与方法按照一般药理学研究的药物剂量设置原则,以药效学有效剂量为一般药理研究的低剂量,高剂量设置为不产生严重毒性反应的剂量,两者取平均值设为中剂量㊂则小鼠蛴螬多糖低㊁中㊁高剂量依次为50㊁225㊁400mg/kg;根据大鼠㊁小鼠与人的给药换算比例,大鼠给药低㊁中㊁高剂量依次为33㊁150㊁267mg/kg㊂给药途径:与临床用药途径一致,采用注射给药;给药次数和容积:一次性按体重计算给药量,小鼠给药体积为0.2mL/(10g),大鼠给药体积为0.5mL/(100g)[11-12]㊂1.4 对神经系统的影响1.4.1 一般行为和自主活动50只小鼠,适应性饲养3d后,按体质量随机分为5组:空白组(与给药体积相同的生理盐水),20mg/kg戊巴比妥钠(阳性药物)组,蛴螬多糖低㊁中㊁高剂量组;每组10只㊂腹腔注射给药后,观察小鼠一般行为㊁姿势㊁步态㊁有无流涎㊁肌颤㊁眼球震颤和分泌物等变化㊂给药1h后,将小鼠放入旷野箱,适应1min后,计数10min以内,小鼠在箱内活动的格数(小鼠四肢都进入同1格内才算走动了1格)㊂1.4.2 机体协调运动实验将一根光滑竖立的金属棒(直径为1.27cm㊁长80cm),与地面垂直放置,并固定底部,保持直立㊂将小鼠放在金属棒的顶端上,让其自然向下爬行,筛选能够一步一步向下爬的小鼠50只,每组10只,雄雌各半,随机分为5组:空白组(与给药体积相同的生理盐水),2.5mg/kg盐酸氯丙嗪注射液(阳性药物)组,蛴螬多糖低㊁中㊁高剂量组;每组10只㊂腹腔注射给药1周后,30㊁60㊁120min分别进行爬杆试验㊂观察小鼠协调运动能力,并进行评分㊂评分标准[13-14]:0分,一步一步向下爬;1分,向下滑行;2分,不能爬住棒;3分,翻正反射消失㊂1.4.3 小鼠镇静催眠实验[15-16]1.4.3.1 入睡率50只小鼠随机分为5组:空白组㊁10mg/kg地西泮组(阳性药物,使用时用去离子水配制,灌胃给药)组㊁蛴螬多糖低㊁中㊁高剂量组,每组10只㊂各组给药1次,1h后每组小鼠腹腔注射25mg/kg(催眠阈下剂量)戊巴比妥钠㊂观察30min,小鼠翻正反射消失达1min以上者计为睡眠发生,计数各组睡眠发生的数目,计算入睡率,比较药物对阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的催眠作用[17]㊂1.4.3.2 睡眠时间50只小鼠随机分为5组:空白组㊁5.0mg/kg地西泮组(阳性药物),蛴螬多糖低㊁中㊁高剂量组㊂各组给药1h后,小鼠腹腔注射45mg/kg戊巴比妥钠㊂观察和记录小鼠睡眠持续时间(翻正反射消失至恢复的时间)㊂1.5 对心血管系统和呼吸系统的影响将40只大鼠随机分成4组:空白组㊁蛴螬多糖低㊁中㊁高剂量组,每组10只,雄雌各半㊂大鼠仰卧位固定于鼠台上,BP-2010A型无创血压分析仪记录动物血压及心率,呼吸频率通过观察大鼠胸腹部的收缩和隆起情况测得㊂动物各记录指标稳定后开始实验,分别记录大鼠给药前㊁给药后1h,2h的血压㊁心率和呼吸的情况㊂1.6 亚急性毒性试验评价及给药方法将30只大鼠随机分成3组:设对照组和给药组,给药组按267mg/kg㊁33mg/kg分别腹腔注射给药,对照组以生理盐水腹腔注射,每组10只,雄雌各半㊂连续给药14d,各组均自由饮水进食,末次给药1h 后,进行脏器系数测定㊁血常规检查㊁血液生化指标检查以及组织病理学检查㊂1.6.1 血液细胞分析连续给药14d,末次给药1h后,由腹主动脉取血,血液细胞分析仪测定血液中白细胞(WBC)㊁红细胞(RBC)㊁血小板(PLT)数目㊁血红蛋白量和红细胞积压㊂1.6.2 生化分析心脏㊁肝脏㊁肾脏重要指标连续给药14d,末次给药1h后,由腹主动脉取血, 3000r/min离心15min,取血清,生化分析仪测定AST㊁ALT㊁ALB㊁GLU㊁TG㊁TC㊁HDL-C㊁BUN 和CRE等水平㊂1.6.3 组织病理观察连续给药14d,末次给药1h后麻醉处死大鼠,经解剖,分别取小鼠心㊁肝㊁肺㊁脾和肾,将各组织修剪固定,制作成石蜡切片,观察各组织病理学变化㊂简要的石蜡切片制作方法如下:4%甲醛组织固定㊁乙醇梯度脱水㊁浸蜡㊁包埋㊁切片㊁H.E.染色㊁二甲苯进行透明处理㊂1.7 统计方法采用SPSS19.0统计软件进行分析㊂计量资料以均数加减标准差(xʃs)表示,先行正态性检验和方差齐性检验,符合正态分布的采用单因素方差分析或t检验,不符合正态分布采用非参数检验㊂P<0.05表示有显著性差异,P<0.01表示有极显著性差异㊂2 结果2.1 对小鼠神经系统的影响2.1.1 对自主活动和机体协调运动的影响蛴螬多糖给药后,小鼠的一般行为和空白组无统计学差异(P>0.05);给药后,在旷野箱内10min内活动的格数空白组为(768.0ʃ140.5)格;阳性药仅为(357.7ʃ31.6)格,显著低于空白组(P <0.05);蛴螬多糖低㊁中㊁高剂量组均与空白组无统计学差异(P>0.05),见表1㊂此外,小鼠机体协调运动的爬杆试验发现,与对照组比较,蛴螬多糖给药后对小鼠机能协调功能无显著影响,而阳性对照氯丙嗪则影响显著,见表2㊂表1 蛴螬多糖对小鼠自主活动的影响(格,xʃs)组别格数空白组768.0ʃ140.5戊巴比妥钠组357.7ʃ31.6∗∗低剂量组668.2ʃ93.0中剂量组732.6ʃ91.3高剂量组781.6ʃ98.6注:与空白组比较,∗∗P<0.01㊂表2 给药后不同时间蛴螬多糖对小鼠爬杆评级的影响(分,xʃs,n=10)组别剂量/mg/kg30min60min120min空白组等容量0.40ʃ0.520.10ʃ0.320.50ʃ0.53盐酸氯丙嗪组 2.50.80ʃ0.421.00ʃ0.67∗∗1.00ʃ0.82低剂量组500.10ʃ0.320.10ʃ0.320.00ʃ0.00∗∗中剂量组2250.00ʃ0.00∗0.00ʃ0.000.60ʃ0.84高剂量组4000.00ʃ0.00∗0.10ʃ0.320.30ʃ0.48注:与空白组比较,∗P<0.05,∗∗P<0.01㊂2.1.2 对镇静催眠的影响小鼠给药30min后戊巴比妥钠阈下剂量睡眠发生的情况见表3㊂空白组无动物入睡,地西泮组入睡率为90%,蛴螬多糖各剂量组也无小鼠入睡㊂给药1h后,各剂量组对戊巴比妥钠催眠剂量小鼠睡眠时间的影响见表4㊂地西泮组的睡眠持续时间为(340.5ʃ70.1)min,明显高于空白组(111.0ʃ29.7)min;蛴螬多糖低㊁中㊁高剂量组的睡眠持续时间分别为(145.7ʃ52.8)min㊁(132.8ʃ12.6)min和(145.4ʃ10.3)min;中剂量和高剂量给药组与空白组睡眠持续时间有显著性差异(P<0.05或P<0.01)㊂表3 蛴螬多糖对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量入睡率的影响组别只数入睡入睡率/%空白组1000地西泮组10990∗∗低剂量组1000中剂量组1000高剂量组1000注:与空白组比较,∗∗P<0.01㊂2.2 对心血管系统的影响采用小动物无创血压测定系统,虽然对照组收缩压指标有波动,但属大鼠正常波动范围内;各剂量蛴螬多糖组和对照组相比收缩压和舒张压均有明显升高作用(P< 0.05);蛴螬多糖对大鼠心率也有一定加快作用,但低㊁中剂量与对照组相比无统计学意义(P> 0.05)㊂见表5㊂2.3 对呼吸系统的影响3个剂量的蛴螬多糖对大鼠呼吸频率均无明显影响(P>0.05)㊂见表5㊂2.4 亚急性毒性试验2.4.1 一般症状试验期间,给药组大鼠未观察到明显异常反应和中毒症状,行为活动㊁毛发㊁摄食㊁饮水㊁大小便均正常㊂给药组与对照组的体重差异无统计学意义(P>0.05)㊂见表6㊂2.4.2 对小鼠脏器系数的影响试验期间,给药组与对照组的心㊁肝㊁肾㊁脾㊁肺㊁胰腺脏器系数差异无统计学意义(P>0.05)㊂见表6㊂表4 蛴螬多糖对戊巴比妥钠催眠剂量小鼠睡眠时间的影响(xʃs)组别潜伏期/s持续时间/min空白组85.5ʃ26.2111.0ʃ29.7地西泮组287.2ʃ86.1∗∗340.5ʃ70.1∗∗低剂量组130.2ʃ71.5145.7ʃ52.8中剂量组116.4ʃ41.9132.8ʃ12.6∗高剂量组114.4ʃ17.6∗∗145.4ʃ10.3∗∗注:与空白组比较,∗P<0.05,∗∗P<0.01㊂表5 蛴螬多糖给药不同时间后血压㊁心率与呼吸频率的比较(xʃs,n=10)组别指标给药前给药后60min120min空白组收缩压/mmHg103.7ʃ3.2 105.3ʃ4.0 106.3ʃ5.1 舒张压/mmHg89.7ʃ3.884.0ʃ11.483.7ʃ2.3平均动脉压/mmHg94.3ʃ3.591.3ʃ9.0 91.3ʃ3.1心率/t/min364.7ʃ13.2366.0ʃ7.0 376.0ʃ10.5呼吸频率/t/min66.5ʃ8.469.5ʃ12.269.3ʃ8.4续表5表5 蛴螬多糖给药不同时间后血压㊁心率与呼吸频率的比较(xʃs,n=10)组别指标给药前给药后60min120min低剂量组收缩压/mmHg110.7ʃ4.2 111.3ʃ5.5 126.0ʃ1.0∗∗舒张压/mmHg88.0ʃ3.099.3ʃ4.0105.7ʃ2.1∗∗平均动脉压/mmHg95.7ʃ1.5103.3ʃ4.2 112.7ʃ2.1∗∗心率/t/min365.7ʃ9.1 375.0ʃ10.0378.0ʃ6.6 呼吸频率/t/min 72.7ʃ12.373.9ʃ9.575.1ʃ9.8中剂量组收缩压/mmHg117.7ʃ4.2∗∗127.7ʃ2.3∗∗ 126.0ʃ6.2∗舒张压/mmHg95.3ʃ5.197.0ʃ1.7107.7ʃ1.5∗∗平均动脉压/mmHg 102.7ʃ2.5∗107.3ʃ0.6∗ 114.0ʃ2.6∗心率/t/min378.7ʃ2.5 377.7ʃ1.2∗381.0ʃ4.4呼吸频率/t/min 76.3ʃ12.578.0ʃ11.778.8ʃ11.4高剂量组收缩压/mmHg124.0ʃ6.2∗∗127.3ʃ3.5∗∗127.7ʃ7.5∗舒张压/mmHg98.7ʃ5.7102.0ʃ5.3 104.0ʃ8.5∗平均动脉压/mmHg 107.3ʃ5.5∗110.3ʃ4.6∗113.3ʃ8.6∗心率/t/min384.7ʃ11.6394.0ʃ5.3∗∗393.0ʃ1.0∗呼吸频率/t/min 69.0ʃ10.8 69.4ʃ12.270.4ʃ13.9注:与空白组比较,∗P<0.05,∗∗P<0.01㊂表6 蛴螬多糖对大鼠体重及主要脏器系数的影响(n=10,xʃs)指标对照组低剂量组高剂量组体重/g425.8ʃ148.1427.7ʃ57.0 385.8ʃ108.3心脏指数(10ˑ-3) 3.12ʃ0.28 3.13ʃ0.46 3.06ʃ0.24肝脏指数(10ˑ-2) 3.68ʃ0.28 3.72ʃ0.41 3.85ʃ0.42脾脏指数(10ˑ-3) 2.32ʃ0.52 2.31ʃ0.32 2.43ʃ0.20肺脏指数(10ˑ-3) 4.79ʃ0.89 4.89ʃ0.33 5.02ʃ0.40肾脏指数(10ˑ-3) 3.97ʃ0.39 3.94ʃ0.23 3.96ʃ0.36胰腺指数(10ˑ-3) 2.39ʃ1.13 2.41ʃ0.55 2.37ʃ0.862.4.3 对血常规指标的影响由血液生理指标可见,蛴螬多糖给药14d,血液中红细胞数㊁血红蛋白含量㊁红细胞积压差异无统计学意义(P >0.05),高剂量蛴螬多糖组的白细胞数高于正常组(P<0.05),血小板数量也增加明显(P> 0.01)㊂见表7㊂表7 蛴螬多糖给药14d对各组大鼠血液生理指标的变化(n=10,xʃs)组别白细胞计数/ˑ1012/L红细胞计数/ˑ109/L血红蛋白/g/L红细胞积压/%血小板计数/ˑ109/L对照组 5.31ʃ2.84 6.52ʃ2.46109.7ʃ30.737.32ʃ14.01759.6ʃ508.9低剂量组7.02ʃ3.11 6.55ʃ2.08113.2ʃ31.236.14ʃ10.59825.1ʃ543.6高剂量组7.41ʃ3.23∗ 6.72ʃ1.44124.7ʃ25.539.26ʃ7.81 1050.5ʃ398.1∗∗注:与空白组比较,∗P<0.05,∗∗P<0.01㊂2.4.4 对血液生化指标的影响蛴螬多糖给药14d,对ALT㊁T-BIL㊁D-BIL㊁LDL-C㊁TBA㊁LDHi㊁LDH-L㊁CRE有一定的下调趋势,其中AST㊁TC显著低于空白组(P<0.05),ALB㊁HDL-C极显著低于空白组(P<0.01)㊂蛴螬多糖组的GLU㊁ALP㊁UA和CK略高于正常组,但差异无统计学意义(P>0.05)㊂见表8㊂表8 蛴螬多糖对大鼠血清生化指标的影响(n=3~9)指标对照组低剂量组高剂量组ALT(U/L)46.8ʃ8.1 43.5ʃ10.235.0ʃ15.9AST/U/L160.8ʃ23.1149.4ʃ36.7 119.3ʃ61.2∗D-BIL/umol/L19.6ʃ3.817.2ʃ6.613.7ʃ7.6T-BIL/umol/L36.6ʃ7.6 34.1ʃ10.2 26.3ʃ15.4BUN/mg/dl21.2ʃ1.719.8ʃ3.820.2ʃ3.2TG/mmol/L 1.2ʃ0.2 1.2ʃ0.3 1.3ʃ0.2ALB/g/L40.3ʃ1.341.2ʃ3.536.3ʃ2.1∗∗GSP/mmol/L 2.0ʃ0.0 2.1ʃ0.1 2.0ʃ0.2 HDL-C/mmol/L0.7ʃ0.10.6ʃ0.20.4ʃ0.1∗∗LDL-C/mmol/L 1.6ʃ0.1 1.6ʃ0.2 1.4ʃ0.2TC/mmol/L 2.5ʃ0.3 2.3ʃ0.4 2.0ʃ0.3∗GLU/mmol/L9.2ʃ1.010.8ʃ2.511.7ʃ3.6γ-GT/U/L 5.8ʃ1.8 5.8ʃ2.7 5.6ʃ6.7TBA/umol/L17.6ʃ6.315.9ʃ6.013.5ʃ5.2ALP/U/L100.5ʃ51.3119.2ʃ43.8127.7ʃ23.2UA/umol/L226.6ʃ36.9231.0ʃ55.9237.5ʃ92.3LDHi/U/L17.3ʃ8.2 14.8ʃ10.19.9ʃ10.8LDH-L/U/L1481.5ʃ234.01336.2ʃ457.91100.6ʃ801.5CK/U/L 409.8ʃ155.2 422.7ʃ306.7 481.0ʃ356.5CRE/umol/L176.7ʃ32.6160.3ʃ39.1126.7ʃ44.0注:与空白组比较,∗P<0.05,∗∗P<0.01㊂2.4.5 病理学观察结果病理组织切片可以在细胞水平上反映毒物是否对器官造成了损伤㊂实验对心㊁肝㊁脾㊁肺㊁肾㊁胰腺㊁脑等器官制成的切片进行显微镜镜检(如图1)所示㊂结果表明对照组和蛴螬多糖实验组心肌细胞均无颗粒变性㊁脂肪变性等,细胞之间均未发现炎性细胞浸润,毛细血管均无内皮细胞胀㊁脱落等病理变化;对照组和蛴螬多糖实验组肝脏中肝小叶结构均完整清晰,肝小叶结构正常,无明显病理变化;对照组和蛴螬多糖实验组脾脏红髓白髓界限清晰,可以看出明显的生发中心;对照组和蛴螬多糖实验组肺泡结构完整无水肿等现象;对照组和蛴螬多糖实验组肾小球结构完整均一,均无肿大㊁出血现象;对照组和蛴螬多糖实验组的胰腺和脑也无明显病理变化㊂3 讨论一般药理学研究也称为安全性药理学研究,主要观察受试物在治疗范围或治疗范围以上剂量时,潜在的不期望出现的对生理功能的不良影响,包括对中枢神经系统㊁呼吸系统㊁心血管系统等方面的影响,为新药用于临床提供安全性依据,是新药研究的重要内容[18-20]㊂本实验严格参照中药一般药理学实验推荐方法[11-12],评价对神经系统的影响时采用行为药理实验法类别下的镇静药物实验法和催眠药物实验法㊂镇静催眠药一般都能延长戊巴比妥钠的睡眠时间,本实验选用戊巴比妥钠和氯丙嗪作为阳性药物构建模型;使用BALB/c小鼠分别进行一般行为和自主活动机体协调运动实验㊁戊巴比妥钠阈下催眠剂量和睡眠剂量试验㊂实验所用BALB/c小鼠是国际近图1 大鼠脏器组织病理切片(HEˑ200)交系小鼠中常用品系,周晓冰等[21]也曾用BALB/c 小鼠评价瑞格列汀对小鼠自主活动及协同睡眠的影响㊂评价对呼吸系统和心血管系统影响时选用常用的健康SD大鼠,采用直接测定指标的方法观察给药后不同时间大鼠呼吸频率㊁收缩压㊁舒张压㊁心率变化以评价蛴螬多糖对动物呼吸系统和心血管系统的影响㊂亚急毒实验主要观察动物在短期内是否出现毒性反应,为长期毒性试验和临床研究提供基础参考资料㊂目前常用健康SD大鼠,使用急性毒性给药方案,于给药后详细记录动物的饮食㊁饮水㊁死亡和尸体检验情况,并记录脏器与体重的变化,测定血液生化指标及病理检查㊂该法广泛用于毒理学评价,王振宇等[22]也曾用SD大鼠评价新型铂类化合物的肝毒性㊂本研究统计分析组间比较采用单因素方差分析或t检验㊂t检验法又称t值法显著性检验,是最常用的处理定量资料的统计方法,该检验法在本研究中被用于两组均数的显著性检验;单因素方差分析适用于实验中只有一个因素改变的试验,本研究以蛴螬多糖给药剂量为单因素,采用单因素方差分析进行组间比较用于判断低㊁中㊁高不同给药剂量对实验指标的影响是否显著㊂蛴螬多糖是将蛴螬经粉碎㊁碱水提取㊁醇液沉淀㊁双氧水脱色等一系列步骤分离纯化得到的,蛴螬多糖因具有抗肿瘤作用一直受到关注㊂归海霞等[23]发现蛴螬的活性成分多糖还具有降脂作用㊂但蛴螬多糖对心血管系统㊁呼吸系统㊁神经系统以及肝脏功能等方面的副作用尚未有报道,因此,本实验针对蛴螬多糖开展了一般药理学研究,为补充和完善其安全性实验数据奠定基础㊂本研究发现蛴螬多糖给药后,高㊁中㊁低3个剂量组对小鼠姿势㊁步态㊁肌颤㊁眼球震颤等一般行为无明显影响,不影响小鼠自主活动,与戊巴比妥钠阈下剂量无协同作用㊂蛴螬多糖3个剂量组经腹腔注射后可以升高大鼠血压和心率,但都属于血压和心率正常范围㊂目前国内外还未见有关蛴螬多糖的毒理学研究报道㊂在课题组前期急性毒性实验中,无法测出蛴螬多糖半数致死量,改测腹腔注射最大耐受量为8g/kg,表明该多糖毒副作用很小或无毒副作用㊂亚急性毒性试验中,与对照组相比,蛴螬多糖各剂量组对大鼠正常活动㊁体重㊁脏器系数影响的差异均无统计学意义,各主要脏器也无明显病理学改变;尽管对血常规㊁血液生化指标中的血小板数㊁AST㊁ALB㊁HDL-C㊁TC有一定影响,但仍在正常范围内,进一步说明蛴螬多糖安全范围大,具有较高的临床用药安全性㊂综上所述,本研究初步证实蛴螬多糖在药效学有效剂量范围内有较高的安全性,并为开发蛴螬多糖相关新药提供了一般药理学数据㊂参考文献[1]李萍.蛴螬多糖的提取分离㊁结构特征与抗肿瘤作用的研究[D].西安:第四军医大学,2016. [2]刘媛媛,曹蔚,张雅,等.蛴螬化学成分和药理作用的研究进展[J].现代生物医学进展,2015,15(12): 2375-2377.[3]杨仓良,齐英杰.动物本草[M].北京:中医古籍出版社,2001:915-916.[4]董庆峰,张崇禧,张书锋,等.蛴螬的化学成分及药理作用研究进展[J].药学实践杂志,2008,26(1): 14-16.[5]Xu X,Liu W,Li W,et al.Anticoagulant activity of crude extract of Holotrichia diomphalia larvae[J].Journal of Ethnopharmacology,2016(177):28-34. [6]Dong QF,Wang JL,Zhang SF,et al.Antifungal activity of crude extracts and fat-soluble constituents of Ho-lotrichia diomphalia larvae.[J].Bioresource Technology, 2008,99(17):8521-8523.[7]Dong Q F,Zhang S F,Wang Y L,et al.Chemical con-stituents of the petroleum ether extract of Holotrichia di-omphalia,larvae[J].Chemistry of Natural Compounds, 2009,45(1):79-80.[8]李林,李小年,魏暑飔,等.蛴螬化学成分研究[J].大理大学学报,2012,11(9):1-4.[9]Guo W,Yan X,Zhao C,et al.Efficacy of entomopatho-genic Steinernema and Heterorhabditis nematodes against white grubs(Coleoptera:Scarabaeidae)in peanut fields [J].Journal of Economic Entomology,2013,106(3): 1112-1117.[10]Lee S Y,Kwon T H,Hyun J H,et al.In vitro activationof pro-phenol-oxidase by two kinds of pro-phenol-oxidase-activating factors isolated from hemolymph ofcoleopteran,Holotrichia diomphalia larvae[J].Europe-an journal of biochemistry.1998,254(1):50-57.[11]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,2006.[12]徐叔云.药理实验方法学[M].2版.北京:人民卫生出版社,1991.[13]万敏,邴飞虹.苡术异位安胶囊一般药理学研究[J].湖北中医药大学学报,2009,11(5):31-33.[14]程小凤,赵佳仪,袁羽,等.腹腔注射LPS建立认知功能障碍相关的中枢神经系统免疫炎症小鼠模型[J].中国病理生理杂志,2017,33(5):890-895.[15]陈会丛,翟建英,张广平,等.葡萄籽提取物原花青素一般药理学研究[J].中国中医药信息杂志,2014,21(3):36-39.[16]闫佳驹,孙海峰,闫萍,等.翻白草的一般药理学研究[J].中国药师,2017,20(8):1466-1468. [17]马大勇,蔡舒婷,张斐姝,等.参知健脑胶囊单次灌胃对小鼠中枢神经系统功能的影响[J].中国医药导报,2017,14(13):8-12.[18]Valentin J P,Bass A S,Atrakchi A,et al.Challengesand lessons learned since implementation of the safetypharmacology guidance ICH S7A[J].Journal of Phar-macological&Toxicological Methods,2005,52(1):22-29.[19]Bode G,Olejniczak K,Group I E W.ICH topic:thedraft ICH S7B step2:note for guidance on safety phar-macology studies for human pharmaceuticals[J].Fun-damental&Clinical Pharmacology,2002,16(2):105-118.[20]黄芳华.中药新药一般药理学研究技术要求和常见问题分析[J].中国中药杂志,2007,32(1):82-84.[21]周晓冰,刘晓萌,张连山,等.BALB/c小鼠单次经口灌胃瑞格列汀的安全药理学研究[J].药物评价研究,2016,39(1):80-82.[22]王振宇,梅茸,宋京风,等.新型铂类化合物LLC-0601与舒铂对SD大鼠的肝毒性[J].中国药理学与毒理学杂志,2011,25(4):369-374. [23]归改霞.蛴螬多糖对家兔血脂调节作用的研究[J].中医临床研究,2017,9(2):11-12.(收稿日期:2019-04-01 编辑:程鹏飞)投稿注意事项表和图:分别按其在文中出现的先后顺序连续编码,并按先见文后见表(图)的原则排列㊂每幅表(图)均应冠有表(图)题,说明性的文字应置于表(图)下方的注释中,本刊采用三线表(顶线㊁表头线㊁底线)㊂。
蛴螬粗提物对人宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用及其机制研究背景宫颈癌是世界范围内女性常见的一种恶性肿瘤。
目前，临床治疗宫颈癌主要采用手术切除、放疗、化疗等方法。
但这些方法的副作用比较大，且往往对患者的身心造成不小的伤害。
因此，探索新的治疗方法是很必要的。
近年来，越来越多的研究表明，天然产物中具有抗癌活性的化合物具有很好的应用前景。
蛴螬草是一种生长在中国南方的植物，其根、茎、叶等均有一定药用价值。
我们之前已经通过对蛴螬根的提取物进行初步筛选，发现它具有抗癌潜力。
本次研究的目的就是进一步探究蛴螬粗提物（CQET）对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用及其机制。
研究方法实验设备本次实验所需设备包括： - 细胞培养箱 - 倒置显微镜 - 荧光显微镜 - 透析袋 - 离心管 - PCR反应仪等。
实验材料•HeLa细胞•蛋白酶抑制剂•细胞培养基、血清、酶液等•CQET提取物实验设计1.细胞培养：将HeLa细胞分别种植在含有不同浓度的CQET培养基中，分为正常对照组、DMSO对照组、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、4mg/mL CQET处理组，共6组。
2.流式细胞仪检测：分别在培养时间为24h、48h、72h的各个时点，用流式细胞仪检测各组的细胞周期、凋亡率等指标。
3.免疫印迹检测：选择CQET处理效果最显著的组别，采集细胞，用免疫印迹检测蛋白相对表达量和活性等指标。
研究结果CQET对HeLa细胞增殖抑制作用通过实验发现，HeLa细胞在CQET的作用下，明显受到了抑制，细胞数目随着CQET的浓度增加，数量显著下降。
此外，CQET作用的时间也对HeLa细胞的增殖发挥显著的抑制作用。
CQET能够诱导HeLa细胞凋亡CQET处理后，HeLa细胞的凋亡率随着CQET浓度的增加呈现出逐渐增加的趋势。
同时，CQET也可以诱导细胞周期停滞在G0/G1期，表明CQET诱导的HeLa 细胞凋亡，是通过抑制细胞增殖引起的。
国医大师朱良春运用虫类药经验——蛴螬（一）概述【药性】味辛，微温。
入肝经。
《别录》、《本草纲目》谓“有毒”。
【功效】①破血逐瘀，软坚散结：凡死血、干血导致的肢体疼痛、肝脾肿大、两目下黯黑、闭经等均可使用。
②消肿定痛：生用取汁滴喉用于治疗喉痹，外敷可治疗皮肤黏膜疮疡疼痛，并可治疗历节风之关节疼痛。
③疗跌损、定疮痉：用于治疗跌打损伤所致关节肢体疼痛，并能治疗破伤风。
④明目退翳：用于角膜溃疡及白内障。
【用量】内服：研末或入丸散，或装入胶囊。
外用：鲜活幼虫汁液0.5～1.0ml/次滴眼或滴喉，或外敷创面。
不入煎剂。
【禁忌】以其破血逐瘀之力较峻，孕妇体弱或无瘀滞者忌用。
（1）《本经》：“主恶血血瘀，血在胁下坚满痛，月闭，目中淫肤青翳白膜。
”（2）《别录》：“主治吐血在胸腹不去，及破骨踒折，血结，金疮内塞，产后中寒，下乳汁。
”（3）《本草纲目》：“主唇紧口疮，丹疹，破伤风疮，竹木入肉，芒物眯目。
许学士《本事方》治筋急养血，地黄丸中用之，取其治血瘀痹也；又按鲁伯嗣《婴童百问》云，张太尹传治破伤风神效方：用蛴螬，将驼脊背捏住，待口中吐水，就取抹疮上，觉身麻汗出，无有不活者。
”（4）《本草图经》：“取汁点喉痹，得下即开。
”（二）应用1．喉痹泛指咽喉肿痛的疾病，有外感、内伤之异，外感多责风热，起病急骤；内伤由阴虚而致，病情缠绵，不易速愈。
《集验方》用活蛴螬取汁点喉痹，得下即开。
此当指外感引起急性喉痹，即《杂病源流犀烛》所述：“喉痹，痹者闭也，必肿甚，咽喉闭塞。
乃风痰郁火，热毒相攻之症”是也。
朱老在农村巡回医疗时亦尝试用，消肿定痛甚速。
2．破伤风今人由《婴童百问》启示而用蛴螬治疗破伤风，获得较好的疗效，经治14例，结果痊愈11例，死亡3例。
有效病例均在15～30分钟张口自如，喉痉挛消失或减轻，口腔分泌物显著减少，能吞咽食物和药物；服药后抽搐虽能减轻，但尚不能制止，仍需配合其他方法治疗；3例死亡者均因年老体弱，并有心肺功能不良。
h t t p ://X B Y Z ．c b pt ．c n k i ．n e t 长期灌胃高脂乳剂能形成高脂血症,尽管该方法在保证个体间高脂乳剂摄入量的统一方面弥补了饲喂法造成的模型动物之间指标的均一性较差的不足,但此方法使动物处于长期应激状态,影响结果的准确性[２].因此采用高脂饲料喂饲法让动物自由摄食更接近人类患高脂血症的过程,取得的结果也更准确.实验结果显示,利用近交系的C ５７B L /６小鼠个体间差异很小,且造成小鼠高胆固醇血症后恢复正常饮食１周,高胆固醇血症虽有降低,但与正常组比较依然偏高.同时,低三酰甘油血症有所恢复,说明实验中所采用的高脂饮食对小鼠血浆中三酰甘油有抑制作用.实验结果表明,使用高糖为主的饲料喂饲C ５７B L /６小鼠４周并不能造成小鼠内源性高三酰甘油血症,与高脂饲料１相同,极大地抑制了血浆中三酰甘油的水平(５５０ʃ３７m g L －１vs１０８９ʃ４９m gL －１,P ＜０．０１);同时,该配方高脂饲料升高血浆胆固醇的幅度也不大(约１．６倍),因此以高糖为主的高脂饲料并不适合造成小鼠高脂血症模型.这与加糖的脂肪乳长期灌胃也不能形成高三酰甘油血症的结果一致[１４].研究表明,采用含有一定比例猪油的高脂饲料长期喂饲能够成功建立小鼠高胆固醇血症模型,但不能建立高三酰甘油血症模型,如想同时建立小鼠高胆固醇血症和脂肪肝模型,高脂饲料中添加胆固醇和胆酸钠是必须的.因此,要筛选主要降低胆固醇的天然产物可选择小鼠高胆固醇血症模型.研究表明,用以猪油或高糖为主要配方的高脂饮食无法成功诱导昆明种小鼠或C ５７B L /６小鼠成为高三酰甘油血症模型.参考文献:[１]㊀Z h a o J J ,Z h uH ,W a n g S J ,e t a l ．N a o x i n t o n gpr o t e c t s a Ｇg a i n s t a t h e r o s c l e r o s i s t h r o u g h l i p i d Ｇl o w e r i n g an d i n h i b i Ｇt i n g m a t u r a t i o n o f d e n d r i t i c c e l l s i nL D L r e c e pt o r k n o c k Ｇo u tm i c e f e dah i gh Ｇf a td i e t [J ]．C u r rP h a r m D e s ,２０１３,１９(３３):５８９１Ｇ５８９６．[２]㊀朱竟赫,赵金明,秦文艳,等．高脂血症实验动物模型研究概述[J ]．实验动物科学,２０１２,２９(２):４８Ｇ５２．[３]㊀高敏,倪凯,杨玉琪．高脂血症动物模型的研究概况[J ]．云南中医中药杂志,２０１０,３１(１０):７９Ｇ８１．[４]㊀英提扎尔 艾孜木江,阿依姑丽 艾合麦提,李珊,等．野山杏果肉中总有机酸对高脂血症大鼠体内抗氧化作用研究[J ]．西北药学杂志,２０１８,３３(３):３５９Ｇ３６３．[５]㊀周淑芳,李晶,关溯,等．四氢普伐他汀钠对高血脂模型新西兰兔脂质代谢的影响[J ]．西北药学杂志,２０１６,３１(１):５１Ｇ５６．[６]㊀K r i s ＧE t h e r t o nP M ,D i e t s c h y J ．D e s i g nc r i t e r i a f o r s t u d Ｇi e s e x a m i n i n g i n d i v i d u a l f a t t y ac i de f f e c t so nc a rd i o v a s Ｇc u l a r d i se a s e r i s kf a c t o r s :h u m a na n da n i m a l s t u d i e s [J ]．A mJC l i nN u t r ,１９９７,６５(５S u p p l ):１５９０S Ｇ１５９６S ．[７]㊀M a r o t t i KR ,C a s t l eCK ,B o y l eTP ,e t a l ．S e v e r e a t h e r o Ｇs c l e r o s i s i n t r a n sg e n i cm i c e e x p r e s s i n g s i m i a nch o l e s t e r y l e s t e r t r a n s f e r p r o t ei n [J ]．N a t u r e ,１９９３,３６４(６４３２):７３Ｇ７５．[８]㊀杨健,周群．高脂血症模型的研究概况[J ]．湖南中医杂志,２０１３,２９(４):１３２Ｇ１３３．[９]㊀M o g h a d a s i a n M H ,F r o h l i c hJJ ,M c M a n u sB M．A d Ｇv a n c e s i ne x p e r i m e n t a ld y s l i pi d e m i aa n da t h e r o s c l e r o s i s [J ]．L a b I n v e s t ,２００１,８１(９):１１７３Ｇ１１８３．[１０]梁红峰,陈方．高脂血症模型小鼠生化指标的变化[J ]．广东微量元素科学,２００４,１１(４):４２Ｇ４５．[１１]吕建敏,应华忠,徐孝平,等．高脂血症动物模型研究进展[J ]．浙江中医学院学报,２００５,２９(４):８７Ｇ８９．[１２]侯杰军,闫曙光,付强,等．大鼠高脂血症模型不同配方的实验研究[J ]．陕西中医学院学报,２００９,３２(１):４８Ｇ４９．[１３]张智,闪增郁,向丽华,等．大鼠实验性高脂血症两种造模方法的比较[J ]．中国中医基础医学杂志,２００４,１０(２):３３Ｇ３４,２４．[１４]张少芬,陈方,吴铁,等．长期脂肪乳剂灌胃致小鼠高脂血症模型的研究[J ]．广东医学院学报,２００４,２２(４):３２８Ｇ３３０．(收稿日期:２０１８Ｇ０７Ｇ１０)基金项目:国家自然科学基金项目(编号:８１４７３３２９);杨凌示范区产学研用协同创新重大项目(编号:２０１７C X Y Ｇ１９)作者简介:郝晓伟,女,硕士研究生∗通信作者:曹蔚,女,教授,博士生导师蛴螬多糖组分H D P S Ｇ２Ⅱ的理化性质及对肝癌的抑制作用郝晓伟１,２,靖㊀会１,２,李㊀萍２,张㊀甜３,周四元１,２,李小强１,２,曹㊀蔚１,２,３∗(１．国家中医药管理局中药胃肠药理重点研究室,西安㊀７１００３２;２．空军军医大学药学系,西安㊀７１００３２;３．西北农林科技大学化学与药学院,陕西省天然产物化学生物学重点实验室,杨凌㊀７１２１００)摘要:目的㊀探讨蛴螬均一性多糖组分H D P S Ｇ２Ⅱ对肝癌的抑制作用.方法㊀采用碱水提取,反复冻融除蛋白等方法获得蛴螬总多糖;用离子交换色谱法和尺寸排阻色谱法分离纯化总多糖获得均一性多糖组分H D P S Ｇ２Ⅱ.用高效尺寸排阻色谱法(H P S E C )和考马斯亮蓝法等测定H D P S Ｇ２Ⅱ的理化性质.采用M T T ㊁划痕实验和H ２２肝癌移植瘤小鼠模型测定蛴螬多糖体内１５西北药学杂志㊀２０１９年１月㊀第３４卷㊀第１期外的抗肿瘤活性.结果㊀蛴螬多糖组分H D P SＧ２Ⅱ的相对分子质量为８．２ˑ１０３D a,蛋白质㊁糖醛酸㊁硫酸基和氨基含量分别为２ ０８％,１２．０８％,０．２４％和４．８９％.H D P SＧ２Ⅱ体外可抑制肿瘤细胞的迁移,体内可显著抑制小鼠体内肿瘤的生长,H D P SＧ２Ⅱ中㊁高剂量组抑瘤率分别为５２．０％和５６．９％;与环磷酰胺(C T X)组比较,蛴螬多糖组分H D P SＧ２Ⅱ可显著增高脾脏指数㊁白细胞和淋巴细胞数量(P＜０．０５).结论㊀蛴螬多糖组分H D P SＧ２Ⅱ具有抑制细胞体外迁移㊁小鼠移植瘤的生长和免疫调节作用,具有进一步研发的价值.关键词:蛴螬;多糖;H D P SＧ２Ⅱ;抗肿瘤;肝癌D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００４Ｇ２４０７．２０１９．０１．０１３中图分类号:R９６５㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:１００４Ｇ２４０７(２０１９)０１Ｇ００５１Ｇ０６P h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t y o f p o l y s a c c h a r i d eH D P SＧ２Ⅱf r o m H o l o t r i c h i a d i o m p h aＧl i a B a t e s a n d i t s a n t i t u m o r e f f e c t s o nh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m aHA O X i a o w e i１,２,J I N G H u i１,２,L IP i n g２,Z HA N G T i a n３,Z H O U S i y u a n１,２,L IX i a o q i a n g１,２,C A O W e i１,２,３∗(１．K e y L a b o r a t o r y o f G a s t r o i n t e s t i n a l P h a r m a c o l o g y o fC h i n e s e M a t e r i a M e d i c ao ft h eS t a t e A d m i n i s t r a t i o no fT r a d i t i o n a lC h i n e s e M e d i c i n e,X iᶄa n ７１００３２,C h i n a;２．S c h o o l o f P h a r m a c y,t h eA i r F o r c eM e d i c a lU n i v e r s i t y,X iᶄa n７１００３２,C h i n a;３．S h a a n x i K e y L a b o r a t o r y o fN a t uＧr a l P r o d u c t s&C h e m i c a l B i o l o g y,S c h o o l o fC h e m i s t r y&P h a r m a c y,N o r t h w e s tA&FU n i v e r s i t y,Y a n g l i n g７１２１００,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T od e t e r m i n e t h e i n h i b i t o r y e f f e c t o nh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m ao f p o l y s a c c h a r i d eH D P SＧ２Ⅱf r o m H o l o t r i c h i a d i o m p h a l i aB a t e s．M e t h o d s T o t a l p o l y s a c c h a r i d e s f r o m H o l o t r i c h i a d i o m p h a l i a B a t e sw e r e o b t a i n e d b y a l k a l i w a t e r e x t r a c t i o n,r eＧp e a t e d f r e e z i n g a n d t h a w i n g m e t h o d,e t c．P o l y s a c c h a r i d eH D P SＧ２Ⅱw a s o b t a i n e db y i o ne x c h a n g e c h r o m a t o g r a p h y a n ds i z e e x c l uＧs i o n c h r o m a t o g r a p h y．T h e p h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s o fH D P SＧ２Ⅱw e r ed e t e r m i n e db y h i g hＧp e r f o r m a n c e s i z eＧe x c l u s i o nc h r o m aＧt o g r a p h y(H P S E C)a n d c o o m a s s i e b r i l l i a n t b l u em e t h o d,e t c．M T T,w o u n d s c r a t c h a s s a y a n dH２２m i c em o d e l s o f l i v e r c a n c e rw e r e u s e d t o d e t e r m i n e t h e a n t i t u m o r a c t i v i t y o f p o l y s a c c h a r i d eH D P SＧ２Ⅱi n v i v o a n d i n v i t r o．R e s u l t s T h em o l e c u l a rw e i g h t o fH D P SＧ２Ⅱw a s８．２ˑ１０３D a,a n d t h e c o n t e n t s o f p r o t e i n,u r o n i c a c i d,s u l f a t e a n d a m i n o g r o u p w e r e２．０８％,１２．０８％,０．２４％a n d４．８９％, r e s p e c t i v e l y．H D P SＧ２Ⅱi n h i b i t e d c e l lm i g r a t i o n i n v i t r o a n d i n h i b i t e d t h e g r o w t ho f t u m o r i nm i c e a n d t h e a n t iＧt u m o r r a t e s o f t h e h i g ha n dm e d i u mＧd o s e H D P SＧ２Ⅱa d m i n i s t e r e d g r o u p w e r e５２．０％a n d５６．９％,r e s p e c t i v e l y．C o m p a r e d w i t hc y c l o p h o s p h a m i d e g r o u p,t h e p o l y s a c c h a r i d eHD P SＧ２Ⅱw a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d t h e i n d e xo f s p l e e n,W B Ca n d l y m p h o c y t e(P＜０．０５)．C o n c l u s i o n T h e r e s u l t s d e m o n s t r a t e dt h a tH D P SＧ２Ⅱh a st h e p o t e n t i a lo f i n h i b i t i n g c e l lm i g r a t i o n i nv i t r o,g r o w t ho fm o u s et r a n s p l a n t e d t u m o r a n d i m m u n e r e g u l a t i o n,a n d i t h a s f u r t h e r r e s e a r c ha n dd e v e l o p m e n t v a l u e．K e y w o r d s:H o l o t r i c h i a d i o m p h a l i a B a t e s;p o l y s a c c h a r i d e;H D P SＧ２Ⅱ;a n t iＧt u m o r;h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a㊀㊀研究发现,糖类成分在抗氧化[１Ｇ２]㊁癌细胞转移[３Ｇ４]㊁调节机体免疫功能[５Ｇ６]和炎症的发生[７]等方面发挥着重要作用.中药多糖尤其是动物多糖,结构更复杂,活性更广泛[８Ｇ９].蛴螬是朝鲜黑金龟子H o l o t r i c h i ad i o m p h a l i a B a t e s及同属近缘昆虫的幼虫[１０],具有破血㊁行瘀㊁通乳等多种药理作用,主治淤痛㊁痛风㊁破伤风和喉痹等[１１].现有研究表明,蛴螬提取物可抑制肿瘤生长[１２Ｇ１３].本实验用蛴螬提取的总多糖和分离纯化的均一性多糖组分H D P SＧ２Ⅱ进行体内㊁体外抗肿瘤活性研究,探讨其对肝癌的抑制作用.１㊀仪器与材料１．１㊀仪器㊀F DＧ１型冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司);自动部份收集器,恒流泵(沪西分析仪器厂);电热套(泰斯特仪器公司);旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);离心机(安亭科学仪器厂);S H BＧⅢ型真空泵(城科工贸公司);酶标仪(B i oＧR a d公司);细胞培养箱(T h e r m oS c i e n t i f i c公司);倒置显微镜(N i k o n公司).１．２㊀试药㊀蛴螬购于陕西韩城,由陕西省食品药品监督检验研究院鉴定;环磷酰胺(上海华联制药有限公司);D E A EＧS e p h a d e x AＧ２５㊁S e p h a d e x GＧ７５和S e p h a d e xGＧ１００凝胶(G E H e a l t h c a r e公司);D M E M 高糖培养液(H y c l o n e公司);胎牛血清(G i b i c o公司);S A B C免疫组织化学检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);C D３４单克隆抗体(A b c a m公司).１．３㊀动物与瘤株㊀I C R小鼠４８只,雄性,体质量１８~２２g,由西安交通大学医学院实验动物中心提供;小鼠腹水型肝癌细胞株H２２由空军军医大学实验动物中心提供;肝癌细胞株H C C L M３和S MM CＧ７７２１购自北京北纳生物有限公司;H e p G２为本实验室传代保株.２㊀方法２．１㊀蛴螬多糖的提取和分级制备㊀将干燥蛴螬粉碎,用４倍体积的无水乙醇提取２h,重复３次.蛴螬残渣用６倍量的氢氧化钠溶液提取２h,３次.所得提取液合并过滤后减压浓缩,置于４ħ冷库中预冷１２h,无水乙醇沉淀１２h后离心,蒸馏水溶解沉淀,反复冻融除蛋白,离心收集上清液,透析,减压浓缩,冷冻干燥,氧化脱色素,得蛴螬总多糖粉末H D P S.称取H D P S粉末８g,溶于１６０m L双蒸水中,０ ４５μm滤膜过滤,滤液上样到D E A EＧS e p h a d e xAＧ２５西北药学杂志㊀２０１９年１月㊀第３４卷㊀第１期h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e t２５凝胶层析柱,梯度氯化钠溶液(依次为０,０．５,１．０,２．０和３．０m o l L－１)洗脱,经苯酚Ｇ硫酸法[１４]检测,根据洗脱曲线主峰位置合并收集液,透析脱盐,减压浓缩,冷冻干燥,得到蛴螬多糖均一性组分H D P SＧ１㊁H D P SＧ２㊁H D P SＧ３和H D P SＧ４.组分H D P SＧ２用双蒸水配制成质量浓度为５０g L－１的溶液,０ ４５μm滤膜过滤,上样至S e p h a d e x GＧ１００凝胶柱纯化,以蒸馏水洗脱,以５m L 管－１收集洗脱液,苯酚Ｇ硫酸法测定,根据绘制洗脱曲线合并相同峰位的收集液,透析,浓缩,冷冻干燥.再用S e p h a d e xGＧ７５凝胶柱进一步纯化,透析,浓缩,冷冻干燥,得到蛴螬均一性多糖组分H D P SＧ２Ⅱ.２．２㊀H D P SＧ２Ⅱ理化性质的鉴定㊀用H P S E C法测定H D P SＧ２Ⅱ的质量分数和相对分子质量:分别配制质量浓度为１０g L－１的标准葡聚糖D e x t r a nTＧ５㊁TＧ１２㊁TＧ５０㊁TＧ１５０㊁TＧ４１０㊁蓝色葡聚糖２００００００及葡萄糖,高速离心;同法制备H D P SＧ２Ⅱ样品,１０μL进样.按照色谱条件检测:S h o d e x S BＧ８０４和S BＧ８０３H Q串联柱;流动相为０．１m o l L－１的硫酸钠水溶液;流速为０．８m L m i n－１;柱温为２５ħ.以标准葡聚糖的分配系数K a v为横坐标(x１)㊁对照品相对分子质量对数值l g M(M指各标准糖的相对分子质量,单位是D a)为纵坐标(y１),求得标准曲线.计算H D P SＧ２Ⅱ的相对分子质量.根据考马斯亮蓝法[１５],以牛血清白蛋白作为标准,测定H D P SＧ２Ⅱ的蛋白质含量;根据硫酸Ｇ咔唑法[１６],以半乳糖醛酸作为标准,测定H D P SＧ２Ⅱ的糖醛酸含量;根据硫酸钡比浊法[１７],测定H D P SＧ２Ⅱ硫酸基含量;根据半胱氨酸Ｇ硫酸法[１８],测定H D P SＧ２Ⅱ中氨基的含量.２．３㊀MT T体外抗肿瘤活性研究㊀参照MT T 法[１９],设置空白组㊁对照组和不同质量浓度给药组(使药物终质量浓度为３~３００m g L－１),测定多糖体外抗肿瘤活性.细胞增殖率＝(A给药组－A空白组)ː(A对照组－A空白组)ˑ１００％.２．４㊀肝癌细胞划痕实验㊀将H e p G２细胞接种于２４孔板中,每孔５ˑ１０５个,培养过夜,用１０μL枪头在培养板底部划痕,用P B S缓冲液冲洗干净划掉的细胞.每孔加入不同质量浓度的多糖无血清培养液５００μL,培养０和４８h后拍照观察迁移距离.实验重复３次.２．５㊀H２２肝癌移植瘤小鼠模型的建立及分组㊀抽取H２２腹水型肝癌细胞株,用预冷的生理盐水清洗３次,并调整密度至１ˑ１０７个 m L－１,以０．２m L接种于小鼠右后背部,２４h后将小鼠随机分成６组:对照组(９g L－１氯化钠溶液)㊁C T X组(腹腔注射C T X ２０m g k g－１)㊁H D P S组(腹腔注射H D P S２０m g k g－１)和H D P SＧ２Ⅱ３个剂量组(高剂量组腹腔注射H D P SＧ２Ⅱ５０m g k g－１,中剂量组腹腔注射H D P SＧ２Ⅱ２０m g k g－１,低剂量组腹腔注射H D P SＧ２Ⅱ１０m g k g－１),每组８只.每日称定质量后,腹腔注射给药.１４d后称定小鼠质量,眼眶取血,处死动物,取皮下瘤㊁胸腺和脾脏,分别称定质量.抑瘤率＝(对照组瘤质量－给药组瘤质量)ː对照组瘤质量ˑ１００％;脏器指数＝脏器质量ː体质量.２．６㊀蛴螬多糖对荷瘤小鼠外周血白细胞(W B C)和淋巴细胞的影响㊀小鼠给药１４d后眼眶取血,用全自动血细胞分析仪检测白细胞和淋巴细胞数量.２．７㊀组织病理形态学观察㊀用质量浓度为４０g L－１的多聚甲醛固定小鼠移植瘤,制备５μm石蜡片,H E染色.观察各组肿瘤细胞生长㊁坏死及对周围组织的浸润情况.２．８㊀检测移植瘤微血管密度㊀免疫组化S A B C法步骤如下:移植瘤石蜡片脱蜡㊁水化后,柠檬酸微波修复抗原㊁灭活内源性过氧化物酶,山羊血清封闭２０m i n,滴加C D３４单克隆抗体(１ʒ２００稀释),４ħ过夜,滴加生物素标记二抗,D A B显色,苏木素复染,自来水返蓝,脱水透明并封片.各组织计数５个视野微血管,取均值.２．９㊀统计学方法㊀应用S P S S１３．０软件进行多个样本均数比较的单因素方差分析和两两比较的t检验.３㊀结果３．１㊀H D P SＧ２Ⅱ的理化性质㊀见图１.由图１可知, H D P SＧ２Ⅱ呈现单一对称峰,表明其为均一性多糖;根据２．２项下方法作相对分子质量标准曲线,回归方程为y１＝－４．４７８７x１＋５．８０９３(r１＝０．９９９２),求得H D P SＧ２Ⅱ的相对分子质量为８．２ˑ１０３D a .图１㊀H D P SＧ２Ⅱ的质量分数和相对分子质量测定色谱图F i g．１C h r o m a t o g r a m o f p u r i t y a n d m o l e c u l a r w e i g h t o f H D P SＧ２Ⅱ㊀蛋白质的含量测定:以蛋白溶液的质量浓度为横坐标(x２)㊁吸光度值为纵坐标(y２),标准曲线为y２＝０．０２１６x２＋０．０４４,r２＝０．９９１５.H D P SＧ２Ⅱ的蛋白３５西北药学杂志㊀２０１９年１月㊀第３４卷㊀第１期h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e t含量为２ ０８％.糖醛酸的含量测定:以糖醛酸溶液的质量浓度为横坐标(x３)㊁吸光度值为纵坐标(y３),标准曲线为y３＝０ ００３３x３＋０．０００６,r３＝０．９９９９.H D P SＧ２Ⅱ的糖醛酸的含量为１２．０８％.硫酸基的含量测定:以硫酸基溶液的质量浓度为横坐标(x４)㊁吸光度值为纵坐标(y４)㊁标准曲线为y４＝０ ００２４x４＋０．０１０７,r４＝０．９９８５.H D P SＧ２Ⅱ的硫酸基含量为０．２４％.氨基的含量测定:以对照品溶液的质量浓度为横坐标(x５)㊁吸光度值为纵坐标(y５),标准曲线为y５＝０ ０４８６x５＋０．１０２,r５＝０．９９９０.H D P SＧ２Ⅱ的氨基含量为４ ８９％.３．２㊀H D P SＧ２Ⅱ对肿瘤细胞增殖和迁移的影响㊀采用MT T法检测H D P SＧ２Ⅱ对肝癌细胞S MM CＧ７７２１㊁H C C L M３和H e p G２生长的影响,发现H D P SＧ２Ⅱ对H C C L M３和S MM CＧ７７２１的生长无明显抑制作用,在高质量浓度时对H e p G２增殖有较弱的抑制作用.结果见图２.细胞划痕实验显示,H D P SＧ２Ⅱ可明显抑制H e p G２细胞的迁移能力.结果见图３.图２㊀H D P SＧ２Ⅱ对肿瘤细胞增殖的影响F i g．２E f f e c t o fH D P SＧ２Ⅱo n t u m o r c e l l p r o l i f e r a t i o n图３㊀H D P SＧ２Ⅱ对H e p G２细胞迁移的影响A．不同浓度H D P SＧ２Ⅱ对H e p G２划痕实验的影响;B．各组划痕愈合宽度分析.与对照组比较∗∗P＜０．０１.F i g．３E f f e c t o fH D P SＧ２Ⅱo nH e p G２m i g r a t i o nA．e f f e c t s o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o fH D P SＧ２Ⅱo n t h ew o u n d s c r a t c ha s s a y o fH e p G２c e l l s;B．a n a l y s i s o f t h ew i d t ho f s c r a t c hh e a l i n g i ne a c h g r o u p．C o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p∗∗P＜０．０１．３．３㊀蛴螬多糖对H２２荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用㊀随着给药时间的延长,C T X组小鼠出现食欲减退㊁皮毛无光泽和反应迟钝的现象,H D P S组和H D P SＧ２Ⅱ高㊁中㊁低剂量组状态较好,体质量与C T X组相比明显增加(P＜０．０５).除H D P SＧ２Ⅱ低剂量组外,各组与对照组比较差异有统计学意义(P＜０．０５).见表１.３．４㊀蛴螬多糖对荷瘤小鼠免疫器官指数的影响㊀C T X组胸腺指数和脾脏指数均比对照组明显降低, H D P S组胸腺指数较C T X组有所增加,H D P SＧ２Ⅱ组脾脏指数比C T X组明显增高,且随着剂量增加,脾脏指数有增加趋势,胸腺指数有降低趋势(P＜０ ０５).见表２.３．５㊀蛴螬多糖对荷瘤小鼠外周血白细胞和淋巴细胞的影响㊀见表２.由表２可知,C T X组白细胞和淋巴细胞均比对照组明显降低(P＜０．０５).H D P S组和H D P SＧ２Ⅱ各剂量组白细胞和淋巴细胞比C T X组明显增高(P＜０．０５).表１㊀蛴螬多糖对小鼠H２２移植瘤生长的抑制作用T a b．１A n t iＧt u m o r a c t i v i t i e s o f p o l y s a c c h a r i d e s f r o m H oＧl o t r i c h i a d i o m p h a l i a B a t e s o nH２２t u m o r(xʃs,n＝８)组别剂量/m g k g－１体质量增加/g瘤质量/g抑制率/％对照组４．７１ʃ０．８５０．２５ʃ０．０４C T X组２０２．０５ʃ０．８４∗０．１０ʃ０．０４∗６０．０H D P S组２０４．３０ʃ１．３９＃０．１３ʃ０．０７∗４８．１H D P SＧ２Ⅱ低剂量组１０７．３０ʃ１．５０∗＃０．２２ʃ０．１１１２．１H D P SＧ２Ⅱ中剂量组２０６．１０ʃ２．７３∗＃０．１２ʃ０．１４∗５２．０H D P SＧ２Ⅱ高剂量组５０５．４１ʃ０．８１＃０．１１ʃ０．１１∗５６．９㊀注:与对照组比较∗P＜０．０５,与C T X组比较＃P＜０．０５.４５西北药学杂志㊀２０１９年１月㊀第３４卷㊀第１期h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e th t t p ://X B Y Z ．c b pt ．c n k i ．n e t 表２㊀蛴螬多糖对荷瘤小鼠胸腺指数㊁脾脏指数㊁白细胞和淋巴细胞的影响T a b ．２T h y m u s a n d s p l e e n i n d e x e s ,W B Ca n d l y m p h o c y t e n u m b e r s o fH ２２m i c e t r e a t e dw i t h p o l ys a c c h a r i d e s f r o m H o l o t r i c h i a d i Ｇo m p h a l i a B a t e s (x ʃs ,n ＝８)组别剂量/m g k g－１胸腺指数/m gg －１脾脏指数/m gg －１白细胞数量/１ˑ１０９L －１淋巴细胞数量/１ˑ１０９L －１对照组１．６３ʃ０．２２５．５２ʃ０．７９６．７３ʃ１．４８５．４３ʃ１．４４C T X 组２５１．０９ʃ０．２０∗４．１９ʃ０．６５∗１．９８ʃ０．６６∗０．９４ʃ０．３２∗H D P S 组２０１．４８ʃ０．１６＃４．８１ʃ０．４５５．１０ʃ０．６３＃３．７８ʃ０．５０＃H D P S Ｇ２Ⅱ低剂量组１０１．５５ʃ０．１９＃５．２０ʃ０．６６＃７．０８ʃ１．７０＃４．３８ʃ１．２８＃H D P S Ｇ２Ⅱ中剂量组２０１．４２ʃ０．２６５．６７ʃ１．２３＃５．８０ʃ２．２３＃４．００ʃ１．７７＃H D P S Ｇ２Ⅱ高剂量组５０１．３６ʃ０．２９６．６８ʃ０．５６∗＃４．３０ʃ１．４６＃２．６６ʃ１．０９＃㊀注:与对照组比较∗P ＜０．０５,与C T X 组比较＃P ＜０．０５.３．６㊀组织病理学和微血管密度观察㊀肉眼可见荷瘤小鼠H ２２移植瘤体呈结节状,剖面呈鱼肉状,且对照组的肿瘤体积明显大于其他各组.H E 染色结果显示:对照组肿瘤细胞核大且细胞质少,细胞生长旺盛;C T X 组出现大面积坏死的瘤组织;多糖给药组肿瘤细胞结构差异较大,其中H D P S Ｇ２Ⅱ中㊁高剂量组可见明显的肿瘤坏死,坏死程度随剂量增加而增大.结构见图４.C D ３４免疫组化结果显示,蛴螬多糖可抑制肿瘤组织微血管生成,其中H D P S Ｇ２Ⅱ中㊁高剂量组抑制作用较显著.见图５.图４㊀各组肿瘤组织病理观察结果A．对照组;B ．C T X 组;C ．H D P S 组;D．H D P S Ｇ２Ⅱ低剂量组;E ．H D P S Ｇ２Ⅱ中剂量组;F ．H D P S Ｇ２Ⅱ高剂量组.标尺:５０μm .F i g ．４H i s t o p a t h o l o g i c a l o b s e r v a t i o n r e s u l t s o f t u m o r t i s s u e i ne a c h g r o u pA．c o n t r o l g r o u p ;B ．C T X g r o u p ;C ．H D P S g r o u p ;D．H D P S Ｇ２Ⅱl o wd o s e g r o u p ;E ．H D P S Ｇ２Ⅱm i d d l ed o s e g r o u p;F ．H D P S Ｇ２Ⅱh i g hd o s e g r o u p．S c a l eb a r :５０μm．图５㊀微血管密度观察A．对照组;B ．环磷酰胺组;C ．H D P S 组;D．H D P S Ｇ２Ⅱ低剂量组;E ．H D P S Ｇ２Ⅱ中剂量组;F ．H D P S Ｇ２Ⅱ高剂量组.箭头:微血管;标尺:５０μm .F i g ．５M i c r o v a s c u l a r d e n s i t y ob s e r v a t i o n A．c o n t r o l g r o u p ;B ．c y c l o p h o s p h a m ide g r o u p ;C ．H D P S g r o u p ;D．H D P S Ｇ２Ⅱl o w Ｇd o s e g r o u p ;E ．H D P S Ｇ２Ⅱm e d i u m Ｇd o s e g r o u p;F ．H D P S Ｇ２Ⅱh i g h Ｇd o s e g r o u p．A r r o w :m i c r o v a s c u l a t u r e ;S c a l eb a r :５０μm．５５西北药学杂志㊀２０１９年１月㊀第３４卷㊀第１期４㊀讨论早在«本草纲目»中就有记载蛴螬系微温有毒物.现有研究发现,蛴螬提取物可抑制多种肿瘤生长[２０],并对肿瘤的防治和增强机体免疫功能具有重要意义[２１].本实验通过MT T实验㊁划痕实验和建立H２２肝癌移植瘤小鼠模型,表明蛴螬均一性多糖组分H D P SＧ２Ⅱ体外对肝癌细胞增殖影响较弱,可明显抑制肿瘤细胞的迁移,且体内对H２２肝癌细胞有明显的抑制作用.实验对小鼠免疫器官指数㊁白细胞和淋巴细胞数量进行测定的结果显示,与C T X组相比,蛴螬多糖可明显增加荷瘤小鼠脾脏指数㊁白细胞和淋巴细胞数量,随蛴螬多糖剂量增加,脾脏指数呈上升趋势.免疫组化染色显示,H D P SＧ２Ⅱ可抑制肿瘤局部微血管的形成.结果提示,H D P SＧ２Ⅱ在体内并非直接抑制肿瘤细胞增殖而发挥抗肿瘤作用,而有可能通过抑制迁移㊁调节免疫系统和抑制微血管生成发挥抗肿瘤作用,具体机制有待进一步研究.目前临床上肿瘤的有效治疗都存在严重的免疫抑制,本实验中蛴螬多糖在抑制肿瘤的同时具有一定的免疫调节作用,这种双重作用将保护肿瘤病人机体及各受累器官,并促进临床综合治疗和康复过程,提高病人的生存质量.此研究中,多糖组分H D P SＧ２Ⅱ与蛴螬总多糖相比显示出更强的抗肿瘤活性,说明蛴螬多糖抗肿瘤活性与其结构有关,有待进一步进行构效关系的研究.结果显示,蛴螬多糖H D P SＧ２Ⅱ在抗肿瘤作用的同时,还有一定的免疫调节作用,因此蛴螬多糖有望作为抗肿瘤的新药开发利用.参考文献:[１]㊀张海涛．多糖类化合物抗氧化作用及其机制的研究进展[J]．天津药学,２０１７,２９(３):６０Ｇ６３．[２]㊀Z h o n g D,W a n g H,L i uM,e t a l．G a n o d e r m a l u c i d u m p o lＧy s a c c h a r i d e p e p t i d e p r e v e n t sr e n a l i s c h e m i ar e p e r f u s i o ni n j u r y v i ac o u n t e r a c t i n g o x i d a t i v es t r e s s[J]．S c iR e p,２０１５,(５):１６９１０．[３]㊀曾俐娟,杨晨露．红花多糖对人卵巢上皮癌细胞增殖㊁转移的影响及机制探讨[J]．江西医药,２０１７,５２(９):９０１Ｇ９０４．[４]㊀Y a n g C M,Z h o uYJ,W a n g RJ,e t a l．A n t iＧa n g i o g e n i ce f f e c t s a n d m e c h a n i s m so f p o l y s a c c h a r i d e s f r o m A n t r oＧd i a c i n n a m o me a w i t hd if f e r e n tm o l e c u l a rw e igh t s[J]．JE t h n o p h a r m a c o l,２００９,１２３:４０７Ｇ４１２．[５]㊀J e u r i n kP V,v a nE s c hBC,R i j n i e r s eA,e ta１．M e c h aＧn i s m su n d e r l y i n g i m m u n e e f e c t so f d i e t a r y o l i g o s a e e h a rＧi d e s[J]．A mJC l i nN u t r,２０１３,９８(２):５７２SＧ５７７S．[６]㊀刘亦洋,饶小勇,王鹏龙,等．天然免疫调节活性多糖类成分研究进展[J]．江西中医药,２０１８,４９(４２２):７５Ｇ８０．[７]㊀T a k a s h iO h t a,K i eK u s a n o,A t s u s h i I d o,e t a l．S i l k r o s e:a n o v e l a c i d i c p o l y s a c c h a r i d ef r o m t h es i l k m o t ht h a tc a n s t i m u l a t et h ei n n a t ei m m u n er e s p o n s e[J]．C a r b o h y d r P o l y m,２０１６,１３６:９９５Ｇ１００１．[８]㊀C a oH．P o l y s a c c h a r i d e s f r o mC h i n e s e t e a:r e c e n t a d v a n c e o nb i o a c t i v i t y a n df u n c t i o n[J]．I n tJ B i o l M a c r o m o l,２０１３,６２:７６Ｇ７９．[９]㊀霍俊成,李艺杰,李萍,等．药用昆虫多糖的研究进展[J]．现代生物医学进展,２０１７,１７(２９):５７８８Ｇ５７９２．[１０]陈智,郑学燕,朱荣刚,等．蛴螬化学成分及药理作用研究进展[J]．食品与药品,２０１４,１６(１):６２Ｇ６４．[１１]江苏新医学院．中药大词典[M]．上海:上海人民出版社,２００２:２３７９．[１２]刘媛媛,曹蔚,张雅,等．蛴螬生物碱提取工艺及体内外抗肿瘤活性研究[J]．西北药学杂志,２０１４,２９(２):１６０Ｇ１６３．[１３]李基俊,孙抒,杨万山,等．蛴螬提取物对小鼠S１８０肉瘤的抑制作用[J]．中华医学写作杂志,２００３,１０(１５):１３５６Ｇ１３５８．[１４]张璐,张斌,易延逵．毛蜂窝菌多糖提取工艺优化[J]．辽宁中医药大学学报,２０１７,１９(１１):６２Ｇ６４．[１５]董蕊,马卓群,卫功庆,等．不同产地东北林蛙卵胶膜中蛋白质和水解氨基酸含量差异比较[J]．食品工业科技,２０１７,３８(２０):３１２Ｇ３１６,３３５．[１６]马虎强,刘洋,张红,等．骆驼刺茎枝粗多糖的理化性质及抗氧化活性研究[J]．中国药师,２０１８,２１(１):４８Ｇ５２．[１７]丛建波,王长振,李妍,等．褐藻硫酸多糖硫酸基含量测定 硫酸钡比浊法研究[J]．解放军药学学报,２００３,１９(３):１８１Ｇ１８３．[１８]董陆陆,于敬海,孙学斌,等．泥鳅分泌多糖特征官能团检测及其抗氧化活性研究[J]．哈尔滨医科大学学报,２０１３,４７(３):２０９Ｇ２１１．[１９]顾湘,倪美鑫,冒小平,等．氧化苦参碱衍生物的生物转化制备及其抗肿瘤活性研究[J]．西北药学杂志,２０１７,３２(６):７１１Ｇ７１４．[２０]曹蔚,裴克,张雅,等．蛴螬的药学研究进展[J]．陕西中医,２０１３,３４(２):２５０Ｇ２５１．[２１]张典,高春风,姜凤良,等．多糖的免疫调节作用研究进展[J]．中国老年学杂志,２０１６,３６(２１):５４４８Ｇ５４５０．(收稿日期:２０１８Ｇ０７Ｇ１５)６５西北药学杂志㊀２０１９年１月㊀第３４卷㊀第１期h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e t。
