微生物标本接种详解演示文稿
- 格式:ppt
- 大小:8.27 MB
- 文档页数:80
微生物接种方法详解一、平板划线分离法平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面,通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞,经培养后生长繁殖成单菌落,通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的,故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
为方便划线,一般培养基不宜太薄,每皿约倾倒20ml培养基,培养基应厚薄均匀,平板表面光滑。
划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种分区划线法是将平板分四区,故又称四分区划线法。
划线时每次将平板转动60~70°划线,每换一次角度,应将接种环上的菌烧死后,再通过上次划线处划线;另一种连续划线法是从平板边缘一点开始,连续作波浪式划线直到平板的另一端为止,当中不需灼烧接种环上的菌。
1)连续划线法将琼脂平皿半开盖倒置于培养箱内至无冷凝水,接种环于酒精灯外焰烧至红透,接种棒也要充分灼烧,最后再集中烧接种环至红。
轻轻摇匀待接种试管,左手手心托待接种试管底侧部,右手执接种环,右手小指拔下试管塞,于酒精灯附近将接种环伸进试管,稍候,再插入待接接种液中,蘸一下,取满一环,抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。
或将接种环通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板,在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却,然后以无菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
于靠近酒精灯处打开平皿盖约30°,右手将环伸进平皿,将菌种点种在平板边缘一处,轻轻涂布于琼脂培养基边缘,抽出接种环,盖上平皿盖,然后将接种环上多余的培养液在火焰中灼烧,打开平皿盖约30°伸入接种环,待接种环冷却后,再与接种液处轻轻接触,开始在平板表面轻巧滑动划线,接种环不要嵌入培养基内划破培养基,线条要平行密集,充分利用平板表面积,注意勿使前后两条线重叠,划线完毕,关上皿盖。
灼烧接种环,待冷却后放置接种架上。
微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念,掌握无菌操作的基本环节2 实验说明将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。
接种的关键是要严格的进行无菌操作,如操作不慎引起污染,则实验结果就不可靠,影响下一步工作的进行。
3 实验器材3.1 器械和用品酒精灯,玻璃铅笔,火柴,试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。
3.2 菌种和培养基菌种:大肠杆菌(Escherichia coli),金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
培养基:普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。
4 实验流程斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。
5 操作步骤5.1 斜面接种法斜面接种法主要用于接种纯菌,使其增殖后用以鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落,或挑取斜面,肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行,先点燃酒精灯。
将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间,菌种管在前,接种管在后,斜面向上管口对齐,应斜持试管呈45~0度角,并能清楚地看到两个试管的斜面,注意不要持成水平,以免管底凝集水浸湿培养基表面。
以右手在火焰旁转动两管棉塞,使其松动,以便接种时易于取出。
右手持接种环柄,将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分(环和丝)必须烧红,以达到灭菌目的,然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍,尤其是接镍铬丝的螺口部分,要彻底灼烧以免灭菌不彻底。
用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞,将试管口在火焰上通过,以杀灭可能沾污的微生物。
药物分析微生物接种技术一、接种工具二、接种方法目录接种是指将微生物移接到另一个灭菌的新鲜培养基中,使其生长繁殖的过程。
微生物接种技术是进行微生物相关实验所必需的基本操作技能,为了确保接种过程中不受杂菌的污染,接种必需采用严格的无菌操作。
1.接种针2.接种环3 . 接种钩4 . 涂布器一、接种工具1 2 3 4用于固体、液体培养基的接种环或针金属柄绝缘柄用于半固体培养基的接种二、接种方法1.斜面接种斜面接种是将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的方法,在斜面接种法中最常用的是划线接种,即用接种环挑取少量菌种后,在斜面培养基上做来回直线的移动,以达到接种目的。
2.穿刺接种穿刺接种是用接种针挑取少量菌种后,沿半固体培养基中心向管底做直线穿刺后,接种针按原路返回的接种方法,根据穿刺时试管的方向又分为垂直法和水平法,垂直法时要注意试管口朝下,该方法主要用于保藏厌氧菌种和研究微生物的运动性。
3.平板接种平板接种是将微生物菌体接种到平板培养基上的方法。
在平板接种法中比较常用的方法有两种,一种是划线接种,即用接种环挑取少量菌种后,在平板培养基上做来回直线的移动,以达到分离纯化培养的目的;另一种是涂布接种,即将菌液注入平板培养基表面,用涂布器将菌液涂布均匀,使菌体在培养后长出单个菌落。
三段分区法四段分区法五段分区法4.液体接种液体接种是指将菌体接种到液体培养基培养的一种接种方法。
根据接种对象的不同,可分为两种,一种是由斜面培养基接入液体培养基;另一种是由液体培养基接入液体培养基。
微生物接种技术THANKS 谢谢观看。