沙门氏菌生化管说明书

沙门氏菌生化鉴定条
沙门氏菌（Salmonella）生化鉴定条是一种用于快速鉴定沙门
氏菌的试剂盒。

它通常包含多个培养基和化学物质，可以通过观察沙门氏菌的生化反应来确定其存在。

沙门氏菌生化鉴定条的使用方法一般如下：
1. 首先，将待检样品中的沙门氏菌分离出培养基上。

2. 取一根已消毒的针头，取出少量菌液并涂在鉴定条上的相应孔中。

3. 按照鉴定条的使用说明，放置于适当的温度下进行培养。

4. 根据鉴定条上的指示，观察菌液在不同培养基上的反应，如颜色变化、气泡产生等。

通过观察菌液在各孔上的反应，可以快速鉴定沙门氏菌。

常见的沙门氏菌生化鉴定条有API 20E和API 20NE等。

需要注意的是，沙门氏菌生化鉴定条虽然能够提供快速的结果，但是并不是最终的确认方法。

如果需要确保结果的准确性，还需要进行进一步的分子生物学检测或培养。

同时，操作人员在使用沙门氏菌生化鉴定条时需要遵守严格的操作规范，以防止交叉感染和误判。

《农产品/食品微生物检验》课程-微教材知识讲解沙门氏菌操作程序及要点——干制生化鉴定试剂盒检测工作中，由于沙门氏菌类型繁多，生化反应复杂多样，可根据三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。

干制生化鉴定试剂盒一般包括赖氨酸脱羧酶及其对照、氰化钾及其对照、靛基质、尿素、甘露醇、山梨醇、ONPG、三糖铁共8项生化试验试剂，通过接种可疑菌落悬浊液培养一定时间后，观察生化现象，结合标准从而判定鉴定结果。

由于此生化鉴定试剂盒中适配三糖铁实验现象不明显，一般将这个实验单独操作。

按照产品说明书，主要操作步骤如下：接种：第一步：从铝箔袋中取出试剂盒，打开盒盖；第二步：用接种针从平板上挑取新鲜培养的适量单菌落接至适量无菌水中，与试剂盒中的标准比浊管进行比对，制成0.5麦氏菌悬液，注意菌悬液浓度不宜过大，否则可能产生假阳性结果；第三步：接种菌悬液分别至试剂盒的9个圆孔中，每孔接种量0.2mL；第四步：在氨基酸对照、赖氨酸脱羧酶、氰化钾对照、氰化钾实验孔中滴加2滴矿物油覆盖培养基表面，盖上盒盖；第五步：与三糖铁生化管一同置于36 ℃±1 ℃的恒温恒湿培养箱中培养24 h，其中ONPG 实验培养1～3h观察结果，如为阴性继续培养至24h观察结果；氰化钾实验若24h仍为阴性，可延长培养至48h观察结果；第六步：培养结束后，在靛基质实验孔中滴加2滴靛基质试剂，即刻观察结果。

结果观察：按照说明书进行结果观察，根据颜色反应，判读是阴性还是阳性。

如：赖氨酸脱羧酶（对照管黄色，试验管紫色）为阳性；氰化钾（对照管生长，试验管不生长）为阴性；靛基质实验（黄色）为阴性；尿素（黄色）为阴性；甘露醇（黄色）为阳性；山梨醇（黄色）为阳性；ONPG（不变色)为阴性判定：根据标准描述进行结果判定。

拓展阅读《GB4789.4-2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》食品微生物检验论坛：/forum-1-1.html。

目的建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。

依据《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。

范围本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。

责任人QC负责人、化验员。

内容1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。

1.1仪器：托盘天平1.2玻璃器皿：150ml锥开瓶、试管、载玻片1.3试液：1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。

1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。

1.4染色剂：1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。

1.4.2碘液：取碘化钾2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。

1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。

1.5培养基：1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。

1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。

1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。

1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。

1.5.5沙门、志贺菌属琼脂：取沙门、志贺菌属琼脂试药60g，加蒸馏水1000ml，放置20分钟，用石棉网微火煮沸使完全溶解，冷至50℃左右倾入无菌平皿中凝固后，备用。

1．适用范围适用于沙门氏菌属的检验。

2.引用标准ＳＮ0170-92 食品卫生微生物学检验3．设备和材料温箱：36 ± 1 ︒C 42±1℃灭菌吸管：1ml 10ml 灭菌试管：12*100mm灭菌平皿电子天平酒精灯玻璃棒金属匙接种环接种针广口瓶：250ml 500ml 锥形瓶：100ml 500ml4．培养基和试剂的制作:(A) 缓冲蛋白胨水(BPW)准确称取4.5g(±0.1g)BPW，倒入500ml锥形瓶中并加入225ml蒸馏水搅拌均匀，静置约10min，加热煮沸至完全溶解后注入500ml的广口瓶中，高压灭菌121℃、15min冷却后储存冰箱备用。

(B)亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)准确称取2.3g(±0.1g)SC,倒入250ml锥形瓶中加入100ml蒸馏水搅拌均匀静置约10min完全溶解后，注入250ml的广口瓶中储存冰箱备用。

（稍加热可加快溶解速度）(C)硫酸铋琼脂(BS)准确称取4.96g(±0.1g)BS，倒入250ml锥形瓶中并加入100ml蒸馏水浸泡15min后，加热煮沸至完全溶解冷却至50-60℃,迅速倾注5-8个灭菌平皿中储存冰箱内备用。

(D) 胆硫乳琼脂(DHL)准确称取6.43g(±0.1g)DHL ，倒入250ml 锥形瓶中并加入100ml 蒸馏水搅拌均匀,静置10min, 加热煮沸至完全溶解冷却至50-60℃, 迅速倾注5-8个灭菌平皿中储存冰箱 内备用。

(本培养基以当天配制,第二天使用为佳) (E) 三糖铁琼脂（TSI准确称取6.5g(±0.1g)TSI,倒入250ml 锥形瓶中加入100ml 蒸馏水浸泡15min,加热煮沸至完全溶解后分装于试管(12*100mm),每管约装2-4ml 高压灭菌115℃,15min 灭菌后置成高层斜面冷却后储存冰箱备用。

5． 沙门氏菌的检验程序如下：36±1℃ 24±2h6．操作步骤1）前增菌：准确称取25 g（±1g）检样(剪碎)，加入225 ml缓冲蛋白胨水，混匀制成混悬液置于36±1℃温箱中培养24±2h。

沙门氏菌 LAMP检测试剂盒使用说明书Loop-mediated Isothermal Amplification Method（使用前请详细阅读本说明书）前言本试剂盒采用LAMP方法结合荧光染料显色的体外扩增和检测技术，适用于食品或环境中沙门氏菌快速检测。

试剂盒组成组成成份（20 test/kit）规格DNA提取液 1.6mL×1管反应液Sal440μL×1管稳定液600μL×1管Bst酶10μL×1管阳性对照DNA Sal50μL×1管阴性对照50μL×1管显色液40μL×1管储存方法及有效期本试剂盒储存于-20℃下有效期为一年（请在有效期内使用）。

实验前准备培养基（前增菌用）移液器吸嘴移液器（0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL） 1.5ml无菌离心管金属浴或者水浴锅0.2mL PCR反应管高速离心机工作服及一次性手套碎冰样品采集及存放1.采集本试剂盒适用于增菌液或可疑菌落样本。

样品制备、增菌培养和分离按照GB/T 4789.4标准方法进行。

2.存放待测样品在2-8℃保存不应超过24小时；-20℃长期保存，应避免反复冻融。

使用方法1.样品处理增菌液模板DNA的制备，对于标准方法培养的增菌液：a) 直接取该增菌液1mL加到1.5mL无菌离心管中，10000r/min离心2min，尽量吸弃上清；b) 加入80μL DNA提取液，混匀后沸水浴10min，置冰上10min；r/min离心2min，上清即为核酸模板；取上清置-20℃可长期保存备用。

c) 10000可疑菌落模板DNA的制备：对于标准方法分离到的可疑菌落，可直接挑取可疑菌落，加入80μL样品预处理液，再按照上述步骤b)制备模板DNA 以待检测。

2.核酸扩增a) 试剂盒内反应液Sal使用前建议室温融化振荡混匀后，2000r/min离心10sec；其余室温融化后，2000r/min离心10sec即可。

沙门氏菌生化鉴定条
沙门氏菌生化鉴定条是一种常用于沙门氏菌的生化鉴定方法。

它是一种基于菌株在不同生化反应中产生的酶活性或代谢产物的变化来进行鉴定的方法。

沙门氏菌生化鉴定条通常包含多个小孔，每个小孔上面涂有一种特定的生化试剂或底物。

当沙门氏菌菌株接种到鉴定条上后，如果菌株具有特定的酶活性或代谢能力，它们将与试剂或底物反应产生颜色变化或其他可观察到的变化。

通过观察菌株在不同孔上的反应情况，可以根据反应结果与已知的沙门氏菌生化特征进行比对，从而确定菌株是否为沙门氏菌。

沙门氏菌生化鉴定条的优势在于其操作简便、快速，且可以同时进行多个生化反应的鉴定。

不过，它的准确性可能受到一些因素的影响，比如菌株的新陈代谢状态、环境条件等。

总之，沙门氏菌生化鉴定条是一种常用的快速鉴定沙门氏菌的方法，可以帮助实验室迅速确定菌株的身份。

北京索莱宝科技有限公司
第1页，共1页细菌微量生化鉴定管使用说明书
货号：L7710
规格：20支
保存：RT，有效期一年。

产品说明：
一、实验准备：
1、安瓿瓶：从包装盒中取出安瓿瓶，朝易折点（瓶颈上方蓝点）反方向用力折开安瓿瓶；或用砂轮划一圈安瓿瓶瓶颈，然后用力折开安瓿瓶，插入安瓿瓶架中。

如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。

2、试管：从包装盒中取出试管，插入试管架中。

如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。

注：折开安瓿瓶时最好包裹纱布，以免划伤手指。

二、接种方法：
1、直接接种：用接种针从平板上挑取已纯化分离的同一菌落接种于需要试验的试管（安瓿瓶）中。

2、菌悬液法：取一内盛2mL 无菌水试管，用接种针从平板上挑取已纯化单个菌落至无菌水中仔细研磨制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液，滴入需要试验的试管（安瓿瓶）中，每管3滴。

注：如内容物为半固体或斜面，请直接穿刺接种。

三、接种完成后放36℃±1℃培养或检测标准中所规定的培养温度。

（建议加盖）产品名称
结果判断
培养时间（h）
阳性
阴性乳糖发酵管黄色紫色或紫灰色18-24。

竭诚为您提供优质文档/双击可除沙门氏菌血清学鉴定篇一：沙门氏菌生化鉴定沙门氏菌生化试验判定步骤三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。

用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。

该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。

而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。

如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。

底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。

斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。

因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。

2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生h2s。

4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生h2s。

3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生h2s，多数产气。

赖氨酸脱羧酶试验1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的ph。

2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。

阴性试验管则始终呈黄色。

氨基酸脱羧酶试验(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。

由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。

(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少0.5cm高度的无菌石蜡油，35℃孵育1~4d，观察结果。

细菌微量生化鉴定管使用说明书
1、实验准备：
安瓿瓶：从包装盒中取出安瓿瓶，朝易折点(瓶颈上方蓝点)反方向用力折开安瓿瓶；或用砂轮划一圈安瓿瓶瓶颈，然后用力折开安瓿瓶，插入安瓿瓶架中。

如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。

试管：从包装盒中取出试管，插入试管架中。

如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。

注：折开安瓿瓶时最好包裹沙布，以免划伤手指。

2、接种方法：
直接接种：用接种针从平板上挑取已纯化分离的同一菌落接种于需要试验的试管(安瓿瓶)中。

菌悬液法：取一内盛2ml无菌水试管，用接种针从平板上挑取已纯化单个菌落至无菌水中仔细研磨制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液，滴入需要试验的试管(安瓿瓶)中，每管3滴。

注：如内容物为半固体或斜面，请直接穿刺接种。

3、接种完后放36±1℃培养或检测标准中所规定的培养温度。

（建议加盖）
青岛高科园海博生物技术有限公司电话：0532-******** 81935226 传真：0532-********。

沙门氏菌成套生化鉴定管使用说明书（SHBG01）
1、实验准备：从包装盒中取出安瓿瓶，用沙轮在瓶颈上划一圈，朝易折点（瓶颈上方蓝点）,
反方向用力折开安瓿瓶，插入安瓿瓶试管架中。

如果染菌或变色，则不能使用，重新拿一支。

2、接种方法：
从选择性琼脂平板（BS琼脂和XLD琼脂或HE琼脂或沙门氏菌显色培养基）上至少选取2个典型菌落或可疑菌落，接种三糖铁琼脂、赖氨酸脱羧酶培养基、靛基质（色氨酸肉汤）、尿素酶、氰化钾、氰化钾对照和氨基酸脱羧酶对照，其中氰化钾对照和氨基酸脱羧酶对照2个菌落做一个对照即可。

本成套生化鉴定管不含三糖铁琼脂。

其它的生化管是否进行接种，请参照GB4789. 4-2010标准判断结果。

直接接种：用接种针从平板上挑取已分离的同一菌落接种于需要试验的生化管中。

菌悬液法：取一内盛2ml无菌水或无菌生理盐水试管，用接种针从平板上挑取单个菌落至无菌水中仔细研磨制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液，滴入需要试验的试管中，每管3 滴。

其中固体和半固体生化管采用穿剌接种。

3、接种完后放37°C培养。

（用封口膜封口，封口膜应用75%酒精擦拭灭菌，成套生化管中附带有）。

S012沙门氏菌生化鉴定套装使用说明书产品介绍用于SN 0170-1992中沙门氏菌的生化鉴定试验。

该套装由10支安瓿瓶组成，包括8项生化试验。

接种可疑菌落悬浊液培养一定时间后，观察生化现象，并结合标准判定鉴定结果。

生化鉴定套装明细需自备材料1、10套×10支安瓿瓶1、无菌水2mL2、10支一次性塑料滴管2、安瓿瓶架（可从本公司另购）3、1支0.5麦氏浊度比浊管配套试剂：靛基质试剂、VP甲乙液试剂、无菌液体石蜡注：一份生化鉴定套装可鉴定10个可疑菌落使用说明1．实验准备：取出安瓿瓶，朝易折点（瓶颈上方蓝点）反方向用力折断瓶颈，按顺序插入安瓿瓶架中，作好标记。

2．菌悬液的制备：➢取一支盛有2mL0.85%生理盐水的试管；➢用接种针挑取可疑菌落至无菌水中；➢仔细研磨，与标准0.5麦氏浊度比浊管比较，制成0.5个麦氏浊度的均匀菌悬液。

3．接种与培养：➢用接种针挑取制备好的0.5个麦氏浊度的均匀菌悬液划线、穿刺接种于三糖铁琼脂中；➢再用接种针挑取制备好的0.5个麦氏浊度的均匀菌悬液分别划线接种于VP固体琼脂和卫矛醇半固体培养基中；➢使用一次性塑料滴管吸取0.5个麦氏浊度的菌悬液，依次滴入制备好的安瓿瓶中，每瓶3滴；➢如无特殊说明，培养温度均为36℃±1℃（无需加盖）。

结果判定结合结果判定表和SN 0170-1992进行结果判定。

保存条件和保质期2-8℃冷藏保存，保质期为一年。

结果判定表试验项目阴性结果阳性结果目标菌生化现象培养时间（h）说明三糖铁斜面K 斜面 A K18h-24h用接种针挑取同一可疑菌落先在斜面划线，再于底层穿刺。

底层K 底层 A A硫化氢不变黑硫化氢变黑阴性或阳性产气无气孔产气有气孔阴性或阳性吲哚无色玫瑰红色阴性18h-24h 滴加2-3滴靛基质试剂，即刻观察结果。

VP半固体琼脂动力不扩散生长动力扩散生长阳性18h-24h用接种针挑取同一菌落穿刺。

培养后依次滴加6滴甲液、2滴乙液，10-30min内观察结果。

沙门氏菌PFGE分型实验室标准操作程序①准备：从检测培养基上挑取单菌落，在普通营养琼脂上培养37℃培养14-18小时。

在Falcon2054管（12-mmx75-mm，sml）上标记样品名称和空白对照；在l.5ml微量离心管上标记好对应样品的名称。

在Faleon2054管中分别加入约2ml细胞悬浊液(CSB)。

用CSB湿润接种环或无菌棉签，从培养皿上刮取适量细菌，轻旋棉签使菌均匀悬浊于CSB中并减少气溶胶形成。

通过加入CSB稀释或增加菌量提高浓度，调整细胞悬液浓度至指定范围:使用bioM6rieux Vitekeolorimeter：透光度≈14%-15%（以Faleon2054管测量）。

②灌制凝胶块在模具上标记好对应样品的名称。

取400ul细胞悬浊液于相应的1.5ml微量离心管中。

若细胞悬浊液冷藏，含细胞悬浊液的微量离心管以37℃水浴中孵育5分钟。

将剩余的细胞悬浊液置于冰上直到胶块制备好放在水浴摇床中。

从37℃水浴箱中取出微量离心管，每管加入20ul蛋白酶K(20mg/mL)，混匀，使其终浓度为0.5mg/mL。

蛋白酶K要置于冰上。

制备好l% SeakemGold：l%SDS琼脂糖，保温于55-60℃水浴箱中。

在微量离心管中加入400uL的l% SeakemGold：1%SDS，用枪头轻轻吸吹几次混匀，混合时避免气泡产生。

1% SeakemGold：1%SDS要一直放在水浴箱中。

将混合物加入模具相应加样孔，避免气泡产生，在室温下凝固10-15分钟。

③凝胶块中细胞的裂解在50ml的聚丙烯螺帽管上做好标记配制CLB/蛋白酶K混合液：每5ml细胞裂解液(CLB)加入25L蛋白酶K(20mg/mL)，使其终浓度为0.l mg/mL，然后颠倒混匀。

每个管子加入5ml CLB/蛋白酶K混合液。

把凝胶块移入相应螺帽管：若想使胶块平齐，可用刀片削去模具表面多余的部分。

将管子放在54℃水浴摇床孵育1.5-2小时，转速150-170rpm。