薄层色谱法

有机化学第二课堂实验报告

一，基本信息

姓名：郑建成 贾玮 赵希一 孟令鑫

年级：2010级 专业层次：预防医学本科五年制 医学检验学本科五年制

队别：学员旅十六队

日期：2011年5月23日 实验室：有机化学实验室二

二、实验报告正文

实验题目：薄层板的制作及薄层色谱的应用

实验目的

掌握薄层色谱的基本原理及其在有机物分离中的应用。

实验原理

1.有机混合物中各组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，有机物各组分会发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前，而吸附力弱的组分则滞后，由于各组分不同的移动速度而使得她们得以分离。物质被分离后在图谱上的位置，常用比移值Rf表示。

Rf原点至层析斑点中心的距离原点至溶剂前沿的距离

实验仪器与药品

实验仪器：硅胶层析板两块，卧式层析槽一个，点样用毛细管，紫外荧光灯，铅笔 暖风机、载玻片、钢勺、镊子等

药品：碱性湖蓝与荧光黄混合样品、咖啡因与阿司匹林混合样品、阿司匹林纯样品二氯乙烷层析液、95%的乙醇溶液，硅胶粉、5%的羧甲基纤维素钠（CMC）的水溶液等

仪器装置图

“浸有层析板的层析槽”图

1-层析缸（广口瓶），2-薄层板，4-层析液

实验步骤

（1）薄层板的制备：

取3g 硅胶G粉于研钵中，加相当于8ml左右的用5%的羧甲基纤维素钠（CMC）的水溶液，用力研磨1-2分钟，至成糊状后立即倒在准备好的薄层板中心线上，快速左右倾斜，使糊状物均匀地分布在整个板面上，厚度约为0.25mm,然后平放于平的桌面上干燥15分钟，再放入100℃的烘箱内活化2小时，取出放入干燥器内保存备用。

（2）点样。在层析板下端1.0cm处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原点。）取拉好的毛细点样管，分别蘸取咖啡因与阿司匹林混合样品、阿司匹林纯样品，点于原点上（注意点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1到2mm为宜！斑点间距稍大一点。点样次数5到7次）另取一块薄层板，点碱性湖蓝与荧光黄混合样品。

中药 薄层色谱法方法验证

中药的薄层色谱法方法验证主要用于确定中药中活性成分的含量和纯度，以及中药浓缩提取物的质量控制。

以下是中药薄层色谱法方法验证的一般步骤：

1. 准备样品：将中药研磨成粉末，并按照所需的质量比例进行混合。

2. 提取样品：选择适当的溶剂来提取中药样品中的活性成分。一般使用无水乙醇、乙醚、丙酮等有机溶剂。

3. 载体制备：将薄层色谱板（如硅胶G板）切割成适当的大小。在板的底部上涂上一层均匀的载体（如硅胶胶体）。

4. 标记试剂制备：根据需要选择适当的标记试剂来对活性成分进行标记。一般常用的标记试剂有紫外吸收试剂（如紫外检测剂），荧光试剂等。

5. 样品施加：将样品施加在薄层色谱板上。可以使用各种方法进行样品施加，如吸附施加、精确施加等。

6. 色谱条件设置：根据需要选择适当的色谱条件，如溶剂系统、色谱板预处理、开发条件等。

7. 色谱开展：将施加样品的薄层色谱板放入展开腔室中，利用毛细作用将色谱层提升上展板。根据需要进行多次开展，直到获得明显的色谱带。

8. 色谱带显色：根据需要选择适当的显色剂来使色谱带可见。常用的显色剂有染料剂、紫外探测剂等。

9. 结果分析：通过观察和测量色谱带的颜色、位置等来确定中药样品中的活性成分的含量和纯度。

通过上述步骤，可以使用薄层色谱法对中药进行质量控制和验证方法的准确性。需要根据实际情况和需要进行具体的操作和优化。

薄层色谱法

薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。

1.仪器与材料

（1）薄层板

按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，G、H表示含或不含石膏黏合剂。F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。按固定相粒径大小分为普通薄层板（10～40µm）和高效薄层板（5～10µm）.

在保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。固定相颗粒大小一般要求粒径为10～40µm。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。

（2）点样器 一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。

（3）展开容器 上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。

（4）显色装置 喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。

（5）检视装置 为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。

（6）薄层色谱扫描仪 系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或检验操作规程 - 2 -

第二部分 色谱分析

第一章薄层色谱法（TLC）

一 薄层色谱法概述

thin-layer chromatography (TLC);thin layer chromatography

薄层色谱法是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法。与HPLC不同，TLC将固定相涂铺在栽板上，使之形成均匀的薄层。被分离的样品溶液点加在薄层板下沿的位置，再把下沿向下放入盛有流动相（深度约5mm）的密闭缸中，进行色谱展开，实现混合组分分离。被展开的组分斑点即色谱谱带，通过适当技术对色谱谱带进行处理可得到定性和定量的检测结果。

薄层色谱法具有技术比较简单，操作容易，分析速度快，高分辨能力，结果直观，不需昂贵仪器设备就可以分离较复杂混合物等特点。

二 薄层色谱法中的薄层板、薄层板的涂铺、点样和展开

（一）薄层板

TLC分离的选择性主要取决于固定相的化学组成及其表面的化学性质。可通过改变涂层材料的化学组成或对材料表面进行化学改性来实现改变薄层色谱分离的选择性。此外，固定相的物理性质，如比表面积、比空容、平均孔径等也对其色谱行为产生影响。

（1）载体 对TLC载体的基本要求为：机械强度好、化学惰性好（对溶剂、显色剂等）、耐一定温度、表面平整、厚度均匀、价格适宜。

（2）固定相 TLC固定相包括改性固定相和未改性固定相两类。硅胶和氧化铝是最常用的两种未改性固定相。

（3）粘合剂 在制备薄层板时，一般需在吸附剂中加入适量粘合剂，其目的是使吸附剂颗粒之间相互粘附并使吸附剂薄层紧密的附着在载板上。常用的粘合剂可分为无机粘合剂和有机粘合剂两类。

（4）荧光指示剂 荧光指示剂是便于在薄层色谱图上对一些基本化合物斑点（无颜色斑点、无特征紫外吸收斑点）定位的试剂。加入荧光指示剂后，可以使这些化合物斑点在激发光波照射下显出清晰的荧光，便于检测。 （二）薄层板的涂铺

涂板方法可以分为涂布法、倾注法、喷洒法及浸渍法四类，其中涂布法是应用最广泛的涂板方法。