薄层色谱

. '. 实验名称:薄层色谱和柱色谱

一、实验目的

1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用 2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。

3、掌握如何正确的配置展开剂

二、实验原理

色谱法的基本原理是利用混合物各组分在固定相和流动相中分配平衡常数的差异。简单地说就是当流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同使吸附力较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中导致各组分在固定相中形成了分离的“色带“从而得到分离。 三、主要试剂规格及用量

1%偶氮苯的甲苯溶液1%苏丹Ⅲ的甲苯溶液1%的羧甲基纤维素 钠CMC水溶液硅胶G立即比为9:1的甲苯-乙酸乙酯。 四、实验装置图

五、实验步骤 一薄层色谱实验步骤

1、薄层板的制备此实验中不考虑有直接的可用

2、取两块薄层板分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条线作为起始线。用分别两根毛细管分别取偶氮苯、苏丹甲苯溶液和其混合液放在起始线上取两个样点且两样点相距1到1.5厘米且样点的直径不超过2毫米。如果样点颜色太浅可以等其变干后在重复几次。

3、用上述的甲苯-乙酸乙酯作为展开剂待样点干燥后小心放入已加入展开剂的广口瓶中点样一端应进入展开剂 0.5cm盖好瓶盖观察实验现象观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划 一记号比较两者的Rf值的大小。

二柱色谱实验步骤 . '. 1、 在色谱柱上端放一个干燥的漏斗将吸附剂倒入其中并轻轻的敲打色柱柱身使其填充均匀然后加入洗脱剂湿润。

2、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱用滴管把样品溶液转移到上色谱柱中并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液直至无色。样品加完后打开下旋塞使样品进入石英砂层后再加入洗脱剂进行洗脱。

3、在分有色物质是直接观察到分离后的“色带”然后用洗脱剂将分离后的“色带”依次自柱中洗脱出来再用适宜的溶剂将溶质萃取出来。

薄层色谱分析主要影响因素

薄层色谱（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的色谱技术，用于分离、鉴定和定量分析化学物质。薄层色谱分析的主要影响因素包括色谱载体、流动相、样品溶液、色谱发展条件和检测方法等方面。

1.色谱载体：

色谱载体是薄层色谱分析中的关键参数，它对分离性能和分析效果起着重要作用。常用的薄层色谱载体包括硅胶、氧化铝和聚甲基丙烯酸酯等。不同类型的载体具有不同的极性和吸附性质，对样品的分离能力和保留行为有所影响。

2.流动相：

流动相是指在色谱过程中用于移动样品的溶剂系统。选择合适的流动相可以有效地提高样品的吸附性能和分离效果。流动相的组成和性质是影响色谱分离的关键因素，其pH值、溶剂极性和添加剂的类型与浓度等都会对分离效果产生影响。

3.样品溶液：

样品的溶解性和浓度对薄层色谱的分析结果也有重要影响。溶液的选择要根据目标化合物的极性和溶解性来确定，应尽量使样品溶解度高、稳定性好，避免出现沉淀和聚集现象。此外，样品的浓度也会对分离效果和检测灵敏度产生影响。

4.色谱发展条件：

色谱发展条件包括色谱层厚、溶剂的饱和度、发展时间和温度等因素。色谱层厚的选择要根据目标化合物的性质和分析要求来确定，一般在0.1-0.25mm之间。溶剂的饱和度和发展时间要适当控制，过度或不足都会对分离效果产生不良影响。温度因素是影响分离的重要参数之一，合适的温度能加速色谱发展速度和提高分离效果。

5.检测方法：

综上所述，薄层色谱分析的主要影响因素包括色谱载体、流动相、样品溶液、色谱发展条件和检测方法等。研究者在进行薄层色谱分析时，需要合理选择上述参数，以获得准确、可靠的分析结果。

薄层色谱鉴别操作规程

薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，用于鉴别。

1.仪器与材料

（1）薄层板

市售薄层板 市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。

自制薄层板 在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为10～40μm，加水或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2％～0.5％）适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。使用涂布器徐布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。

（2）点样器 一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。

（3）展开容器 上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。

（4）显色装置 喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸溃显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。

（5）检视装置 为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。

2.操作方法

（1）薄层板制备

市售薄层板 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，110℃活化，置干燥器中备用。

自制薄层板 除另有规定外，将1份固定相和3份水（或加有黏合剂的水溶液）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度，在反射光及透视光下检视，表面应均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损及污染。

单一溶剂的极性顺序为（从小到大）：

石油醚→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲醇→吡啶→乙酸

混合溶剂的极性顺序（从小到大）：

苯∶氯仿（1+1）→ 环己烷∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶丙酮（95+5）→苯∶丙酮（9+1）→苯∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶乙醚（9+1）→苯∶甲醇（95+5） →苯∶乙醚（6+4）→环己烷∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶乙醚（8+2）→氯仿∶甲醇（99+1）→苯∶甲醇（9+1）→氯仿∶丙酮（85+15）→苯∶乙醚（4+6）→苯∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶甲醇（95+5）→氯仿∶丙酮（7+3）→苯∶乙酸乙酯（3+7）→苯∶乙醚（1+9）→乙醚∶甲醇（99+1）→乙酸乙酯∶甲醇（99+1）→苯∶丙酮（1+1）→氯仿∶甲醇（9+1）

1．薄层板的选择和铺制

（1）薄板的选择 最常用的薄板是玻璃板，其大小选择：根据目的、样品量、组分的数目多少和展开的方式等综合而定。

小量制备：待分离组分总量在0.5～1g左右，可采用400mm×350mm的薄板1~3块即可。

预试或定性分析：用单项展开时，多用载玻片（200mm×50mm，200mm×25mm或75mm×25mm）。双向展开或小量制备时，一般采用200mm×200mm或400mm×200mm的大板。

玻璃板要求：平整、光滑、干净。

（2）制板方法：干铺法和湿铺法

干铺法

概念：就是将吸附剂颗粒或粉末均匀地平铺在玻璃板上的方法，所制得薄板称为干板。

吸附剂粒度要求：一般为150~200目左右。

涂铺方法：把玻璃板平放在平台上或实验台面上，先将吸附剂大致平摊在玻板上，然后两手握住一根带有两个套圈的粗玻璃棒，按照图所示方向推动，把多余的吸附剂除去，便可得到一块均匀的薄板。玻棒套圈可以用塑料管或胶布等制成。

两个套圈的厚度和距离，便是薄层的厚度和宽度。