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实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.实验四放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征掌握培养放线菌的几种方法2 原理放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
3 材料3.1 菌种灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。
3.2 培养基高氏1号培养基。
3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。
4 流程4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图5 步骤5.1插片法5.1.1倒平板将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.5.1.2插片将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。
5.1.3接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。
5.1.4观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。
直接在显微镜下观察。
5.2压印法5.2.1制备放线菌平板同5.1.1。
在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。
实验三酵母菌、霉菌、放线菌的形态观察一目的要求1.观察酵母菌的个体形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2.掌握酵母菌的菌落特征及其与细菌菌落的区别。
3．学会识别霉菌的菌落特征，掌握霉菌的乳酸石炭酸制片法。
4．学习观察霉菌个体形态及各种无性孢子的方法。
5．学会观察放线菌的菌落特征，个体形态及其繁殖方式。
二实验原理1．酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，多数是圆形或椭圆形，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。
用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
2.霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
因此，在观察时要注意菌丝直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性繁殖形成的孢子是那一种？孢子是怎样着生的？3.放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。
常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。
孢子的表面光滑或粗糙、圆或椭圆，孢子有各种颜色，这些形态特点都是鉴定放线菌的重要依据。
三实验材料1．菌种（1）啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、热带假丝酵母;（2）毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉;（3）白色链霉菌、红色链霉菌2. 0.1%的美蓝染色液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉蓝溶液, 芽孢染色液、无菌水、盖玻片、载玻片，接种钩，接种铲。
四内容与步骤1．酵母菌(1)菌落特征和菌苔特征的观察。
观察菌落表面干燥或湿润、隆起形状、边缘整齐度、大小、颜色等，并用接种环挑菌，注意与培养基结合是否紧密。
南京大学生物技术系实验报告题目放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察【一、实验目的】1、通过菌落及细胞形态的观察和比较，掌握区分细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的要点。
2、掌握观察放线菌孢子的方法。
3、掌握观察霉菌孢子及根霉假根的方法。
4、了解酵母菌子囊孢子形成的方法。
【二、实验原理】1、三类微生物菌落形态特征：霉菌形态比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。
霉菌营养体的基本形态单位是菌丝，包括有隔菌丝和无隔菌丝。
营养菌丝分布在营养基质的内部，气生菌丝伸展到空气中。
营养菌丝体除基本结构以外，有的霉菌还有一些特化形态，例如假根、匍匐菌丝、吸器等。
霉菌的繁殖体不仅包括无性繁殖体，例如分生孢子，孢子囊等，包裹其内或附着其上的有各类无性孢子；还包括有性繁殖结构，例如子囊果，其内形成有性孢子。
在观察时要注意细胞的大小，菌丝构造和繁殖方式。
放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。
孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。
孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。
它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。
酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。
酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。
酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。
2、三点接种法与霉菌菌落形态的观察霉菌的菌落形态是分类鉴定的重要依据。
为便于观察，通常用接种针挑取极少量霉菌孢子点接于平板中央，使其形成单个菌落；或在平板上接三点，即在等边三角形的三个顶点上接种，经培养后同一菌种可形成三个重复的单菌落。
后一方法称为三点接种法。
04 实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察实验目的：1. 了解微生物的形态特征。
2. 熟悉显微镜的使用方法，学习普通染色技术。
3. 学习鉴别放线菌、酵母和霉菌的形态特征。
实验材料：1. 盐酸裂解液、甲醛定型液、碘酒、甲基橙、溴酚蓝等。
2. 放线菌、酵母和霉菌的培养物。
实验步骤：1. 取一小块培养物放在玻片上，滴上一滴生理盐水并用小棒子将其研磨均匀。
2. 放线菌培养物制片：将研磨好的放线菌制成薄片，滴上盐酸裂解液使其变成透明，定型液使其固定，并在空气中晾干。
然后，在火上加热定邦，再用碘酒染色，过后清水洗净，醋酸洗净并晾干或用吹风机吹干。
3. 酵母培养物制片：将研磨好的酵母制成薄片，滴上碘酒染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
4. 霉菌培养物制片：将研磨好的霉菌制成薄片，滴上甲基橙染色剂染色，过后清水洗净，醋酸洗净，晾干或用吹风机吹干。
5. 用显微镜观察制片。
实验结果：放线菌：放线菌为革兰阳性菌，细胞形状呈弯曲的短小棍形，光学显微镜下看到的细胞较长，一般在1-20微米之间，可以分枝，分枝形成的菌丝从外形上呈现出类似于蜘蛛网的形状。
勃林美细胞内有许多成熟的孢子，呈现为典型的链状。
常常在不规则的小菌落或黏液内生长。
酵母菌：酵母细胞直径一般在2-5微米之间，为单细胞生物，在将染好色的玻片放在光学显微镜下很容易看到直径3微米以上的球形，卵圆形等细胞结构，表面光滑。
细胞质软，柔软而透明。
霉菌：霉菌属真菌，具有多种形态，种类繁多，细胞直径1-5微米，长1-10微米，细胞呈现不规则形状，通常形成的是在菌丝基础上聚合并且扩展而成的菌落。
通过本次实验观察和比较放线菌、酵母和霉菌的形态特征，可以得出以下结论：1. 放线菌为分枝杆菌，细胞型态呈弯曲状，外观类似于蜘蛛网。
2. 酵母为单细胞生物，呈圆球形或卵圆形，表面光滑、整齐。
3. 霉菌属于真菌，细胞形态呈现不规则形状。
实验四酵母菌霉菌放线菌个体形态观察实验目的：通过对酵母菌、霉菌和放线菌的个体形态观察，了解它们的外部特征及区分方法。
实验器材：1.酵母菌：酵母菌培养基、显微镜、玻璃片、盖玻片；2.霉菌：霉菌培养基、显微镜、玻璃片、盖玻片；3.放线菌：放线菌培养基、显微镜、玻璃片、盖玻片。
实验步骤：1.酵母菌的观察：(1)取一片酵母菌培养基，用微量移液器吸取适量酵母菌悬浊液滴于盖玻片上；(2)将盖玻片放在显微镜上，用40倍镜下观察酵母菌的形态特征。
2.霉菌的观察：(1)取一片霉菌培养基，用微量移液器吸取适量霉菌悬浊液滴于盖玻片上；(2)将盖玻片放在显微镜上，用40倍镜下观察霉菌的形态特征。
3.放线菌的观察：(1)取一片放线菌培养基，用微量移液器吸取适量放线菌悬浊液滴于盖玻片上；(2)将盖玻片放在显微镜上，用40倍镜下观察放线菌的形态特征。
实验结果：1.酵母菌的形态特征：酵母菌是单细胞真菌，呈卵圆形或肾脏形状，大小约为5-10微米。
在显微镜下观察，可以看到酵母菌呈透明或微黄色，细胞表面光滑，没有菌丝或分枝。
在适宜的培养条件下，酵母菌可以通过分裂繁殖。
2.霉菌的形态特征：霉菌是多细胞真菌，细胞呈丝状或孢子状，构成了菌丝体。
在显微镜下观察，可以看到菌丝呈无规则分枝状，菌丝上有许多孢子。
菌丝和孢子的颜色和形状有所差异，根据这些特征可以区分不同种类的霉菌。
3.放线菌的形态特征：放线菌是革兰氏阳性菌，形态特征类似细菌。
在显微镜下观察，可以看到放线菌呈革兰氏阳性杆菌，有时菌体呈分枝状。
放线菌是严格需氧菌，所以通常在培养基的表面形成菌落。
放线菌的菌落通常呈灰黄色、红色或蓝绿色等，形状不规则。
放线菌还可以产生一种特殊的菌丝结构，孢子链，它们是放线菌繁殖和传播的主要方式。
实验结论：通过对酵母菌、霉菌和放线菌的个体形态观察，我们可以区分它们的外观特征。
酵母菌是单细胞真菌，没有菌丝或分枝，呈卵圆形或肾脏形状；霉菌是多细胞真菌，构成了分枝的菌丝体，菌丝上有多个孢子；放线菌是革兰氏阳性菌，菌体类似细菌，可产生分枝状的菌体和特殊的孢子链。
细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落测定一、目的要求1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。
2．学习细菌菌落制片的方法。
二、墓本原理菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。
细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初步识别、鉴定微生物，方法简便快速，在科研和生产实践中常被采用。
利用血液培养基富有营养及粘性等特性来培养细菌，在此培养基上生长的菌落在固定时粘性很大，能够牢固地附着在载玻片或盖玻片上，便于制片和观察。
另外，血液培养基又是较好的保存菌种用培养基，故由此培养基所制的菌落制片能保存较长时间。
三、器材圆褐固氮菌，枯草芽孢杆菌，灰色链霉菌，酿酒酵母，青霉的单个菌落平板，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；Bouin氏固定液，0．01％结晶紫溶液，羊血或兔血，肉膏蛋白胨琼脂培养基，酒精等。
四、操作步骤1．观察圆褐固氮菌、枯草芽孢杆菌、灰色链霉菌、酿酒酵母、青霉的单个菌落特征，并按实验一菌落特征描述的方法记录结果。
2．血液琼脂培养基的制备：(1)成分pH7．6肉膏蛋白胨琼脂培养基10ml，无菌脱纤维羊血（或兔血）1ml。
(2)将肉膏蛋白胨琼脂培养基加热溶化。
(3)待冷至45℃时，以无菌操作加1ml无菌脱纤维羊血于培养基内，立即摇荡使血液和琼脂培养基充分混匀。
(4)迅速以无菌操作倒入平板，使成血液琼脂平板，注意不要产生气泡。
中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。
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(5)置37℃过夜，如无菌生长即可使用。
(6)将无菌的平板取出进行划线接种分离单个菌落，因要保持琼脂表面完整，接种改用圆头光滑玻棒，注意不要把琼脂划破。
注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。
由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。
细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。
接种的关键是严格进行无菌操作。
常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。
3 实验材料3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管3.4 仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。
4 操作步骤4.1 斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。
4.1.1准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
4.1.2接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。
4.1.3拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
4.1.4接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。
4.1.5接种接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。
不同种类微生物的接种方式各异，具体如下：（1）细菌和放线菌由斜面培养基底部自下而上来回做“Z”形密集划线，勿划破培养基。
（2）真菌菌落为局限性生长的曲霉、青霉等采用上下涂布法接种。
菌落为扩散性生长的根霉、毛霉等采用点植法接种。
4.1.6塞管塞和接种环灭菌接种完毕，将接种环抽出，灼烧管口，并迅速塞上棉塞。
再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。
将接种管做好标记后放入试管架，即可进行培养。
4.2平板接种法平板接种法就是用接种环将菌种或用无菌吸管将定量菌液接种至平板培养基的方法，主要用于观察菌落特征、分离纯化菌种和平板活菌计数。
其接种方式有倾注接种、涂布接种、划线接种和点植接种。
4.2.1倾注平板法（1）倾注平板无菌条件下取适量菌液倾注于平皿中。
（2）倒平板将灭菌好的培养基倒入平皿，并迅速轻轻旋动平皿，使培养基与菌液充分混匀。
（3）培养培养基凝固后，将平板倒置于培养箱中培养。
4.2.2涂布平板法（1）倒平板将灭菌好的培养基倒入平皿。
（2）涂布平板无菌条件下吸取菌液滴加于平板培养基表面中心位置，左手持平皿并将皿盖打开一缝，右手持涂布棒将菌悬液自平板中央以同心圆方向轻轻向外涂布扩散，使之分布均匀，静置5-10min，使菌液浸入培养基。
（3）培养培养基凝固后，将平板倒置于培养箱中培养。
4.2.3平板划线法（1）倒平板将灭菌好的培养基倒入平皿。
（2）平板划线通过划线使样品在平板上形成单个菌落。
①连续划线法用于稀释液（见下图右）②分区划线法用于较浓的菌样（本实验细菌、酵母菌、放线菌采用此方法，下图左）注意：接种环勿划破培养基，划线不宜重叠，要疏密适中。
4.2.4平板点植接种法此法适用于观察霉菌的菌落特征（见下图）。
用接种环蘸少许无菌生理盐水，挑取斜面上少量菌丝或孢子，以三个角三点的形式轻轻点种于平板培养基上。
接种时最好倒置平皿，以免霉菌孢子飞扬。
4.3液体接种法多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下：由斜面培养物接种至液体培养基：用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。
如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。
由液体培养物接种液体培养基时，可用接种环或接种针沾取少许液体移至新液体培养基即可。
也可根据需要用吸管、滴管或注射器吸取培养液移至新液体培养基即可。
接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。
如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。
凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。
4.4 穿刺接种法此法多用于半固体、醋酸铅、三糖铁琼脂与明胶培养基的接种，操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同。
但必须使用笔直的接种针，而不能使用接种环。
接种柱状高层或半高层斜面培养管时，应向培养基中心穿刺，一直插到接近管底，再沿原路抽出接种针。
注意勿使接种针在培养基内左右移动，以使穿刺线整齐，便于观察生长结果。
4.5固体接种法普通斜面和平板接种均属于固体接种，斜面接种法已讲了，不再赘述。
固体接种的另一种形式是接种固体曲料，进行固体发酵。
按所用菌种或种子菌来源不同可分为：用菌液接种固体料，包括用菌苔刮洗制成的菌悬液和直接培养的种子发酵液。
接种时按无菌操作将菌液直接倒入固体料中，搅拌均匀。
但要注意接种所用水容量要计算在固体料总加水量之内，否则会使接种后含水量加大，影响培养效果。
用固体种子接种固体料。
包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌。
将种子菌于无菌条件下直接倒入无菌的固体料中即可，但必须充分搅拌使之混合均匀。
一般是先把种子菌和少部分固体料混匀后再拌大堆料。
二、形态与菌落特征观察1目的要求（1）观察并描述出细菌、酵母菌、放线菌、真菌的平板菌落特征（群体形态）。
（2）了解其菌落在其形态学鉴定上的重要性。
（3）了解观察酵母菌、放线菌、常见霉菌形态特征（个体形态）的基本方法。
2基本原理（1）各种细菌在平板上形成的菌落均具有一定特征，其菌落一般较湿润、光滑、透明、易挑起、菌落正反面及边缘、中央部位的颜色一致，且菌落质地较均匀等，菌落往往较小，较薄且有“细腻”感。
它对细菌的分类、鉴定有重要的意义。
（2）酵母菌菌落一般亦较湿润、光滑、易挑起、菌落正反面及边缘、中央部位的颜色一致，但其菌落一般比细菌大、厚而且透明度较差。
酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大，一般成圆形、椭圆形、柱形和藕节形等。
本实验用水—碘液浸片来观察生活的酵母形态。
（3）放线菌菌落局限生长，小而薄，多为圆形，边缘有辐射状，外观呈干燥、不透明的丝状、绒毛状或皮革状等特征。
由于营养菌丝伸入培养基中使菌落和培养基连接紧密，故菌丝不易被挑起。
一般情况下，菌落中心的颜色常比边缘深，由于气生菌丝、孢子和营养菌丝颜色不同，常使菌落正反面呈不同颜色。
放线菌可用水浸片法在显微镜下观察其形态。
放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。
菌体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝( 或称基内菌丝) 和生长在培养基表面的气生菌丝。
有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。
孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。
气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。
（4）霉菌的菌落大而疏松，由于孢子不同的形状，构造和颜色，菌落表面往往呈现不同的结构和色泽，菌落在固体培养基上生长呈棉絮状（毛霉）、蜘蛛网状（根霉）、绒毛状（曲霉）和地毯状（青霉）。
霉菌的营养体是分枝的丝状体。
其个体比细菌和放线菌大得多，分为基内菌丝和气生菌丝。
气生菌丝中又可分化出繁殖丝。
不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。
霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到3 ~10μm），通常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍。
可采用乳酸石碳酸棉蓝浸片法来观察其形态。
3实验材料3.1菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的平板培养物。
3.2培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基。
3.3试剂与染色剂：0.85%生理盐水、革兰氏染色用碘液、0.1%美蓝染色液、乳酸石碳酸棉蓝染色液、50%乙醇等。
3.4仪器或其它用具：接种针、载玻片、盖玻片、镊子、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。
4操作步骤4.1菌落特征的观察4.1.1细菌菌落的描述菌落大小：大菌落（5mm以上）、中等菌落（3-5mm）、小菌落（1-2mm）、露滴状菌落（1mm 一下）菌落形状：圆形、放射状、假根状、不规则等菌落颜色：乳白色、灰白色、金黄色、粉红色等菌落质地：黏稠、脆硬等菌落表面形态：有光滑、皱褶、放射状、根状等菌落边缘形态：有整齐、波状、丝状、锯齿状、裂叶状等形态菌落隆起形态：有扁平、隆起、草帽状、胶状等透明度：可分为秀明、半透明、不透明等4.1.2酵母菌菌落形态的描述：可参照细菌4.1.3放线菌和霉菌菌落的描述：菌落大小：分局限生长和蔓延生长，用格尺测量菌落的直径和高度菌落表面的形态：粗糙、同心圆、辐射状沟纹、粉状、绒毛状或皮革状、疏松或紧密、有无水滴等。
菌落颜色：菌落正面颜色（包括气生菌丝或孢子颜色）；菌落反面颜色（指营养菌丝颜色）；有否水溶性色素？（色素会渗入培养基中，使菌落周围的培养基改变颜色）。
菌落的组织形状：棉絮状、蜘蛛网状、绒毛状和地毯状。
4.2个体形态特征的观察4.2.1酵母菌的形态观察水-碘液浸片法在载破片中央加1小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔于水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
4.2.2放线菌的形态观察（1）插片：在平板的一半面积划线接种，在接种线上将盖玻片1/2长度以45°角插入琼脂，平板另一半先插片，然后将少量放线菌孢子接种于盖玻片与琼脂相接的沿线。
平板倒置28℃培养3-5天。
（2）0.1%美蓝染色液染色：取1滴染液置于载玻片中央，将上述平板中的盖玻片取出，将有菌的一面向下以45°角浸于载玻片的染色液中（避免气泡）。
（3）镜检：用高倍镜观察其单个分生孢子及其基内菌丝。
4.2.3霉菌的形态观察（1）制片：在干净的载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用接种针从菌落边缘处取小量带有孢子的菌丝，先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再置于染色液中，小心地把菌丝放开，然后用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。
（2）镜检：1）曲霉：高倍镜下观察菌丝有无隔膜，分生孢子着生位置，辨认分生孢子梗、顶囊、小梗和分生孢子。
