分子筛层析

山东金泰生物工程有限公司验证管理文件编号：V00P005题目：分子筛层析系统清洁方法验证方案版本号：01 版共3 页，第1 页生效日期：年月日起草：日期：一审：日期：二审：日期：批准：日期：1验证范围分子筛S-200 层析柱、泵管、检测器管路及吸收池所组成的系统的清洁2验证目的确保分子筛层析系统的清洁方法有效可行，确保纯化过程中不受外来污染。

3验证合格标准3.1在0.02AUFS、280nm 时，基线平稳没有大的波动3.2pH 应与S-200 洗脱缓冲液的pH 相同，即为pH=6.8±0.13.3内毒素的含量w 2 EU/mL4验证步骤4.1分子筛层析系统清洁方法流程配制O.IMNaOH无热原缓冲液T通过泵冲洗柱子1-2个柱体积宀配制pH6.8 S-200缓冲液宀平衡柱子1-2 个柱体积4.2验证所用相关文件序号题目编号1细菌内毒素检查法Q00E0082pH 计操作规程P00D0063分子筛层析缓冲液配制操作规程P01R0124分子筛层析系统操作规程P00D0165重组人白介素-2 分子筛层析岗位操作法P01M0064.3程序4.3.1S-200 纯化后，用0.1MNaOH 溶液冲柱子1-2个体积。

4.3.2灵敏度为0.02AUFS 时，半小时基线平稳无大的波动。

4.3.3根据pH 测定法，检测器端测得洗脱液出液的pH=6.8± 0.1.4.3.4根据内毒素测定法，内毒素含量w 2EU/mL.5再验证连续三次按上述验证步骤检验清洁方法，做好记录，在以后生产过程中每年验证一次。

清洁方法验证记录验证部门：项目时间基线pH内毒素验证人复核人分子筛层析系统清洁方法验证报告验证部门：验证日期：报告填写人：报告日期：1 经检查并确认在0.02AUFS 灵敏度下，基线验证人：2 经检查并确认所测pH 验证人：3 经验证内毒素含量验证人：4 验证结果分析及验证总结论核对人：（符合或不符合）清核对人：符合或不符合）验证要求核对人：（平稳或不平稳）。

一.分子筛（凝胶层析）原理：用一般的柱层析方法使相对分子质量不同的溶质通过具有分子筛性质的固定相（凝胶），从而使蛋白质分离。

优点：1.洗脱条件简单，往往只需要一种缓冲溶液，可以使用任何缓冲液。

2.实验操作相对简单3.条件温和，对蛋白活性保持率高4.既可以对标签蛋白纯化也可以对非标签蛋白纯化。

缺点：1. 工艺放大困难：分子筛层析无法遵循线性放大原则，即使遵循柱床高度不变的原则，工艺流速如何进行调整，也是需要面临的问题。

2. 层析柱装填困难3.对上样量有要求4.测定柱效困难5.反复使用层析柱困难二.亲和层析原理：亲和层析是一种吸附层析，亲和层析利用固相介质中的配基与混合生物分子之间亲和能力不同而进行分离，当蛋白混合液通过层析柱时，与配基能够特异性结合的蛋白质就会被吸附固定在层析柱中，其他的蛋白质对配体不具有特异性的结合能力，将通过柱子洗脱下来，这种结合在一定条件下是可逆的，选用适当的洗脱液，改变缓冲液的离子强度和pH 值或者选择更强的配体结合溶液将结合的蛋白质洗脱下来，而无亲和力的蛋白质最先流出层析柱。

优点:1. 亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。

2. 是最有效的生物活性物质纯化方法，它对生物分子选择性的吸附和分离，可以取得很高的纯化倍数。

此外蛋白在纯化过程中得到浓缩，结合到亲和配基后，性质更加稳定，其结果提高了活性回收率。

此外它可以减少纯化步骤，缩短纯化时间，对不稳定蛋白的纯化十分有利。

缺点：1.除特异性的吸附外，仍然会因分子的错误认别和分子间非选择性的作用力而吸附一些杂蛋白质，另洗脱过程中的配体不可避免的脱落进入分离体系。

2. 载体较昂贵，机械强度低，配基制备困难，有的配基本身要经过分离纯化，配基与载体耦联条件激烈等。

三.离子交换层析原理：离子交换层析根据样品表面电荷不同进行分离纯化的技术，根据不同蛋白样品在同一Ph条件下所带电荷正负以及带电荷量不同而将不同蛋白样品分离。

生物化学大实验一、装柱及标准样品的分子筛层析：把柱子固定在夹子上，打开下面的盖，用取液器匀速加入介质。

保证介质均匀沉淀，且要缓慢加入，防止产生气泡。

待介质完全沉降打开柱的上盖，剪一与柱内径大小一致的圆形滤纸片放入柱中，沉淀于介质表面。

液体接近界面时加入3ml超纯水，同时在层析杯中加入100ml超纯水，连接泵洗柱15min，同时配制平衡液200mL（20mmol Tris-HCl,pH 8.0; 20mmol NaCl）。

待液体接近界面时，在柱中加入3ml平衡液（其余平衡液加到层析杯中），调节流速，控制滴速为3ml/10min（一分钟约6-7滴）。

平衡柱过中午。

实验材料：牛血清蛋白、糜蛋白酶二者比例为2:1 溶于20mmol Tris-HCl，pH 8.0; 20mmol NaCl（教师统一配制）。

缓慢向柱中加入样品（4ml）打开层析柱上下端，使样品靠重力流出。

当样品接近界面时在柱中加入3ml 上样缓冲液（即平衡液），连接泵，调T=100 A(0.5A)=0 ，开启记录仪，同时配制100ml 0.1M Nacl。

待两个峰都出来后，把层析杯中的液体换为0.1M Nacl洗柱20min，再用超纯水洗柱30min，封柱，关机。

实验二BAP的诱导表达1.在5ml培养基中加入Amp2.5μl（母液为100mg/ml）和10μl菌液。

在摇床上37℃ 130转过夜预培养。

2.取2.5ml菌液加入50ml含有Amp (25μl)的LB培养基中（1:20扩培）。

37℃恒温摇床，180-200rpm培养40-60min左右。

测OD600,使其值达到0.5-0.7。

3.加入终浓度为1mM的IPTG(500μl)进行外源基因的诱导表达。

于室温诱导4-5小时。

4.取出后进行细胞超声破碎，留1ml破碎前菌液处理后进行western及PAGE，其余放入冰箱于4度保存。

实验三BAP的亲和层析纯化一、破碎细菌A.盐酸胍破碎1.100ml诱导后的菌液分别放于大离心管中，配平，5000rpm离心15min。

根据分子大小分离蛋白质的方法蛋白质分子的大小是其在溶液中运动速度的一个重要参数，根据分子大小分离蛋白质的方法有许多。

下面我们将介绍几种常见的方法。

1.差速离心：差速离心是一种简单常用的蛋白质分离方法，通过调整离心速度，能够分离出不同大小的蛋白质颗粒。

这种方法适用于分离大分子量的蛋白质，如多聚体或细胞器结构。

2.凝胶过滤：凝胶过滤是一种基于分子大小的分离方法。

通常使用交联凝胶作为固相介质，通过不同大小的孔隙来限制蛋白质的通过。

较小的蛋白质分子能够穿过凝胶孔隙，而较大的蛋白质分子则被凝胶阻隔。

这种方法可以用于分离蛋白质的不同形态，如单聚体和多聚体。

3.聚丙烯酰胺凝胶电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的分离和分析蛋白质的方法。

通过在电场作用下，将蛋白质按照其分子大小进行分离。

较小的蛋白质能够快速迁移，而较大的蛋白质迁移速度较慢。

这种方法适用于分离不同大小范围的蛋白质。

4.超速离心：超速离心是一种高效的分离蛋白质的方法，通过调整离心机参数，可以分离出不同大小的蛋白质颗粒。

较大的蛋白质分子能够沉降至离心管底部，而较小的蛋白质分子则停留在离心液上层。

这种方法适用于分离中等到大分子量的蛋白质。

5.过滤法：过滤法是一种利用不同孔径的滤膜或滤床来分离蛋白质的方法。

较小的蛋白质能够很容易穿过滤膜孔隙，而较大的蛋白质则被滤膜阻隔。

这种方法适用于分离较小的蛋白质。

6.分子筛层析：分子筛层析是一种利用分子筛颗粒对蛋白质进行分离的方法。

由于分子筛颗粒具有较小的孔隙，只有小于孔隙大小的蛋白质能够进入颗粒内部，而大于孔隙大小的蛋白质则被筛除。

这种方法适用于分离较小的蛋白质。

总而言之，根据分子大小分离蛋白质的方法有许多种。

选择合适的方法要考虑蛋白质的特性和需要分离的蛋白质大小范围。

不同的方法具有不同的分离效率和分离适用范围，科研人员可以根据具体情况选择适合的方法进行蛋白质分离和纯化。

一、实验目的1. 了解凝胶过滤层析的原理及操作步骤。

2. 掌握利用凝胶过滤层析法分离混合物中不同分子量蛋白质的方法。

3. 通过实验验证凝胶过滤层析法在蛋白质分离中的应用。

二、实验原理凝胶过滤层析法，又称分子筛层析法或凝胶过滤法，是一种根据分子大小进行分离的层析技术。

该技术利用凝胶的分子筛特性，将混合物中的不同分子量的物质分离。

凝胶是一种具有多孔结构的物质，孔径大小不一，当混合物通过凝胶层析柱时，大分子物质由于无法进入凝胶孔径，将直接通过层析柱；而小分子物质则可以进入凝胶孔径，从而在层析柱中停留较长时间，实现分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白质混合物（含有已知分子量的标准蛋白质和未知分子量的蛋白质）- 凝胶层析柱（Sephadex G-75）- 洗脱液（磷酸盐缓冲液，pH 7.4）- 标准蛋白质（如牛血清白蛋白、卵清蛋白等）- 未知蛋白质样品2. 实验仪器：- 凝胶层析柱架- 凝胶层析柱- 量筒- 离心机- 分光光度计四、实验步骤1. 准备凝胶层析柱：将凝胶层析柱垂直放置于凝胶层析柱架上，用洗脱液平衡凝胶层析柱，直至洗脱液颜色清澈。

2. 加样：取一定量的蛋白质混合物，加入凝胶层析柱的顶部，用洗脱液冲洗，直至混合物完全进入层析柱。

3. 洗脱：用洗脱液缓慢冲洗层析柱，收集各部分洗脱液，分别测定其蛋白质含量。

4. 分离：根据洗脱液的蛋白质含量，绘制洗脱曲线，分析不同分子量蛋白质的分离情况。

5. 结果分析：根据标准蛋白质的分子量和洗脱曲线，推测未知蛋白质样品的分子量。

五、实验结果与分析1. 凝胶过滤层析柱平衡后，洗脱液颜色清澈，说明凝胶层析柱已准备就绪。

2. 洗脱过程中，标准蛋白质和未知蛋白质样品的洗脱曲线如下：- 标准蛋白质洗脱曲线：在洗脱曲线中，标准蛋白质的洗脱峰呈对称状，峰面积较大，说明分离效果较好。

- 未知蛋白质样品洗脱曲线：在洗脱曲线中，未知蛋白质样品的洗脱峰位置与标准蛋白质的洗脱峰位置不同，峰面积较小，说明分离效果较差。

生物工程中的分离纯化技术生物工程是一门涉及生命科学、工程科学和计算机科学等多个领域的交叉学科，其中的分离纯化技术是生物工程中最为基础和关键的环节之一。

分离纯化技术是指将混合物中的某种物质隔离出来并经过一系列的处理，得到单一的、纯度高的、特殊的产品的技术过程。

在生物工程中，分离纯化技术被广泛应用于蛋白质、酶、细胞、病毒等的分离纯化、检测测定和生产加工等方面。

1. 蛋白质的分离纯化蛋白质是生物体内一种重要的大分子有机物质，具有结构多样性、功能多样性和应用广泛性的特点，因此成为生物工程领域中一个重要的研究方向。

在蛋白质的分离纯化过程中，分子筛层析、离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水相互作用层析等技术均可有效实现蛋白质的分离纯化。

其中，分子筛层析是指通过分子筛的孔径大小将目标蛋白质与其他杂质分子分离开来的方法。

分子筛层析技术是一种广泛应用于生物工程中的“粗制滥造”方法，具有快速、简便、高效的特点，但相应地，纯度较低。

而离子交换层析是通过分别对离子与蛋白质的吸附作用来分离不同的离子组分，具有较高的特异性和纯度，但需要更细致的操作。

2. 酶的分离纯化酶是生物体内一种重要的催化剂，具有结构多样性、反应特异性和活性高效性的特点，广泛应用于医药、农业、食品和化妆品等领域。

在酶的分离纯化过程中，离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤层析等技术均可有效实现酶的分离纯化。

其中，亲和层析是通过将目标酶与某些特定的固定化分子结合在一起，使目标酶在混合物中优先吸附到亲和基质上，最终达到分离纯化的目的。

凭借亲和层析技术，可实现酶的高效、高特异性的分离纯化，但亲和基质的选择和对酶的影响需要精细操作。

3. 细胞的分离纯化细胞是生命离不开的基本单位，它们在物质代谢、能量交换、生长发育和免疫防御等方面发挥着重要的作用。

在细胞的分离纯化过程中，差速离心、密度梯度离心和磁珠分离技术等均可有效实现细胞的分离纯化。

其中，磁珠分离技术是通过将特定的磁性珠子与多价抗体等结合起来，利用磁性珠子对靶细胞或细胞分子的快速分离与扩增。

一、实验目的本实验旨在通过凝胶层析技术，对混合物中的不同分子量物质进行分离和纯化。

具体目标包括：1. 掌握凝胶层析的原理和操作步骤。

2. 学习如何根据分子量差异对蛋白质等生物大分子进行分离。

3. 观察和分析实验结果，验证凝胶层析技术的有效性和可行性。

二、实验原理凝胶层析（Gel Filtration）又称分子筛层析，是一种基于分子量差异进行物质分离的方法。

该技术利用凝胶作为固定相，凝胶具有多孔结构，分子量不同的物质在凝胶中的移动速度不同，从而实现分离。

实验中常用的凝胶材料包括葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。

凝胶颗粒的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制。

交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松。

因此，不同型号的凝胶具有不同的分子量分级范围。

实验过程中，将待分离物质加入凝胶柱中，在溶剂的作用下，各组分因分子量差异在凝胶柱中以不同的速度移动。

分子量大的物质在凝胶柱中的移动速度较慢，先流出柱子；而分子量小的物质则可以进入凝胶颗粒的网孔内，移动速度较快，后流出柱子。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 待分离的混合物- 葡聚糖凝胶（Sephadex G-100）- 洗脱液（例如磷酸盐缓冲液）- 标准蛋白质溶液（例如牛血清白蛋白、肌红蛋白等）- 紫外分光光度计- 凝胶层析柱- 量筒- 移液器- 离心机2. 实验仪器：- 凝胶层析柱- 紫外分光光度计- 移液器- 量筒- 离心机四、实验步骤1. 准备凝胶柱：将葡聚糖凝胶（Sephadex G-100）用洗脱液充分溶胀，装入凝胶层析柱中。

2. 准备样品：将待分离的混合物用洗脱液稀释，调整蛋白质浓度至适当水平。

3. 加样：将样品加入凝胶柱中，待样品完全进入凝胶柱后，用洗脱液冲洗柱子，直至流出液为无色。

4. 收集洗脱液：用紫外分光光度计检测洗脱液中的蛋白质浓度，收集不同分子量范围的蛋白质组分。

5. 分析结果：将收集到的蛋白质组分进行SDS-PAGE电泳或Western blot分析，观察蛋白质的分子量和纯度。

凝胶过滤层析的分类
凝胶过滤层析是一种常用的生物制剂分离和纯化技术，主要用于生物大分子的精细纯化和结构研究。

它是利用小孔隙的凝胶纤维或颗粒作为固定相，在其内部通过物质的分子筛选和分散作用，实现对混合物中生物大分子的分离和纯化。

根据其分离原理、凝胶基质和实现机制，可以将凝胶层析分为以下几类：
1. 分子筛层析
分子筛层析是利用具有一定孔径分布的凝胶基质分离混合物中分子大小差异较大的生物大分子。

该技术通常使用具有不同孔径大小的凝胶柱，较小的分子可透过凝胶孔道而较大的分子则被阻滞并在凝胶孔道内停留，从而实现克隆、富集和大分子的纯化。

2. 逆流层析
逆流层析是将混合物中组分与凝胶基质相互作用后，通过逆向流动，选择性地读出不同组分。

该技术主要利用大分子与凝胶基质的亲和作用，通过连续返流溶液在凝胶柱内的往复流动，将具有亲和性的分子迅速疏水排放，从而实现分离和纯化。

离子层析是基于凝胶基质与某些离子的亲和性而实现分离纯化的技术。

离子层析通常采用常见的阴离子或阳离子的亲和柱，利用空间分离、分子交互作用和高效分离的特性。

离子层析是分离、富集和分析各种生物大分子分子的重要技术手段之一。

4. 亲和层析
亲和层析是基于凝胶基质与生物大分子之间的特异性结合而实现分离纯化的技术。

该技术利用富集目标大分子与凝胶基质亲和性较高的特点，通过配对反应的选择性结合，进一步提高其纯化效率和选择性。

综上所述，凝胶过滤层析的分类主要包括分子筛层析、逆流层析、离子层析和亲和层析。

随着生物制剂的应用不断扩大和完善，各类凝胶层析的应用和发展将日趋重要。

通过实验让学生理解影响凝胶过滤层析的因素在生物化学实验中,凝胶过滤层析,也称分子筛层析、排阻层析,是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术。

笔者现将凝胶层析的用途及通过实验让学生理解掌握影响凝胶过滤层析的两种因素阐述如下。

一、凝胶层析的应用广泛凝胶层析的应用非常广泛,最主要的应用有以下四种。

1.脱盐高分子(如蛋白质、核酸、多糖等)溶液中的低分子量杂质,可以用凝胶层析除去,这一操作称之为脱盐。

2.用于分离提纯凝胶层析已广泛用于酶、蛋白质、氨基酸、多糖、激素、生物碱等物质的分离提纯。

凝胶对热原有较强吸附力,可用于除去无离子水中的致热原制备注射用水。

3.测定高分物质的分子量用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内,在同一条件下层析、记录每一分钟成分的洗胶体积;根据物质的洗胶体积,在标准曲线上查出其分子量。

4.高分子溶液的浓缩二、通过葡聚糖凝胶柱层析实验,让学生理解影响凝胶过滤层析的两种因素学生通过实验,掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。

对于凝胶过滤层析的理论学习,学生普遍感到抽象、难理解。

通过实验,可以让学生在实验的过程中,变抽象为直观,变难懂为易懂。

在实验开展的进程中,学生可以亲眼观察到凝胶的选择和层柱大小、长短的不同均会对实验结果产生影响。

1.凝胶的选择,根据实验目的不同,选择不同型号的凝胶目前,市售凝胶主要包括:价格便宜的凝胶葡聚糖G-10,分离范围<700;价位适中的凝胶葡聚糖G-35,分离范围是<5000;价格偏贵、胶位度较大的为凝胶葡聚糖G-35、G50,分离范围分别为1000-17000及1000-30000。

在该实验中,样品蓝色葡聚糖2000分子量的约为2×105,而溴酚蓝分子量约为670,两者分子量相差较大,可选择颗粒较大而胶联度较小的、价格相对适中的凝胶葡聚糖G25。

由于蓝色葡聚糖分子量过大,不能从凝胶分子中通过,所以蓝色葡聚糖2000克于溴酚蓝出柱,从而达到分离、两者分离的效果。

层析技术名词解释生物化学生物化学是研究生物体内化学反应的科学，涉及到许多生物分子的结构、功能和代谢途径等方面。

层析技术是生物化学实验中常用的一种技术手段，可以对生物分子进行分离、纯化和分析。

本文将对层析技术中常用的名词进行解释，希望能够帮助读者更好地理解和应用这一技术。

1. 层析层析是一种利用物质在不同相之间分配不均的现象，将混合物分离成不同成分的方法。

在生物化学实验中，通常采用柱层析、纸层析、薄层层析等方法。

柱层析是将混合物溶液通过填充在柱子中的层析介质，利用不同成分在介质中的吸附、分配、离子交换等特性，将混合物分离成不同成分的方法。

纸层析和薄层层析则是利用不同成分在纸或薄层上的吸附、分配等特性，将混合物分离成不同成分的方法。

2. 层析介质层析介质是指填充在柱子中的用于分离混合物的物质，常用的介质包括凝胶、硅胶、离子交换树脂等。

凝胶层析是利用凝胶的孔隙结构和表面电荷，将混合物分离成不同成分的方法。

硅胶层析则是利用硅胶的表面性质和孔隙结构，将混合物分离成不同成分的方法。

离子交换层析是利用离子交换树脂的离子交换能力，将混合物分离成不同成分的方法。

3. 亲和层析亲和层析是利用生物分子之间的特异性结合，将目标分子从混合物中分离出来的方法。

亲和层析的原理是利用某些分子间的特异性结合，将目标分子与介质上固定的亲和配体结合，从而实现目标分子的分离。

常用的亲和层析介质包括亲和树脂、亲和凝胶等。

4. 分子筛层析分子筛层析是一种利用分子筛的孔隙大小和形状，将混合物中不同大小和形状的分子分离出来的方法。

分子筛层析的原理是利用分子筛的孔隙大小和形状的选择性，将混合物中分子分离成不同大小和形状的分子。

常用的分子筛层析介质包括凝胶过滤、超滤等。

5. 色谱层析色谱层析是一种利用分子在固定相和流动相之间不同的相互作用，将混合物分离成不同成分的方法。

色谱层析的原理是利用不同成分在固定相和流动相之间的不同亲和性，将混合物分离成不同成分。

【实验目的】掌握凝胶过滤层析的原理及操作方法【实验原理】凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。

是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。

层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。

1、器材：核酸蛋白检测仪、层析柱、水浴锅、真空泵2、试剂：SephadexG-25【实验步骤】（1）凝胶的选择：在经过膜分离后，分子量<5000。

本次实验选用G-25葡聚糖凝胶（分离范围1000-5000）。

（2）柱子的选择：分子量<5000，膜分离后玉米肽中不同的小肽分子量比较接近，属于分级分离，所以选用50*1.6规格的柱子。

（3）干凝胶用量的计算：柱子体积/膨胀度，G-25膨胀度是4~6。

（4）凝胶的预处理：将干胶颗粒悬浮于5-10倍量的蒸馏水或洗脱液中充分溶胀，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻出去。

可以用玻璃棒搅拌，但是不能剧烈，防止凝胶破裂。

多洗几次，尽量洗干净。

自然溶胀费时较长，加热可使溶胀加速，即在沸水浴中将湿凝胶浆逐渐升温至近沸，1-2小时即可达到凝胶的充分胀溶。

充分溶胀后，进行真空脱气。

（5）洗脱液的选择：本实验采用蒸馏水做洗脱液。

（6）凝胶的填充：将层析柱与地面垂直固定在架子上，然后将处理好的凝胶倒入柱子里，不能有气泡，要防止干柱。

（7）柱平衡：装柱完成后，用洗脱液来平衡柱子，直至核酸蛋白检测系统基线保持水平半个小时以上。

（8）上样：上样量在5%~10%。

（9）标准曲线的制作：本次实验用到还原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、杆菌肽（氧化型谷胱甘肽（GSSG），M=612.63；还原型谷胱甘肽（GSH），M=307.33；杆菌肽M=1422.69）。

三种肽各称取0.03g 配成2ml，进行层析，在恒定流速下进行凝胶过滤层析。