离子色谱-抑制型电导检多肽中的三氟乙酸

离子色谱法测定盐酸托烷司琼中的三氟乙酸周传静;宋玉平;李玉双;魏长峰【摘要】目的：建立离子色谱检测盐酸托烷司琼中三氟乙酸的方法。

方法采用Ionpac AS11-HC色谱柱（4 mm ×250 mm）以及相应的保护柱Ionpac AG11-HC（4 mm ×50 mm），淋洗液为含有4.5 mmol·L-1 Na2 CO3和0.8 mmol·L-1 NaHCO3的溶液，流速为1.2 mL·min-1，抑制电导检测，电导池温度：35℃，柱温：35℃，进样量：25μL。

结果三氟乙酸和样品中其他成分能达到很好的分离；在0.2613~8.7113 μg·mL-1范围内具有很好的线性关系（ r=0.9999），检出限为0.0862μg·mL-1，定量限为0.2613μg·mL-1。

结论该方法专属性强，灵敏度高，可作为盐酸托烷司琼中三氟乙酸的检测有效方法。

【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2014(033)011【总页数】3页(P635-636,639)【关键词】盐酸托烷司琼;离子色谱法;三氟乙酸【作者】周传静;宋玉平;李玉双;魏长峰【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】R927.11盐酸托烷司琼化学名称为3－吲哚甲酸（8－甲基－8－氮杂双环［3.2.1］－3α－辛基）酯盐酸盐［1］，是一种抗肿瘤辅助药，能有效预防和治疗因癌症化疗引起的恶心和呕吐。

在合成过程中，三氟乙酸常作为一种催化剂被使用［2］，而三氟乙酸作为一种酸性有机溶剂，属于四类溶剂，临床使用存在毒性。

因此需要对药品中的三氟乙酸进行控制。

本文采用离子色谱法［3］，使用高容量的AS11－HC色谱柱，以碳酸钠和碳酸氢钠缓冲盐溶液作为淋洗液，对盐酸托烷司琼中的三氟乙酸进行检测。

与文献报道的高效液相色谱法［4］、气质方法［5，6］以及使用氢氧化钾等淋洗液的离子色谱法［7，8］相比，该方法操作简单、灵敏度高。

离子色谱常用检测器离子色谱常用检测器离子色谱常用的检测方法可以归纳为两类，即电化学法和光学法。

电化学法包括电导和安培检测器，光学法重要是紫外—可见光汲取检测器和荧光检测器。

离子色谱中*常用的电化学检测器有三种，即电导、安培和积分安培（包括脉冲安培）。

电导检测器是IC的通用型检测器，重要用于测定无机阴阳离子（pKa＜7，pKb＜7＝和部分极性有机物如一些羧酸等；直流安培检测器可用于测量那些在外加电压下能够在工作电极上产生氧化或还原反应的物质，如酚类化合物、I－、SCN－等；积分安培和脉冲安培检测器则重要用于测定糖类有机化合物。

紫外—可见光汲取检测器和荧光检测器在离子色谱分析中广泛应用于过渡金属、稀土元素和环境中有机物染物的检测。

离子色谱检测器的选择，重要的依据是被测定离子的性质、淋洗液的种类等因素。

同一物质有时可以用多种检测器进行检测，但灵敏度不同。

例如，NO2－、NO3—、Br－等离子在紫外区域测量时可以得到较用电导检测高的灵敏度；I－用安培法测定其灵敏度高于电导法。

1电导检测器1.1电导检测器的基本原理将电解液置于施加了电场的电极之间时，溶液将导电，此时溶液中的阴离子移向阳极，阳离子移向阴极。

并遵奉并服从式5—7关系：（5—7）式中k——为电导率，是电阻的倒数（k=1/R）；A——为电极截面积；L——为两电极间的距离；ci——为离子浓度，mol/L；λi——为离子的极限摩尔电导。

公式（5—7）也被称作Kohlraush定律。

在电导测量中，对一给定电导池电极截面积A和两电极间的距离L是固定的，L/A称为电导池常数K，则电导率k等于：（5—8）当电导池常数为1时，测量出的电导率值称为比电导率，对水溶液常用的电导率值单位是μS/cm。

依据Kohlraush定律，离子的摩尔电导与浓度成正比关系。

在一个充足稀的溶液中，离子的摩尔电导达到*大值，此*大值称为离子的极限摩尔电导（λi）。

表5—1列出常见离子的极限摩尔电导值。

实验离子色谱法测定水中的三氟乙酸1 目的（1）掌握离子色谱法测定的基本原理。

（2）学会离子色谱法测定水样品中常见阴离子浓度的方法。

2 原理本法利用离子交换的原理，对水中的三氟乙酸进行定性和定量分析。

所用淋洗液为氢氧化钾水溶液，水样品注入流动相后，样品进入离子交换树脂，基于待测阴离子对低容量强碱性离子交换树脂（分离柱）的相对亲和力不同而彼此分开。

被分离的阴离子，由串联在分离柱后的抑制器除去淋洗液中的强电介质以扣除其背景电导，再用电导检测器连续测定出流出液的电导值，便得到各种离子的色谱峰，根据保留时间定性，峰高或峰面积定量。

从而实现了分离、定性、定量分析一次完成。

3 仪器与试剂ICS 900离子色谱，0.22μm水相滤头。

三氟乙酸标准试剂。

4 色谱条件色谱柱：AS19阴离子交换色谱柱；淋洗液：KOH溶液；流速：1mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；外标法定量。

5 标准溶液三氟乙酸标准储备液（1g/L）：准确称取三氟乙酸1.00g溶于1L超纯水中，使之全部溶解，震荡摇匀。

标准溶液的配制：取三氟乙酸的标准储备液0.5、5.0、10.0、15.0、20.0mL分别稀释至100mL，配制为浓度5、50、100、150、200mg/L的标准溶液。

将浓度分别为5、50、100、150、200 mg/L的三氟乙酸标准液分别进行离子色谱分析，根据所得峰面积绘制标准曲线。

6 水样分析将水样进行预处理过滤后，进行色谱分析，根据所得峰面积以及标准曲线，计算得到水样中目标分析物的浓度。

7 数据处理标准曲线数据见表2。

表2 标准曲线数据浓度（mg/L）550100150200峰面积0.154 1.661 3.337 5.046 6.736根据水样测定的峰面积，计算出水中三氟乙酸的含量。

8 思考题（1）用离子色谱法测定水样品中的阴离子时，水样品预处理过程如何进行？（2）抑制器的作用是什么？。

三氟乙酸色谱级
三氟乙酸（TFA）是一种重要的有机化合物，在医药、农药、燃料、氨基酸保护、有机合成等领域得到广泛应用。

在色谱领域，三氟乙酸常常用作离子对试剂，用于反相色谱分离多肽和蛋白质。

三氟乙酸色谱级是指在色谱分析过程中，采用高纯度的三氟乙酸作为试剂，进行样品的分离和检测。

三氟乙酸色谱级具有以下特点：
1. 较高的酸性强，极性大，有利于在反相色谱柱中实现良好的峰形和分离效果。

2. 挥发性好，易于从制备样品中除去，降低了对环境和实验人员的危害。

3. 紫外吸收峰低于200nm，对低波长处的多肽检测干扰较小。

4. 线性关系良好，灵敏度高，重复性好，适用于多肽药物中三氟乙酸的质量控制要求。

在三氟乙酸色谱级应用中，常见的色谱柱类型有：
1. Discovery BIO C18色谱柱：可以在不加三氟乙酸的情况下，实现多肽的良好分离和峰形。

2. Dionex IonPacTM AS23阴离子柱：用于同时测定多肽中的三氟乙酸与乙酸，具有较高的准确性和灵敏度。

3. 毛细管电泳法：作为一种高效的分离技术，可在三氟乙酸存在下实现多肽的分离和检测。

总之，三氟乙酸色谱级是在色谱分析过程中，采用高纯度的三氟乙酸作为试剂，实现多肽和蛋白质分离的一种方法。

通过选择合适的色谱柱和优化实验条件，可以实现对三氟乙酸的高效分离和检测。

合成多肽药物中三氟乙酸检测方法研发表时间：2018-11-23T11:56:21.727Z 来源：《药物与人》2018年8月作者：张莲莲杜开峰[导读] 三氟乙酸（TFA）是多肽药物的一项重要控制项目，目前报道较多的检测方法是离子色谱法（IC）与高效液相色谱法（HPLC）。

摘要：三氟乙酸（TFA）是多肽药物的一项重要控制项目，目前报道较多的检测方法是离子色谱法（IC）与高效液相色谱法（HPLC）。

本文分别对 IC 及 HPLC 法进行研究：结果表明 IC 法 TFA 定量限为 2.4ng，推算检出限为 0.8ng，且在 0.12088μg/mL～6.044μg/mL 范围内呈良好的线性关系（r = 0.9999）；HPLC 法定量限为 6ng，检出限为 1.5ng，且在 0.3023μg/mL～15.115μg/mL 范围内呈良好的线性关系（r = 0.9998），加标回收率为 99.3%～101.7%，精密度（n=6）为 0.192%～0.200%，RSD5=1.4%。

结论：IC 法与 HPLC 法相比，在灵敏度，线性及重复性等方面差异不大，均能满足准确检测相关多肽样品中 TFA 含量要求，但 HPLC 法适用范围更广，且能同时检测多肽药物中醋酸（HAC）及三氟醋酸（TFA）含量，达到简单易行、结果准确、灵敏度高、降低成本、提高效率的研究目的。

关键词：离子色谱法，高效液相色谱法，多肽，三氟乙酸，含量检测中图分类号：文献标识码：A Abstract：Trifluoroacetic acid (TFA) is an important control item of polypeptide drugs. Ion chromatography (IC) and high performance liquid chromatography (HPLC) are commonly used in the detection of TFA. In this paper, IC and HPLC methods are studied respectively.The results showed that the quantitative limit of TFA by IC method was 2.4 ng, the detection limit was 0.8 ng, and the linear relationship was good in the range of 0.12088 ug/mL to 6.044 ug/mL (r=0.9999);the quantitative limit of HPLC was 6 ng, the detection limit was 1.5 ng, and the linear relationship was good in the range of 0.3023 ug/mL to 15.115 ug/mL (r = 0.9998). The recovery was 99.3% ~ 101.7%, the precision (n = 6) was 0.192% ~ 0.200%, RSD5 = 1.4%.CONCLUSION: Compared with HPLC, IC method has little difference in sensitivity, linearity and repeatability, and can meet the requirement of accurate determination of TFA content in related polypeptide samples. However, HPLC method has a wider application range and can simultaneously detect the contents of HAC and TFA in polypeptide drugs.The HPLC method is simple, accurate, sensitive, low cost and efficient. Key words：Ion chromatography ;HPLC; Peptide ;Trifluoroacetic acid; Content determination 1 前言三氟乙酸（TFA）普遍用于合成多肽的工艺中作为切割剂及脱保护剂，临床使用存在毒性。

离子色谱法电导检测多肽药物中的三氟乙酸张晨光a，吴方睿b，赵春华ca中国疾病预防控制中心营养与食品安全所，北京，100021b浙江大学药学院，杭州，310058cCTI华测检测(青岛)技术有限公司，青岛，266100摘要：本文建立了测定多肽药物中三氟乙酸的离子色谱分析方法。

运用该方法，待测离子在较宽的线性范围内线性关系良好(R2=0.9993)，检测限为30 μg/L，加标回收率在95.7%~98.3%之间。

方法简便易行，灵敏度高，结果准确。

关键词：离子色谱，电导检测，多肽药物，三氟乙酸三氟乙酸主要用于新型农药、医药和染料等的生产，在材料、溶剂等领域也有较大的应用开发潜力。

三氟乙酸主要用于合成多种含三氟甲基和杂环的除草剂，目前可以合成多种带有吡啶基、喹啉基的新型除草剂；作为极强的质子酸，它广泛用于芳香族化合物烷基化、酰基化、烯烃聚合等反应的催化剂；作为溶剂，三氟乙酸是氟化、硝化及卤代反应的优良溶剂，特别是其衍生物三氟乙酰基对羟基和氨基的优良保护作用，在氨基酸和多肽化合物合成方面有着非常重要的应用,用于多肽合成中除去氨基酸的叔丁氧羰基（t-boc）保护基【1】。

1 材料与方法1.1 仪器与试剂IC6000 离子色谱仪（合肥皖仪科技有限公司）HW2000色谱工作站（上海千谱软件有限公司）；WY-1自再生抑制器（合肥皖仪科技有限公司）；超纯水机（合肥皖仪科技有限公司）。

电导检测器（合肥皖仪科技有限公司）；WY-Anion 2型阴离子色谱柱（250 mm×4.6 mm i.d.，合肥皖仪科技有限公司）；RP 柱（Agela Technologies；）0.22 μm有机滤膜（Agela Technologies）。

/Product.asp?action=search&dq=1860&proClass=0&textitle=超纯水机碳酸钠（基准试剂，国药集团）；乙腈（色谱级，美国天地）；试验用二次去离子水（18.2 MΩ）为超纯水机制备。

离子色谱法测定硫酸头孢噻利中三氟乙酸残留陈芳;李润岩;吴春敏【摘要】建立了硫酸头孢噻利中三氟乙酸残留的离子色谱检验方法。

实验优化了前处理条件和离子色谱分离条件，结果表明：三氟乙酸在0．1～10．0μg／m L 范围内具有良好的线性关系（r＝0．9997），精密度（n＝6）为1．04％～1．51％，检出限为0．03μg／m L ，加标回收率为97．9％～98．9％。

该方法灵敏、快速，高通量，可以为监测该药物中三氟乙酸残留提供科学依据。

%A method was conducted for the detection of trifluoroacetic acid residues in cefoselis sulfate by ion chromatography .The operating conditions of pretreatment and the separation of ion chromatography were optimized .The line arrange of trifluoroacetic acid was 0 .1 ~10 .0μg/mL (r=0 .9997) ,T he precision for determining the trifluoroacetic acid pesticides by this method (n=6) varied from 1 .04% to 1 .51% and the limits of detection was 0 .03μg/mL .The spike recoveries ranged 97 .9%~98 .9% .Proved by this testing ,this method w as sensitive , fast and suitable for the analysis of trifluoroacetic acid residue in cefoselis sulfate .【期刊名称】《河北省科学院学报》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】4页(P66-69)【关键词】离子色谱;测定;硫酸头孢噻利;三氟乙酸【作者】陈芳;李润岩;吴春敏【作者单位】石药集团欧意药业有限责任公司，河北石家庄 050000;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室，河北石家庄 050091;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室，河北石家庄 050091【正文语种】中文【中图分类】O657硫酸头孢噻利化学名称为7β－［（z）－2－（2－氨基－4－噻唑基）－2－（2－甲氧亚氨基乙酰氨基）］－3－［3－氨基－2－（2－羟乙基）－1－吡唑鎓基］甲基－3－头孢烯－4－羧酸硫酸盐［1］，属于第四代注射用头孢菌素，是一种高效广谱抗菌药物。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810391410.1(22)申请日 2018.04.26(71)申请人 南京明捷生物医药检测有限公司地址 210000 江苏省南京市江北新区新锦湖路3-1号中丹生态生命科学产业园一期B栋601室(72)发明人 付娜　吕兴祥　顾凯　朱子丰　(74)专利代理机构 南京常青藤知识产权代理有限公司 32286代理人 史慧敏(51)Int.Cl.G01N 24/08(2006.01)(54)发明名称一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法(57)摘要本发明属于三氟乙酸残留量检测技术领域，具体涉及一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法，采用定量核磁检测方法，使用环丙沙星作为氟谱内标物，本发明提供一种适用于检测多肽类药物中三氟乙酸含量的测定方法，具有样品消耗较低，节约测定成本，同时具有较高的检测精度的优点。

权利要求书1页 说明书8页 附图3页CN 108593696 A 2018.09.28C N 108593696A1.一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法，其特征在于：采用定量核磁检测方法，使用环丙沙星作为氟谱内标物。

2.一种利用定量核磁测定多肽中三氟乙酸残留的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：仪器与溶剂的准备：①仪器：核磁共振仪和topspin3.2在线/离线处理软件；②溶剂：三氟乙酸钠标准品、内标物环丙沙星、氘代二甲基亚砜和多肽样品；S2：溶液的配置：①三氟乙酸钠母液配制：精密称取三氟乙酸钠25.00mg，置10ml容量瓶中，用DMSO -d6定容，摇匀至完全溶解，再精密移取1.0ml置10ml量瓶中，用氘代二甲基亚砜定容，摇匀，即得；②内标环丙沙星母液配制：精密称取环丙沙星25.00mg，置10ml量瓶中，用氘代二甲基亚砜定容，摇匀，即得；③供试品溶液配制：精密称样品多肽5.00mg，再精密移取内标环丙沙星母液0.10ml置5mm样品管中，精密加入0.50ml氘代二甲基亚砜，摇匀待测；注：①-③中的称重的误差为±0.01mg；S3：设定所述核磁共振仪的测定基础条件：采用QNP探头，设定采样谱宽、采样中心频率、采样点数为、采样次数、延迟时间为和脉冲角度；S4：使用核磁共振仪得到图谱，用手动方式依次进行相位校正、基线校正和化学位移校正，并根据所选的定量峰及积分范围进行积分。

固相多肽合成沉淀剂
固相多肽合成是一种重要的生物化学技术，它用于合成多肽化
合物。

在合成过程中，有时候需要使用沉淀剂来帮助纯化和分离产物。

常用的沉淀剂包括三氟乙酸（TFA）、氢氟酸（HF）和三氯乙酸（TCA）等。

首先，三氟乙酸（TFA）是一种常用的沉淀剂，它在多肽合成中
常用于去保护基团和裂解树脂。

TFA可以将多肽从树脂上彻底解离，并且易挥发，有助于产物的纯化。

其次，氢氟酸（HF）也是一种常用的沉淀剂，它在固相多肽合
成中用于裂解三氯甲酸酯（trityl）保护基团。

HF对一些氨基酸残
基和特定化学键有选择性的裂解作用，因此在特定情况下可以使用
HF来裂解多肽。

另外，三氯乙酸（TCA）也是常用的沉淀剂之一，它在多肽合成
中用于沉淀多肽产物。

TCA可以与多肽中的游离氨基反应形成沉淀，从而帮助分离和纯化多肽产物。

除了上述常用的沉淀剂外，还有一些其他的沉淀剂，如乙酸乙
酯（EtOAc）和丙酮等，它们在特定情况下也可以用于固相多肽合成中的沉淀和纯化步骤。

总的来说，选择合适的沉淀剂取决于多肽的性质、合成策略和后续纯化的要求。

在固相多肽合成中，合理选择和使用沉淀剂对于提高产物的纯度和收率具有重要意义。

三氟乙酸在HPLC中的应用液质联用反相色谱柱-------- 降低三氟乙酸用量/ 改善质谱分析在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸(TFA) 作为离子对试剂是常见的手段。

流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。

三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性基团相结合以减少极性保留，并把多肽带回到疏水的反相表面。

以同样的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残留的极性表面。

三氟乙酸的行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，同时与多肽及柱床作用，这已在Vydac Advances for Spring, 1997 中得到了报导。

三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。

另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm ，对多肽在低波长处的检测干扰很小。

改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的选择性。

这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多肽的指纹图谱）的信息量是非常有益的。

三氟乙酸添加在流动相中的浓度一般为0.1% ，在这个浓度下，大部分的反相色谱柱都可以产生良好的峰形，当三氟乙酸浓度大大低于这个水平时，峰的展宽和拖尾就变得十分明显。

LC/MS 液质联用在过去的十年中，反相色谱与电喷雾质谱联用已成为多肽和蛋白质的分子量测定和结构分析的重要工具。

然而，含有三氟乙酸的流动相对离子的产生具有抑制作用，一定程度上降低了液质联用技术的灵敏性和分析可靠性。

这种抑制作用可以通过柱后加成技术部分地克服，但将使色谱系统极大地复杂化。

将流动相中三氟乙酸的浓度降低10 倍可以消除这种抑制作用，但同时也会造成色谱分析质量的降低。

Vydac 公司开发了三种液质联用专用反相色谱柱，在使用较低浓度的三氟乙酸时，仍可以得到对称性好、柱效高的多肽和蛋白质色谱峰。

这些柱子基于Vydac 公司品质卓越的高纯硅胶（300A）及C18 和C4 键合相，并通过专利的硅胶处理技术大大减轻了对TFA 的依赖。

实验离子色谱法测定水中的三氟乙酸1 目的（1）掌握离子色谱法测定的基本原理。

（2）学会离子色谱法测定水样品中常见阴离子浓度的方法。

2 原理本法利用离子交换的原理，对水中的三氟乙酸进行定性和定量分析。

所用淋洗液为氢氧化钾水溶液，水样品注入流动相后，样品进入离子交换树脂，基于待测阴离子对低容量强碱性离子交换树脂（分离柱）的相对亲和力不同而彼此分开。

被分离的阴离子，由串联在分离柱后的抑制器除去淋洗液中的强电介质以扣除其背景电导，再用电导检测器连续测定出流出液的电导值，便得到各种离子的色谱峰，根据保留时间定性，峰高或峰面积定量。

从而实现了分离、定性、定量分析一次完成。

3 仪器与试剂ICS 900离子色谱，0.22μm水相滤头。

三氟乙酸标准试剂。

4 色谱条件色谱柱：AS19阴离子交换色谱柱；淋洗液：KOH溶液；流速：1mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；外标法定量。

5 标准溶液三氟乙酸标准储备液（1g/L）：准确称取三氟乙酸1.00g溶于1L超纯水中，使之全部溶解，震荡摇匀。

标准溶液的配制：取三氟乙酸的标准储备液0.5、5.0、10.0、15.0、20.0mL 分别稀释至100mL，配制为浓度5、50、100、150、200mg/L的标准溶液。

将浓度分别为5、50、100、150、200 mg/L的三氟乙酸标准液分别进行离子色谱分析，根据所得峰面积绘制标准曲线。

6 水样分析将水样进行预处理过滤后，进行色谱分析，根据所得峰面积以及标准曲线，计算得到水样中目标分析物的浓度。

7 数据处理标准曲线数据见表2。

表2 标准曲线数据浓度（mg/L） 5 50 100 150 200峰面积0.154 1.661 3.337 5.046 6.736 根据水样测定的峰面积，计算出水中三氟乙酸的含量。

8 思考题（1）用离子色谱法测定水样品中的阴离子时，水样品预处理过程如何进行？（2）抑制器的作用是什么？。

降低三氟乙酸用量，改善质谱分析在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸 (TFA) 作为离子对试剂是常见的手段。

流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。

三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性基团相结合以减少极性保留，并把多肽带回到疏水的反相表面。

以同样的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残留的极性表面。

三氟乙酸的行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，同时与多肽及柱床作用，这已在 Vydac Advances for Spring, 1997 中得到了报导。

三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。

另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm ，对多肽在低波长处的检测干扰很小。

改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的选择性。

这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多肽的指纹图谱）的信息量是非常有益的。

三氟乙酸添加在流动相中的浓度一般为 0.1% ，在这个浓度下，大部分的反相色谱柱都可以产生良好的峰形，当三氟乙酸浓度大大低于这个水平时，峰的展宽和拖尾就变得十分明显。

LC/MS 液质联用在过去的十年中，反相色谱与电喷雾质谱联用已成为多肽和蛋白质的分子量测定和结构分析的重要工具。

然而，含有三氟乙酸的流动相对离子的产生具有抑制作用，一定程度上降低了液质联用技术的灵敏性和分析可靠性。

这种抑制作用可以通过柱后加成技术部分地克服，但将使色谱系统极大地复杂化。

将流动相中三氟乙酸的浓度降低 10 倍可以消除这种抑制作用，但同时也会造成色谱分析质量的降低。

Vydac 公司开发了三种液质联用专用反相色谱柱，在使用较低浓度的三氟乙酸时，仍可以得到对称性好、柱效高的多肽和蛋白质色谱峰。

这些柱子基于 Vydac 公司品质卓越的高纯硅胶（ 300A）及 C18 和 C4 键合相，并通过专利的硅胶处理技术大大减轻了对 TFA 的依赖。

三氟乙酸（TFA）是一种离子配对剂，有助于抑制电离。

在高效液相色谱中，峰拖尾是由于表面硅烷醇基团电离为-Si-O-提供阳离子交换位点而引起的常见失真，添加三氟乙酸可以限制硅胶表面上硅烷醇基团的电离。

三氟乙酸影响电离的原理是通过降低负离子的电荷密度使之稳定，从而抑制电离的发生。

具体来说，三氟乙酸分子中的氟原子具有较强的吸电子能力，能够降低负离子的电荷密度，使其更加稳定，从而抑制电离的发生。

需要注意的是，三氟乙酸是一种具有一定危险性的化学物质，在使用和处理时需要特别小心。

如果你需要使用三氟乙酸或其他化学物质，建议在专业人士的指导下进行，并遵守相关的安全操作规程。

降低三氟乙酸用量，改善质谱分析在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸 (TFA) 作为离子对试剂是常见的手段。

流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。

三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性基团相结合以减少极性保留，并把多肽带回到疏水的反相表面。

以同样的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残留的极性表面。

三氟乙酸的行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，同时与多肽及柱床作用，这已在 Vydac Advances for Spring, 1997 中得到了报导。

三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。

另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm ，对多肽在低波长处的检测干扰很小。

改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的选择性。

这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多肽的指纹图谱）的信息量是非常有益的。

三氟乙酸添加在流动相中的浓度一般为 0.1% ，在这个浓度下，大部分的反相色谱柱都可以产生良好的峰形，当三氟乙酸浓度大大低于这个水平时，峰的展宽和拖尾就变得十分明显。

LC/MS 液质联用在过去的十年中，反相色谱与电喷雾质谱联用已成为多肽和蛋白质的分子量测定和结构分析的重要工具。

然而，含有三氟乙酸的流动相对离子的产生具有抑制作用，一定程度上降低了液质联用技术的灵敏性和分析可靠性。

这种抑制作用可以通过柱后加成技术部分地克服，但将使色谱系统极大地复杂化。

将流动相中三氟乙酸的浓度降低 10 倍可以消除这种抑制作用，但同时也会造成色谱分析质量的降低。

Vydac 公司开发了三种液质联用专用反相色谱柱，在使用较低浓度的三氟乙酸时，仍可以得到对称性好、柱效高的多肽和蛋白质色谱峰。

这些柱子基于 Vydac 公司品质卓越的高纯硅胶（ 300A）及 C18 和 C4 键合相，并通过专利的硅胶处理技术大大减轻了对 TFA 的依赖。

离子色谱法同时测定离子液体中的三氟乙酸根、氟硼酸根及卤素离子李偲文;张小东;于泓【摘要】采用离子色谱-直接电导检测法同时测定了离子液体中的三氟乙酸根(CF3COO-)、氟硼酸根(BF4-)及卤素离子(F-、Cl-、Br-).实验采用Shim-pack IC-A3阴离子交换色谱柱,分别选用邻苯二甲酸氢钾、邻苯二甲酸+三(羟甲基)氨基甲烷、对羟基苯甲酸+三(羟甲基)氨基甲烷+硼酸为淋洗液,考察了淋洗液种类和浓度、乙腈浓度、色谱柱温度对分离测定三氟乙酸根、氟硼酸根及卤素离子的影响.确定的最佳色谱条件为:以1.2 mmol/L 邻苯二甲酸氢钾为淋洗液,柱温45 ℃,流速1.0 mL/min.在此条件下,可同时分离上述5种阴离子,且色谱峰形对称.所测阴离子的检出限(以信噪比为3计)为0.01～0.50 mg/L,保留时间和峰面积的相对标准偏差(n=5)分别不大于0.2%和1.2% .将方法应用于测定离子液体中的三氟乙酸根、氟硼酸根及卤素离子,加标回收率为98.0% ～103.2% .该方法简单、准确、可靠,具有较好的实用性.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2010(028)007【总页数】4页(P708-711)【关键词】离子色谱;三氟乙酸根;氟硼酸根;卤素离子;离子液体【作者】李偲文;张小东;于泓【作者单位】哈尔滨师范大学化学化工学院,黑龙江,哈尔滨,150025;黑龙江省齐齐哈尔矿产勘查开发总院,黑龙江,齐齐哈尔,161006;哈尔滨师范大学化学化工学院,黑龙江,哈尔滨,150025【正文语种】中文【中图分类】O658Abstract:A method was developed for the simultaneous determination of trifluoroacetate,tetrafluoroborate and halide ions(F-,C l-,B r-)by ion Chromatography with direct conductivity detection.The Chromatographic separation was perform ed on a Shim-pack IC-A3anion-exchange column with potassium biphthalate,phthalic acid+tris(hydroxymethyl)-aminom ethane,and p-hydroxybenzoic acid+tris(hydroxy methyl)-aminomethane+boric acid as eluent,separately.The effects of the nature of eluent,eluent concentration,acetonitrile concentration and column temperature on the separation and the retention factors of the anions were investigated.The optimized Chromatographic conditions for the determination of the anions were as follow s:1.2mmol/L potassium biphthalate as eluent,a column temperature of45℃and a flow rateof1.0mL/m in.Under the optimal conditions,the anions were baseline separated.Moreover,the symmetries of peaks were better.The limits of detection(S/N=3)for the anions were in the range of0.01-0.50m g/L.The relative standard deviations(RSDs)of the Chromatographic retention time and peak area for the anions were not morethan0.2%and1.2%(n=5),respectively.The method has been applied to thedeterm ination of trifluoroacetate,tetrafluoroborate and halide ions in ionic liquids.The spiked recoveries of the anions were from98.0%to 103.2%.The method is simple,accurate and reliable,and has better practicability.Key words:ion Chromatography;trifluoroacetate;tetrafluoroborate;halide ions;ionic liquid离子液体作为一种新型的绿色溶剂,在萃取、有机合成、催化、分析化学等领域得到了广泛的应用[1-5]。

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2013.12.04C N 103421081 A (21)申请号 201210162683.1(22)申请日 2012.05.24C07K 1/20(2006.01)(71)申请人昆明积大制药股份有限公司地址650106 云南省昆明市国家高新技术产业开发区科新路389号(72)发明人曹天海 张荧 何增林(54)发明名称一种去除多肽中三氟醋酸的方法(57)摘要本发明提供一种去除多肽中三氟醋酸的方法，其步骤为：将含有三氟醋酸的多肽通过反相色谱柱，流动相为醋酸钠水溶液和乙腈，冲洗色谱柱至三氟醋酸出峰即可。

本方法所采用的设备简单，生产工艺简洁，能有效去除多肽中的三氟醋酸。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书4页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书4页(10)申请公布号CN 103421081 A*CN103421081A*1/1页1.一种采用反相高效液相法去除多肽中三氟醋酸的方法，其特征在于流动相为醋酸钠溶液和乙腈。

2.如权利要求1所述的采用反相高效液相法去除多肽中三氟醋酸的方法，其特征在于，所述流动相中醋酸钠溶液的浓度为0.1mol/L 至1mol/L 。

3.如权利要求1或2所述的采用反相高效液相法去除多肽中三氟醋酸的方法，其特征在于，所述流动相中乙腈的体积比为1%~50%。

4.如权利要求1或2所述的采用反相高效液相法去除多肽中三氟醋酸的方法，其特征在于，所述流动相中醋酸钠溶液的体积比为50%~99%。

5.如权利要求1或2所述的反相高效液相法去除多肽中三氟醋酸的方法，其特征在于，所述色谱柱的填料类型为C4（丁基键合硅胶）、C8（庚基键合硅胶）或C18（十八烷基键合硅胶）反相色谱柱。

权 利 要 求 书CN 103421081 A一种去除多肽中三氟醋酸的方法技术领域[0001] 本发明涉及一种有机化合物的高效液相色谱分离方法，尤其是涉及一种多肽化合物中有机酸的反相高效液相色谱去除方法。

电导抑制-离子色谱法测定有机酸化剂中11种有机酸含量
谢秀兰;徐菲
【期刊名称】《动物营养学报》
【年(卷),期】2024(36)3
【摘要】本试验旨在建立一种同时检测有机酸化剂中11种有机酸含量的分析方法。

样品中有机酸经提取后,以0.5 mmol/L硫酸水溶液∶丙酮∶乙腈=84∶6∶10为淋洗液等度洗脱,经Organic Acids 250/7.8分析柱分离,柱温30℃,流速0.5 mL/min,进样体积20μL,采用电导抑制检测器进行外标法定量。

结果显示:11种有机酸含量
在一定范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9994),检出限介于0.01~0.11 mg/L,11种有机酸3个不同添加水平加标回收率处于92.9%~112.2%,相对标准偏差均小于
2.4%。

本方法简便高效,精密度、准确度良好,线性范围宽,能同时分离有机酸化剂
中11种有机酸。

【总页数】10页(P2031-2040)
【作者】谢秀兰;徐菲
【作者单位】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S816.17
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