17种氨基酸液相色谱法

脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。

脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。

批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。

2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。

）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。

2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。

取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。

氨基酸的衍生与高效液相色谱分离的研究江芸，林育汉（北京科技大学应用科学学院生物科学与技术系，北京，100083）摘要：蛋白质是生命的基础，氨基酸是蛋白质的主要组成部分，因此氨基酸的种类和含量是测定蛋白的一项重要指标。

氨基酸的含量一般用氨基酸分析仪测定，氨基酸分析仪的工作原理是基于离子交换层析法与氨基酸分析仪的测定方法相比高效液相色谱法因其具有分离度高，选择性好等优点自20世纪70年代以来开始应用于氨基酸的分析测定中随着研究的不断深人，柱前衍生与C18柱分离法相结合已成为氨基酸分离和分析的有力工具。

以ODS-c_(18)柱(100mm×4.6mm i.d.,5μm)为色谱柱,2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,进行氨基酸的定性测定。

流动相A:0.05mol/L乙酸钠缓冲溶液(pH=6.5,含10mL/LN,N-二甲基甲酰胺),流动相B:乙腈-水(体积比为1:1)。

所测氨基酸组分的浓度在0.2～3.0mg/L范围内与峰面积之间具有良好的线性关系,检出限为0.120～1.225mg/L,该方法准确、重现性好，可用于氨基酸的定性和定量测定。

关键词：氨基酸衍生物；高效液相色谱；2,4-二硝基氟苯高效液相色谱法是在经典液相色谱法基础上发展起来的。

高效液相色谱法是在高压条件下溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换的过程,它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同引起排阻作用的差别使不同溶质得以分离[1]。

经过近30年的发展，现在高效液相色谱法在分析速度、分离效能、检测灵敏度和操作自动化方面，都达到了与气相色谱相媲美的程度，并保持了经典液相色谱法对样品适用范围广、可供选择的流动相种类多和便于制备色谱的优点。

其优点概括如下：采用高效微粒固定相使色谱分离效能大大提高；采用新型高压输液泵使分离时间大大缩短；采用高灵敏度的检测器使仪器的检测灵敏度大大提高；由于HPLC具有高柱效、流动相可以控制和改善分离过程的特点，故其选择性高。

高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的酪氨酸和色氨酸含量复方氨基酸注射液是一种透明、无色或微黄色的澄明液体，适用于不能口服或经肠道补给营养，以及营养不能满足需要的患者。

复方氨基酸注射液具有促进人体蛋白质代谢正常，纠正负氮平衡，补充蛋白质，加快伤口愈合的作用。

氨基酸（Amino acid）是构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使他的分子具有生化活性[1-4]。

蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酵素和酶。

酪氨酸是一种芳香族氨基酸，亦是20种用来合成蛋白质的蛋白氨基酸之一[5-11]。

色氨酸具有促进胃液及胰液产生的作用。

目前主要生产复方氨基酸注射液的厂家有上海长征富民金山制药XX公司、广东利泰制药XX公司、八峰药化宜昌有限责任公司、石家庄四药XX公司、西南药业XX 公司、湖南科伦制药XX公司、安徽丰原药业XX公司、广东科伦药业XX公司、广东利泰制药XX公司、广州百特侨光医疗用品XX公司等。

本文采用高校液相测定了复方氨基酸注射液中酪氨酸和色氨酸的含量。

1 仪器与试药瑞士梅特勒-托利多MS精密天平（梅特勒-托利多中国公司）；SCQ-1020超声波清洗器（上海声彦超声仪器XX公司）；UltiMate3000 高效液相色谱仪（上海仪先仪器XX公司）；E2000制冷色谱柱温箱（上海子期实验设备XX公司）；UV2800紫外可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器XX公司）；PHS-3C酸度检测仪（深圳市卡迪亚科技XX公司）；MP-TA-10L 超纯水器（成都优越科技XX公司）。

乙腈（济南汇丰达化工XX公司）、三乙胺（吴江市吉祥精细化工XX公司）、冰醋酸（济南汇丰达化工XX公司）、甲醇（吴江市吉祥精细化工XX公司）、醋酸钠（济南汇丰达化工XX公司）、磷酸二氢钠（吴江市吉祥精细化工XX 公司）、四氢呋喃（济南汇丰达化工XX公司）、磷酸（淄博丰仓化工XX公司）。

2 含量测定2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果[11]，确定色谱条件如下。

18种天然氨基酸分析迪马科技摘要氨基酸组成测定是蛋白质组学、食品质量检测以及药品质量检测中的重要分析项目。

本文分别以异硫氰酸苯酯、2,4-二硝基氟苯作为衍生剂对蛋白质水解液和游离氨基酸注射液进行衍生，使用Diamonsil AAA柱250×4.6 mm，5 μm，梯度洗脱进行分离，能够满足19种天然氨基酸的分析，各组分分离度较高、定量结果准确而稳定。

AbstractThe amino acid determination is an important analysis project in proteomics, food and drug quality testing.The method determination of 19 nature amino acid in protein hydrolyzed solution and free amino acid injection, the derived reagent is phenyl isothiocyanate (PITC) and 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene. The column is Diamonsil AAA (250 × 4.6 mm, 5 μm), gradient elution, the results are accurate and stable.引言从化学角度讲，同时含有一个或多个氨基和羧基的脂肪酸均可称为氨基酸。

自然界存在300多种氨基酸，但构成天然蛋白质的氨基酸只有20种，这20种氨基酸又称为天然氨基酸。

天然氨基酸分析是食品、饲料和药品分析的重要项目。

目前氨基酸分析常常采用这样两种方式：离子交换色谱分离-柱后衍生和柱前衍生-反相色谱法分离。

后者以操作灵活、费用低廉而被广泛应用。

在柱前衍生-反相色谱法分离中，异硫氰酸苯酯(PITC)和2,4-二硝基氟苯(DNFB)均可与一级胺、二级胺反应，是理想的柱前衍生剂。

氨基酸的分析方法
氨基酸的分析方法主要有以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸中的吸收光谱特性进行定量分析。

对于有色氨基酸，可以直接用此方法进行分析，如色氨酸、酪氨酸等。

对于无色氨基酸，需事先进行衍生化反应，如二羧基二氨基联苯胺(DTNB)法，测定半胱氨酸含量。

2. 氨基酸自动分析仪：常用的分析方法是自动氨基酸分析仪，其原理是利用离子交换色谱技术对氨基酸进行分离和检测。

该方法操作简便，自动化程度高，可同时分析多种氨基酸，用于生化实验和质量检测。

3. 氨基酸序列测定法：利用氨基酸测定仪测定氨基酸的相对分子质量，进而测定氨基酸的分子序列，通常用于蛋白质结构分析和生物活性研究。

4. 纸层析法：利用氨基酸的亲水性和疏水性差异进行分离，通常用于初步鉴定氨基酸的含量和组成。

该方法简便易行，但准确性较低，仅可作为定性或半定量分析方法。

5. 高效液相色谱法：利用高效液相色谱技术对氨基酸进行分离和检测。

该方法灵敏度高、重复性好、分辨率高，可用于生化分析和质量检测。

河 北 医 科 大 学 学 报JO U RN A L OF HEBEI M ED ICA L U NI VER SI T YV o 1.17　No .3　1996高效液相色谱柱前自动衍生法测定氨基酸含量许彦芳　许新民　王永利药理教研室(050017) 摘　要　本文利用高效液相色谱(HP L C )柱前邻苯二甲酝酿(OP A )自动衍生、自动进样程序测定脑组织中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、牛磺酸和r -氨基丁酸含量。

该法的最低检出限为10nmol /ml ,5种氨基酸峰面积测定值的变异系数平均为2.0±1.3%,线性相关系数平均为0.97±0.03。

关键词　HPL C;氨基酸;OP A ;自动衍生;自动进样HPLC -PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC DETERMINATION OFAMINO ACIDS BY AUTOMATIC PRECOLUMN DERIVATIZATIONXu Yan fang Xu Xinmin Wang YongliDep artment of Ph armacologyABSTRACT Glutamate,asparate,glycine,taurine and GABA in brain w ere seperated and determined by HPLC system of the autom atic processes of precolum n o -phthaldialdehydeder iv atization and injection .Average co efficient o f variatio n for peak areas of 5amino acids w as 2.0±1.3%w ith the detectio n lim it o f 50ng.Av erag e line co orelatio n coefficient w as 0.97±0.03.KEY WORDS HPLC ;o -phthaldialdehyde ;amino acids ;automatic derivatizatio n ;au-tom atic injection 生物样品中的微量氨基酸测定在医学领域中占重要地位。

1. 分光光度法氨基酸检测： 主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应，产生蓝紫色化合物，该化合物在某一波长处有最大吸收峰，根据吸收值大小得到氨基酸含量。

常用的衍生剂为茚三酮。

分光光度法具有操作方便、仪器要求简单、成本低、应用范围广以及适用于芳香族氨基酸检测等特点。

2. 毛细管电泳法氨基酸检测： 根据分离原理的不同，可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。

其中，毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸检测。

毛细管电泳法具有分离效率高、分析时间短、溶剂用量少、无须梯度洗脱以及适用于氨基酸的手性分离等特点，但该方法分析结果重现性较差。

3. 近红外光谱法氨基酸检测： 利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁，产生光谱的变化，结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。

近红外光谱法具有高效、无污染、无破坏性以及可同时检测多组分等特点。

4. 气相色谱法氨基酸检测：将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质，根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同，实现对氨基酸的定量分析。

GC法不仅能检测氨基酸含量，还可以发现新氨基酸，但缺点在于操作复杂、干扰因素多，专一性差。

5. 高效液相色谱法氨基酸检测： 是最常用的一种氨基酸检测方法。

由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应，因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质，衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。

1)柱前衍生：是样品在进入色谱柱之前，氨基酸经衍生化转变为适合反相高效液相色谱检测的物质，常用的衍生剂有丹酰氯、邻苯二甲醛、萘二甲醛等。

实验常用的色谱柱有C8柱、C18柱和CN柱，检测方法有HPLC-UV、HPLC-ELSD、HPLC-FLD、HPLC-MS等。

2)柱后衍生：是样品经离子交换柱分离，分离后的氨基酸再进行衍生化处理。

常用的柱后衍生化试剂有茚三酮和荧光胺，其中荧光胺的灵敏度比茚三酮高大约 3个数量级。

氨基酸测定方法一、引言氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对于生命体的生长和发育起着重要的作用。

因此，准确测定氨基酸的含量和组成对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。

本文将介绍一些常用的氨基酸测定方法，包括色谱法、光谱法和化学法等。

二、色谱法测定氨基酸2.1 气相色谱法气相色谱法是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。

该方法通过将氨基酸样品转化为易挥发的衍生物，然后使用气相色谱仪进行分析。

气相色谱法具有分离效果好、灵敏度高和操作简便等优点。

2.1.1 衍生化反应在气相色谱法中，常用的氨基酸衍生化反应包括酯化、酰化和取代反应等。

这些反应能够将氨基酸转化为易挥发的衍生物，便于后续的气相色谱分析。

2.1.2 气相色谱仪气相色谱仪是进行气相色谱分析的关键设备。

它由进样系统、色谱柱和检测器等部分组成。

进样系统用于将样品引入色谱柱，色谱柱用于分离氨基酸衍生物，检测器用于检测分离后的化合物。

2.2 液相色谱法液相色谱法也是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。

该方法通过将氨基酸样品溶解在溶剂中，然后使用液相色谱仪进行分析。

液相色谱法具有分离效果好、灵敏度高和选择性强等优点。

2.2.1 色谱柱选择在液相色谱法中，选择合适的色谱柱对于分离氨基酸非常重要。

常用的色谱柱包括离子交换柱、反相柱和手性柱等。

不同的色谱柱具有不同的分离机理和选择性，可以根据需要选择合适的色谱柱。

2.2.2 梯度洗脱条件在液相色谱法中，通过调整洗脱溶剂的组成和流速等参数，可以实现对氨基酸的有效分离。

梯度洗脱条件可以根据氨基酸的亲水性和极性等特性进行优化。

三、光谱法测定氨基酸3.1 紫外-可见光谱法紫外-可见光谱法是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。

该方法通过测量氨基酸在紫外-可见光波段的吸收特性，来推断其含量和组成。

紫外-可见光谱法具有操作简便、灵敏度高和选择性强等优点。

3.1.1 吸收峰特征不同氨基酸在紫外-可见光谱中具有不同的吸收峰特征。

通过测量氨基酸的吸收峰强度和位置，可以推断其含量和组成。

氨基酸液相检测方法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。

液相检测方法是一种常用的氨基酸分析方法，它具有灵敏度高、分辨率好、操作简便等优点。

本文将介绍氨基酸液相检测方法的原理、步骤和应用。

一、原理氨基酸液相检测方法是利用液相色谱技术实现的。

液相色谱是一种将混合物分离成各个组分的方法，其原理是根据各个组分在色谱柱中的保留时间来进行分离。

在氨基酸液相检测中，常采用离子交换色谱柱或手性色谱柱进行分离。

离子交换色谱柱是利用固定在柱子上的离子交换剂与氨基酸分子间的静电作用进行分离，根据氨基酸的电荷性质进行选择性吸附和洗脱。

而手性色谱柱则是利用固定在柱子上的手性选择性吸附剂与氨基酸分子的手性结构进行分离，根据氨基酸的手性性质进行选择性吸附和洗脱。

二、步骤氨基酸液相检测方法的步骤主要包括样品制备、色谱条件设定、色谱分离和检测等。

1. 样品制备：将待测样品进行适当处理，如酸水解或碱水解，以使氨基酸分子释放出来。

然后将样品进行过滤和稀释，以便进行后续的色谱分离和检测。

2. 色谱条件设定：选择合适的色谱柱和流动相，根据样品特性和分离要求进行条件设定。

对于离子交换色谱柱，可以选择不同的离子交换剂和缓冲剂，调节pH值和离子浓度等；对于手性色谱柱，可以选择不同的手性选择性吸附剂，调节流动相的组成和流速等。

3. 色谱分离：将样品注入色谱柱，利用色谱柱内固定相的选择性吸附作用，将各个组分分离开来。

根据各个氨基酸的特性，调节流动相的条件，使目标氨基酸在适当的保留时间内分离出来。

4. 检测：利用检测器对分离出的氨基酸进行检测。

常用的检测器有紫外检测器和荧光检测器。

紫外检测器可以根据氨基酸的吸收特性来进行检测，荧光检测器则可以根据氨基酸的荧光特性来进行检测。

三、应用氨基酸液相检测方法在生物医药、食品安全等领域有着广泛的应用。

在生物医药领域，氨基酸液相检测方法可以用于蛋白质结构和功能研究，如氨基酸序列分析、蛋白质修饰研究等。

脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。

脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。

批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。

2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。

）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。

2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。

取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。

食品中18种氨基酸检验方法食品中氨基酸是构成蛋白质的重要成分之一。

氨基酸的检验方法能够帮助我们了解食品中氨基酸的含量和种类，对于食品的营养价值评估和质量控制具有重要意义。

本文将介绍18种常见氨基酸的检验方法。

1. 色谱法：色谱法是检测氨基酸含量的常用方法之一。

通过将样品中的氨基酸分离出来，并利用色谱柱分离各个氨基酸，再利用紫外检测器检测各个氨基酸的含量。

2. 毛细管电泳法：毛细管电泳法是一种高效、快速的氨基酸分析方法。

通过将样品中的氨基酸在电场作用下在毛细管中迁移，再利用紫外检测器检测各个氨基酸的含量。

3. 高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种常用的氨基酸分析方法。

通过将样品中的氨基酸在液相中分离，并利用紫外检测器检测各个氨基酸的含量。

4. 离子交换色谱法：离子交换色谱法是一种常用的氨基酸分离和检测方法。

通过将样品中的氨基酸在离子交换柱上分离，并利用紫外检测器检测各个氨基酸的含量。

5. 高温液相色谱法：高温液相色谱法是一种适用于疏水性氨基酸检测的方法。

通过将样品中的氨基酸在高温条件下分离，并利用紫外检测器检测各个氨基酸的含量。

6. 酶法：酶法是一种常用的氨基酸分析方法。

通过将样品中的氨基酸与特定的酶反应，生成可测定的产物，并利用酶活性的变化来测定各个氨基酸的含量。

7. 比色法：比色法是一种简单、快速的氨基酸分析方法。

通过将样品中的氨基酸与特定的试剂反应，生成具有特定颜色的产物，并利用比色计测定各个氨基酸的含量。

8. 紫外分光光度法：紫外分光光度法是一种常用的氨基酸检测方法。

通过测量各个氨基酸在紫外光波长下的吸光度，来测定各个氨基酸的含量。

9. 荧光分析法：荧光分析法是一种敏感、高效的氨基酸检测方法。

通过测量各个氨基酸在激发光波长下的荧光强度，来测定各个氨基酸的含量。

10. 质谱法：质谱法是一种高灵敏度的氨基酸分析方法。

通过将样品中的氨基酸转化为气相离子，并利用质谱仪测定各个氨基酸的含量。

11. 核磁共振法：核磁共振法是一种非破坏性的氨基酸分析方法。

脯氨酸的测定方法
脯氨酸是一种重要的氨基酸，其测定方法主要有以下几种：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种常用的测定脯氨酸浓度的方法。

首先将样品中的脯氨酸与特定的试剂反应生成有色化合物，然后使用高效液相色谱仪进行分离和定量。

这种方法具有灵敏度高、准确度高和分析速度快的优点。

2. 气相色谱法（GC）：该方法需要将脯氨酸进行甲硫酸甲酯化反应，然后使用气相色谱仪分离和定量。

这种方法具有分离能力强、重复性好和灵敏度高的优点。

3. 近红外光谱法（NIR）：该方法利用近红外光谱仪对脯氨酸进行光谱测定，通过建立标准曲线或者使用化学计量学方法进行定量分析。

这种方法具有快速、无损伤和非破坏性的特点。

4. 比色法：比色法是利用脯氨酸与特定试剂发生反应生成有色产物，然后使用分光光度计进行测定。

常用的试剂有二硫代二氨基苯，其生成的紫色产物与脯氨酸的浓度成正比。

这种方法简便易行，但灵敏度较低。

需要注意的是，不同的测定方法适用于不同的样品和实验要求，选择合适的方法需要考虑样品类型、测定要求和实验设备等因素。

液相色谱是怎么实现十八种氨基酸的分离一、实验目的（1）熟悉高效液相色谱仪的结构、分离原理和操作程序。

（2）掌握氨基酸标样的分析方法、原理。

二、实验原理氨基酸与PITC发生反应生成的衍生物，在254nm处有最大吸光值。

氨基酸衍生物进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积可进行定性和定量。

该方法是柱前衍生法中的一种。

三、实验仪器和试剂1、仪器：高效液相色谱仪（带紫外检测器）。

2、材料：氨基酸标样3、试剂：衍生液：异硫氰酸苯：甲醇：三乙胺：水（V/V）=1：7：1：1，正己烷、乙腈、乙酸、乙酸钠。

以上试剂中乙腈为色谱醇，水为二次蒸馏水，其它为分析醇。

四、实验步骤1、柱前衍生步骤：（1）将200ul衍生液加入200ul氨基酸标样或样品中，震荡使混合均匀，室温放置1小时。

（2）反应液中加入400ul正己烷，充分震荡后放置使分层。

（3）取下层溶液用一次性滤膜过滤器（0.45ul）过滤。

（4）取滤液5ul注入HPLC。

2、分离条件的设定（1）色谱柱：Shim-pack VP-ODS 4.6mm x 15cm保护柱：Shim-pack GVP-ODS4.6 mm x 1cm（2）流动相：A液：0.1M乙酸钠pH6.50（用乙酸调整，500ml乙酸钠中约加2滴乙酸）。

B液：乙腈/水=4/1（3）流量：1ml/min柱温：36℃检测波长：254nm（4）梯度洗脱程序：●TIME(min) FUNC VALUE●0．01 BCONC 10● 3 BCONC 10●21 BCONC 39●21.01 BCONC 80●25 BCONC 80●25.01 BCONC 10●35 STOP STOP3、数据采集打开real-time CS analysis软件采集数据并对数据进行分析。

五、注意事项1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。

2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

18种氨基酸检测方法【原创版4篇】目录（篇1）I.氨基酸检测方法概述1.氨基酸是生命中必不可少的有机化合物2.18种氨基酸是人体必需的营养物质3.氨基酸检测方法的研究意义II.氨基酸检测方法介绍1.传统检测方法2.现代检测方法3.新型检测方法III.氨基酸检测方法优缺点分析1.传统检测方法的优缺点2.现代检测方法的优缺点3.新型检测方法的优缺点IV.氨基酸检测方法应用前景展望1.在医疗领域的应用2.在食品行业的应用3.在其他领域的应用正文（篇1）一、氨基酸检测方法概述氨基酸是生命中必不可少的有机化合物，它们在人体内扮演着重要的角色。

人体内有18种氨基酸，其中一部分是由身体自身合成的，而其余的部分必须从食物中摄取。

因此，氨基酸检测方法的研究对于了解人体健康状况具有重要意义。

传统的氨基酸检测方法较为繁琐，需要耗时费力，而现代的检测方法则更加快速、准确、简便。

例如，高效液相色谱法、质谱法等。

此外，近年来还出现了一些新型的检测方法，如表面增强拉曼光谱法、近红外光谱法等。

二、氨基酸检测方法介绍1.传统检测方法：传统的氨基酸检测方法主要包括化学法、电泳法、色谱法等。

化学法是通过测定氨基酸的化学反应来测定其含量，但操作繁琐、误差较大；电泳法是通过氨基酸在电场中的迁移率来测定其含量，但需要消耗大量的样品；色谱法是通过氨基酸在色谱柱中的分离来测定其含量，但需要消耗大量的样品。

2.现代检测方法：现代的氨基酸检测方法主要包括高效液相色谱法、质谱法等。

高效液相色谱法是一种基于色谱分离技术的分析方法，可以快速、准确地分离和测定多种氨基酸；质谱法是一种基于质谱分离技术的分析方法，可以同时测定多种氨基酸，但需要消耗大量的样品。

3.新型检测方法：新型的氨基酸检测方法主要包括表面增强拉曼光谱法、近红外光谱法等。

表面增强拉曼光谱法是一种基于拉曼散射技术的分析方法，可以在不破坏样品的情况下快速、准确地测定多种氨基酸；近红外光谱法是一种基于光学技术的分析方法，可以在不破坏样品的情况下快速、准确地测定多种氨基酸。

高效液相色谱法测定氨基酸操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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