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下文所述程序改编于Speicher和McCarl（1974）的方法。
实验需要两把弯头的解剖剪，两把5号钳子，一个25-ml的带橡皮塞的锥形瓶，内装一搅拌棒。
所有器械使用前均应消毒灭菌。
为了进一步保证无菌条件，最好用一次性无菌塑料用品。
所有的孵育操作均应在高湿度的5% CO237℃孵箱中。
本实验适合处理20~30只幼鼠，若少于20只鼠则可能会发生组织消化过度的情况，若超过30只，则由于准备工作加长降低了细胞的成活性。
组织消化和分离细胞1）在细胞操作间内，放一个加热搅拌台，上放一个装有100-ml灭菌水的容量600-ml的烧杯，加热至37℃。
2）准备胰酶液。
用水浴或温箱使胰酶液温度保持在37℃。
胰酶（0.1）%，100ml盐水A 90ml1%胰酶1:300（GIBCO/BRL）10ml使用当天配制盐水A137mmol/L NaCl4 mmol/L KCl4.2 mmol/L NaHCO35 mmol/L 葡萄糖溶于无菌蒸馏水中3）做一个冰台：将一只平皿装满冰后倒置即可，70%乙醇擦拭平皿后放进操作台。
取3个60-mm的一次性组织培养用平皿，加入5 ml盐水A，标记上1，2，3，放进操作台的冰台上。
4）取一只干净加盖的烧杯，内放一块Metofane饱和的纱布，把0~1日龄的SD幼鼠放进该烧杯中麻醉。
20只幼鼠大约需要5分钟时间。
用70%乙醇擦净烧杯再放进操作间。
5）一次取出一只幼鼠，一定要再盖好盖子，然后将幼鼠躺着放在一块无菌纱布上。
用乙醇擦洗其胸部及腹部。
把鼠肩胛骨往后夹，使突出胸腔，在肋骨下沿胸骨方向拉一口，摘出心脏放进标记着1的培养皿中。
24-mm规格的弯头解剖刀适合用于切口及摘除心脏。
此时幼鼠心脏仍能跳动，故一般很容易找到并摘除。
可用同一把解剖刀将心脏摘出放进盐水A溶液，若需要也可用灭菌的5号钳子。
6）继续处理余下的幼鼠，一定要保持手套及所用器械洁净。
每次解剖约需1分钟。
7）上述操作完成后，用两把5号钳子剔除心脏上结缔组织和血块再转入标记为2的平皿中。
小鼠心脏成纤维细胞说明书
1、组织来源：小鼠乳鼠
2、产品规格：25cm2培养瓶
3、细胞简介：
小鼠心脏成纤维细胞分离自正常大鼠心脏组织，细胞呈梭型、多边形等不规则形状。
体外培养的小鼠心脏成纤维细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
本公司生产的小鼠心脏成纤维细胞采用酶解法制备而来，细胞总量约为1×106个/瓶，细胞纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、使用方法
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1、取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态；
2、待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养；
3、细胞传代
（1）吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次；
（2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴1-2min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
（3）用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5ml，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
（4）待细胞完全贴壁后，培养观察。
之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。
（备注：由于实验所用试剂与操作环境的不同，以上方法供各实验室参考。
）
三、注意事项
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月；
2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作；
3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态；
4、该细胞只可用于科研。
一、细胞室灭菌1.将酒精灯、止血钳、枪、滴管架子、离心管架子、器械饭盒等清点无误后置于超净台内，紫外照射20-30min。
2.（注：物品不可重叠放置，否则会遮挡射线。
培养细胞和培养用液不可照射紫外。
）3.将实验服等摊开置于培养室，打开紫外照射20-30min。
4.紫外照射结束后，打开超净台风机，吹10min，吹走O3。
5.（注：若超净台内物品不全，向台内拿取物品前，应先用75%酒精喷洒消毒。
）二、胶原酶1的配置分离心肌细胞的胶原酶1浓度为：10mg胶原酶/12ml PBS。
具体方法为：（以下过程均在超净台内操作）1.称取10mg胶原酶于小烧杯中。
2.加入12ml PBS溶液。
3.灼烧止血钳，夹出青霉素小瓶，灼烧备用。
4.用10ml一次性无菌注射器吸取小烧杯中溶液，用一次性无菌滤器过滤于青霉素小瓶中，即得到无菌的胶原酶1溶液，呈淡土黄色。
三、取材并分离心肌细胞1.用止血钳取5-6个平皿，分别加入适量PBS溶液。
2.用止血钳夹住小烧杯壁，从器械饭盒中取出剪刀、镊子等器械。
3.准备2个小烧杯，加入75%酒精适量，一个置于超净台外，一个置于超净台内。
先将乳鼠头朝下置于外面的小烧杯中消毒2min左右，取出，拿进超净台内，置于内部的小烧杯中消毒2min.4.左手捏住乳鼠背部皮肤，暴露出胸腔，右手拿一直的小剪刀，在中间靠左处剪开皮肤，左手轻轻一捏，其心脏即弹出来。
5.剪下心室部分置于含PBS的平皿中。
6.待8只乳鼠心脏全部取定后，换手套，喷酒精。
7.左手拿镊子，右手拿剪刀，在心脏中间部位剪一刀，成“肉夹馍”形，在PBS中冲洗干净，洗去血细胞。
8.将心室转移到另一新的培养皿中，继续清洗，此时可继续打开心室，取出余血。
9.继续冲洗2-3遍，10.将洗好的心脏置于含转子的带盖玻璃瓶中（提前将转子取出置于干净处），加入2ml PBS溶液。
11.灼烧剪刀，左手拿玻璃瓶，右手拿剪刀剪碎心脏成不能再剪的碎片。
12.用枪吸掉上清，只留碎片，将转子放入玻璃瓶中，盖好盖子备用。
DOI ：10.3969/j.issn.1672-9463.2020.04.002乳鼠心肌细胞片状生长的分离、培养及纯化张宇 杨帆【摘要】 目的 探讨乳鼠心肌细胞分离、培养的方法与条件，从而在体外实验中得到纯度、存活率更高的心肌细胞。
方法 出生24h 内C57BL/6J 乳小鼠，开胸分离出左心室并剪碎，用0.1%胰酶与0.1%胶原酶Ⅱ型的混合液消化心肌组织，并用两次差速贴壁法纯化心肌细胞。
在倒置光学及荧光显微镜下观察细胞形态，并计数心肌细胞搏动次数，通过台盼蓝染色法检测细胞存活率。
结果 心肌细胞培养24h 后基本全部贴壁，伸出伪足；培养48h 后，细胞伪足逐渐增多呈局部片状；培养72h 后，大部分心肌细胞的突起相互交联，形成片状。
培养第2天细胞存活率达到（95.33±2.51）%。
…结论 本研究方法所培养的心肌细胞具有存活率高、纯度高及稳定性强等优势，有利于加强心肌细胞的基础实验研究。
【关键词】 心肌细胞 原代培养 改良 存活率 片状生长Isolation, culture and purification of flaky growth of neonatal rat cardiomyocytes Zhang Yu, Yang Fan. Department of Cardiology, Xixiu District People's Hospital of Anshun City, Anshun 561000【Abstract 】 Objective To…investigate…the…methods…and…condition…of…isolation…and…culture…of…the…neonatal…rat…cardiomyocytes,…acquire…the…higher…purity…and…survival…of…cardiomyocytes…in…vitro.…Methods The…C57BL/6J…mice…in…24…hours…of…birth…were…executed…to…obtain…the…left…ventricle.…The…left…ventricle…tissues…were…digested…by…the…mixture…（containing…0.1%…trypsin…and…0.1%…collagenase…type…Ⅱ）…for…isolation…and…then…were…purified…by…twice…adherence.…The…morphology…and…beats…of…cardiomyocytes…were…detected…by…microscope…and…the…cellular…survival…rates…were…measured…by…Trypan…Blue.…Results The…cardiomyocytes…were…adherent…after…24…hours…with…the…protruding…portions.…The…protruding…portions…were…partly…extended…flakily…after…48…hours.…Most…of…cardiomyocytes…were…cross-linked…through…the…increased…protruding…portions…after…72…hours.…The…cellular…survival…rate…was…about…（95.33±2.51）%…after…48…hours.…Conclusion The…high…survival…rate,…purity…and…stability…of…cardiomyocytes…can…be…obtained…by…our…improving…method,…which…could…enhance…the…basic…researches…in…cardiomyocytes.【Key words 】 Cardiomyocyte Primary…culture Improving Survival…rate Flaky…growth▲基金项目：国家自然科学基金资助项目（编号：81960083）；安顺市科技计划项目（编号：安市科社[2019]07号）作者单位：561000 贵州省安顺市西秀区人民医院心内科（张宇）；贵州省人民医院心内科（杨帆）通讯作者：杨帆，E-mail：*********************随着社会进步与人们生活水平提高，心血管疾病的发病率日趋增高并逐步年轻化[1]，心血管疾病研究一直是科研工作者不断探索及关注的领域。
・论著・乳鼠心肌成纤维细胞培养方法的改进陈勇兵 陈如坤 陈力 吴明 施立 杨文涛 钱永跃【摘要】 目的 建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型。
方法 通过对经典的差速贴壁分离法稍作改进,采用每次贴壁60min 、两次差速贴壁分离法收集、培养心肌成纤维细胞。
结果 形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定显示,成功培养心肌成纤维细胞,纯度达95%以上。
结论 该研究成功建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型,为高纯度心肌成纤维细胞的获得和对其病理生理学的进一步研究打下良好基础。
【关键词】 心肌成纤维细胞;细胞培养A modif ication of the model establishment for cell culture of neonatal rat myocardial f ibroblasts CHEN Yongbing ,CHEN Rukun ,CHEN Li ,et al.Depart ment of Thoracic a nd Cardiovascular Surgery ,Second Affiliated Hospital ,Soochow University ,Suzhou 215004,CHINA【Abstract 】 Objective To establish the model of cell culture of neonatal rat myocardial fibro 2blasts.Methods Neonatal rat myocardial fibroblasts were isolated and cultured with a modified tech 2nique of differential anchoring velocity for twice with 60min each.Morphologic characters of those cells were observed with the inverted microscope.Immunocytochemical staining was used to evaluate and confirm the myocardial fibroblasts.R esults The morphological observation and immunocyto 2chemical staining used to confirm the myocardial fibroblasts showed that the purity of cells cultured was more than 95%.Conclusion The model of cell culture of neonatal rat myocardial fibroblasts was successfully established ,which has laid good foundation for f urther research on myocardial fibroblasts.【K ey w ords 】 Myocardial fibroblast ;Cell culture 基金项目:苏州大学青年基金;浙江省医药卫生科学研究基金(编号2000A110)作者单位:215004 苏州大学附属第二医院胸心外科(陈勇兵、施立、杨文涛、钱永跃);浙江大学附属第二医院胸心外科(陈如坤、陈力、吴明) 心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成。
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010680696.2(22)申请日 2020.07.15(71)申请人 四川大学华西医院地址 610041 四川省成都市武侯区国学巷37号(72)发明人 黄方洋 李君丽 田格尔 周骏腾 (74)专利代理机构 成都虹桥专利事务所(普通合伙) 51124代理人 伍云萍(51)Int.Cl.C12N 5/077(2010.01)(54)发明名称高效分离培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的方法(57)摘要本发明属于细胞分离培养技术领域，具体涉及一种高效分离培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的方法。
针对现有大/小鼠乳鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞分离效率低、活性差、操作条件不易控制的问题，本发明提供了一种方法，包括以下步骤：a、取乳鼠心脏，清洗后转移至含胰蛋白酶的分离液中，剪碎；b、组织块在分离液中消化后，吸走上清，剩余物中加入消化液，消化；c、移液管吹打混匀，静置，转移上部悬浮液，对下部的组织块再加入消化液消化；d、悬浮液混合，离心，弃上清，重悬细胞，孵育，成纤维细胞和心肌细胞。
本方法能够高效分离心肌细胞，得到的心肌细胞活性高，得率高；还能同时获得心肌成纤维细胞，适宜工业化生产。
权利要求书1页 说明书6页 附图2页CN 111876378 A 2020.11.03C N 111876378A1.高效分离培养乳鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、取乳鼠心脏，置于含Blebbistatin的PBS溶液中清洗后，转移至含胰蛋白酶的分离液中，剪碎心脏成小的组织块；b、将步骤a所述组织块在10～15ml分离液中消化，2～8℃消化4～12小时后，吸走上清，剩余物中加入消化液，在37℃下消化20～30min；c、步骤b消化完成后，采用移液管吹打混匀，静置，转移上部悬浮液，对静置后下部的组织块再加入消化液，在37℃下消化20～30min，直至无肉眼可见组织块；d、将步骤c消化后得到的悬浮液混合，离心，弃上清，采用铺板培养基重悬细胞，孵育30～60min，成纤维细胞铺于相应孔板中，上清中的细胞即为心肌细胞。
ＳＤ乳鼠原代心脏成纤维细胞培养及鉴定杨艳１ ，欧阳伟炜１，２ ，苏胜发１，２，马筑１，２，李青松１，２，耿一超１，２，卢冰１，２（１．贵州医科大学附院肿瘤科，贵州省肿瘤医院肿瘤科，贵州贵阳 ５５０００４；２．贵州医科大学肿瘤学教研室，贵州贵阳 ５５０００４）［摘 要］目的：建立一种乳鼠心脏成纤维细胞分离、培养及鉴定的方法。
方法：选取新出生的ＳＤ乳鼠，用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化组织，差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞；倒置显微镜观察细胞形态特征及生长情况，并进行Ｖｉｍｅｎｔｉｎ免疫组化对培养的原代细胞进行鉴定，观察原代细胞生长中出现污染情况。
结果：差速贴壁６０～９０ｍｉｎ后镜下可见圆形细胞贴壁，２ｄ后可见细胞呈梭形、扁平形、三角形或多角形，且细胞数量增多、核分裂相增多；第３～４天时细胞生长约９０％，免疫组化见细胞染色达９０％以上，在原代细胞培养４８ｈ时出现细菌污染。
结论：成功建立一种稳定、有效的心脏成纤维细胞培养方法。
［关键词］心脏；成纤维细胞；形态发生；免疫组织化学；原代培养；鉴定［中图分类号］Ｒ３２９．２；Ｑ９５４．６ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１０００ ２７０７（２０２０）０４ ０４２７ ０５ＤＯＩ：１０．１９３６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１０００ ２７０７．２０２０．０４．０１０ＣｕｌｔｕｒｅａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｒｉｍａｒｙＣａｒｄｉａｃＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｎＳＤＮｅｏｎａｔａｌＭｉｃｅＹＡＮＧＹａｎ１，ＯＵＹＡＮＧＷｅｉｗｅｉ１，２，ＳＵＳｈｅｎｇｆａ１，２，ＭＡＺｈｕ１，２，ＬＩＱｉｎｇｓｏｎｇ１，２，ＧＥＮＧＹｉｃｈａｏ１，２，ＬＵＢｉｎｇ１，２（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ＧｕｉｚｈｏｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｎＳＤｎｅｏｎａｔａｌｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅＳＤｎｅｗｂｏｒｎｍｉｃｅｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｔｈｅｔｉｓｓｕｅｓｗｅｒｅｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈｔｒｙｐｓｉｎａｎｄｔｙｐｅＩＩｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ，ａｎｄｔｈｅｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｒａｐｉｄａｄｈｅｒｅｎｃｅ．Ｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓａｎｄｍｙｏｃａｒｄｉａｌｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓａｎｄｇｒｏｗｓｏｆｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｉｎｖｅｒｔｅｄｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＴｈｅｐｒｉｍａｒｙｃｅｌｌｓａｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙＶｉｍｅｎｔｉｎｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｔｈｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｐｒｉｍａｒｙｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ６０～９０ｍｉｎｕｔｅｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌａｄｈｅｓｉｏｎ，ａｄｈｅｒｅｎｔｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｆｏｒｍｅｄｓｐｈｅｒｉｃａｌｃｅｌｌｍａｓｓａｎｄｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｐｉｎｄｌｅ ｓｈａｐｅｄａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄｒａｐｉｄｌｙａｆｔｅｒ２ｄａｙｓ．Ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏｎｆｌｕｅｎｔａｆｔｅｒ３～４ｄａｙｓａｎｄｎｕｃｌｅａｒｆｉｓｓｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄ．ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆＶｉｍｅｎｔｉｎｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｓｔａｉｎｉｎｇｗｅｒｅｎｅａｒｌｙｕｐｔｏ９０％．Ｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｏｃｃｕｒｒｅｄｄｕｒｉｎｇｐｒｉｍａｒｙｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅａｔ４８ｈ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｅｃｏｎｏｍｉｃａｌａｎｄｓｔａｂｌｅｔｏｉｓｏｌａｔｅｃａｒｄｉａｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｗｉｔｈｈｉｇｈａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｈｉｇｈｐｕｒｉｔｙｆｒｏｍａｄｕｌｔｍｉｃｅ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｈｅａｒｔ；ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ；ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ；ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；ｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ７２４第４５卷 第４期２０２０年４月 贵州医科大学学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＩＺＨＯＵＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ Ｖｏｌ．４５ Ｎｏ．４２０２０．４［基金项目］贵州省科技厅课题［黔科合ＬＨ字（２０１４）７１３５］；贵州省教育厅创新群体重大研究项目［黔教合ＫＹ字（２０１６）０３２］；国家自然科学基金地区科学基金项目（８１６６０５０７）贵州医科大学２０１５级硕士研究生 通信作者Ｅ ｍａｉｌ：ｏｕｙａｎｇｗｗ１０３１７３＠１６３．ｃｏｍ；ｌｂｇｙ－ｍａａａａ＠１６３．ｃｏｍ 成纤维细胞是疏松结缔组织中最主要的细胞，可分泌多种生长因子调节细胞增殖及分化。
原代乳小鼠心肌细胞的分离培养及鉴定＊程阔菊，黄河，杜智勇，李洪，杨天德△【摘要】目的建立原代乳小鼠心肌细胞的培养方法，评价心肌细胞的存活状况并鉴定心肌细胞纯度。
方法应用胰酶联合胶原酶共同消化3d内C57乳小鼠心脏，台盼蓝染色判断心肌细胞存活率，α－actin免疫荧光染色鉴定心肌细胞纯度。
结果利用3d内乳鼠心脏可成功培养原代小鼠心肌细胞，台盼蓝染色显示细胞存活率大于95%，α－actin免疫荧光染色显示心肌细胞纯度达95%以上。
结论严格控制实验条件，可成功培养高存活率和高纯度的小鼠心肌细胞。
【期刊名称】重庆医学【年(卷),期】2013(000)022【总页数】3【关键词】乳小鼠；心肌细胞；分离；纯化；培养；鉴定各种基因敲除及转基因小鼠已广泛应用于心血管疾病动物模型的建立，已为心血管疾病机制的研究作出了巨大贡献。
体外心肌细胞培养作为一种体外实验研究模型，可以排除神经、体液的干扰而独立地从细胞和分子水平研究心血管疾病的发生、发展机制，但由于小鼠心肌细胞的分离和培养比较困难，所以一直限制了医学科研工作者在细胞生物学水平上对心血管疾病方面的深入研究。
本实验室在以往的经验基础上，摸索出了一套成熟可行、简单可靠的小鼠心肌细胞培养方法，获得的心肌细胞存活率高且纯度高。
本文对此培养方法做一简单介绍，并对其中的关键影响因素做详细的探讨。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物1～3d龄野生型C57新生乳鼠，SPF级，由第三军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（渝）2007－0003。
1.1.2 主要仪器与试剂显微眼用镊、眼科剪、显微镊、显微剪（上海医疗器械有限公司），器械使用前清洗干净并经高压灭菌（121℃，20min）。
二氧化碳培养箱、倒置显微镜（OLYMPUS）、超净工作台（苏净安泰）、低温台式离心机（Sigma）。
小牛血清、DMEM／F12、胰酶、胶原酶Ⅱ（GIBCO），BrdU－溴脱氧尿苷（Sigma），青霉素、链霉素（华美生物工程公司），anti－α－actinin（Millipore），组织固定液（Alphelys），Triton X－100（Amresco），SlowFade Gold antifade reagent with DAPI（Invitrogen），Alexa goat anti－mouse IgG（H＋L）（Invitrogen）。
