毒理学动物实验设计.ppt

七、毒理学实验（一）、急性毒性试验的定义、目的和意义急性毒性试验，又称单次给药急性毒性实验，是指在24h内一次或多次给予动物受试物后，所产生的毒性反应。

（二）、基本内容和技术要求1、实验动物可根据不同情况选用不同的实验动物，例如大鼠、小鼠、犬。

本实验随机选用健康成年的12只大鼠和12只小鼠，要求雌雄分别对半，动物初始体重不超过或低于平均体重的20%。

2、给药途径由于本品为浓缩丸，因此选用口服进行实验。

给药前将实验动物禁食24h。

3、给药剂量将大鼠和小鼠分别两只一组，分大鼠6组，小鼠6组。

然后编号。

分剂量0g/kg，1g/kg，2g/kg，3g/kg，4g/kg，5g/kg对小鼠和大鼠进行灌胃口服，20ml/kg。

然后观察小鼠反应。

一般认为口服5g/kg时未见急性毒性或死亡，可不必提高剂量进行实验。

4、观察时间及指标给药后几小时内应严密观察动物反应，之后每天上下午各观察一次，至少连续观察14d。

5、在口服给药24h后，如果没有实验动物死亡，则每组各选一只动物进行病理组织学检查；如果有动物死亡，则将死亡动物和未死亡的动物小组中选一只动物进行病理学检查。

6、实验动物临床表现与器官系统的关系急性毒性试验一般指征观察参考表（三）、长期毒性实验实验要求和内容1、实验药品要求选用符合相关制剂要求的同一批药品。

2、实验动物选用正常、健康、雌雄各半和动物体重应在平均体重的20%之内的成年各20只大鼠和小鼠。

将每种动物平均分四组，分别为高、中、低、和对照组。

3、实验动物饲养按照动物室正常标准进行饲养。

4、药物剂量根据相应动物急性毒性的最大无症状剂量（MTD）、1/3MTD、1/10MTD 分别设高中低三个剂量。

对照组为空白对照。

5、给药方法将药物加入到饲料中，依据确定的量进行。

6、给药时间给药6个月。

7、观察指标（1）一般指标实验动物的体重，和解剖后相关脏器的重量。

每周固定时间测1次大鼠体重及摄食量，试验期间详细观察大鼠一般状况，包括外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便等，必要时应测定大鼠饮水量。

实习一毒理学动物实验基础【实验设计的原则】毒理学作为一门动物实验课程，应该遵循动物实验中对照、重复和随机三个基本原则。

【不成文原则】1、保护好自己最重要。

2、经典的步骤只是提供一个符合的大多数人习惯的参考，具体实验时每个人可按照自己的习惯以及现实有的条件来完成操作，只要能够按要求完整地实现相关的操作目的即可。

【实验动物】大鼠（价格低廉，同时相比小鼠，大鼠的生理生化过程与人类较为接近，故在毒理学实验中常用）【大鼠的捕捉及固定】大鼠的门齿很长，在抓取方法不当而受到惊吓或激怒时易将操作者手指咬伤,所以,不要突然袭击式地去抓它，取用时应轻轻抓住其尾巴后提起，置于实验台上，用玻璃钟罩扣住或置于大鼠固定盒内，这样即可进行尾静脉取血或注射。

如要作腹腔注射或灌胃等操作时，实验者应戴上手套(有经验者也可不戴)，右手轻轻抓住大鼠的尾巴向后拉，但要避免抓其尖端，以防尾巴尖端皮肤脱落，左手抓紧鼠两耳和头颈部的皮肤，并将大鼠固定在左手中，右手即可进行操作。

【大鼠性别的鉴定】动物性别不同对毒物的敏感性也不同，因此，要根据实验要求选择性别，一般实验如对性别无特殊要求者，以选用雌雄动物各半。

大鼠、小鼠主要以肛门与生殖空间的距离区分，间距大者为雄性，小者为雌性。

成年雄鼠卧位时可见到睾丸，雌性在腹部可见乳头。

【实验动物的编号及标记方法】好的标记应达到清晰、耐久、简便适用的要求。

常用的方法有化学染色法，耳缘剪口法或打小孔法，挂牌法及烙印法。

1. 化学染色法: 染色标记法是用毛笔或棉签蘸取化学药品，在实验动物体表不同部位涂上斑点，以示不同编号。

常用染色液：3％～5％的苦味酸溶液(染成黄色)；0.5％的中性品红溶液(染成红色)（1）用一种染色剂染动物的不同部位，颜色可标记1～10号（10号不标记）。

如图：（2）若用两种颜色的染液配合使用，其中一种颜色代表个位数，另一种颜色代表十位数，可编到99号。

例如要标记12号，就可以在左前腿涂上红色，左腹部涂上黄色。

毒理学描述性动物毒性实验第五章描述性动物毒性实验描述性动物毒性实验是指通过对环境有害因素特别是外源化学物的毒理学基础研究，包括⼀定程序的实验动物选择、实验模型的制作、数量与剂量确定、染毒⽅法及毒性指标等，观察动物机体所产⽣的总体毒性效应，通过不断反复的资料积累作出毒理学评价并外推⾄⼈类，为防治暴露于环境有害因素的有害作⽤提出综合性措施的过程。

第⼀节急性毒性试验⼀、急性毒性急性毒性(acute toxicity)是指机体(⼈或实验动物)⼀次或24h之内多次接触(染毒)外源化学物之后，在短期内所发⽣的毒性效应，包括引起死亡效应。

实验动物接触外源化学物所引发的急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强度，因外源化学物的性质（主要为化学结构与理化性质）和染毒剂量的⼤⼩⽽有很⼤差别。

有的化学物在实验动物接触致死剂量后，⼏分钟之内即可产⽣中毒症状，甚⾄瞬间死亡，有的化学物则在接触致死剂量⼏天才出现明显的中毒症状或死亡。

所谓“⼀次或24内多次”接触或染毒的时间界定：⼀次是指瞬间染毒，如经⼝染毒、经注射途径染毒，但在经呼吸道与经⽪肤染毒，则是指在⼀个特定的期间内持续地接触化学物的过程，所以“⼀次”含有时间因素。

当外源化学物毒性过低，或⼀次染毒剂量受机体容量限制，需给予实验动物较⼤剂量时，则可在24h内分次染毒，即为“多次”。

“短期内”，⼀般限定为7天内。

⼆、急性毒性试验的⽬的和⽅法（⼀）急性毒性试验的⽬的急性毒性研究的⽬的，主要是探求化学物的致死剂量，以初步评估其对⼈类的可能毒害的危险性。

再者是求该化学物的剂量-反应关系，为其它毒性实验打下选择染毒剂量的基础。

（⼆）实验动物的选择毒理学中研究外源化学物的基础毒性主要是进⾏体内试验，即是以实验动物为研究对象，最终向外源化学物毒害主体—-⼈类外推。

虽然在⼀些国家由于动物保护运动的发展，进⾏整体动物研究受到⼀定限制，⽽促使体外试验的发展，但毕竟⽤离体组织、细胞、亚细胞器为标本时距整体接触化学物的毒性有差距，所以⾄今评价外源化学物基本毒性，还是以整体实验动物体内实验为主。

实验一动物的一般操作技术1. 实验目的和要求*毒理学研究需要用实验动物来进行各种实脸，通过对动物的实验观察和分析来研究毒作用，获得毒物的毒性、剂量-反应关系、毒作用机制等方面的资料，因此动物实验是毒理学研究中重要的手段之一。

通过本次学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术，掌握实验动物的选择、动物抓取和分组等技术。

2. 实验原理做毒理学实验，首先要了解实验动物选择的要求，实验动物分组、实验样品的采集、实验动物处死方法等。

3. 实验仪器设备:小鼠若干，手套15副，苦味酸酒精饱和液，0.5%中性红或品红溶液，棉签，解剖剪刀10把，感应量为0.1g的天平一台。

4. 实验内容步骚:(一) 健康动物的选择无论选择哪种种属品系的动物进行实验，均要求选择健康的实验动物。

健康动物检查时要求达到：外观体型丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速，反应灵活，食欲及营养状况良好。

选择时重点检查以下几项：1. 眼睛明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物2. 耳耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮3. 鼻无喷嚏，无浆性粘液分泌物4. 皮肤无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。

5. 颈部要求颈端端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不应选作实验动物。

6. 消化道无呕吐、腹泄，粪便成形，肛门附近被毛洁净。

7. 神经系统无震颤、麻痹。

若动物(大鼠、小鼠)出现圆圈动作或提尾倒置呈圆圈摆动，应放弃该动物。

8. 四波及尾四肢、趾及尾无红肿及溃疡。

(二) 实验动物的性别鉴定小鼠主要依据肛门与生殖孔间的距离区分，间距大者为雄鼠，小者为雌性。

成年雄鼠卧位可见睾丸，雌性在腹部可见乳头。

(三) 抓取方法正确地抓取固定动物，是为了在不损害动物健康、不影响观察指标、并防止被动物咬伤的前提下，确保实验顺利进行。

小鼠的抓取方法先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上向后位，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。