营养琼脂培养基使用说明

第1部分：化学品及企业标识1.1 产品中文名称：营养琼脂1.2 产品英文名称：Nutrient Agar1.3 产品编号：CM107/CM107-011.4 企业名称：北京路桥技术股份有限公司1.5 推荐用途和限制用途：生化研究/分析第2部分：危险性概述2.1 紧急情况概述：吸入后，立即呼吸新鲜空气；接触皮肤后，立即用清水冲洗或淋浴：眼睛接触后，用清水冲洗；食入：清水漱口；如感不适，请立即就医。

2.2 GHS分类：非危险物质或混合物。

2.3 物理和化学危险：目前未掌握物理或化学危险性信息。

2.4 健康危害：目前未掌握物理或化学危险性信息。

2.5 环境危害：目前未掌握物理或化学危险性信息。

2.6 其他危害：无数据资料。

第3部分：成分/组成信息3.1 混合物：化学品成分参考培养基标签成分。

3.2 有化学害物质：无第4部分：急救措施4.1 必要的急救措施：吸入：立即移至新鲜空气处。

如不适就医。

皮肤接触：立即用清水冲洗。

眼睛接触：立即提起眼睑用大量流动清水冲洗。

如不适就医。

食入：清水漱口，如有不适请就医。

4.2 主要症状和影响，急性和迟发效应：据我们所知，此化学，物理和毒性性质尚未经完整的研究。

4.3 及时的医疗处理和所需的特殊处理的说明和指示：无数据资料第5部分：消防措施5.1 灭火方法和灭火剂：用水、耐醇泡沫、干粉或二氧化碳灭火器灭火5.2 危险特性：不助燃5.3 有害燃烧产物：碳氧化物，硫氧化物，磷的氧化物，氯化氢气体，碘化氢，氧化钾，钠的氧化物，氧化镁等5.4 消防员防护装备建议：戴上自给式呼吸器灭火第6部分：泄露应急处理6.1 个人防护：穿戴实验服，手套和口罩，避免吸入粉尘6.2 环境保护措施：在确保安全的前提下，防止进一步泄露或溢出。

6.3 清洁/收集措施：干燥扫除，存放进适当闭口容器中待处理，清洗污染区域，而后酒精消毒。

第7部分：操作处置与储存7.1 安全操作注意事项：防止粉尘和气溶胶生成，有粉尘时，应提供通风设备。

营养琼脂培养基使用说明022020 营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO标准)。

原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。

配方(每升)：蛋白胨10g牛肉膏粉3g氯化钠5g琼脂15g最终pH 7.3±0.2使用方法：1、称取本培养基33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。

2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。

依次做1：100，1：1000……稀释液。

3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。

4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。

待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。

5、观察结果。

6、菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

7、菌落计数的报告：选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准。

一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。

实验一培养基的制备与灭菌实验步骤：（一）伊红美蓝培养基（EMB，用成品，分离大肠杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。

按成品说明称量、放入搪瓷杯，加水，加热完全溶化，倒入三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，作标记（培养基名称、批次组别、日期，下同），灭菌。

（二）营养琼脂培养基（即牛肉膏蛋白胨培养基，用成品，分离芽孢杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基，方法同上，灭菌。

（三）PDA培养基（即马铃薯蔗糖培养基，分离酵母菌、根霉用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。

培养基配方：马铃薯20%、蔗糖（白砂糖）2%、琼脂 2%，加水至所需体积，pH自然。

配制方法：马铃薯去皮，称量，切成小方块，放入搪瓷杯，加水适量，煮沸20 min，取汁液，补水至所需体积，加入蔗糖（白砂糖），加热溶化，最后加入琼脂（琼脂要预先单独用水浸泡，然后挤干再加入），加热至琼脂完全溶化，分装三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，灭菌。

培养基统一高压蒸汽灭菌（121℃25 min）。

（四）无菌平皿准备（下次实验倒平板用）每组10套，报纸包扎，高压蒸汽灭菌（121℃25 min）后，置干燥箱80℃烘干1 h。

（五）枯草样预处理及预培养（下次实验分离芽孢杆菌用）枯草样预处理：每组1瓶。

100 ml三角瓶＋自来水约50 ml，加5%可溶性淀粉，溶解。

枯草若干，剪短，浸入三角瓶水中，牛皮纸封口，包扎，置水浴中煮沸10 min，然后置培养箱30℃预培养3～7 d。

（六）葡萄样（或其它水果）酵母菌预培养（下次实验分离酵母菌用）每组1瓶。

葡萄（或其它水果）适量，捏碎，皮渣与汁液一起放入250 ml 三角瓶（装量1/2～2/3），封口，置培养箱25℃预培养3～7 d，观察自然发酵过程。

实验二微生物的分离与纯化实验步骤：（一）污水中大肠杆菌的分离（稀释倒平板法）1）用三角瓶取污水样适量。

常用培养基配方汇总1. 营养琼脂培养基 (Nutrient Agar)- 夏洛特奥康纳 (Charlote A. O'Connor) 配方:-蛋白胨:5克-麦芽提取物:3克-胰蛋白酶胨:1.5克-硫酸镁:0.2克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。

2. 肉蔗糖琼脂培养基 (Tryptic Soy Agar, TSA)- 条件反射琼脂 (孟德尔和赛尼·特鲁斯 ('Sneath and Tres') 配方):-牛肉蛋白胨:17克-大豆酪蛋白胨:3克-肉汤提取物:5克-葡萄糖:2.5克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。

3. MAC琼脂培养基 (MacConkey Agar)- 麦康奈 (MacConkey) 配方:-紫胆杆菌胨:17克-葡萄糖:1.5克-硫酸盐:1.5克-中性红:0.03克-石蕊:0.3克-氯化钠:5克-地膜:10克-pH值调整到7.1-7.5-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。

4. LB琼脂培养基 (Luria-Bertani Agar)- 古斯塔夫·诺维斯 ('Gustaf Novis') 配方:-研磨大豆饼粉:10克-酵母提取物:5克-部分脱脂酪蛋白:5克-氯化钠:1克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。

5. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (Potato Dextrose Agar, PDA)- 林登麦卡蒂 ('Lindenmuth and McCarty') 配方:-马铃薯提取物:4克-葡萄糖:20克-地膜:15克-pH值调整到5.6-5.8-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。

这些是一些常用的培养基配方，适用于细菌和真菌的培养。

1．营养肉汤成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。

制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。

2．营养琼脂培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。

制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。

3．MRS培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄（琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。

糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g，制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。

4．脱脂乳培养基成分：牛奶，蒸馏水。

制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。

除去上层乳脂即得脱脂乳。

将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。

5．培养基A成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。

制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。

6．PTYG培养基成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。

制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。

盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。

7H2O 0.48g，NaCO310g，NaCL 2g，蒸馏水1000mL，溶解后备用。

营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。

用途：作普通琼脂平皿。

血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。

用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。

2．尿液，脓液3．分离细菌标本用。

基础培养基（肉膏汤BB）成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。

用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。

2 作普通琼脂斜面。

血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸［相当于10mg/毫升］）1g% 1毫升3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升4 枸椽酸钠0．3g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。

用途：作血，骨髓培养用。

肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22）克水1000毫升2%伊红溶液20毫升0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。

（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。

罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇）12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤）2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。

常用培养基的配制常用培养基的配制〔一〕营养琼脂培养基【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基根底之用。

【成分】牛肉膏 3gNaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g±0.2℃ 30min高压灭菌备用。

〔二〕蛋白胨水培养基【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。

【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g℃ 20min高压灭菌备用。

〔三〕半固体培养基【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。

【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g【pH值】7.6℃ 20min高压灭菌备用。

〔四〕营养肉汤培养基【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。

【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g牛肉粉〔牛肉浸汁〕 3g±℃ 20min 高压灭菌备用。

〔五〕葡萄糖蛋白胨水培养基【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。

【成分】蛋白胨 5g葡萄糖 5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g)【pH值】7.0～7.2【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装试管，每管2～3ml，经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。

〔六〕伊红美蓝培养基〔EMB培养基〕【用途】弱选择性培养基,用于别离肠道致病菌,特别是大肠杆菌。

【成分】蛋白胨 10g乳糖 10g 伊红 0.4g美兰 0.065g 琼脂 14g K2HPO4 2g±0.4℃ 15min高压灭菌，待冷却至60℃左右倾注灭菌平皿备用。

〔七〕S-S琼脂培养基【用途】供沙门氏菌、志贺氏菌的选择性别离培养之用。

【成分】蛋白胨 5g 乳糖 10g 牛肉粉 5g三号胆盐 3.5g 琼脂 17g 柠檬酸钠 8.5g 柠檬酸铁 1g 硫代硫酸钠 8.5g 中性红 0.025g 煌绿 0.00033g±0.1【制法】上述成分称取60g加蒸馏水1000ml，加热煮沸至完全溶解，待冷却至60℃左右倾注灭菌平皿备用。

营养琼脂对照培养基营养琼脂对照培养基产品说明：本品是一种最基本的非选择性培养基，含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖。

因含有动、植物两种蛋白质，苛养菌也可利用其中的营养进行增殖。

营养琼脂对照培养基用途：细菌计数培养基适用性试验或检验营养琼脂对照培养基注意事项：1.检查平板内是否干裂或染菌，如长菌请勿使用；2.请在洁净的环境下操作，避免杂菌干扰；3.在冰箱储存很久的培养基容易出现一些冷凝水，请在洁净的环境下将水倒出，然后在培养箱放置10-30Min，待其表面干燥后再接种；或在使用前，提前一到两周放置室温即可；4.弃物处理：使用后应高压灭菌或焚烧后按一般垃圾处理，也可按专业技术人员指示方法处理。

保存：避光保存，放于阴凉干燥处。

营养琼脂对照培养基其他相关对照培养基：硫乙醇酸盐流体对照培养基改良马丁对照培养基营养琼脂对照培养基营养肉汤对照培养基玫瑰红钠琼脂对照培养基胆盐乳糖对照培养基甘露醇氯化钠琼脂对照培养基沙氏葡萄糖肉汤对照培养基麦康凯琼脂对照培养基沙门、志贺菌属琼脂对照培养基4-甲基伞形酮葡萄苷酸（MUG)对照培养基沙氏葡萄糖琼脂对照培养基念珠菌显色对照培养基绿脓菌素测定用对照培养基基础梭菌增菌对照培养基哥伦比亚琼脂对照培养基溴化十六烷基三甲铵琼脂对照培养基基础四硫磺酸钠亮绿对照培养基基础乳糖发酵对照培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂（YPD）对照培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基胰酪大豆胨肉汤对照培养基R2A琼脂对照培养基三糖铁琼脂对照培养基麦康凯液体对照培养基紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基肠道菌增菌液体对照培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐对照培养基。