动植物油脂苯并芘含量的测定

固相萃取-高效液相色谱法测定植物油中苯并(a)芘范素芳;马俊美;俞婧;王娟;刘红冉;李强;张岩【摘要】本实验建立了基于固相萃取的高效液相色谱法测定植物油中苯并(a)芘含量.样品用正己烷溶解,经Cleanert BAP-3固相萃取小柱净化,采用C18色谱柱分离,以乙腈/水=80/20(V/V)为流动相,经荧光检测器检测.结果表明苯并(a)芘在0.50 μg /L ~ 50 μg /L浓度范围内线性良好,相关系数为0.9999,方法检出限为0.1 μg /kg,样品加标回收率为89.00% ~ 94.46%,RSD为1.0% ~ 2.2%.该方法具有快速、准确、灵敏、简单等特点,可用于植物油中苯并芘的检测.【期刊名称】《河北省科学院学报》【年(卷),期】2017(034)002【总页数】5页(P47-51)【关键词】固相萃取;高效液相色谱法;植物油;苯并(a)芘【作者】范素芳;马俊美;俞婧;王娟;刘红冉;李强;张岩【作者单位】河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室,河北石家庄050004;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室,河北石家庄 050004;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室,河北石家庄 050004;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室,河北石家庄 050004;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室,河北石家庄 050004;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室,河北石家庄 050004;河北省食品检验研究院河北省食品安全重点实验室,河北石家庄 050004【正文语种】中文【中图分类】O657苯并(a)芘又称3,4-苯并芘，是由苯环和芘分子结合而成的多环芳烃类化合物[1]，具有高度脂溶性[2]，并且性质稳定, 不易降解，是常见的高活性间接致癌物的一种，苯并(a)芘具有致畸、致突变作用[3]。

植物油是人类食用频率最高的食物之一，在油料作物的种植、加工、运输和烹调的过程中，容易污染苯并(a)芘 [4-5]，虽然含量通常较低，但其毒性较大，对油脂的营养品质和人体健康都造成的不容忽视损害。

植物油脂中苯并（a ）芘的测定-高效液相色谱法本方法参考国标方法：动植物油脂苯并（a ）芘的测定反相高效液相色谱法，GBT 22509-2008；该国标源自ISO 15302:2007，MOD 方法。

相关技术差异为：对仪器设备作了改动；氧化铝柱采用天津博纳艾杰尔科技有限公司的商品氧化铝固相萃取柱；将洗脱溶剂改为采用重蒸后的石油醚；待测液定容体积改为300µL，采用仪器自动进样，进样量为20µL；采用外标法定量计算。

方法内容：1．适用范围本方法适用于动植物油脂中苯并（a ）芘的检测。

本方法的最低检出限为0.3-0.5µg/Kg，该最低检出限为对应所使用的仪器的检出限，因此仪器荧光检测器的灵敏度对应检出限。

2．方法原理样品经石油醚溶解，通过商品氧化铝固相萃取柱（活度为Ⅳ级，粒径大小为100-200目）吸附脂肪酸等，用石油醚洗脱苯并（a ）芘，采用反相高效液相色谱法分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，采用峰面积外标法定量。

3．试剂与材料3.1 色谱纯正己烷；石油醚，每升加4g 氢氧化钾重蒸；3.2 氧化铝固相萃取柱：100-200目，brockmann 活度Ⅳ级，在室温下避光保存，天津博纳艾杰尔科技有限公司；3.3 苯并（a ）芘标准储备液：称取10mg 标准品于10ml 容量瓶中，用正己烷定容，配制的标准储备液浓度为1000mg/L；3.4 标准工作液：用正己烷稀释标准储备液，稀释的浓度为10µg/L。

4．仪器和设备4.1 旋转蒸发仪，大于150ml 的圆底旋蒸瓶或鸡心瓶，勿用平底旋蒸瓶；4.2 氮吹仪；4.3 涡旋混合器；QL-866 江苏海门产；4.4 2ml色谱瓶；4.5 250µL色谱瓶玻璃内插管；4.6 高效液相色谱仪，配自动进样器，荧光检测器。

5．样品前处理5.1 样品净化称取约0.300g 的油样，用5ml 石油醚溶解涡旋混合器上充分混匀。

分析与检测1　检测方法苯并(a)芘又称3,4-苯并芘，是由苯环构成的性质稳定的强致癌物质。

食品中本身并不含有或很少含有苯并(a)芘，但在种植、加工、运输和烹调过程中容易受到污染造成苯并(a)芘的增加。

所以，研究苯并(a)芘的检测十分重要。

我国至今已有的检测方法大致分为以下四种。

1.1　荧光分光光度法此法利用在紫外光照射的条件下，苯并(a)芘出现蓝紫色荧光斑点的特性，通过酶标仪测定的荧光强度与标准浓度曲线进行比较定量。

这种方法较为准确，但是，由于苯并(a)芘中有紫外吸收的物质比有荧光性的物质多，这种方法的应用受到很大的限制。

1.2　高效液相色谱法此法利用苯并(a)芘与植物油中其他物质的不同极性。

例如：杨燕[2]等人以甲醇∶水为流动相，使用无键合硅胶固相萃取柱处理，最后在激发波长285 nm、发射波长406 nm处进行检测。

此法虽然回收率高，但实验周期长、实验费用昂贵。

1.3　气相色谱-质谱法此法利用苯并(a)芘易溶解于有机溶剂的特性，采用正己烷等有机溶剂萃取苯并(a)芘并净化，最后用选择性离子探测的方法检测苯并(a)芘。

这种方法极易出现假阴性，不能准确测定。

1.4　电化学传感器检测此法利用BaP的氧化还原性质。

例如：Du等人[3] 在裸玻碳电极上，乙腈-水溶液的体系中，建立了一种基于电化学传感器检测植物油中苯并(a)芘残留的新方法，检测限为0.67 nmol/L。

这种方法是近几年较为流行的方法，由此也衍生出一些更为高效、方便的电化学纳米传感器、电化学免疫传感器等检测方法。

由此可见，之前流行的色谱法和光谱法因为检测周期长、检测结果准确度不高等原因，人们正在寻求更为高效、简便的方法。

在不久的将来，新兴的电化学传感技术也将不断改进和发展，苯并(a)芘的检测技术也将会更加快速、准确、高效、便捷。

2　控制方法然而，所有的检测方法都是对已有物质进行苯并(a)芘的定性定量测定，生活中控制苯并(a)芘的产生的方法对于我们来说更加重要。

2020年05月液相色谱-串联质谱法快速测定食用油中的苯并(a)芘郭芳芳高宏朱成晶（江苏省理化测试中心，江苏南京210000）摘要：文章建立了食用油中的苯并(a)芘的液相色谱-串联质谱法测定方法。

食用油中的苯并(a)芘经石油醚提取后，提取液用固相萃取吸附剂净化，洗脱，浓缩定容后经液相色谱-联质谱仪检测，采用内标法定量。

研究表明：食用油中的苯并(a)芘经石油醚提取，净化后测试线性良好，其相关系数大于等于0.999，检出限为0.1μg/kg 。

该方法操作简便、快速、灵敏高，可为其他产品中的苯并(a)芘提供参考。

关键词：液相色谱-串联质谱法；大气压化学电离；苯并(a)芘目前，食用油脂中苯并(a)芘的分析方法主要有免疫学法、表面增强拉曼光谱、气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法（GC-MS ）和液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS ）等。

由于食用油成分复杂，其中苯并(a)芘含量又较低，存在着大量的干扰物质，因此灵敏度高，抗干扰强的检测方法是必要的。

GC-MS 法由于灵敏度不高，热稳定性较差，在很多时候使用受到了限制。

高效液相色谱法定性能力不够；表面增强拉曼光谱还不够成熟，应用较少，定量分析时还不够准确；免疫学检测灵敏度不高；LC-MS/MS 法却能同时提高灵敏度和提升定性能力，目前运用LC-MS/MS 测定食用油脂中苯并(a)芘鲜有报道。

文章是针对食用油中苯并(a)芘快速检测的应用研究，可用于批量样品的高通量筛查，提高工作效率，也可用于突发食品中毒分析，这些对保护人类健康具有重要的意义。

本文建立的这种液相色谱-串联质谱法测定食用油脂中苯并(a)芘的方法，快速，简便，高效，定量准确。

1实验部分1.1仪器与试剂Agilent-1260-6430液质联用仪。

石油醚，南京化学试剂股份有限公司；乙腈，德国默克有限公司。

1.2色谱条件色谱柱：C1850×2.1mm 1.8um 柱温：40℃流动相：乙腈/水＝80/20流速：0.6ml/min 进样量：20uL 1.3标准溶液的配制苯并(a)芘标准储备溶液的制备：准确移取1mL 100μg/mL 苯并(a)芘标准品于10mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度线，-20℃保存备用。

分析检测高效液相色谱法测定煎炸油中的苯并(a)芘含量倪　涵（云南省红河州质量技术监督综合检测中心，云南红河 661100）摘　要：采用液相色谱法测定煎炸油中苯并(a)芘（BaP）的含量，优化了样品前处理方法。

样品用正己烷提取，经SPE小柱净化，荧光检测器检测。

结果表明，苯并(a)芘含量在0.5～20.0 ng·mL-1线性关系良好，相关系数R2为0.999 8，检出限为0.15 μg·kg-1，定量限为0.5 μg·kg-1，3个不同加标浓度下的平均回收率为89.1%～97.8%，相对标准偏差为0.8%～2.1%，方法灵敏度高，稳定性好。

采集21份小吃店里油炸过油条、土豆、肉制品的煎炸油样品进行检测，苯并(a)芘的检出率为100%，含量为2.82～9.23 μg·kg-1。

关键词：高效液相色谱；苯并(a)芘；固相萃取Determination of Benzo(a)pyrene Content in Frying Oil byHPLCNI Han(Comprehensive Quality and Technical Supervision and Testing Center of Honghe Prefecture, Yunnan Province,Honghe 661100, China)Abstract: The content of benzo(a)pyrene (BaP) in frying oil was determined by HPLC, and the sample pretreatment method was optimized. The sample was extracted with n-hexane, purified by an SPE column, and detected by fluorescence detector. The results showed that the linear relationship of BaP was good within the mass concentration range of 0.5～20.0 μg·kg-1, with a correlation coefficient of R2=0.999 8 and a detection limit of 0.15 μg·kg-1 with a quantitative limit of 0.5 μg·kg-1. The average recoveries under three different spiking gradients at 89.1%～97.8%, respectively, RSD ranging from 0.8% to 2.1%. The method has high sensitivity and good stability.21 fried oil samples of deep-fried dough sticks, potatoes and meat products from snack bars were collected for detection. The detection rate of BaP was 100%, and the content range was 2.82～9.23 μg·kg-1.Keywords: high performance liquid chromatography; benzo(a)pyrene; solid phase extraction苯并(a)芘（Benzo(a)pyrene，BaP）是毒性最强的多环芳烃类物质[1-2]，食品在油炸、煎烤、熏制等烹调加工过程中，其脂肪、蛋白质、胆固醇、碳水化合物等营养成分会在高温条件下发生热裂解反应，再经过环化和聚合反应生成包括BaP在内的多环芳烃类物质。

SPE ProElut Al-N 22 g/60mL Diamonsil C18(2)250×4.6 mm 5 µm Cat.#99603::植物油中苯并芘的测定
序列号：适用范围
样品准备提取
柱净化级活度分析条件
添加回收结果
DM-P-007
1 2 /0.4 g 0.001 g 5 mL 3——()
(1) 30 mL (2) (3) 50 mL (4)30-( 9 :
1 ) 1 mL HPLC 4 1.0 mL/min *
384 nm 406 nm 305 µL = 9735(mg/kg)/%RSD(*=4)/%0.196.8 2.300.0198.5 4.50
适用于植物油中苯并芘的检测。

用玻璃烧杯称取试样，精确到，用正己烷溶解稀释，作为上样液待净化。

活化：正己烷，流出液弃去；
上样：将待净化液加入小柱，流出液弃去；
淋洗：正己烷淋洗，收集流出液；
重新溶解：在℃下用减压蒸馏将收集液蒸干，然后用乙腈四氢呋喃溶液定容至后供分析。

色谱柱：
流速：
检测器：激发波长：发射波长：柱温：
℃进样量：
流动相：乙腈水分析物
添加水平回收率苯并芘
苯并芘Ⅳ，（：）
n
7.08.09.0
10.011.012.0
Time (min)1
mg/kg 1植物油中苯并芘（添加水平０．０１　）的液相色谱图
苯并芘。

高效液相色谱法测定植物油中苯并（α）芘含量及其不确定度分析摘要目的：对高效液相色谱法测定植物油脂中苯并（α）芘含量的测量不确定度进行分析，为评价检测数据的准确性提供科学依据。

方法：用HPLC法测定植物油中苯并（α）芘的含量，并根据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059—1999) 中有关规定评估其不确定度。

结果：取样量2.00g时，测定植物油中苯并（α）芘含量为(100.00±6.42)μg/kg。

结论：本方法适用于高效液相色谱法测定植物油中苯并[α] 芘的不确定度评定。

关键词：测量不确定度；高效液相色谱法；苯并（α）芘；植物油Uncertainty Evaluation of Determination of Benzo [α] pyrene in Vegetable Oil with HPLCAbstract Objective: To analyze the measurement uncertainty of determination of benzo [α] pyrene in vegetable oil with High Performance Liquid Chromatography, and to provide a scientific basis for evaluating the detection accuracy. Methods: We determinated the content of benzo [α] pyrene in vegetable oil with HPLC, and evaluated the uncertainty of the measurement according to JJF1059-1999. Results: The benzo [α] pyrene content was (100.00±6.42) μg/kg in vegetable oil， when we Repeatedly determinated the sample (weighed 2.00 g). Conclusion: This method is applicable to the uncertainty evaluation of HPLC determination of benzo [α] pyrene in vegetable oil.Keywords: measurement uncertainty; performance liquid chromatography; benzo [α] pyrene; vegetable oil苯并（α）芘（Benzo(a)pyrene，BaP）是一种强致癌物质，食品植物油的理化指标中规定苯并（α）芘的含量要低于10μg/kg[1]。