微生物的培养与应用

鉴别
琼脂（或凝固剂）
（3） 通过观察产生透明圈的不同菌落,该实验室提出山羊瘤胃中存在多种纤维素分解菌的观点,他们的实验依据是___________________________________________。
（4） 将不同纤维素分解菌纯化培养,并对其纤维素酶种类进行比较,发现均至少包括三种组分,即___________________________。若定量比较不同微生物纤维素酶的活性高低,应如何操作？写出简要的实验思路：_______________________________________________________________________________________________________________________。
（1） 为保证分离得到纤维素分解菌,所取的土壤样品应具有什么特点？_____________。
富含纤维素
[解析] 纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中,因此为保证分离到纤维素分解菌,所取的土壤样品应该富含纤维素。
（2） 选择培养时,应选择_______（填“液体”或“固体”）培养基,原因是____________________________________________________________。
（5） 挑选透明圈较大的菌落进一步扩大培养若干天后,将发酵液离心、取上清液、浓缩、冻干,即获得纤维素酶冻干粉。测定该纤维素酶活性的一般方法是__________________________________________________。
对纤维素酶分解纤维素后产生的葡萄糖进行定量测定
[解析] 纤维素分解菌可以产生纤维素酶,纤维素酶是一种复合酶,包括 酶、 酶和葡萄糖苷酶等,纤维素酶能将纤维素分解形成葡萄糖,因此测定该纤维素酶活性的一般方法是对纤维素酶分解纤维素后产生的葡萄糖进行定量测定。

3g
1g 0．5 g 0．5 g 0．01 g 30 g 1 000 mL 0．1万单位
(1)依物理状态，该培 液体 养基属于________培 养基；依用途划分， 选择 则属于________培养 基。 (2)根据培养基的配方 可判断出，该培养基 所培养微生物的同化 作用的类型是 异养型 ________，培养的微 生物可能是 酵母菌或霉菌 ________ 。
水不仅是优良溶剂，而且可维
持生物大分子的稳定；无机盐 是细胞内成分和调节物质 外界摄入
2．培养基的种类
(1)按物理状态分类： 培养基种类 特点 用途
液体培养基
固体培养基
不加凝固剂
加凝固剂 (如琼脂)
工业生产
微生物分离、鉴定， 活菌计数，菌种保藏
(2)按功能分类：
种类 制备方法 原理 依据某些微 选择培 培养基中加入 生物对某些 养基 某些化学物质 物质的抗性 而设计 鉴别培 养基 培养基中加入 产生特定的 用途 举例
一、微生物的实验室培养
1．培养基 (1)培养基即人们按照 微生物对营养物质的不同需求 ， 配制出供其生长繁殖的基质。 (2)按物理状态，可将培养基划分为液体 培养基和 固体培 养基(如琼脂培养基)。 （3）按功能，可将培养基划分为 选择 培养基 和 鉴别 培养基(如琼脂培养基)。 (4)培养基一般都含有的成分是：水、碳源、氮源和无机盐 ， 在此基础上还需满足微生物生长对 pH、特殊营养物质 及氧气 的需求。
2．消毒和灭菌 项目 条件 消毒 使用 较为温和 化方法 的理 灭菌 使用 强烈 的理化因素
结果
杀死物体表面或内部 一部分对人体有害的 杀死物体内外 所有的 微生物(不包括芽孢和 微生物，包括芽孢和
孢子) 孢子

微生物的培养与应用知识点
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

在数次划线后，就可以得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。

稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。

5、微生物的分离和计数
(1)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
①筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。

②测定微生物数量的常用方法：统计菌落数目和显微镜直接计数。

③土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。

(2)分解纤维素的微生物的分离
①实验原理即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

②流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选菌落。

第42课时 微生物的培养与应用
步步高
第十一单元 生物技术实践
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(4)通常情况下 ，在微生物培养过程中，实验室常用的 灭菌方法有灼烧灭菌、___________和___________。无菌技 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰 术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围
环境中微生物的污染。
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3．复习指导 (1)复习线索 ①以转基因——微生物培养——酶生产——酶应用为线索， 系统复习微生物培养技术、酶的研究和实践应用。 ②以技术手段、技术流程为主线，复习发酵、组织培养、 DNA与蛋白质提取有关知识。
(2)复习方法 ①列表比较法——DNA、蛋白质的提取与分离。
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对位训练
2．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关 的叙述中，不正确的是 ( ) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭 菌后倒平板 B．取10－4、10－5的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组 平板上 C．将培养皿倒置，37 ℃恒温培养24～48小时 D．选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数
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2.划分依据：自养微生物与异养微生物类型划分的主要 依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源，而与氮源 无关。自养微生物以CO2或碳酸盐为主要或唯一碳源进行代谢 生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。 3．自养微生物的能源 (1)利用光能，如蓝藻等。 (2)依靠物质氧化过程中释放的能量，如硝化细菌，能利 用NH3氧化过程中释放的化学能，NH3既作为氮源，又作为能源。 4．异养微生物的能源 主要来源于有机物的氧化分解，碳源不仅为异养微生物 提供构成细胞的物质，而且提供完成整个生命活动所需的能 量。