【检验医学】方法学评价实验

自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。

ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。

一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。

用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。

葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。

在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。

【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。

2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。

3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。

二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。

他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。

可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。

以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。

【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。

2．其他注意事项参见340nm K值校正。

三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。

乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证摘要目的：对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。

方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒HBsAg标准品从浓度为8ng/ml做2倍稀释的6个浓度梯度做标准曲线，以6，3，1.5ng/ml 3个浓度梯度5复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证。

结果：标准曲线R2=0.997，准确度97.07%，1.5ng/ml的RSD为16.78%，不满足ng/ml级水平的RSD一般应<15%的要求，检测限LOD为0.172ng/ml，低浓度样品（<1.5ng/ml）的检测在准确性和精密度方面都低于高浓度样品，不适合低浓度样品的检测。

结论：该HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒不能用于临床标本的分析。

关键词：乙肝表面抗原 ELISA 定量分析方法学验证前言乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。

随着免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1]。

ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。

目前临床上多倾向于做定量分析，若想知道检验结果是否可靠，实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证，本实验对福州蓝图生物工程有限公司生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行准确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下。

1. 材料与方法1.1 试剂盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品。

1.2 仪器酶标仪：Bio-Rad 680 ；洗板机：Bio-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix ；电热恒温培养箱(DNP-9052)上海精宏实验设备有限公司；振荡器（苏州管械，KJ-201A）；移液器；Tip头；EP管。

五种胱抑素C试剂的方法学性能评价赵世巧陈忠余* 梁华郭广波孙伟（重庆市中医院检验科，400021）摘要：目的对五个不同厂家血清胱抑素C(CysC)检测系统的分析性能进行评价和验证。

方法采用美国雅培C16000全自动生化分析仪与五个不同厂家胱抑素C试剂组成的检测系统测定血清胱抑素C，评价的方法学性能指标为精密度、线性、抗干扰性及偏倚。

结果CysC浓度在0.9～7.1mg/L时，各厂家试剂总不精密度（CV）＜6%。

在0.6～5.6mg/L浓度范围，各厂家均有良好的线性范围。

血清中一定浓度的胆红素、血红蛋白和乳糜物对五个厂家的CysC的测定结果产生不同程度的影响，但与厂家声明相符。

除利德曼外各厂家的偏倚均<15%。

结论五个厂家CysC 试剂的主要分析性能：精密度、线性、抗干扰性、偏倚的验证结果与厂家声明基本一致，但利德曼试剂测定结果与Randox质控品存在偏差。

【关键词】胱抑素C；分析性能；评价Methodology p erformance evaluation on five kind s of Cysteine proteinase inhib itors C reagent kits.(ZHAO Shi-Qiao,CHEN Zhong-Y u,LIANG H ua,Department of clini cal laboratory, Hospital of traditi onal chinese medi cine of Chongqing,China,400021)Objective To eval uate and veri fy the analyti c performance on five kinds of Cysteine proteinase inhibitors C(Cys C) reagent kits. M ethod s Cys C was detected by Abbott C16000 automati c biochemi cal anal yzer and f ive kinds of Cys C reagent,The preci sion,lineari ty,interference and bias of five testi ng systems were analyzed. Results The total CV of the samples that contain 0.9～7.1mg/L were all less than 6%.Within the range 0.6～5.6mg/L,five kinds of reagent ki ts showed good linearity.The detecti on outcome was i nterfered to vari ous degree by bilirubin,haematogl obin and chyle,but the i nterference was consistent wi th manufa cturer’s cl aimed.The others four kinds of reagents of bias were l ess than 15%,except for LEADMAN reagent. Conclusion The primary analyti c performance veri fi cation results of five manufacturer i ncl uding the preci sion,lineari ty,i nterference and bias are consi stent wi th the analyti cal performance defi ned by manufacturer,but there was bias between the results of LEADMAN and Randox control material s.【K ey word s】Cysteine proteinase inhibi tors C；A nalyti c performance;Evaluation为保证质量，临床实验室在建立或引进新的检验项目时，应对检测方法的基本性能进行评价，证实其能够满足临床预期用途【1，2】。

三种梅毒抗体检测的方法学评价摘要目的：探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、胶体金免疫层析法（GICA）对梅毒的诊断价值。

方法：对200份梅毒阳性标本和200份梅毒阴性标本采用ELISA、TRUST、GICA三种方法进行检测。

结果：ELISA的敏感度为100%，特异性为100.0%，TRUST的灵敏度为52.5%，特异性为100%，GICA的灵敏度为99%，特异性为100.0%。

ELISA与TRUST的灵敏度比较，差异有统计学意义（X?=9.41，P＜0.05），GICA与TRUST 的灵敏度比较，差异有统计学意义（X?=9.38，P＜0.05），ELISA与GICA的灵敏度比较无显著差异。

结论：用GICA对梅毒进行筛查，ELISA双抗原夹心法对梅毒进行确诊，并用ELISA结合TRUST进行疗效判断，既能快速筛查又具备较高特异性，是较为理想的梅毒血清学检查项目组合。

标签：梅毒抗体，酶联免疫吸附试验，甲苯胺红不加热血清试验，胶体金免疫层析法梅毒属于一种性传播疾病，病原体为苍白密螺旋体苍白亚种，又称梅毒螺旋体，梅毒螺旋体主要通过性接触直接传染，手术、哺乳、输血、接触污染物也可被传染【1】。

近年来为控制梅毒的传播，多数医院对手术、输血及各种创伤性检查的患者都进行梅毒的实验室检查【2】。

机体感染梅毒螺旋体后可产生特异性抗螺旋体抗体（TP-Ab）和非特异性抗类脂质抗体。

TP-Ab是诊断梅毒螺旋体感染的依据。

因此，选择灵敏度高的实验室检测方法，对梅毒的早期诊断早期治疗，尤其对控制其蔓延至关重要。

为了解酶联免疫吸附试验（ELISA）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、胶体金免疫层析法（GICA）灵敏度和特异性的差异，作者对200份梅毒阳性标本和200份梅毒阴性标本分别进行检测，现将结果报告如下。

1 资料与方法1.1一般资料收集梧州红十字会医院2014年1月至2014年3月住院及门诊被确诊为梅毒患者的200份阳性血清作为实验组，其中男性105例，女性95例，年龄22-70岁；同期本院经健康体检为健康人的200份梅毒阴性血清为健康对照组，男98例，女性102例，年龄20-75岁。

㊃论 著㊃D O I :10.3969/j.i s s n .1672-9455.2023.18.002肉汤纸片洗脱法和全自动药敏系统应用于黏菌素药敏试验的方法学评价*周春妹,黄嘉仪,黄声雷,马 艳,单玉璋,沈佳瑾,王蓓丽,潘柏申,郭 玮ә复旦大学附属中山医院检验科,上海200032摘 要:目的 评估黏菌素肉汤纸片洗脱法(C B D E )和全自动药敏系统检测肠杆菌目细菌对黏菌素体外药敏结果的可靠性㊂方法 选取2021年1 6月该院临床分离的肠杆菌目细菌133株,根据欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(E U C A S T )公布的黏菌素的折点判断标准,使用C B D E 和两种全自动药敏系统检测分离株对黏菌素的最低抑菌浓度(M I C ),以肉汤微量稀释法(B M D )为参考方法,分析3种方法和B M D 的基本一致率(E A )㊁分类一致率(C A )㊁重大误差(M E )和非常重大误差(VM E )㊂结果 与B M D 比较,C B D E ㊁P h o e n i x NM I C -413和V i t e k C o m pa c t Ⅱ-G N 335检测大肠埃希菌对黏菌素敏感性的E A 分别为98.5%㊁97.0%和98.5%,C A 分别为100.0%㊁97.0%和98.5%,M E 均为0.0%,VM E 分别为0.0%㊁28.6%和14.3%㊂与B M D 比较,C B D E ㊁P h o e n i x NM I C -413和V i t e k C o m p a c t Ⅱ-G N 335检测肺炎克雷伯菌对黏菌素敏感性的E A 分别为97.0%㊁92.4%和92.4%,C A 分别为100.0%㊁92.4%和92.4%,M E 均为0.0%,VM E 分别为0.0%㊁10.9%和10.9%㊂结论 C B D E 可以作为微生物室检测肠杆菌目细菌对黏菌素敏感性的可靠方法㊂由全自动药敏分析系统判读为对黏菌素敏感的肠杆菌目细菌需使用B M D 进行复核㊂关键词:黏菌素; 微量肉汤稀释法; 黏菌素肉汤纸片洗脱法; 体外药敏试验中图法分类号:R 446.5文献标志码:A文章编号:1672-9455(2023)18-2633-05M e t h o d o l o g i c a l e v a l u a t i o n o n a p pl i c a t i o n o f c o l i s t i n b r o t h d i s k e l u t i o n m e t h o d a n d f u l l -a u t o m a t i c a n t i m i c r o b i a l s e n s i t i v i t y s y s t e m i n c o l i s t i n s u s c e p t i b i l i t yt e s t *Z H O U C h u n m e i ,HU A N G J i a y i ,HU A N G S h e n g l e i ,MA Y a n ,S HA N Y u z h a n g ,S H E N J i a ji n ,WA N G B e i l i ,P A N B o s h e n ,G U O W e i әD e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y ,A f f i l i a t e d Z h o n g s h a n H o s pi t a l ,F u d a n U n i v e r s i t y ,S h a n gh a i 200032,C h i n a A b s t r a c t :O b je c t i v e T o e v a l u a t e t h e r e l i a b i l i t y of c o l i s t i n b r o t h d i s k e l u s i o n (C B D E )a n d f u l l -a u t o m a t i c a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i ng (A S T )s y s t e m f o r d e t e c t i n g th ei n v i t r o a n t i m i c r o b i a l s e n s i t i v i t y re s u l t s of E n t e r o b a c t e r a l e s b a c t e r i a t o c o l i s t i n .M e t h o d s A t o t a l o f 133s t r a i n s o f c l i n i c a l l y is o l a t e d E n t e r o b a c t e r a l e s b a c t e r i a w e r e s e l e c t e d f r o m J a n u a r y t o J u n e 2021.A c c o r d i n g t o t h e B r e a k i n g Po i n t C r i t e r i a o f C o l i s t i n p u b -l i s h e d b y E u r o p e a n C o mm i t t e e f o r A n t i m i c r o b i a l S u s c e p t i b i l i t y T e s t i n g (E U C A S T ),C B D E a n d t w o k i n d s o f f u l l -a u t o m a t i c A S T w e r e u s e d t o d e t e c t t h e m i n i m u m i n h i b i t o r y co n c e n t r a t i o n (M I C )o f t h e i s o l a t e d s t r a i n t o c o l i s t i n .T h e b r o t h m i c r o d i l u t i o n (B M D )m e t h o d w a s u s e d a s t h e r e f e r e n c e m e t h o d .T h e e s s e n t i a l a g r e e m e n t (E A ),c a t e g o r y a g r e e m e n t (C A ),m a j o r e r r o r (M E )a n d v e r y m a j o r e r r o r (VM E )o f t h r e e m e t h o d s a n d B M D w e r e a n a l y z e d .R e s u l t s C o m p a r e d w i t h B M D ,E A o f C B D E ,P h o e n i x NM I C -413a n d V i t e k C o m pa c t Ⅱ-G N 335i n d e t e c t i n g t h e s e n s i t i v i t y o f E s c h e r i c h i a c o l i t o c o l i s t i n w e r e 98.5%,97.0%,a n d 98.5%,r e s p e c t i v e l y;C A w e r e 100.0%,97.0%,a n d 98.5%,r e s p e c t i v e l y;M E a l l w e r e 0.0%,a n d VM E w e r e 0.0%,28.6%,a n d 14.3%,r e s p e c t i v e l y .C o m p a r e d w i t h B M D ,E A o f C B D E ,P h o e n i x NM I C -413a n d V i t e k C o m p a c t Ⅱ-G N 335i n -d e t e c t i n g t h e s e n s i t i v i t y o f K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e t o c o l i s t i n b y u s i n g th e s e t h r e e m e t h o d s w e r e 97.0%,92.4%,a n d 92.4%,r e s p e c t i v e l y ;C A w e r e 100.0%,92.4%a n d 92.4%,r e s p e c t i v e l y ;M E a l l w e r e 0.0%,VM E w e r e 0.0%,10.9%a n d 10.9%,r e s p e c t i v e l y.C o n c l u s i o n C B D E c o u l d b e u s e d a s a r e l i a b l e m e t h o d f o r t h e c l i n i c a l m i c r o b i o l o g y l a b o r a t o r y i n d e t e c t i n g t h e a n t i m i c r o b i a l s e n s i t i v i t y of E n t e r o b a c t e r a l e s b a c t e r i a t o c o l i s t i n .T h e s t r a i n s o f E n t e r o b a c t e r a l e s b a c t e r i a w h i c h i s j u dg e d t o b e s e n s i t i v e t o c o l i s t i n b y A S T s ys t e m ㊃3362㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n ,S e pt e m b e r 2023,V o l .20,N o .18*基金项目:上海市科委应急科技攻关基金资助项目(20411950500);病原微生物生物安全国家重点实验室开放课题资助项目(S K L P B S 2144)㊂ 作者简介:周春妹,女,副主任技师,主要从事病原体耐药机制方面的研究㊂ ә通信作者,E -m a i l :g u o .w e i @z s -h o s pi t a l .s h .c n ㊂Copyright ©博看网. All Rights Reserved.n e e d s t o b e r e-c h e c k e d b y B M D.K e y w o r d s:c o l i s t i n; m i c r o b r o t h d i l u t i o n m e t h o d;c o l i s t i n b r o t h d i s k e l u s i o n m e t h o d;i n v i t r o a n t i-m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t黏菌素是从多黏杆菌中分离的一种多肽类杀菌剂,其杀菌机制是通过分子中的聚阳离子环与革兰阴性杆菌细胞膜上的磷酸基结合,使细胞膜通透性增加,从而导致细胞内的嘌呤㊁嘧啶等小分子物质外漏,最终使细菌膨胀㊁溶解㊁死亡[1]㊂由于存在肾毒性和神经毒性等严重药物不良反应,黏菌素一度在临床上被停止使用[2]㊂但近几年随着多重耐药甚至泛耐药的革兰阴性杆菌感染比例不断升高,如何遏制耐药革兰阴性菌的传播并合理使用抗菌药物提高抗感染治疗成功率成为临床亟须解决的问题[3]㊂黏菌素类抗菌药物作为少数几种对泛耐药的革兰阴性杆菌保持较好体外抗菌活性的药物之一,在2017年被国家食品药品监督管理总局批准重新用于抗感染治疗[4]㊂由于黏菌素中阳性离子团与琼脂的静电相互作用使其不易溶于琼脂,难以在琼脂内扩散,导致扩散方法的准确性较差[5],因此2016年欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(E U C A S T)和美国临床和实验室标准协会(C L S I)联合声明不推荐使用琼脂稀释法㊁纸片扩散法和浓度梯度扩散法用于常规检测黏菌素类药物的敏感性,并建议临床实验室使用微量肉汤稀释法(B M D)㊂为了减少实验室成本和方便操作,2020年C L S I又推出了黏菌素肉汤纸片洗脱法(C BD E)作为检测革兰阴性杆菌对黏菌素敏感性的方法㊂本研究评估了C B D E和自动化药敏系统与参考方法B M D检测革兰阴性杆菌对黏菌素药敏结果的一致性,现将结果报道如下㊂1材料与方法1.1菌株来源收集2021年1-6月本院临床标本分离的非重复黏菌素耐药菌株和随机选取等量的敏感菌株共133株革兰阴性杆菌,其中大肠埃希菌67株㊁肺炎克雷伯菌66株㊂本研究获得本院医学伦理委员会批准㊂1.2仪器与试剂基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪㊁V i t e k C o m p a c tⅡ全自动药敏分析仪和A S T-G N335药敏卡购自法国生物梅里埃公司;P h o e n i x M50全自动药敏分析系统及P h o e n i x NM I C-413药敏卡购自美国B D公司;黏菌素纸片(10微克/片)㊁阳离子调节肉汤(C AMH B)㊁B M D-96孔板(测定浓度为0.06~32m g/L)均购自温州康泰生物科技有限公司㊂药敏试验质控菌株为大肠埃希菌A T C C25922㊁铜绿假单胞菌A T C C27853和大肠埃希菌M C R-1阳性N C T C13846,以上菌株均购自上海市临床检验中心㊂1.3方法1.3.1 C B D E和B M D C B D E根据C L S I M100-S30文件推荐操作进行㊂具体做法如下:将C AMH B试管和黏菌素纸片恢复至室温㊂在含有10m L C AMH B 试管中加入不同数量的黏菌素纸片,以制作含0μg/ m L(不放纸片)㊁1μg/m L(加1个纸片)㊁2μg/m L(加2个纸片)和4μg/m L(加4个纸片)最终黏菌素浓度的肉汤㊂将加入纸片的试管在室温下轻轻漩涡振荡洗脱30~60m i n㊂在10m L管中加入50μL0.5麦氏浊度的菌悬液,使最终接种浓度为7.5ˑ105C F U/ m L㊂用10μL接种环取原始接种物至血平板上纯培养㊂加入纸片的C AMH B试管在低速下短暂涡旋,混匀,防止黏菌素黏附于盖子或液面上方的玻璃表面㊂轻轻松开盖子,将试管和平板在35ħ的环境中孵育16~20h后,记录最低抑菌浓度(M I C)㊂B M D具体操作如下:黏菌素微量肉汤稀释板和C AMH B试管恢复至室温㊂200μL C AMH B试管中加入10μL的0.5麦氏浊度受试菌悬液,然后取100μL加入黏菌素微量肉汤稀释板孔内㊂在35ħ的环境中孵育16~20 h后,记录M I C㊂黏菌素的判断标准根据E U C A S T 的折点表10.0版进行解释,即M I Cɤ2m g/L判为敏感,M I C>2m g/L判为耐药㊂为了保证测试菌的同质性,同一株待测菌的所有测试均在同一天进行㊂1.3.2细菌鉴定和全自动药物敏感性试验使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪将分离菌鉴定到种㊂分别使用V i t e k C o m p a c tⅡ全自动药敏分析仪及A S T-G N335药敏卡(黏菌素检测浓度为0.5~16 m g/L)和P h o e n i x M50全自动药敏分析系统及P h o e-n i x NM I C-413药敏卡(黏菌素检测浓度为1~4 m g/L)进行黏菌素的药敏试验㊂具体操作步骤参考厂家的说明书㊂1.4观察指标根据我国2018年发布的W S/ T639 2018‘抗菌药物敏感性试验的技术要求“,以B M D为本研究参考方法,评估方法学的指标如下:(1)基本一致性(E A)㊂E A是指被评估方法检测M I C 与B M D的M I C值之间相差ʃ1个稀释度的菌株百分比㊂(2)分类一致性(C A)㊂C A是指按照药物敏感性折点标准判读为敏感和耐药一致的菌株百分比㊂(3)重大误差(M E)㊂M E是指菌株在同一折点判断标准下,被评估方法将敏感判定为耐药的百分比(即假耐药率,分母是参考方法检测出的敏感菌株数)㊂(4)非常重大误差(VM E)㊂VM E是指菌株在同一折点判断标准下,被评估方法将耐药判定为敏感的百分比(即假敏感率,分母是参考方法检测出的耐药菌株㊃4362㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n,S e p t e m b e r2023,V o l.20,N o.18Copyright©博看网. All Rights Reserved.数)㊂当C A和E A均ȡ90%且所有耐药菌株的VM E 以及所有敏感菌株的M E均ɤ3%时,作为评估方法的可接受标准㊂1.5统计学处理采用S P S S23.0软件进行数据处理㊂计数资料以例数或百分率表示,对3种方法检测结果与B M D结果的一致性分析使用K a p p a检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1 B M D检测黏菌素的结果 B M D检测133株菌株对黏菌素的耐药率为39.8%(53/133),M I C50为1μg/m L,M I C90为64μg/m L㊂其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对黏菌素的耐药率分别为10.4%(7/67)和69.7%(46/66)㊂B M D检测黏菌素M I C的分布见表1㊂2.2 C B D E检测黏菌素的结果以及与B M D结果比较使用C B D E检测,133株菌株对黏菌素的耐药率为39.8%(53/133),M I C50为ɤ1μg/m L,M I C90为> 4μg/m L㊂其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对黏菌素的耐药率分别为10.4%(7/67)和69.7%(46/66)㊂C B D E和B M D结果比较:C B D E检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌总体的E A为97.7%,C A为100.0%, M E和VM E均为0.0%㊂见表2㊂2.3 P h o e n i x NM I C-413检测黏菌素的结果以及与B M D结果比较使用P h o e n i x NM I C-413药敏卡检测,133株菌株对黏菌素的耐药率为34.6% (46/133),M I C50为ɤ1μg/m L,M I C90为>4μg/ m L㊂其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对黏菌素的耐药率分别为7.5%(5/67)和62.1%(41/66)㊂与B M D结果比较,NM I C-413药敏卡检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌总体的E A和C A均为94.7%,M E为0.0%,VM E为13.2%㊂见表3㊂2.4 V i t e k C o m p a c tⅡ-G N335检测黏菌素的结果以及与B M D结果比较使用V i t e k C o m p a c tⅡ-G N335药敏卡检测,133株菌株对黏菌素的耐药率为35.3% (47/133),M I C50为ɤ0.5μg/m L,M I C90为ȡ16.0μg/m L㊂其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对黏菌素的耐药率分别为8.9%(6/67)和62.1%(41/66)㊂与B M D结果比较,V i t e k C o m p a c tⅡ-G N335药敏卡检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌总体的E A和C A均为95.5%,M E为0.0%,VM E为11.3%㊂见表4㊂2.5一致性分析 C B D E㊁P h o e n i x NM I C-413和V i t e k C o m p a c tⅡ-G N335检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对黏菌素敏感性的结果与B M D的检测一致性分析显示,K a p p a值分别为1.000(P=0.0001)㊁0.888(P=0.0001)和0.904(P=0.0001)㊂表1 B M D检测黏菌素M I C的分布细菌名称菌株数(n)M I C50(μg/m L)M I C90(μg/m L)M I C分布菌株数(n)ɤ0.25μg/m L0.5μg/m L1μg/m L2μg/m L4μg/m L8μg/m L16μg/m L32μg/m L64μg/m L>64μg/m L大肠埃希菌670.543315102231001肺炎克雷伯菌6632>64739130213199合计1331644018193533131910表2 C B D E检测黏菌素的结果及与B M D比较细菌名称菌株数(n)M I C50(μg/m L)M I C90(μg/m L)M I C分布菌株数(n)ɤ1μg/m L2μg/m L4μg/m L>4μg/m LE A(%)C A(%)M E(%)VM E(%)大肠埃希菌67ɤ145285298.5100.00.00.0肺炎克雷伯菌66>4>418234397.0100.00.00.0合计133ɤ1>4701084597.7100.00.00.0表3 P h o e n i x NM I C-413检测黏菌素的结果及与B M D比较细菌名称菌株数(n)M I C50(μg/m L)M I C90(μg/m L)M I C分布菌株数(n)ɤ1μg/m L2μg/m L4μg/m L>4μg/m LE A(%)C A(%)M E(%)VM E(%)大肠埃希菌67ɤ146114197.097.00.028.6肺炎克雷伯菌66>4>425004192.492.40.010.9合计133ɤ1>486144294.794.70.013.2㊃5362㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n,S e p t e m b e r2023,V o l.20,N o.18Copyright©博看网. All Rights Reserved.表4 V i t e k C o m p a c tⅡ-G N335检测黏菌素的结果及与B M D比较细菌名称菌株数(n)M I C50(μg/m L)M I C90(μg/m L)M I C分布菌株数(n)ɤ0.5μg/m L1μg/m L2μg/m L4μg/m L8μg/m Lȡ16μg/m LE A(%)C A(%)M E(%)V M E(%)大肠埃希菌67ɤ14610002498.598.50.014.3肺炎克雷伯菌66>4>42401014092.492.40.010.9合计133ɤ0.5>48501034495.595.50.011.33讨论2017年世界卫生组织把耐碳青霉烯类的革兰阴性菌列为全球耐药的紧急威胁,并将研发针对性抗菌药物列为最高优先等级㊂黏菌素作为 老药新用 的代表已成为目前临床对抗耐碳青霉烯类的革兰阴性菌重要 武器 之一[6]㊂随着黏菌素在临床的使用量不断增加,其耐药率也逐年上升[7],这要求微生物实验室需提供快速并准确的黏菌素药敏结果以满足临床合理使用抗菌药物的要求㊂为了应对这种情况, E U C A S T/C L S I指南均添加了黏菌素类的药敏检测方法和对应判读折点,且每年都进行更新㊂E U C A S T 和C L S I目前首选推荐使用B M D进行多黏菌素B和黏菌素的药敏试验㊂但是由于B M D相较于纸片法以及商品化全自动药敏系统,操作烦琐且成本较高,限制了其在微生物实验室常规工作中的广泛使用㊂国外学者HUM P H R I E S等[8]在2019年对C B D E进行了评估,共检测了498株革兰阴性杆菌(包括肠杆菌目细菌270株㊁铜绿假单胞菌122株和鲍曼不动杆菌106株),总体上94.4%C B D E的M I C值与参考方法B M D的M I C值基本一致,97.9%C B D E的判读结果与参考方法B M D的判读结果分类一致;498株细菌C B D E检测的VM E和M E分别为3.2%和0.9%,其中肠杆菌目细菌C B D E检测的C A为98.6%㊁VM E 为2.5%㊁M E为0%,铜绿假单胞菌检测C B D E的C A为99.3%㊁VM E为0%㊁M E为0.7%,不动杆菌检测C B D E的C A为93.1%㊁VM E为5.6%㊁M E为3.3%㊂正是基于这个研究数据,2020年C L S I批准了C B D E成为检测肠杆菌目细菌和铜绿假单胞菌的黏菌素体外敏感性的试验方法,但是目前国内有关C B D E的研究报道较少㊂本研究为了验证C B D E方法的准确性,共检测了133株肠杆菌目细菌㊂研究结果发现,97.7%C B D E 的M I C值和参考方法B M D的M I C值基本一致,只有3株细菌(1株大肠埃希菌和2株肺炎克雷伯菌)的两个方法的M I C值相差大于1个稀释度㊂在判读结果分类一致性上,C B D E的判读结果与参考方法B M D 的结果100.0%相同㊂国内学者黄丽等[9]对C B D E的研究结果显示,C B D E检测肠杆菌目细菌对黏菌素敏感性的E A为90.3%㊁C A为99.6%㊁M E为0.4%㊁VM E为0%,C B D E与B M D的结果具有较高的一致性,这和本研究结论相同,并验证了C L S I的推荐㊂2020年‘协和医学杂志“刊登了‘多黏菌素药物敏感性检测及临床解读专家共识“,该共识不常规推荐自动化药敏检测仪器用于黏菌素的体外敏感性试验,自动化药敏检测仪器只有经过临床实验室性能验证后,满足临床报告需求时才可以使用㊂目前自动化药敏检测仪器是否能用于黏菌素的检测还存在一些争议㊂国内Z HU等[10]研究结果显示,使用P h o e n i x NM I C-413药敏卡检测136株大肠埃希菌和26株肺炎克雷伯菌对黏菌素的药物敏感性,结果显示C A和E A均为100%,M E和VM E均为0%㊂该研究认为NM I C-413药敏卡可作为临床实验室检测黏菌素敏感性的方法,而使用V i t e k C o m p a c tⅡ-G N335药敏卡对这些菌株进行黏菌素敏感性检测结果显示与B M D一致性较差,C A分别为89.7%和63.0%,且有较高的VM E,分别为26.3%和0%,因此V i t e k C o m p a c tⅡ-G N335药敏卡不能作为临床实验室检测黏菌素药敏的方法㊂然而P F E N N I GW E R T H等[11]报道,使用P h o e n i x检测206株肺炎克雷伯菌对黏菌素的敏感性,结果显示存在较高的VM E(8%),提示P h o e n i x 仪器法不能为实验室提供准确的黏菌素药敏数据㊂为了更好地了解微生物实验室使用的自动化药敏检测仪器检测黏菌素药敏结果的准确性,本次试验分别评估了P h o e n i x NM I C-413药敏卡和V i t e k C o m p a c t Ⅱ-G N335药敏卡,研究结果显示两种商品化的药敏卡与B M D比较,C A和E A均超过95.0%,与参考方法的一致性较好;但是两种商品化的药敏卡检测结果存在一定假敏感率,VM E分别为13.2%和11.3%㊂本研究和刘晓妤等[12]的研究结果相似㊂本研究存在一些局限性:首先,本次收集的肠杆菌目细菌种类较单一,仅仅包含了大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌;其次, C L S I推荐C B D E也可以检测铜绿假单胞菌对黏菌素的敏感性,但本研究没有纳入铜绿假单胞菌进行研究㊂本研究团队将会在后续的研究工作中扩大测试细菌的种类和数量㊂综上所述,C B D E由于其较低的成本㊁简便的操作和准确的结果可以作为临床微生物实验室检测肠杆菌目细菌对黏菌素敏感性的可靠试验方法㊂自动㊃6362㊃检验医学与临床2023年9月第20卷第18期 L a b M e d C l i n,S e p t e m b e r2023,V o l.20,N o.18Copyright©博看网. All Rights Reserved.化药敏检测仪器检测黏菌素体外药敏的结果有一定价值,但对于那些由自动化药敏检测仪器判读为敏感的菌株仍需使用B M D进行复核㊂参考文献[1]Z HA N G Y,S H I L,L V L,e t a l.I d e n t i f i c a t i o n o f a n o v e la d j u v a n t l o p e r a m i d e t h a t e n h a n c e s t h e a n t ib ac t e r i a l a c t i v i-t y o f c o l i s t i n a g a i n s t M C R-1-p o s i t i v e p a t h o g e n s i n v i t r o/ v i v o[J].L e t t A p p l M i c r o b i o l,2023,76(2):713-720.[2]S H E U C C,C HA N G T,L I N S Y,e t a l.I n f e c t i o n s c a u s e db yc a r b a p e n e m-r e s i s t a n t e n t e r o b a c t e r i a c e a e:a n u pd a te o n t h e r a p e u t i c o p t i o n s[J].F r o n t M i c r o b i o l,2019,10:80-89.[3]MA R T I N A,F A H R B A C H K,Z HA O Q,e t a l.A s s o c i a-t i o n b e t w e e n c a r b a p e n e m r e s i s t a n c e a n d m o r t a l i t y a m o n g a d u l t,h o s p i t a l i z e d p a t i e n t s w i t h s e r i o u s i n f e c t i o n s d u e t oE n t e r o b a c t e r i a c e a e:r e s u l t s o f a s y s t e m a t i c l i t e r a t u r e r e-v i e w a n d M e t a-a n a l y s i s[J].O p e nF o r u m I n f e c t D i s,2018, 5(7):234-245.[4]Z HA N G R,S H E N Y,WA L S H T R,e t a l.U s e o f p o l y-m y x i n s i n C h i n e s e h o s p i t a l s[J].L a n c e t I n f e c t D i s,2020, 20(10):1125-1126.[5]P O G U E J M,J O N E S R N,B R A D L E Y J S,e t a l.P o l y-m y x i n s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g a n d i n t e r p r e t i v e b r e a k p o i n t s: r e c o mm e n d a t i o n s f r o m t h e U n i t e d S t a t e s C o mm i t t e e o nA n t i m i c r o b i a l S u s c e p t i b i l i t y T e s t i n g(U S C A S T)[J].A n-t i m i c r o b A g e n t s C h e m o t h e r,2020,64(2):e01495-19.[6]M E D E I R O S G S,R I G A T T O M H,F A L C I D R,e t a l.C o m b i n a t i o n t h e r a p y w i t h P o l y m y x i n B f o r c a r b a p e n e-m a s e-p r o d u c i n g K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e b l o o d s t r e a m i n f e c-t i o n[J].I n t J A n t i m i c r o b A g e n t s,2018,53(2):152-157.[7]胡付品,郭燕,朱德妹,等.2020年C H I N E T中国细菌耐药监测[J].中国感染与化疗杂志,2021,21(4):377-387.[8]HUM P H R I E S R M,G R E E N D A,S C HU E T Z A N,e ta l.M u l t i c e n t e r e v a l u a t i o n o f c o l i s t i nb r o t h d i s k e l u t i o n a n dc o l i s t i n a g a r t e s t:a r e p o r t f r o m t h e c l i n i c a l a nd l a b o-r a t o r y s t a n d a r d s i n s t i t u t e[J].J C l i n M i c r o b i o l,2019,57(11):e01269-19.[9]黄丽,胡付品,朱德妹,等.黏菌素细菌药物敏感性检测方法学评价[J].中国感染与化疗杂志,2021,21(6):719-724.[10]Z HU Y,J I A P,Z HO U M,e t a l.E v a l u a t i o n o f t h e c l i n i c a l s y s t e m s f o r p o l y m y x i n s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f c l i n i c a lg r a m-n e g a t i v e b a c t e r i a i n C h i n a[J].F r o n t M i c r o b i o l, 2020,11(5):604-610.[11]P F E N N I GW E R T H N,K AM I N S K I A,K O R T E-B E R-WA N G E R M,e t a l.E v a l u a t i o n o f s i x c o mm e r c i a l p r o d-u c t s f o r c o l i s t i n s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g i n E n t e r o b a c t e r a l e s[J].C l i n M i c r o b i o l I n f e c t,2019,25(11):1385-1389.[12]刘晓妤,张辉,张戈,等.多黏菌素B和黏菌素体外药敏试验系统评估[J].中国医学装备,2022,19(6):38-42.(收稿日期:2023-03-30修回日期:2023-07-21)(上接第2632页)N,e t a l.U K g u i d e l i n e s o n t h e m a n a g e m e n t o f i r o n d e f i-c i e n c y i n p r e g n a n c y[J].B r J H a e m a t o l,2020,188(6):819-830.[15]S HA N D E R A,K N I G H T K,T HU R E R R,e t a l.P r e v a-l e n c e a n d o u t c o m e s o f a n e m i a i n s u r g e r y:a s y s t e m a t i c r e-v i e w o f t h e l i t e r a t u r e[J].A m J M e d,2004,116(S u p p l 7A):58S-69S.[16]MU N O Z M,A C H E S O N A G,A U E R B A C H M,e t a l.I n-t e r n a t i o n a l c o n s e n s u s s t a t e m e n t o n t h e p e r i-o p e r a t i v e m a n a g e m e n t o f a n a e m i a a n d i r o n d e f i c i e n c y[J].A n a e s-t h e s i a,2017,72(2):233-247.[17]A U T HO R I T Y N B.P a t i e n t B l o o d M a n a g e m e n t G u i d e-l i n e s:m o d u l e2p e r i o p e r a t i v e[E B/O L].(2012-03-09) [2023-06-09].h t t p s://w w w.b l o o d.g o v.a u/s y s t e m/f i l e s/d o c u m e n t s/p b m-m o d u l e2-q r g_0.p d f.[18]K E I T,M I S T R Y N,C U R L E Y G,e t a l.E f f i c a c y a n d s a f e t y o fe r y t h r o p o i e t i n a n d i r o n t h e r a p y t o r e d u c e r e d b l o o d c e l l t r a n s-f u s i o n i n s u rg i c a l p a t i e n t s:a s y s t e m a t i c r e v i e w a n d M e t a-a-n a l y s i s[J].C a n J A n a e s t h,2019,66(6):716-731. 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