细胞培养标准流程

养细胞的流程
养细胞的流程可以分为以下几个步骤：
1. 细胞培养基的制备：准备适当的培养基，选择适合细胞种类的培养基，并添加所需的营养物质、生长因子和抗生素等成分。

2. 细胞的分离与传代：将原始细胞种植在培养皿中，培养至细胞达到适当的密度后，使用消化酶将细胞从培养皿中分离。

分离得到的细胞可以继续传代至其他培养皿中。

3. 细胞的培养：将分离得到的细胞接种在预处理好的培养器皿中（如培养瓶、培养皿、多孔板等），放入恒温培养箱或细胞培养箱中进行培养。

细胞的培养条件包括温度、湿度、CO2
浓度、培养基的换液等。

4. 细胞的观察与检测：定期使用显微镜观察细胞的生长状态、细胞形态的变化等；可以通过染色技术观察细胞的生长情况，如细胞增殖率、存活率等；还可以使用细胞生长曲线和细胞测定仪等设备对细胞进行定量检测。

5. 细胞的处理与维护：根据需要，可以对细胞进行维护，如更换培养基、添加营养物质等；还需要注意细菌、真菌等污染的防控措施，如在培养环境中使用无菌操作技术、添加抗生素等。

需要注意的是，不同类型的细胞具有不同的培养条件和特殊要求，因此在养细胞过程中需要根据具体情况进行相应的调整和操作。

此外，养细胞的流程也会受到实验目的的影响，如进行
蛋白表达、细胞增殖、药物筛选等不同目的的实验会有相应的操作步骤和培养条件。

细胞培养的实验步骤细胞培养的实验步骤如下：1、细胞复苏：细胞培养条件2、复苏流程：（1）确认水浴锅的水清洁可用，方可提前打开37度预热。

（2）确认好复苏细胞的液氮罐中具体位置，并做好复苏登记。

（3）提前做好复苏准备，预热培养基。

（4）悬浮和贴壁细胞复苏参数：（5）将细胞快速放入37度水浴锅中迅速溶解，1.8ml时间大概1分30秒，1ml大概1min左右，需计时，其间不要老是拿起来观察，需要快速复溶，避免细胞受到损伤。

（6）贴壁细胞需离心，1000rpm，5min。

悬浮细胞直接加入预热的培养基中然后放入培养箱中（7）贴壁细胞离心后去除上清，用预热的培养基重悬细胞后加入T25方瓶，蕞后放入培养箱中培养。

（8）取小样计数观察，细胞活力在70%以上算正常。

低于70%活力可能细胞状态不太好，需要培养和恢复。

3、细胞传代培养1．悬浮细胞传代流程：（1）先将装有细胞的摇瓶从培养箱拿出，用酒精喷洒瓶身后将摇瓶拿进超净台。

（2）打开摇瓶瓶盖，用200ul移液器取100~200ul细胞放入1.5mlEP管中，瓶盖过火，拧紧，将培养瓶放回摇床。

（3）将200ul细胞混匀，取10ul细胞加入10ul台盼蓝，显微镜下计数。

根据细胞数决定下游实验。

（4）细胞需计数两次求平均值。

（5）悬浮细胞生长参数（6）根据不同细胞的生长曲线在合适的时间和密度给细胞接种传代。

以sf9细胞为例：细胞接种密度0.4x10^6个/ml,24h密度1x10^6个/ml,48h密度2.4x10^6个/ml,72h密度6x10^6个/ml，此时需要传代细胞。

要求留样100ml0.4x10^6个/ml具体操作如下：计算：需要母细胞体积=100*0.4/6=6.6ml需要培养基体积=100-6.6=93.4ml将上面体积的细胞和培养基加入摇瓶中，放回27度培养箱培养即可2.贴壁细胞传代流程：（1）显微镜下观察细胞状态和密度，80%汇合率以上需要传代。

（2）T25方瓶中加入0.5ml~1ml0.25%胰酶溶液（需37度预热），使瓶底细胞都浸入溶液中。

细胞培养的操作步骤细胞培养是一种在体外培养和繁殖细胞的方法，广泛应用于医学、生物学和生物工程等领域。

下面是细胞培养的操作步骤，包括细胞的收获、传代和检测。

1.材料准备：- 细胞培养基：选择适合细胞类型和培养要求的培养基，常用的包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）和RPMI（Roswell Park Memorial Institute）等。

-细胞：选择合适的细胞系，如人类胚胎肺成纤维细胞（HELF）和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）等。

-细胞培养器具：包括培养皿、细胞培养瓶、细胞离心管等。

2.细胞收获：-细胞培养器具消毒：用70%乙醇或其他消毒剂将培养器具进行消毒。

-细胞培养基预热：将所需的培养基预先加热至37摄氏度。

-细胞培养皿涂覆：将培养皿或瓶子内壁涂覆一层细胞黏附物，如明胶或聚-卵氨酸等，以增加细胞附着。

3.细胞传代：-培养基预热：将所需的培养基预先加热至37摄氏度。

-细胞收获：将细胞培养瓶中的培养基倒掉，用生理盐水等缓冲液洗涤细胞。

- 细胞分离：使用胰酶（Trypsin）或胰蛋白酶（Trypsin-EDTA）将细胞从细胞培养瓶上析离下来。

-细胞计数：使用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数，以确定细胞的密度。

-细胞培养：将细胞培养在新的细胞培养瓶中，加入适量的预热培养基。

4.细胞检测：-细胞形态观察：使用倒置显微镜或显微摄像系统观察细胞的形态变化和增殖情况。

- 细胞活力检测：使用细胞活力检测试剂，如MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）或CCK-8（Cell Counting Kit-8）等，评估细胞的存活率和代谢活力。

- 细胞凋亡检测：使用凋亡检测试剂盒，如Annexin V-FITC和PI （Propidium Iodide）等，评估细胞凋亡的程度。

atcc标准细胞培养方法
ATCC细胞培养方法是细胞培养的一种标准方法。

该方法包括以下步骤：
1. 选择适当的培养基：根据细胞种类选择适当的培养基，如DMEM、RPMI、MEM等。

加入10%的胎牛血清以及必要的抗生素和抗真菌药物。

2. 准备细胞：从冻存细胞库中取出细胞，放置在无菌条件下，用PBS（含有钙和镁）洗涤细胞2-3次，去除冻存液。

3. 接种细胞：将细胞转移到含有培养基的无菌培养皿中。

培养皿容积应根据细胞数量和培养时间来确定。

4. 细胞培养：将培养皿放置在37℃的培养箱中，保持湿润的环境。

定期更换培养基，一般每两天更换一次。

注意细胞密度的控制，不要过度密集。

5. 细胞分离：在培养达到一定密度后，将细胞用胰酶或EDTA等酶类分离剂进行消化，分离到新的培养皿中。

6. 冻存细胞：当细胞密度达到适当的水平后，使用液氮冻存细胞，以备以后使用。

注意事项：培养过程中必须严格控制消毒，确保细胞无污染；定期检查细胞状态、生长情况、污染情况等，及时处理异常情况。

细胞培养工作流程细胞培养是一种将动植物细胞在体外条件下进行繁殖和生长的技术。

它是许多生物学研究和应用领域的重要工具，广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药物研发、生物工程等领域。

细胞培养的工作流程包括以下几个主要步骤：2.细胞株的建立：细胞株是一组具有相同遗传特性的细胞，通常可以通过原代培养、扩增和传代等方法建立。

原代细胞通常来自新鲜组织，将其接种在含有合适培养基和营养物的培养皿中，细胞在适宜条件下会开始生长和分裂形成细胞株。

3.细胞培养基的选择：细胞培养基是提供细胞生长和繁殖所需的营养物和生长因子的培养介质。

根据不同细胞类型的要求，可以选择不同的培养基配方。

培养基常见的成分包括无菌水、氨基酸、糖类、脂质、无菌血清、维生素等。

4.细胞的传代：细胞在培养皿中进行繁殖和分裂，当细胞密度达到一定程度时，需要将细胞进行传代以保持细胞的健康和增殖能力。

传代的目的是将细胞分离并分散在新的培养皿中，以便细胞可以继续生长和繁殖。

5.细胞的准备和植入：根据实验设计和研究目的，将所需的细胞接种在含有合适培养基和营养物的培养皿中。

细胞培养条件通常包括适宜温度（通常为37摄氏度）、无菌条件、恒定的pH值、适宜的气氛（如5%CO2），以及提供细胞所需的营养物和生长因子。

6.细胞的观察和维护：细胞在培养过程中需要定期观察其生长状态和形态特征。

可以使用显微镜对细胞进行观察和记录，以判断细胞的健康和增殖情况。

细胞的培养过程中还需要定期更换培养基，补充营养物和生长因子，以维持细胞的正常生长和繁殖。

7.细胞的实验应用：培养的细胞可以用于各种不同的实验研究和应用，包括细胞分离、细胞特征分析、药物筛选、基因表达研究等。

在实验中，细胞可能需要通过一些特殊处理，如细胞冻存、细胞分离、染色等。

细胞培养操作流程细胞培养是一种人工环境中扩增和维持活细胞的技术。

它对于研究细胞生物学、药物筛选和治疗等方面有着重要的应用。

下面是一个常见的细胞培养操作流程，具体步骤如下：1.准备培养器具和试剂：首先需要准备好培养器具和所需试剂，包括培养皿、离心管、培养基、培养液、胶原蛋白贴士等。

2.细胞的分离和收获：将待培养的组织或细胞样品取出，用适当的方法将细胞分离开来。

可以使用酶消化、机械切割或筛选等方法。

分离好的细胞通过离心将细胞沉淀，将上清液吸掉，得到细胞沉淀。

3.细胞计数和浓度调整：使用细胞计数仪或血球计数室等工具，将细胞计数。

根据需要可以进行浓度调整，使其适合在培养器具中的扩增。

4.细胞的接种和培养：将得到的细胞沉淀重新悬浮于培养基中，并将其放置于培养皿中。

确定适宜的培养条件，包括温度、湿度、气体环境等。

定期观察细胞的生长情况，并更换培养基，以维持细胞的健康生长。

5.细胞的传代：当细胞在培养皿中达到一定密度时，需要进行传代，以防止细胞群体过于致密导致细胞生长受限。

传代前需先将细胞沉淀，并用如十倍的细胞培养基将其重新悬浮。

将悬浮的细胞分装至新的培养皿中，培养基的更换和细胞的观察也是相同的。

6.试验处理：在细胞培养过程中，可能需要对细胞进行各种试验处理，如药物处理、感染等。

根据需要，将试验处理物加入培养基中，确保细胞接触到试剂，并保持正常生长。

7.细胞固定和染色：进行一些试验或者观察时，对细胞进行固定和染色可以帮助观察或者分析细胞的形态、细胞器分布等。

选择适合的固定和染色方法，将细胞固定在培养皿中，并使用染色剂染色。

8.细胞的收集和保存：在实验完毕后，可以用适当的方法将培养皿中的细胞收集起来。

例如，轻轻洗涤细胞，然后加入适当的缓冲液，用吸管吸出，或者使用离心机离心沉淀。

收集好的细胞可以用于下一步的实验，或者进行冷冻保存。

9.培养器具的清洁和消毒：一旦细胞收集完毕，需要对使用过的培养器具进行清洗和消毒，以防止细菌、真菌、病毒等的传播。

细胞培养流程细胞培养是生物学实验中常见的一项技术，它可以帮助研究人员观察和研究细胞的生长、分化和代谢等生物学特性。

在进行细胞培养实验时，需要严格按照一定的流程和操作规范进行，以确保实验结果的准确性和可靠性。

下面将介绍一般的细胞培养流程，希望对初学者有所帮助。

1. 材料准备。

在进行细胞培养实验之前，首先要准备好所需的材料，包括培养基、培养皿、细胞传代液、无菌吸管、移液器、离心管等。

这些材料需要提前消毒和准备，以确保实验过程的无菌性和安全性。

2. 细胞解冻。

如果是从冻存状态的细胞开始培养，首先需要将细胞解冻。

解冻的过程需要在无菌工作台内进行，使用预先加热的培养基缓慢将细胞解冻，然后将细胞悬于完整培养基中。

3. 细胞传代。

一旦细胞达到一定的密度，就需要进行传代。

传代是指将已培养的细胞分离并重新接种到新的培养皿中，以保持细胞的活力和增殖。

在传代的过程中，需要注意细胞的数量和培养基的配比，以确保细胞的健康生长。

4. 观察细胞生长。

在细胞培养的过程中，需要定期观察细胞的生长情况。

通过显微镜观察细胞的形态、数量和活性，及时发现并处理细胞的异常情况，如细胞凋亡、感染等。

5. 细胞收获。

当细胞达到所需的数量和状态时，就需要进行细胞的收获。

收获细胞时，需要使用适当的酶溶解细胞，并进行离心等操作，最终获得细胞沉淀物。

6. 细胞冻存。

如果需要长期保存细胞，就需要进行细胞的冻存。

在冻存前，需要将细胞悬于含有冻存剂的培养基中，然后将细胞缓慢冷冻至液氮温度，以确保细胞的冻存质量。

以上就是一般的细胞培养流程，当然在实际操作中还会根据不同的细胞类型和实验目的进行一些细节上的调整。

希望初学者能够通过这些基本步骤，掌握细胞培养的基本技术，为日后的实验工作打下坚实的基础。

细胞复苏（快融）准备工作：1ml 灭菌Tip一盒，DMEM，D+F+P（DMEM90%+FBS10%+PS400µl），1.5ml离心管，水浴锅（42℃）1、25mm小皿各加入1mlD+F+P，置超净台预热备用，1.5ml EP管各加入500ulD+F+P；2、液氮中取出冻存管（注意不要用手直接触摸冻存管袋），置于水浴锅42℃快融，一般为2min（具体情况看冻存管溶解状况）；若在-80℃取出，40℃快融。

3、将1.5ml冻存液（1350ul细胞悬液+150ul DMSO）离心，1000rpm,5min离心，弃上清。

4、将超净台中的D+F+P加入离心管，吹散底部沉淀（轻轻吹打）；5、将细胞悬液加入培养皿中，注意点样均匀，镜检，入箱培养。

细胞传代70~80%时就可以传代1、吸去原培养基，用基础培养基洗2次（大皿每次1ml）；2、0.25%胰酶（小皿600µl，大皿1ml，依据情况而定），静置1~2min（依据细胞贴壁状况而定）；3、吸去胰酶，可静置，胰酶残留物进一步消化；4、加D+F+P（DMEM90%+FBS10%+PS400µl）1ml（可进一步阻止胰酶），轻轻吹打（需沿同一方向吹打，不可产生气泡）；5、取出新培养皿分别标清细胞类型、时间、人物以及传代次数，并且加入1ml培养基；6、取200µl平均点缀至大皿，均匀加至各部分，8字晃匀；7、显微镜观察细胞状态以及是否铺匀，入箱培养。

细胞冻存（慢冻）准备工作工作液：每次使用前配制，用多少配多少 10%DMSO+90%D+F+P（DMEM90%+FBS10%+PS400µl）1、吸去原培养基，用基础培养基洗2次（大皿每次1ml）；2、0.25%胰酶（小皿600µl，大皿1ml，依据情况而定），静置1~2min（依据细胞贴壁状况而定）；3、吸去胰酶，可静置，胰酶残留物进一步消化；4、加工作液1ml（可进一步阻止胰酶），轻轻吹打（需沿同一方向吹打，不可产生气泡）；5、取出冻存管分别标清细胞类型、时间、人物，加500µl配好的工作液，终体积1.5ml；6、放置4℃（包棉花）放在PE手套，头向上10min，然后转至-20℃放置40min，再到-80℃过夜（最多保存1个月），最后放置到液氮中。

细胞培养标准操作规程
一、适用范围
适用于实验室从事细胞培养的实验技术人员和研究生。

二、操作规程
1、所需试剂细胞培养液、血清、胰酶、PBS或Hank`s液
2、规程：
2.1 细胞株的培养
2.1.1 获取所需细胞株（一般细胞株的运送是把细胞放在培养瓶中，干冰保存运输的）
2.1.2 得到所需细胞株后弃掉多余的培养液，放到5%的CO2培养箱中培养
2.1.3 每天至少观察一次，待细胞长满整个培养瓶的80%时传代
2.1.4 倒掉培养液，用1mlPBS 漂洗细胞一次，加入500ul胰酶消化，消化时间视细胞种类、胰酶浓度和消化温度而定，一般3-5min
2.1.5 终止消化，向上一步消化液中加入含10%血清的培养液，一般5ml
2.1.6 吹打，用吸管轻轻吹打至细胞全部脱落，注意尽量减少气泡产生
2.1.7 细胞计数，取少量液体于细胞计数板上，确定接种密度
2.1.8 将细胞接种到另外的培养瓶中
2.1.9 换液，根据细胞生长情况，间隔一定时间半量换液。

2.2 原代细胞培养
2.2.1 原代细胞的获取无菌条件下取动物组织剪碎
2.2.2 向剪碎的动物组织加入适宜浓度的胰酶，消化，时间因细胞种类和胰酶浓度而定
2.2.3 终止消化，向上一步消化叶重加入含10%血清的培养液，一般5ml
2.2.4 吹打将终止消化后的组织转入一培养皿中，加入一定量的培养液轻轻吹打数次，静置5-10分钟
2.2.5 细胞计数，取少量液体于细胞计数板上，确定接种密度
2.2.6 将细胞接种到培养瓶或培养板中，放入5%的CO2培养箱中培养。

实验室细胞培养的一般步骤细胞培养是一项重要的实验室技术，广泛应用于生命科学研究以及医药产业中。

下面将为您介绍一般的细胞培养步骤，希望能为您提供一些指导意义。

第一步：制备培养基细胞培养的第一步是制备适合细胞生长的培养基。

培养基通常包括营养物质、氨基酸、维生素、生长因子等，可以为细胞提供足够的养分和环境条件。

根据不同的细胞类型和实验目的，制备不同种类和浓度的培养基。

第二步：分离细胞在细胞培养之前，需要将细胞从组织、器官或已有培养物中分离出来。

通常采用酶消化、机械剪切或离心等方法来分离细胞。

分离后，细胞可以在培养基中生长和繁殖。

第三步：细胞接种将分离出的细胞接种到含有培养基的培养皿或培养瓶中。

接种密度要适当，不宜过稀或过密。

同时，需要将培养基中的氧气和二氧化碳平衡，通常使用CO2培养箱来提供适宜的气体环境。

第四步：细胞培养经过接种后，细胞开始在培养基中生长和分裂。

在培养过程中，需要控制细胞的温度、湿度和pH值，保持适宜的生长条件。

此外，定期更换新鲜的培养基可以提供足够的营养物质，维持细胞的正常生长。

第五步：细胞检测和观察细胞培养的过程中，需要定期对细胞进行检测和观察。

包括细胞数量的计数、形态的观察和生长曲线的绘制等。

通过这些检测和观察，可以了解细胞的健康状态、增殖速率以及其他相关参数。

第六步：细胞应用或冻存根据研究或实验的需要，可以选择将细胞用于进一步的实验、传代培养或冻存保存。

冻存细胞需要使用适当的冻存液，将细胞缓慢冷冻并存放在液氮罐中，以便长期保存。

细胞培养是一项需要耐心和细心的工作，每一步都需要严格控制条件和遵循操作规范。

只有如此，才能获得可靠的实验结果和高质量的细胞培养。

希望本文能为您提供参考，更好地开展细胞培养工作。

细胞培养工作流程细胞培养指的是将体外细胞放入适宜的培养基中，通过人工控制环境提供养分、温度、湿度和气氛等条件，使细胞能够在体外生长和繁殖的过程。

它是现代生物科学研究的重要手段之一、下面是细胞培养的基本工作流程：1.选择细胞系：根据研究目的，选择合适的细胞系进行培养。

常用的细胞系包括动物细胞系（如人类细胞系、小鼠细胞系）和植物细胞系（如拟南芥细胞系、水稻细胞系）等。

2.培养皿处理：将培养皿（常用的有细胞培养板、细胞培养瓶等）进行反应器瓶内蒸气温度消毒，消毒完后平行设置以备用。

3.准备培养基：根据细胞系的要求，配制适合的培养基。

培养基可以分为基本培养基和特殊培养基两种。

基本培养基是常规使用的培养基，包含至少4个组分：基础培养液（如DMEM、RPMI1640等）、热灭菌的胎牛血清、青霉素-链霉素溶液和培养液调节剂。

特殊培养基则根据细胞系的需要，添加特定的因子和配方，以满足特殊细胞的生长和繁殖要求。

4. 细胞接种：将细胞接入培养皿中。

首先需要将细胞接种得到的细胞进行计数，根据细胞密度和细胞系特性合理的安排接种密度。

常规的细胞接种密度为1×10^5 到5×10^5个细胞/ml。

然后将培养基加入培养皿中。

5.培养条件控制：将培养皿放入恒温培养箱中，保持适宜的环境条件。

常见的条件有：温度通常为37℃，CO2浓度通常为5%，相对湿度约95%。

这样可以提供适宜的温度、气氛和湿度，保证细胞正常生长和繁殖。

6.细胞观察和维护：每天对细胞进行观察、记录和维护。

观察细胞的形态、增殖情况和污染情况等。

细胞一般分为贴壁生长和悬浮生长两种，贴壁细胞需要定期更换培养基，悬浮细胞则需要掌握细胞的密度从而进行传代。

7.细胞传代：当细胞密度到达一定程度（通常为80-90%）时，需要进行细胞传代，以维持细胞的生长和繁殖。

传代的方法包括机械切割、酶解等。

细胞传代的时机和方法由细胞的适应性和特性决定。

8.细胞冻存：为了保证细胞库的保存和维持，需要进行细胞的冻存。

细胞培养流程细胞培养是生物学实验中常用的一种技术手段，通过细胞培养可以使细胞在体外环境中持续生长和繁殖。

细胞培养流程包括细胞的分离、传代、培养和检测等步骤，下面将详细介绍细胞培养的流程及注意事项。

1. 细胞分离。

细胞培养的第一步是从组织或细胞悬液中分离出需要的细胞种群。

常用的方法包括机械分离、酶消化和细胞筛选等。

在进行细胞分离时，需要注意避免对细胞造成损伤，保证细胞的完整性和活力。

2. 细胞传代。

细胞传代是指将细胞从一个培养皿中移植到另一个培养皿中，以维持细胞的生长和增殖。

在进行细胞传代时，需要注意细胞的密度和培养基的配比，以确保细胞的正常生长和分裂。

3. 细胞培养。

细胞培养是指将分离和传代后的细胞放置在含有营养物质和生长因子的培养基中进行培养。

培养基的选择和配制对细胞的生长和表型具有重要影响，需要根据不同类型的细胞进行合理选择。

4. 细胞检测。

在细胞培养过程中，需要对细胞进行定期的检测，包括形态学观察、生长曲线分析、细胞纯度检测等。

通过对细胞的检测，可以及时发现细胞的异常情况，并采取相应的措施进行处理。

细胞培养过程中需要注意的事项：保持无菌操作，细胞培养过程需要在无菌条件下进行，避免细胞受到外界污染。

控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等，确保细胞在适宜的环境中生长。

定期更换培养基，培养基中的营养物质和生长因子会随着时间逐渐耗尽，需要定期更换新的培养基。

避免细胞过度传代，过度传代会导致细胞老化和突变，影响细胞的生长和功能。

总之，细胞培养是一项复杂而又重要的实验技术，正确的细胞培养流程和操作规范对于细胞生物学研究具有至关重要的意义。

希望本文介绍的细胞培养流程及注意事项能够对您有所帮助，祝您的细胞培养工作顺利进行！。

细胞培养室标准操作规程一、器皿清洗1. 玻璃器皿清水浸泡——洗衣粉刷洗——自来水冲洗，烘干——浸酸过夜——自来水冲洗10次以上——蒸馏水浸泡，荡洗——三蒸水冲洗2次，烘干——包装，灭菌，备用。

2. 胶塞﹑塑料制品清水浸泡——洗洁精超声15分钟——清水超声15分钟——自来水冲洗，烘干——2%NaOH浸泡30分钟——自来水冲洗，烘干——1%HCl浸泡30分钟——自来水冲洗——蒸馏水浸泡，荡洗——三蒸水冲洗2次，烘干——包装，灭菌，备用。

3. 培养板*用后立即浸入水中——洗洁精超声20分钟——清水超声20分钟——自来水冲洗，烘干——浸酸6小时——自来水冲洗10次以上——蒸馏水浸泡，荡洗——三蒸水冲洗2次，烘干——浸入70%乙醇（盖盖以防乙醇挥发）消毒。

临用前取出，置超净台中，紫外照射过夜。

* 注意: 1．不宜用毛刷刷洗，如残留有附着物，可用脱脂棉蘸水拭掉，流水冲干净。

2．浸酸时间不要超过12小时,以防板被腐蚀。

3. 烘干温度不要太高。

二、灭菌1. 使用前，先检查主体内水位是否超过电热管。

2. 在加热开始时，放气阀垂直，使空气随加热由桶内逸出。

待有较急的蒸汽喷出时，即将放气阀拨回水平位置。

3. 当压力到达所需的范围时，调节调压器使压力稳定，并开始计时。

瓶皿 121-126℃ 15min器械 121-126℃ 10min橡胶 121℃ 15min溶液 121-126℃ 20-40min4. 灭菌完，要迅速使之干燥者，将灭菌器内的蒸汽通过放气阀迅速排出。

等压力为0时，再稍等1-2分钟，然后将盖打开，继续加热10-15分钟，使物品上残留的水蒸汽得到蒸发，随后关掉。

5. 灭菌液体时，应将液体装在玻璃瓶中，以不超过2/3体积为好，瓶口用胶塞封好，并用绳子把牛皮纸扎在瓶颈上，最后在上面扎根针，使瓶内的空气能自然泄出。

灭菌完，先关电源，等压力自然降为0时，再稍等几分钟，打开放气阀，排出余气后，才能将盖开启，开盖的同时迅速拔掉针头。

细胞培养标准操作程序（SoP1.目的：为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。

2 .适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。

3 •操作规程：3.1培养液、PBS、胰蛋白酶的配制3.1.1 100Oml培养液的配制1、准备用品：培养粉、1000ml烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH仪、2〜3天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCo3粉、1000ml无菌玻璃瓶（100ml× 10个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2〜3个过滤器、注射器。

紫外线照台30min。

2、将培养粉用900ml新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。

3、充分搅拌,按说明添加成分（如InVitrogen公司的RPMl-1640配制1000ml需加NaHCO3粉2.0g , InVitrogen公司的DMEM需加NaHCo3粉3.7g等），再充分搅拌。

无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。

4、用1M （1mol∕L ）HCl调PH至7.0左右（细胞适宜在PH7.2〜7.4生长，配制好后PH值会升高0.2〜0.3 ,故配时调PH至7.0左右）。

5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到1000ml。

6、配青霉素80万/瓶+ 4ml蒸馏水溶解配链霉素100万/瓶+ 4ml蒸馏水溶解取0.5ml青霉素和0.4ml链霉素加入到1000ml培养液中，使其终浓度均为100U/ml ,充分搅拌混匀。

7、在无菌操作台里用0.22Um的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到100ml玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20 C保存备用。

注意：（1 ）配制培养液及调节培养液PH值所使用的HCl和（或）NaOH均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。

一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。

（2）准备的100ml× 10个玻璃瓶必须事先高压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。

细胞培养标准操作程序（SOP）1．目的：为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。

2．适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。

3．操作规程：培养液、PBS、胰蛋白酶的配制1000ml培养液的配制1、准备用品：培养粉、1000ml烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH仪、2～3天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCO3粉、1000ml无菌玻璃瓶（100ml×10个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3个过滤器、注射器。

紫外线照台30min。

2、将培养粉用900ml新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。

3、充分搅拌，按说明添加成分（如Invitrogen公司的RPMI-1640配制1000ml需加NaHCO3粉，Invitrogen 公司的DMEM需加NaHCO3粉等），再充分搅拌。

无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。

4、用1M（1mol/L）HCl 调PH至左右（细胞适宜在～生长，配制好后PH值会升高～，故配时调PH 至左右）。

5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到1000ml。

6、配青霉素80万/瓶+ 4ml 蒸馏水溶解配链霉素100万/瓶+ 4ml 蒸馏水溶解取青霉素和链霉素加入到1000ml培养液中，使其终浓度均为100U/ml，充分搅拌混匀。

7、在无菌操作台里用的除菌滤膜过滤配制好的培养液，并分装到到100ml玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20℃保存备用。

注意：（1）配制培养液及调节培养液PH值所使用的HCl和（或）NaOH均需新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）配制。

一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。

（2）准备的100ml×10个玻璃瓶必须事先高压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。

PBS（平衡盐溶液）的配制NaCl 8gKCl ＋新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至1000mlNa2HPO4*H2OKH2PO4（1）无需调PH值，其成分溶解后PH为，不需除菌滤膜过滤除菌，放于4℃保存，用前直接高压灭菌（高压时，装PBS的瓶子的瓶盖要插针头!）（2）Na2HPO4*H2O 则Na2HPO4*12 H2O需（3）如欲配制500ml，以上成分减半即可%胰蛋白酶的配制胰蛋白酶粉EDTA（乙二胺四乙酸二钠）NaClKCl` +新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）至1000ML NaHCO3Glucose(葡萄糖)酚红（1）配出来的PH值为，在PH值～范围内，故不需调PH值。

医学实验中细胞培养的基本操作教程细胞培养是医学实验中常用的技术手段，可以通过培养细胞体外研究细胞结构、功能、代谢以及疾病的发病机制。

本文将介绍医学实验中细胞培养的基本操作教程，包括无菌操作、细胞传代和细胞培养基的制备。

一、无菌操作1. 器具准备：将工作区域和培养器具用70%乙醇喷雾消毒，将所需器具放入无菌工作台，待干燥后再进行后续操作。

2. 细胞培养基准备：将所需的细胞培养基放入无菌环境中，根据实验需求添加适量的血清、抗生素等。

3. 细胞取样：取出培养物中所需的细胞，使用吸管或移液器将细胞转移到无菌的培养基中。

4. 细胞传播：将细胞和培养基混合均匀后，转移到培养皿或培养瓶中，注意避免皿壁的污染。

5. 无菌操作结束：将使用过的培养器具进行无菌处理，清理工作区域并进行必要的消毒。

二、细胞传代1. 始代细胞收获：当细胞在培养器中达到一定密度后，使用细胞解离液将细胞从底物上解离下来。

2. 离心：将解离的细胞转移到离心管中，以适当的转速离心沉淀细胞。

3. 上清液去除：倒掉离心管中上清液，注意尽量不要干扰到细胞沉淀。

4. 细胞悬浮液制备：使用无菌PBS洗涤离心沉淀的细胞，再添加适量的细胞培养基将其悬浮均匀。

5. 细胞传代操作：将悬浮细胞转移到新的培养器具中，注意避免气泡的产生，并将培养基置于CO2孵化箱中培养。

三、细胞培养基的制备1. 培养基组成：根据实验需求，制备含有特定成分的培养基，如DMEM、RPMI 1640等。

2. 液体消毒：将容器进行高温高压灭菌，确保培养基的无菌。

3. 配方调整：按照实验需求向培养基中添加适量的血清、抗生素、谷氨酸等。

4. 混合均匀：使用无菌器具将添加好成分的培养基搅拌均匀，确保各成分充分溶解。

5. 培养基保存：将制备好的培养基用无菌器具装入培养瓶中，标明日期和成分，存放于4℃的冰箱中，避免阳光直射。

以上就是医学实验中细胞培养的基本操作教程，从无菌操作、细胞传代到培养基的制备，这些基本技术对于医学实验中的细胞研究至关重要。

Assay Protocol——细胞培养一、仪器、试剂仪器：细胞培养瓶，移液枪，枪头盒（5ml、1ml、100μl、10μl），移液管（5ml、10ml），玻璃分装瓶（100ml、200ml、500ml），高压铝盒（离心管、冻存管），离心机（800转5min），倒置显微镜，细胞计数板，水浴箱（37℃），CO2培养箱（调整至37℃、5%CO2）。

试剂：DMEM，Serum，Trypsin，P.S.，Puromycin，DMSO。

二、试剂配制10ml Complete Media：DMEM 9ml；Serum 1ml；P.s. 100μl.10ml Frozen Media：Complete Media 8ml；Serum 1ml；DMSO 1ml。

Puromycin(2μg/μl)：6μl Promycin/4ml CM三、具体操作1. 准备：取各种已消毒的培养用品（枪头盒、高压铝盒、分装瓶）置于净化台面，紫外线消毒30分钟，Media、Trypsin、Serum、P.S.、Puromycin从4℃冷藏拿出至室温待用（使用之前用75%酒精全面消毒）。

开始工作前先洗手、戴上乳胶手套，用75%酒精喷拭手至肘部。

紫外灭菌时间到后，将灯和风机打开，开始工作。

将Media、Trypsin、Serum、P.S.、Puromycin去除封口处密封条，用75%酒精喷拭全面消毒后拿进去待用（注意：使用之前，应充分摇匀）。

合理摆放所需物品，尽量减少手部的大幅度摆动，点燃酒精灯，配置100ml Complete Media：用10ml移液管吸取DMEM 10ml*9次至分装瓶中，再吸取Serum 10ml至分装瓶中，再加入1ml P.S.用移液管吹打混匀后待用。

2. 辛将待处理细胞取出后，倒掉原有的培养基；安装5ml移液枪头后吸取PBS 5ml，每支细胞加入2.5ml，清洗细胞代谢物和培养瓶底部（清洗不干净会使胰酶消化变难），清洗过后倒掉PBS（垂直倾斜瓶各倒一次，一定要倒干净，防止残余PBS稀释Trypsin，影响酶解效果）。