高中生物《大肠杆菌培养和分离》教研公开课PPT课件

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大肠杆菌的分离和培养PPT课件

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2、涂布分离法
1) 稀释菌液（10-5 ~ 10-7倍）
用无菌吸管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有 9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液。……
3) 涂布
用无菌吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。再将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。
（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
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四、大肠杆菌的培养和分离
1、大肠杆菌（1）特性：
革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌（2）用途：
基因工程技术中被广泛采用的工具
2、培养： LB液体培养基 —— 扩大培养 LB固体培养基 —— 分离
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感谢您的观看。
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液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
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沉淀生长
固体培养基：菌落
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（2）根据化学成分分
合成培养基——成分明确天然培养基——成分不明确
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（3）按培养基的用途分类
• a．基础培养基（LB培养基）:含有一般细菌生长繁殖需要的基本的营养物质。最常用的基础培养基是上面提及的天然培养基中的牛肉膏蛋白胨培养基。
• b．营养培养基（加富培养基）:在基础培养基中加入某些特殊营养物质，如血液、血清或生长因子等。用以培养对营养要求高的微生物。
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c、选择培养基——在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长,如尿素固体培养基可以分离以尿素为氮源的微生物。

实验1大肠杆菌的培养和分离ppt课件

2、成分
水、碳源、氮源、无机盐、生长因子
(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方
调节pH
真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5
有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压
四、无菌操作
1.无菌操作的概念
无菌操作杂泛菌指在培养微生物的操作中，所有防止________污染的方法。
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。
2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
大肠杆菌在人体的_____中一肠般道对人体无害，但任何大大肠肠杆杆菌菌如是_果_进__入_____工__程__中_被__广_泌都泛尿会采系对用统人的体工产具生。危害。
基因
质粒、 EcoRⅠ限制酶、
E.coli-DNA连接酶、
受体细胞
菌落的概念
菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量生长繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构的子细胞群体。
天然培养基：
天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：营养成分丰富，培养效果好缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。
主要包括：
_各__种__器__具__必须无菌、 __培__养__基___也必须要无菌、 ___________时不能带入其他杂菌

实验1大肠杆菌的培养和分离浙科版选修一PPT课件

总结词
培养基是培养和繁殖微生物的重要物质，制备培养基的过程需要精确控制各种成分的比例和条件。
详细描述
在制备培养基时，需要选择适合大肠杆菌生长的营养物质，如碳源、氮源、水、无机盐等，按照规定的比例混合，调节pH值，并进行灭菌处理，以确保培养基的质量和安全性。
大肠杆菌的接种和培养
总结词
将纯化后的大肠杆菌接种到培养基中，控制适当的温度和湿度等条件，促进其生长繁殖。
在实验过程中，应严格控制实验条件，确保无菌操作，避免
污染。
对于菌种的来源和纯度，应进行质量检查，确保实验结果的
准确性和可靠性。
在培养过程中，应定期观察并记录菌落的生长情况，以便更好地了解大肠杆菌的生长特性
。
可以尝试采用不同的培养基和培养条件，以获得更优质的大
肠杆菌培养物。
对大肠杆菌培养和分离的实际应用思考
详细描述
在接种大肠杆菌时，需要将纯化后的大肠杆菌稀释并接种到培养基中，然后将其放置在恒温摇床或恒温箱中进行培养。在培养过程中，需要控制温度、湿度、气体浓度等条件，以确保大肠杆菌的正常生长繁殖。
大肠杆菌的分离纯化
总结词
通过特定的分离纯化技术，将大肠杆菌从其他杂菌和杂质中分离出来，获得纯度较高的菌株。
数据分析
对实验过程中记录的数据进行整理和分析，得出大肠杆菌的生长
曲线、生长速率等参数。
结果对比
将实验结果与理论值进行比较，分析实验误差产生的原因，提高
实验的准确性和可靠性。
实验讨论
根据实验结果，讨论大肠杆菌的培养和分离过程中可能存在的问题和改进措施，为后续实验提供
参考。
05 结论与思考题
实验结论总结
培养基成分

实验1-大肠杆菌的培养与分离30566 PPT课件

平板划线的操作
不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
（四）大肠杆菌的划线分离
1、划线分离法注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. 2.划线首尾不能相接
LB固体培养基——细菌的划线分离
封口膜：既通气又不使菌进入
（二）倒平板
灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面
注意事项：
1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板
2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒
大肠杆菌属于革兰氏阴性菌
(三)细菌的培养 ☆ 培养基培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 1.培养基的类型固体培养基和液体培养基、半固体培养基。成分区别：琼脂
2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方细菌喜荤，霉菌喜素
大肠杆菌配方：酵母提取物 0.25g 蛋白胨 0.5g Nacl 0.5g 琼脂 1g 水:50ml
注意事项:
1.火焰旁从斜面上用接种环取菌;
2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌,冷却后方能取菌; 3.取菌后封口膜和棉塞复原.
菌种扩增
•摇床震荡培养12h（于LB液体培养基中）
本图来自十一学校
（四）大肠杆菌的划线分离
分离方法:划线分离法和涂布分离法
1、划线分离法无菌操作台上用接种环取菌后在固体培养基的平板上连续划线.

浙科版高中生物选修一实验一-大肠杆菌的培养和分离(共25张PPT)

平板划线接种
灼烧接种环
冷却
蘸取菌液
灼烧接种环
冷却
灼烧接种环灼烧接种环
冷却冷却
划线（第一区域）
划线（第二区域）
划线（第三区域）
划线（第四区域）
灼烧接种环
冷却
平板倒置放置培养
划线（第五区域）
灼烧接种环
第五区域第四区域
第一区域第二区域
第三区域
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
液体培养基扩大培养，工业生产
凝固剂琼脂
固体培养基分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏
选择培养基鉴定培养基
天然培养基合成培养基
培养基成分
成分
作用
碳源
主要作能源物质
氮源
合成含N类化合物
无机盐
调节渗透压等
水

生长因子
调节促生长
主要来源
无机碳(CO2) 或有机碳(糖类) N2，NH3，铵，硝酸盐尿素，牛肉膏，蛋白胨
(2)常用灭菌的方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
步骤一：制备LB培养基(液)
称量-计算-溶化-灭菌-倒平板
灭菌：加上封口膜，用牛皮纸包好放在高压蒸汽灭菌锅中灭菌，1Kg压力灭菌15Min
倒平板过程总结
步骤三：大肠杆菌的分离纯化
分离方法：平板划线分离法
原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。

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实验内容：
1 细菌培养：将大肠杆菌接种到LB液体培养基扩大培养。 2 细菌分离：将大肠杆菌从液体培养基中接种到LB固体培养基，形成单菌落。目的为了分离纯化。
实验内容：
1 细菌培养：用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。 2 细菌分离：用LB固体培养基划线分离，形成菌落。
实验过程
Ⅰ 准备阶段：1 培养基配制 2 灭菌和消毒
琼脂？
凝固剂
红藻中提取的多糖,在98 ℃以上熔化，44 ℃以下凝固，常温下凝结成有弹性的凝胶。
培养基配置步骤
计算称量：配固体培养基时还需加琼脂
溶化：加热溶化，定容
调节PH 灭菌
细菌 6.5-7.5 中性偏碱真菌 5.0-6.0 中性偏酸
培养基的灭菌方法：高压蒸汽灭菌法。 121℃，1kg/cm2
1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
实验过程：
准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒
平板划线分离法
原理：接种环沾菌液后再固体培养基划线，划线过程中菌液逐渐减少，细菌也减少，最后，细菌间距离增大，培养后形成单菌落。
稀释涂布平板法
1稀释
2 涂布
固体培养基：涂布分离形成的菌落
微生物的恒温培养微生物的恒温培养
1平板进行恒温培养时，需要将平板倒置，原因是？
答：培养基的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会是水蒸气凝结成水滴留在盖上；如果正放培养皿，则水分形成的水滴回落到培养基的表面并且散开。如果培养皿已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。因此，恒温培养时，培养皿必须倒置。
什么是微生物呢？
微生物：形体极小，结构简单，凡是肉眼看不见的生物。只有在光学显微镜和电子显微镜下才能看清楚的生物。
微生物的类群
非细胞 1病毒结构
原核细胞:
2原核生物界(单C)：细菌、蓝藻、放线菌
3真菌界(单或多C) ：例如酵母菌、霉菌、真菌
细胞结构真核细胞: 4单细胞动植物
1、100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法
70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 ……
消毒与灭菌
（1）消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生
物的过程。
（2）灭菌：
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。
进行 4 避免已灭菌处理的材料用具和周围物品的接触
灭菌的方法
1、高压蒸汽灭菌（最常用）
培养基，培养皿，无菌水，各种玻璃制品
2、灼烧灭菌接种环，试管口等 3、干热灭菌（160-170 ℃下加热1-2h。）金属制品
4.过滤灭菌法(不能高温加热的物质)
玻璃砂漏斗
葡萄糖，尿素，抗生素等
消毒的方法
大肠杆菌模式图大肠杆菌电镜图
菌落：
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。

大肠杆菌菌落
不同细菌菌落不同
实验一大肠杆菌的培养与分离
大肠杆菌是异养兼性厌氧的肠道杆菌，在肠道中一般对人体无害，但进入泌尿系统就会对人体产生危害。在基因工程技术中广泛的应用，它的质粒是最常见的运载体，它也是基因工程中最常用的受体细胞。
LB培养基的配方
培养基成分
各成分的量
蛋白胨酵母提取物
0.5g 0.25g
NaCl
0.5g
H2O
加至50ml
称量
酵母提取物
蛋白胨
按照物理性质划分培养基
培养基的种类固体培养基（加琼脂）
液体培养基
固体培养基
能形成菌落，用途：微生物的分离、鉴定、保存等
液体培养基
主要用于扩大培养
固体LB培养基每100ml 液体LB培养基中加入2g琼脂，摇匀，灭菌。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
超净台上紫外灯和过滤风
实验过程：
准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒操作阶段：1倒平板：将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过
程。

分装培养基：1倒平板：
将灭菌后的固体培养基倒入培养皿
培养基冷却到60度时倒入
Ⅱ 操作阶段：
培养基成分（culture media）
按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。营养成分：碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。
培养基成分
细菌:
“喜荤”,蛋白胨,牛肉膏,酵母提取液,Nacl等
真菌:
“喜素”,无机物或蔗糖溶液
实验准备工作 1配制培养基
15分钟.
高压蒸汽灭菌锅
灭菌Biblioteka 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三： 1、湿热灭菌时菌体蛋白容易变性； 2、湿热穿透力强； 3、水蒸汽变成水时可放出大量热增强杀菌效果，因此，它是效果最好的灭菌方法。
实验准备工作
2 灭菌和消毒无菌操作目的：为了避免被杂菌污染。
1 对实验操作空间，操作者衣服和手进行清洁和消毒 2培养基，培养器皿，接种用具进行灭菌 3为避免周围微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰旁
例如草履虫、变形虫，单C藻
微生物的新陈代谢类型
同化作用：自养型，异养型异化作用：需氧型，厌氧型，兼性厌氧型。
自养需氧型：光合细菌（蓝藻），硝化细菌等异养需氧型：醋杆菌，真菌，固氮菌等异养厌氧型：乳酸菌，假丝酵母菌等异养兼性厌氧型：酵母菌，大肠杆菌。
一、细菌结构
细胞壁，细胞膜，细胞溶胶，拟核DNA，核糖体，质粒，鞭毛等
操作阶段：1倒平板：将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过程。

2扩大培养：将大肠杆菌接种到LB液体培养基中，
37℃，摇床培养12小时。

3 分离纯化：将大肠杆菌从液体培养基接种到固体培
养基，并形成单菌落。

大肠杆菌扩大培养
条件： 37℃ 恒温培养箱摇床振荡培养
分离纯化大肠杆菌的方法两种：稀释涂布平板法和平板划线法