常规切片的制作

一、实验目的1. 观察肺气肿病变的组织学特征。

2. 了解肺气肿的病理变化及其与正常肺组织的差异。

3. 掌握肺气肿切片的制作方法。

二、实验材料1. 肺气肿患者肺组织标本。

2. 常规病理切片技术所需试剂。

3. 显微镜及配套设备。

三、实验方法1. 切片制作（1）取肺气肿患者肺组织标本，置于4%中性福尔马林固定液中固定。

（2）常规脱水、透明、浸蜡、包埋，制成蜡块。

（3）将蜡块切片，厚度为5μm。

（4）将切片贴附于载玻片上，进行脱蜡、水化、染色等步骤。

（5）用显微镜观察切片。

2. 显微镜观察（1）低倍镜观察：观察肺气肿病变的大体形态，如肺泡扩张、肺组织纤维化等。

（2）高倍镜观察：观察肺气肿病变的微观特征，如肺泡壁破坏、肺泡腔增大、肺泡间隔增宽等。

四、实验结果1. 低倍镜观察肺气肿病变的肺组织呈现出明显的肺泡扩张，肺泡腔增大，肺泡间隔增宽，肺组织纤维化明显。

2. 高倍镜观察（1）肺泡壁破坏：肺气肿病变的肺泡壁变薄，甚至断裂，部分肺泡壁消失。

（2）肺泡腔增大：肺泡腔内充满气体，肺泡壁与肺泡间隔之间的距离增大。

（3）肺泡间隔增宽：肺泡间隔的胶原纤维增多，纤维化明显。

五、实验讨论肺气肿是一种常见的慢性阻塞性肺疾病，其病理特征为肺泡壁破坏、肺泡腔增大、肺泡间隔增宽等。

在本实验中，我们通过肺气肿切片的制作和观察，明确了肺气肿病变的组织学特征。

肺气肿的发病机制复杂，目前尚无确切的治疗方法。

通过了解肺气肿的病理变化，有助于临床医生对肺气肿的早期诊断和治疗方案的选择。

六、实验结论通过本实验，我们掌握了肺气肿切片的制作方法，并观察到了肺气肿病变的组织学特征，为肺气肿的病理研究提供了有力依据。

七、实验心得1. 肺气肿切片制作过程中，应注意切片的厚度和贴附质量，以确保观察结果的准确性。

2. 在显微镜观察过程中，应熟悉肺气肿病变的病理特征，以便准确判断切片中的病变情况。

3. 通过本次实验，加深了对肺气肿病理变化的理解，为今后的临床实践奠定了基础。

常规病理切片的制备（讲稿）亲爱的各位领导，各位老师，大家好。

能站在这个讲台上，对我来说本身就已经是一份莫大的荣誉，但我知道，这个讲台肯定不是属于我的。

我在这里也只能是班门弄斧了。

还真诚的希望各位不要见笑。

如果有什么不对的地方，希望各位领导和老师能够提醒我，帮助我。

因为我是分到了病理科，现在阶段的主要工作是病理技术。

那么我今天就简要的介绍一下在我们科室常规病理切片的制备过程。

这里我们以常规手术标本为例：一．收取标本。

在手术室收取标本，并仔细核对标本的各项信息。

如有误，应立即联系相应科室及医师。

如仍然有误，则可拒收该标本。

二．固定。

第二步和第一步并没有明显的时间上的先后顺序。

其实，准确的说固定必须在收取标本之前就已经进行。

因为活体的器官或组织在离体的那个时候就应该固定。

因为器官或组织离体后，在自然状态下会立刻开始腐败和自溶。

而组织或器官经固定液固定之后能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。

细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。

固定液可以固定任何蛋白质，凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。

另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，这是为什么呢？除了细菌参与外，其本身也是很重要的。

因为组织离体后，供应这此组织的血液随之消失，细胞缺氧，细胞内溶酶体膜的结构受到破坏，破坏后释放出溶酶体酶，组织在溶酶体酶的作用下开始自溶。

日常生活中常碰到的肉变质，就是细菌污染加组织自溶的结果。

这也就是为什么离体器官或组织必须在手术室刚切下来的时候就固定的原因。

在我们科室最常用的固定液是4%中性甲醛溶液（10%中性福尔马林溶液）。

三．水洗及常规取材。

１．水洗是指针对已经固定充分的组织及器官用流水冲洗。

洗去待检标本表面的杂质及其它可能影响诊断的物质。

２．取材，主要是对送检标本进行肉眼检查并记录同时从标本中切取有病变或怀疑有病变的部位。

而对于微小标本，如通过胃镜或纤支镜等取出的标本我们一般对标本进行全取检查。

组织病理切片制备
组织病理切片的制作，首先医生取下组织病理标本，放在10%的中性福尔马林里进行固定，固定完之后标本送到病理科。

小标本需要固定4-6个小时，大标本需要固定6-12个小时，固定完之后由病理医生进行取材。

所谓的取材指把标本取出放在标本盒里，置于全自动脱水机中脱水16个小时处理标本。

处理过程包括组织进行固定、透明、脱水、浸蜡，处理完16个小时之后，病理技师把标本拿到包埋机上进行包埋，把病变组织放在蜡里，包埋成病理蜡块。

蜡块包埋完之后，病理技师把蜡块放在切片机上进行切片，切片大约需要切3-4μm的切片。

切完片子需要捞在病理玻片上，玻片再进行脱蜡，放在二甲苯中需要透明，之后放在全自动染色机中进行染色，再放在封片机里进行封片，这样才能制成病理切片，这个过程一般需要2-3天的时间。

苏木素-伊红染色（HE）切片制作HE制片是病理实验室最基本的方法，是各种制片技术最基础的部分。

它包括组织固定、脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明和封固等程序。

HE染色是既基本又是十分重要的工作。

HE染色的好坏直接影响病理医生的正确诊断，而HE染色质量好坏与HE制片的每一步骤关系都十分密切。

任一步骤出问题都会直接影响最终的染色结果。

现将方法介绍如下：（一）组织处理(全封闭自动组织脱水机处理程序)：（1）福尔马林Ⅰ：30min（2）福尔马林Ⅱ：30min（3）70%乙醇：30min（4）85%乙醇：30min（5）95%乙醇：1h（6）95%乙醇：1h（7）无水乙醇Ⅰ：1.5h（8）无水乙醇Ⅱ：1.5h（9）二甲苯Ⅰ：30min（10）二甲苯Ⅱ：45min（11）石蜡Ⅰ：30min（12）石蜡Ⅱ：30min（13）石蜡Ⅲ：1h（14）石蜡Ⅳ：1h程序中除二甲苯外余试剂处理中均加温至37摄氏度并加压。

石蜡选用熔点为58摄氏度的硬蜡。

组织包埋：包埋时将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。

（二）切片切片厚约4~8μm，通常厚约4μm，细胞小而密的组织如淋巴结，可以切3μm，而细胞疏的组织，如脑组织可切5-8μm。

将切片在45℃左右水浴中展开，展开程度以组织完全摊平为准。

切片至65-75℃烘箱中烤片10min，一般时间越长效果越好，以切片紧贴于载玻片上呈半透明状为佳。

常规组织块捞片1-2张，胃肠镜小组织以3×3排列共捞9个。

（三）染色步骤：（1）环保液脱蜡5min（2）环保液脱蜡5min（3）无水乙醇2min（4）95%乙醇2min（5）85%乙醇2min（6）流水冲洗切片10min（7）抖干切片水分入苏木素10min（8）流水稍洗（9）2%盐酸乙醇分化10-30秒，根据组织不同选择不同的分化时间（10）流水返蓝15min或稀氨水返蓝30秒（11）流水稍洗（12）入伊红20-60秒（13）流水稍洗（14）75%乙醇脱水兼分色数秒（15）85%乙醇脱水兼分色数秒（16）95%乙醇脱水5min（17）无水乙醇脱水5min（18）无水乙醇脱水5min（19）等量乙醇环保液脱水5min（20）环保液二甲苯3min（21）环保液二甲苯5min（22）中性树胶封片（四）对HE切片的质量要求：（1）切片完整、贴片恰当；（2）切片较薄和均匀；（3）无皱折；（4）无刀痕；（5）染色清晰、核浆分明、透明度好；（6）无固缩、龟裂、污染；（7）封胶适当、玻片清洁；（8）标签号码清楚，字体端正。

常规石蜡切片制片规范 Last updated on the afternoon of January 3, 2021常规石蜡切片制片规范1．制片过程中的每一个环节，应确保切片号和蜡块号一致，自始至终不能将号码弄错，一旦发生应重新取材，以防事故发生。

2．制片完成后，应在HE切片上及时粘贴写好本病理科病理号的标签，并认真仔细地核对。

3．认真检查制片质量。

切片优良率（甲、乙级片所占的比例）≥90％，优级率（甲级片所占的比例）≥35%。

不合格切片应立即重做。

4．制片完成后，技术人员应将所制作的切片连同相应的申请单/记录单、取材工作单等一并移交给病理医师，双方经核对无误后，办理移交签字手续。

5．制片工作一般应在取材后2个工作内完成（需要脱钙、脱脂等特殊处理的除外）。

6．制片过程中如发生意外情况，有关技术人员和技术室负责人应及时向病理科主任汇报，并积极设法予以补救。

7．具体HE切片制作技术参见《病理组织学常规制片技术》。

附：1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。

取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，应迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

天津天士力集团研究院药理所 文件编号：1 烘烤切片-常规石蜡切片制作切片的烘烤看似简单，只在烘烤箱或干燥箱一放，让其烘烤就行了，但从某种意义上讲，它也是一个关键，如果切片烘烤不好，到染色的时候，便会使切片脱离载玻片（掉片），使整个过程毁于一旦，因此，认真烤好切片是制好切片的前提。

怎样才能使切片烘烤得好呢？我们的做法如下：当切片裱于载玻片后，于烘烤箱边竖立起来，控干水份，然后平放于烘烤箱的烤板上烘烤，温度可调至70℃。

当最后一个蜡块切完后，前面的切片也烤得差不多了。

关于切片的烘烤，尤其是需做免疫组化切片的烘烤，要特别的注意对抗原的保存，使它们能在合适的烘烤切片时间内既不受到破坏，又能尽量地显示出现，经多组多次的实验认为，温度和时间是极为重要的。

温度过高能使蛋白变性，抗原失活至丧失，时间过长，也会致使其失活和丧失。

最初有人主张切片在60℃以下烘烤30-60min ，然后进行染色，依此法进行实验，结果切片脱片率高，切片松动的占100%，由于切片附贴不牢，染色时不敢用PBS 充分冲洗，造成背影染色加深，鉴别特别困难。

又由于脱片严重，重染次数增多，延误了诊断，也造成人力物力的浪费。

究竟什么样的温度及时间才能做到既使切片附贴牢固，又不会对抗原造成影响的呢？经实验证明：切片在60℃恒温箱中连续烘烤3-5小时最为合适。

这种时间和温度烘烤出来的切片，可以用于抗原修复，PBS 的冲洗，可满足做免疫组化的一切需要。

切片在上述的烘烤时间和温度是否对抗原有影响呢？笔者认为，不必为此而担心。

因为活检组织块浸蜡时，浸蜡箱的温度都调在65℃左右，组织块在这样的温度中起码要浸泡2小时以上，才能达到浸蜡较为彻底的要求。

组织中的抗原，经过65℃的考验，保留下来的，基本上都已具有耐热性，因此，几小时的烘烤，不会对抗原有影响，实验证明，上述的理论完全正确。

常规石蜡切片标本制作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!一、取材1. 选取合适的大小和厚度的组织块，通常为直径约1cm左右。

天津天士力集团研究院药理所 文件编号：
1 裱片-常规石蜡切片制作
将漂浮于水面上的已展开没有皱折的切片捞于载玻片上的过程称为裱片或捞片。

现在市售的烘烤箱都与裱片器连在一起，裱片器上的水温在界定温度后，它可自动调节。

裱片时水温很为关键，一般在45-55℃，如果水温过高，超过石蜡的熔点，切片将会被熔化掉，如果水温过低，在30度以下，切片则裱不好，皱皱巴巴，不能完成展片任务。

切片放入水后，在合适的水温中它会自然展开，有个别没有展开的，用小镊子慢慢将其展开，镊子的用力要恰到好处，如果用力过大，切片会被搅破，如果用力不对，切片无法展开。

应特别注意。

当切片展开后，用载玻片（有人喜欢用蛋白甘油涂于载片上，但据我们二十几年对二十几万张活检切片的经验，没有蛋白甘油涂片也能行）插入水中，靠近展开的切片捞于载玻片上，捞片时应尽量保持裱片器中的水不晃动。

一张载玻片可以捞一张切片，也可以捞数张乃至十几张，这要看组织的大小和病理的需要，一般说大的组织捞一张切片就已足够，小的组织最好就要求多捞一些。

烘烤切片-常规石蜡切片制作切片的烘烤看似简单，只在烘烤箱或干燥箱一放，让其烘烤就行了，但从某种意义上讲，它也是一个关键，如果切片烘烤不好，到染色的时候，便会使切片脱离载玻片（掉片），使整个过程毁于一旦，因此，认真烤好切片是制好切片的前提。

怎样才能使切片烘烤得好呢？我们的做法如下：当切片裱于载玻片后，于烘烤箱边竖立起来，控干水份，然后平放于烘烤箱的烤板上烘烤，温度可调至70℃。

当最后一个蜡块切完后，前面的切片也烤得差不多了。

关于切片的烘烤，尤其是需做免疫组化切片的烘烤，要特别的注意对抗原的保存，使它们能在合适的烘烤切片时间内既不受到破坏，又能尽量地显示出现，经多组多次的实验认为，温度和时间是极为重要的。

温度过高能使蛋白变性，抗原失活至丧失，时间过长，也会致使其失活和丧失。

最初有人主张切片在60℃以下烘烤30-60min，然后进行染色，依此法进行实验，结果切片脱片率高，切片松动的占100%，由于切片附贴不牢，染色时不敢用PBS充分冲洗，造成背影染色加深，鉴别特别困难。

又由于脱片严重，重染次数增多，延误了诊断，也造成人力物力的浪费。

究竟什么样的温度及时间才能做到既使切片附贴牢固，又不会对抗原造成影响的呢？经实验证明：切片在60℃恒温箱中连续烘烤3-5小时最为合适。

这种时间和温度烘烤出来的切片，可以用于抗原修复，PBS的冲洗，可满足做免疫组化的一切需要。

切片在上述的烘烤时间和温度是否对抗原有影响呢？笔者认为，不必为此而担心。

因为活检组织块浸蜡时，浸蜡箱的温度都调在65℃左右，组织块在这样的温度中起码要浸泡2小时以上，才能达到浸蜡较为彻底的要求。

组织中的抗原，经过65℃的考验，保留下来的，基本上都已具有耐热性，因此，几小时的烘烤，不会对抗原有影响，实验证明，上述的理论完全正确。

1/ 1。

组织病理切片制作步骤
本文档将介绍组织病理切片制作的完整步骤。

1. 标本收集和处理
1.1 收集患者的组织标本，并确保其完整性和准确标记。

1.2 将组织标本置于合适的中，用适当的缓冲液或固定剂进行
处理，以保持其形态结构并防止腐败。

2. 标本处理和包埋
2.1 用合适的方法将标本固定在组织处理机中，例如将其浸泡
在缓冲液中或使用组织处理机进行自动处理。

2.2 将处理后的标本转移到合适的包埋中，通常使用蜡或树脂
作为包埋材料。

3. 切片制作
3.1 使用专业的旋转切片机将包埋的组织标本切割成薄片，通
常为4-5微米。

3.2 切割后的切片应浸泡在水中，以去除任何残留的包埋材料。

3.3 将切片转移到玻片上，并确保它们平整地展开。

4. 染色
4.1 选择适当的染色方法，如常规组织染色法（H&E染色），以突出组织的形态结构。

4.2 将切片浸泡在染色液中，按照染色方法的要求进行染色处理。

4.3 染色后，通过洗涤和脱水步骤去除多余的染色剂。

5. 盖片和封口
5.1 在切片干燥后，将一小滴透明胶液滴在切片上。

5.2 轻轻放置盖片在切片上，确保无气泡和皱纹。

5.3 用封口剂封住盖片和玻片的边缘，以保护切片并防止其损坏。

6. 观察和存储
6.1 使用显微镜观察切片，检查组织的结构和病理变化。

6.2 将切片存储在干燥、阴凉和避光的地方，以确保其长期保存和保持质量。

以上是组织病理切片制作的完整步骤。

每个步骤都需要仔细操作和适当的设备来确保切片的质量和准确性。

组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65 C左右熔化的石蜡中，于65C的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。

组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。

组织浸蜡时，由于诱导剂（二甲苯）的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。

当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。

组织浸蜡据多次文献报到必须换几次不同熔点的石蜡。

石蜡有软蜡和硬蜡之分，软蜡的熔点有45 C、52~54 C。

硬蜡的熔有56~58 C, 58~60 C、60~62 C。

浸蜡的顺序是先软蜡，后硬蜡，浸蜡的时间根据组织不同而确定不同的时间。

有的人指出组织浸蜡先放入二甲苯与石蜡等份混合的液体中浸渍然后再放入软蜡、硬蜡。

根据使用经验我认为不必要这样做。

因为组织经二甲苯或其它透明剂透明后, 在组织进入石蜡时, 自己还带着残存的透明液, 如为手工操作,可将组织块控干,尽量减少残存液的存在,而自动脱水机则不然,组织可存留一定量的透明剂, 经使用次数多次后, 残存的透明剂可把石蜡稀释。

因此机器程序处理的次数较多时,应注意换石蜡,以防组织浸蜡效果不好。

一、石蜡的性质石蜡是一种碳氢化合物,由矿物油的分裂产生,它的性质是相当的不同,其熔点在45~62 C之间。

熔点高的为硬蜡，硬度较高，适合于夏天切片的用蜡，熔点低的为软蜡，54 C 以下的称为软蜡,这种适合于组织化学的切片用蜡。

根据石蜡的特点, 根据季节的不同,合理地使用不同熔点的石蜡,这是能否切好片,使切片产生带状的关键。

二、石蜡性质的改善为了获得较好的连续切片, 人们想出了许多种方法, 对石蜡进行改造, 使石蜡的硬度和柔软性更适合于佳片的切出,提出了许多种方法：石蜡加热冷却法刚购入的石蜡,不管是动植物切片石蜡也好,还是工业用蜡也好,都必须进行处理,方法是: 将石蜡放于容器里,于电炉上加热,此时石蜡遇热熔解并发出哔哔吧吧的声音,这是石蜡中含有的杂质,遇热后分解所发出的声音,随着时间的延长,温度的升高,这种声音将逐渐减少,直至消失。

常规组织切片染色制作中常见问题及其解决方法常规组织切片染色制作中常见问题及其解决方法吕俊耀1, 于晓军1, 刘卯阳2( 1.汕头大学医学院法医学教研室, 广东汕头515031; 2.北华大学医学院法医学教研室, 吉林吉林132003)常规组织切片的制作过程较繁琐, 按具体制作效能分为固定、取材、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封片等九大步骤。

其中脱水有12 个步骤、透明有2 个步骤、浸蜡有3 个步骤、染色有23 个步骤, 一般要经过总计40～45 个步骤, 各个实验室根据自身的实际情况及工作习惯各有不同。

事实上, 从尸体储藏到切片染色的整个过程中, 任何步骤出现问题均可影响切片的质量, 因此, 要提供高质量的石蜡切片, 必须对各种潜在的影响因素严加注意, 同时, 观察组织切片时, 还应对可能出现的切片染色质量问题给予充分考虑, 以避免制片过程中的人为假象干扰而作出错误诊断。

现综合有关文献及笔者的经验, 讨论常规组织切片染色制作中常见问题及其解决方法( 表1) 。

1 固定和取材组织切片的固定剂主要为甲醛和酒精, 固定剂可与蛋白质交联结合、使之变性, 组织硬化、结构固定,此外其本身的变性物质可与染料结合, 增强着色能力。

同时, 固定交联和沉淀蛋白质、脂肪、糖、酶等细胞内物质成分, 产生不同的折光率, 使得光学显微镜下易于更清晰地观察组织细胞的微细结构。

常见的与固定过程相关的组织切片染色问题及解决方法见表1。

在诸多影响切片质量的因素中, 尤以固定较为重要。

1.1 减少或去除组织切片中甲醛颗粒甲醛饱和液偏酸, 影响细胞核的染色, 特别是放置较久后, 易析出沉积在组织切片中, 呈细小的黑褐色或黄黑色颗粒物, 影响观察。

以甲醛饱和液和pH7.2 的PBS 缓冲液配制的10%中性甲醛固定液( 体积比为1∶9) 应用最普遍, 效果也相对较好, 可以减少和消除甲醛颗粒。

如果现场无法配制PBS 缓冲液, 可在固定溶液中加入一些普通白粉笔, 使溶液呈中性或弱碱性。

组织经过透明剂的完全透明后，被移放于65℃左右熔化的石蜡中，于65℃的电热恒温箱中浸渍的过程称为浸蜡。

组织在脱水时，组织中的脂类和类脂等物质在脱水剂的作用下被溶解掉，留下了许多腔隙，许多管腔组织和血管，也有许多腔隙，这些都严重地影响了切片。

组织浸蜡时，由于诱导剂（二甲苯）的作用，石蜡进入到组织的各个角落，并在各个角落中保存下来。

当石蜡包埋后冷却时，这浸入到里面的石蜡便可起到支撑的作用，而且使组织不致于变形，塌陷等现象，使切片能完整的切出，便于镜下观察。

组织浸蜡据多次文献报到必须换几次不同熔点的石蜡。

石蜡有软蜡和硬蜡之分，软蜡的熔点有45℃、52~54℃。

硬蜡的熔有56~58℃，58~60℃、60~62℃。

浸蜡的顺序是先软蜡，后硬蜡，浸蜡的时间根据组织不同而确定不同的时间。

有的人指出组织浸蜡先放入二甲苯与石蜡等份混合的液体中浸渍然后再放入软蜡、硬蜡。

根据使用经验我认为不必要这样做。

因为组织经二甲苯或其它透明剂透明后，在组织进入石蜡时，自己还带着残存的透明液，如为手工操作，可将组织块控干，尽量减少残存液的存在，而自动脱水机则不然，组织可存留一定量的透明剂，经使用次数多次后，残存的透明剂可把石蜡稀释。

因此机器程序处理的次数较多时，应注意换石蜡，以防组织浸蜡效果不好。

一、石蜡的性质石蜡是一种碳氢化合物，由矿物油的分裂产生，它的性质是相当的不同，其熔点在45~62℃之间。

熔点高的为硬蜡，硬度较高，适合于夏天切片的用蜡，熔点低的为软蜡，54℃以下的称为软蜡，这种适合于组织化学的切片用蜡。

根据石蜡的特点，根据季节的不同，合理地使用不同熔点的石蜡，这是能否切好片，使切片产生带状的关键。

二、石蜡性质的改善为了获得较好的连续切片，人们想出了许多种方法，对石蜡进行改造，使石蜡的硬度和柔软性更适合于佳片的切出，提出了许多种方法：石蜡加热冷却法刚购入的石蜡,不管是动植物切片石蜡也好,还是工业用蜡也好,都必须进行处理,方法是:将石蜡放于容器里,于电炉上加热,此时石蜡遇热熔解并发出哔哔吧吧的声音,这是石蜡中含有的杂质,遇热后分解所发出的声音,随着时间的延长,温度的升高,这种声音将逐渐减少,直至消失。

常规石蜡切片制片方法组织经系列酒精的脱水，经透明剂的作用，经熔化的石蜡的浸渍，包埋后所切成的切片称为石蜡切片。

组织脱水把含于组织内或细胞内的水份用脱水剂把其置换出来的过程称组织脱水。

不管是正常的组织，还是有病变的组织，都含有不同程度量的水分。

据测定，人体的物质组成约含水55~67%，蛋白质15~18%，脂类10~15%，无机盐3~4%及糖类1~2%[14]。

如果不把这些水分脱去，石蜡切片将无法进行，因为石蜡和水不能混合在一起，所以除去组织中的水分成为制片中的关键，用什么物质才能担当起这个重任呢，至今为止，国内所用的都是酒精。

因它不管在什么样比例的情况下都能和水混合，所以它可以慢慢地将水从组织中置换出来。

酒精脱水力强，对组织又有硬化和易脆的不良影响。

在使用时，通常是从低浓度至高浓度，浓度系列通常是70%、80%、90%、95%和100%，组织经过这一系列处理后，基本可达到脱水的目的。

临床上如使用含酒精的固定液固定组织时，(Carnoy氏、AAF液)组织不需要经过低浓度的酒精，可直接进入95%酒精脱水。

组织脱水，目前常用的有两种方法1.人工组织脱水法该法经济实惠，灵活度高，可根据不同的组织及其大小来确定脱水时间，也可根据不同组织及大小分批进行脱水，其优点是：①可根据不同的组织及大小，任意增减脱水时间，达到脱水目的。

②可随时观察组织的变化，随时中断组织的脱水，不使组织过度硬脆。

③可以多层次地进行脱水。

缺点：①需耗费人力，每个步骤的递增都需要人工完成。

②不能大批量的进行脱水。

③必须在上班完成脱水或者定点于某一浓度的酒精中过夜，晚上无法进行梯度递增。

2.自动组织脱水机脱水法自动组织脱水机的机型品种繁多，大小不一，国内生产的轨道式和圆盘式两种，国外生产的有圆盘式和柜式两种，上述国内外四种型号的机子，我们都使用过，根据使用的效果做一简单介绍。

①轨道式自动组织脱水机。

这种机子容量小，脱水用的试剂不足一千毫升，组织块脱水用的提篮小，每次只能容纳40块组织左右，它适合于较小的单位，但不适合于大单位。

·病理诊断·常规病理切片制作中常见的问题及处理方法山西省万荣县人民医院（044200）陈俊艳常规病理切片最基本的技术就是石蜡切片及苏木素-伊红（HE）染色，是临床外科病理最基本、最普遍的形态学检验技术。

病理切片制作的优劣、完美与否将直接影响病理诊断的准确性。

其制作过程较繁琐，在实际工作中常会遇到各种原因引起的质量不佳，甚至会造成不良后果，每一个细小环节出问题，都会给后面的步骤造成影响。

现结合实际工作中遇到的一些问题和解决方法，谈谈提高病理切片质量的几点体会，工作中不仅要严格按照病理技术操作规范标准规范化操作，对各种潜在影响严加注意，更需要在实际工作中不断总结经验教训、积极探索，提高工作效率，改进制片质量。

1流程步骤1.1标本接收：依申请单认真核对后登记编号。

标本袋（瓶）上姓名一定要标记清楚，严防搞错。

1.2固定：（1）标本良好、充分的固定是制片最关键、最基础的第一关。

固定的目的是组织保持在活体内原有形态，使细胞内各种化学成分得以定为不可溶性，沉淀、凝固细胞内物质。

固定剂可与蛋白质交联，使之变性、组织硬化、结构固定，固定后可与染料结合，增强着色能力，使得显微镜下易于清晰地观察组织细胞内微细结构。

如固定不当，对后续工作所造成的不良影响是无法补救的，标本离体后就及时固定，越新鲜越好。

固定液首选10%甲醛中性缓冲液，量为固定组织体积的4~10倍，固定时间要18~24h。

小标本可适当缩短3~ 6h；大标本一定要按要求切开固定，对当日手术标本不要急于取材，待固定24h后再取。

尤其是要做免疫组织化学（IHC）的固定更应注意（固定时间过长造成某些组织抗原性丢失及甲醛色素沉着）。

（2）常见问题：①减少和去除切片中甲醛颗粒：甲醛饱和液偏酸，影响细胞核着色，特别是固定久后，易析出沉淀，切片上呈细小黑褐色或黄黑色颗粒物，影响观察。

去除方法：切片脱蜡后浓氨水1mL+75%乙醇溶液200mL溶液中处理30min，如还有可以再延长时间，后用流水冲洗。