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参考-氯酚对碱性磷酸酶的抑制动力学研究

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碱性磷酸酶——精选推荐

碱性磷酸酶——精选推荐

解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。

碱性磷酸酶偏高的原因当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。

[1]碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具体讨论如下：1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。

2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸酶偏高。

3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。

4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等[2]。

人体内情况碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。

患这些疾病时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。

但由于骨组织中此酶亦很活跃。

因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。

佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高，应加以鉴别正常范围正常范围（连续监测法）女性，1-12岁小于500U/L；大于15岁，40-150U/L；男性，1-12岁小于500U/L；12-15岁，小于750U/L；大于15岁，40-150U/L。

高值可能说明有胆管阻塞现象；低值更多出现于儿童和孕妇身上。

高值表明有可能发生了活动性骨沉积(这个可能译的不准，请指正，原文为active bone deposition)，因为ALP是成骨细胞活动(造骨)的副产物(例如在佩吉氏斯症[畸形性骨炎]的案例中)。

一般来说，低值要比高值少见。

临床意义临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。

用于有机磷农药残留检测的植物酯酶筛选

用于有机磷农药残留检测的植物酯酶筛选
上 海 理 工 大 学 学 报
第 25 卷 第2期 J. University of Shanghai for Science and Technology Vol.25 No.2 2003
文章编号： 1007-6735(2003)02-0109-03
用于有机磷农药残留检测的植物酯酶筛选
徐 斐, 张慧君, 许学勤, 华泽钊
E——每毫升酶液所含的总酯酶活力, U/ml D——酶液的稀释倍数 K ——某一 pH 下α-萘酚的标准曲线的斜率 OD595 nm——反应后在波长 595 nm 处测得 的吸光度 U 为酶活力单位, 1U 定义为在规定条件下 ,
每分钟催化得到 1 µmol α-萘酚所需的酶量. 1.2.2 对敌敌畏的灵敏度测试[3,5] 用不同 pH 值的缓冲溶液将敌敌畏稀释为不 同 pH 值下的浓度系列(10-3~10-7 mol/l). 按总酯酶 活力测试步骤 , 将 1.950 ml 含有不同浓度农药的 缓冲液取代不含农药的缓冲液 , 测试敌敌畏对植 物酯酶的抑制程度, 其计算式 E − E2 I= 1 × 100 E1 I ——抑制率 E1——无农药抑制时的酶液酯酶活性 E2——某一浓度农药抑制时酶液酯酶活性 参考 Ivanov A N 等人和 Villatte Francois 等人 的文献[3,5] , 将酯酶对敌敌畏的灵敏度定义为曲线 的斜率 K ′ . 将农药浓度取对数值 , 并以之为横坐 标对抑制率作图, 得一曲线的斜率为 式中 n Ii K′ = lg c n i i =1
一个活力高峰, 整条曲线呈抛物线. 这种差别可能 是由动物酯酶和植物酯酶的性质不同而导致的. 2.2 不同小麦酯酶对敌敌畏的灵敏度及 pH 的影响 由于玉米中总酯酶活力偏低 , 所以仅对 5 种 小麦酯酶进行了不同 pH 值下的敌敌畏灵敏度测 试. 图 2 是 pH 为 4.0 时不同浓度 ci 的敌敌畏对豫 麦 39 酯酶的抑制曲线 , 曲线斜率 K ′ 的大小表示 pH 为 4.0 时豫麦 39 对敌敌畏的灵敏度. 按照图 2 数据处理方式, 表 1 列出了 5 种小麦酯酶在不同 pH 条件下的敌敌畏抑制曲线斜率 K ′ 和相应的线 性关系 R2, 表示了 5 种小麦酯酶在不同 pH 条件下 对敌敌畏的灵敏度. 其数值与 Ivanov A N 等人[3] 用固定化乙酰胆碱酯酶和固定化丁酰胆碱酯酶检 测敌百虫 (敌敌畏的前体 , 检测前已转化为敌敌畏) 时所测得的斜率相近.

氯酚类化合物的微生物降解研究进展_姜梅

氯酚类化合物的微生物降解研究进展_姜梅

氯酚类化合物的微生物降解研究进展＊姜　梅　牛世全　展惠英　袁建梅　陈　慧＊＊(西北师范大学,兰州730070)【摘要】　综述了近年在具有降解氯酚类化合物能力的微生物的筛选、氯酚类化合物的好氧和厌氧降解机制以及现代生物技术的开发利用研究.阐述了氯酚类化合物在不同条件下的降解路径.在好氧条件下,单氯酚和二氯酚在氧化酶的攻击下形成氯代邻二酚,邻二酚开环生成相应的氯代粘康酸或半醛,粘康酸内酯化过程中释放氯离子;高度氯代的化合物则是在氢氧化酶作用下生成氯代醌,并逐步脱去所有的氯原子生成苯酚后才开环.在厌氧或缺氧条件下,氯酚进行还原脱氯,在得到电子的同时去掉一个氯取代基.关键词　氯酚类化合物　好氧降解　厌氧降解　生物降解性　生物技术文章编号　1001-9332(2003)06-1003-04　中图分类号　X171　文献标识码　AResearch advances in biodegradation of chlorophenols in environment .JIAN G Mei ,N IU Shiquan ,ZHAN Huiy -ing ,Y UA N Jianmei ,CHEN Hui (Northwest Normal University ,L anzhou 730070,China ).-Chin .J .Appl .Ecol .,2003,14(6):1003～1006.T his paper examines the biodegrada tio n of chlorophenols by microbes and deals with the chlo rophenols -deg rading microbes and the usage of bio technology w ith special emphasis on deg radation mechanisms .Dechlo rination is the first critical step in the bacterial deg radation of many chlo ro niated pollutants .Under aerobic condition ,the deg radation of mono -and dichlorophenols is show n to be initiated by oxyg enation into chlorocatechols ,and dechlo rinatio n occurs only after ring cleavage of the chlo rocatechols .T he degradation of polychlo rinated phenols starts by hydroly tic para -hydroxylation ,yielding chlorinated para -hy droquinone .T he anaerobic biodeg radation of chlo rophenols occurs by reductive dechlorination ,a process by w hich chlo rines are replaced with hydrogen .Key words Chlorophenols ,Aerobic deg radation ,Anaerobic degradation ,Bioderadability ,Bio technology .＊国家自然科学基金资助项目(29977015).＊＊通讯联系人.2001-11-23收稿,2002-04-01接受.1　引 言自20世纪30年代以来,氯酚类化合物(CPs )被广泛用作木材防腐剂、防锈剂、杀菌剂和除草剂等,在亚洲、非洲和南美洲还用于血吸虫病的防治,其中2,4-二氯酚(DCP )和2,4,5-三氯酚(T CP )还大量用于农药2,4-D 和2,4,5-T 的生产,因此在许多工业化国家CPs 的生产规模非常庞大.同时2-氯酚,2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚和五氯酚都是毒性很高的物质,被美国EPA 列入优先控制污染物的黑名单[25].氯酚类化合物的大量使用,使得大量的CPs 污染物进入了环境,给自然环境造成很大的危害[27].因此,清除环境中的该类化合物是人类面临的一大挑战.人们早就发现微生物对自然界有机物的循环起着重要的作用[4].随着工农业的快速发展,进入环境中的外来物越来越多,其中许多有机污染物对微生物有抑制作用,甚至杀灭作用.但是经过长期的接触驯化,有些微生物能通过自然变种,或形成诱导酶,具备了新的代谢功能,从而能降解或部分转化外来化合物.微生物对外来化合物降解或转化的巨大潜力,引起了国内外学者的广泛兴趣.筛选高效的降解菌株,研究污染物的降解机理,以及应用新型现代生物技术加强有机污染物的生物降解是研究微生物降解有机污染物的主要方向.本文就氯酚类化合物在这几方面所开展的一系列工作进行综述.2　具有降解氯酚类化合物能力的微生物氯酚类化合物进入环境已有几十年,有些微生物通过长期自然进化具有降解氯酚类化合物的能力.对此人们进行了多年的研究,现已分离出具有降解氯酚类化合物能力的多种微生物菌株(表1).由表1可以看出,许多微生物能参与氯酚类化合物的降解反应.其中假单胞菌是降解氯酚类化合物最常见的微生物,不仅能降解多种氯酚[22],而且能降解氯苯、多氯联苯、硝基苯和多环芳烃等近100种有毒物质[21,23,29,32].黄孢原毛平革菌(Phanerochate chryso sporium )是对氯代酚化合物具有非专一性降解作用的真菌,还能降解菲、葸等多环芳烃和多氯联苯及其各种染料等[2,17].3　氯酚类化合物的降解机制3.1　氧化脱氯3.1.1先开环再脱氯　在Ps eudomonas sp .好氧培养中,单氯酚和二氯酚首先在单氧化酶作用下发生邻位氧化,生4-氯代儿茶酚降解机制见图1[16].成氯代儿茶酚[6];氯代儿茶酚在1,2-双加氧酶的作用下发生邻位开环生成氯代顺,顺-粘糖酸,内酯化过程中释放出氯离子,并被氧化成马来酰基应用生态学报　2003年6月　第14卷　第6期 CHIN ESE JO U RNA L OF A PPL IED ECOLO GY ,Jun .2003,14(6)∶1003～1006表1　具有降解氯酚类化合物的纯培养微生物Table1Chlorophenols-degrading microbes in pure cu lture氯酚Chlorophenols微生物M icrobes2-氯酚2-ch l orophenol产碱杆菌Alc a ligenes sp.,固氮菌Azotobacter sp.,恶臭假单胞菌Pseudomonas putida,洋葱假单胞菌Ps.cepacia,Desu lfovibr io dechloracetivorans,Ralstonia sp.,Cystobacter i sp.3-氯酚3-ch l orophenol Desulfomomile tiedjei4-氯酚4-ch l orophenol恶臭假单胞菌Ps.putida,洋葱假单胞菌Ps.cepacia,产碱杆菌Alca ligenes s p.,固氮菌Azotobactersp.,睾丸酮丛毛菌C oma monas testosteron i JH5,Ralstonia sp.2,3-二氯酚2,3-dichlorophenol Desulfitobacter iu m deha l ogenans,Desulfomomile tiedjei2,4-二氯酚2,4-dichlorophenol洋葱伯克霍尔德氏菌Burkholderia c epacia(Ps.cepacia),皮氏假单胞菌Ps.pickettii.,梭状芽孢杆菌Clostr idium sp.,Desu lfitobacterium dehalogenans,Des u lformonil e tiediei,R alston ia sp.2,5-二氯酚2,5-dichlorophenol Desulfomon ile tiedjei,Desulfovibrio dechlor acetivor ans2,6-二氯酚2,6-dichlorophenol Desulfitobacter iu m dehalogenans,Ralstonia sp.分枝杆菌Mycobacter iu m ch lophenolicum,洋葱假单胞菌Ps.cepacia,固氮菌Az otobacter sp.3,4-二氯酚3,4-dichlorophenol皮氏假单胞菌Ps.pickettii,Desulfor ibrio dechlorac etivorans3,5-二氯酚3,5-dichlorophenol皮氏假单胞菌Ps.pickettii2,3,4-三氯酚2,3,4-trichlorophenol梭状芽孢杆菌Cl otrid ium sp.,皮氏假单胞菌Ps.pickettii,Desulfovibrio dech loracetivorans2,4,6-三氯酚2,4,6-trichlorophenol黄孢原毛平革菌Phanerochate chrys ospor iu m,固氮菌Azotobacter sp.,梭状牙孢杆菌Clostrid iu m sp.,皮氏假单胞菌Ps.picketti,Desulfitobacteriu m deha l ogenans,Desulfomonile tiedjei2,4,5-三氯酚2,4,5-trichlorophenol梭状芽孢杆菌Cl ostridium sp.,皮氏假单胞菌Ps.pic ketti四氯酚Tetrachlorophenols皮氏假单胞菌Ps.picketti,节杆菌Arthrobacter sp.,Ralstonia sp.五氯酚Pentachlorophenol黄杆菌F lavobacterium sp.,梭状牙孢杆菌Cl ostr idium sp.,洋葱假单胞菌Ps.cepacia,红球菌Rhodococcus s p.,Desulfitobacterium frap pier,Desulfitobacter iu m deha l ogenans,Desulfomonil etiedjei图1氯代儿茶酚的邻位开环Fig.1Degradation pathway for chlorocathol via orth ring fis sion.A:1,2双加氧酶1,2-dioxygenas e.乙酸进入三羧酸循环. 通常认为,在芳香烃的生物降解过程中,当取代基是烷烃时,儿茶酚发生间位开环;氯代芳烃则经邻位开环.但近年的研究表明,在一定的条件下,氯代芳烃好氧降解过程中氯代儿茶酚也存在间位开环[10].Hollender等[11]在以4-氯酚和甲基苯酚为底物富集培养过程中筛选得菌株Comamonas testoteroni JH5,能同时降解4-CP和4-M P.对其降解中间体及降解酶的检测都证实在该菌的作用下,4-CP是经间位开环降解的,降解路径如图2.在经甲酚驯化的Alcaligenes eu-trophus JM P222对2,4-DCP和Ps eudomonas cepacia P166对4-氯苯甲酸降解过程中氯代儿茶酚的间位开环也得到了证实[16].氯代儿茶酚的间位开环的发现使得氯代芳烃和甲基芳烃,这两种曾认为是生物代谢不相容的两类化合物的同时降解成为可能,为代谢不相容化合物的生物降解提供了新的思路.3.1.2先脱氯再开环　从PCP污染环境中筛选得到的Flavobacterium sp.和Rhodococcus chlorophenolicus能降解PCP和其它一些多氯酚[14].在好氧条件下,它们先将CPs苯环氧化生成氯代醌,然后再逐步脱去氯取代基生成单氯酚或苯酚.Flavobacterium sp.对PCP的降解路径如图3[3]. Deng-Yu L等[6]发现,在2,4,6-TCP的降解菌株Azoto bacter sp.G P1对酚类化合物的降解过程中存在上面两种降解路径:苯酚的降解是经儿茶酚降解的;2,4,6-TCP和2,6-DCP 图2　4-氯酚的间位开环降解路径Fig.2Degradation pathw ay for the mechanism of4-CP via meta ring fis-sion.B:2,3-双加氧酶2,3-dioxygenas e.图3　五氯酚的好氧生物降解路径Fig.3Aerobic degradation pathw ay for PCP.的降解首先对位氧化生成醌.K izy ohora等[14]报道了经2,4, 6-T CP诱导的Pseudomonas pickettii菌株DT P0602可将含对位氯的酚转化成相应的氯醌;而经4-CP诱导时,该菌能将邻位缺氯的氯酚经氯代儿茶酚的路径降解.3.2　还原脱氯机制 还原脱氯是指氯酚类化合物在得到电子的同时去掉一个氯取代基并释放一个氯阴离子的过程.这种脱氯机制多发生在厌氧和缺氧条件下,是氯代芳香化合物生物降解的重要途径[8,12,26].因氯原子强烈吸引电子云使苯环上电子云密度降低,在好氧条件下氧化酶很难从苯环上获取电子而发生氧化反应;相反,在厌氧条件下,环境氧化还原电位较低,电子云密度较低的苯环在酶作用下易受到还原剂的亲核攻击,氯1004应　用　生　态　学　报 14卷原子就很容易被亲核取代,许多在好氧条件下难于降解的化合物在厌氧条件下变得容易降解[8,31]. James 等[12]从河底淤泥筛选出一株能在厌氧条件下利用2-CP 生长的细菌.该菌生化特征革兰氏阴性杆菌,接触酶、氧化酶阴性,初步鉴定属Cysto bacterincae 在厌氧条件下,该菌能以乙酸盐为电子供体,将2-CP 还原脱氯产生苯酚.在多氯酚的微生物降解过程中,人们发现邻位氯取代基较间、对位的氯取代基容易还原脱除.M adsen 等[18]研究了TCPs对微生物的毒性及其稳定产甲烷菌培养液对2,4,6-T CP 的降解.结果表明2,4,6-T CP 的转化路径是:依次脱去邻位氯取代剂生成2,4-DCP 和4-CP ;3种T CP s 对微生物的毒性由小至大依次为2,4,6-TCP <2,4,5-TCP <3,4,5-T CP . 由于PCP 应用的广泛性和相对易于厌氧降解,在氯酚类化合物中PCP 的厌氧降解研究最多[1,5,28].日本有关水稻地中PCP 的分布和归趋的研究提供了PCP 厌氧降解的最早报导[6].I de 等第一次证实,四氯酚(T eCPs )和三氯酚是厌氧微生物还原PCP 的产物;而后Broyd ,M ikesell 和W oods 等分别在用厌氧活性污泥对PCP 降解过程中发现,羟基邻位的氯原子较间、对位的容易被取代.Nishino 等[20]在经PCP 驯化的产甲烷菌对CPs 还原脱氯时有相似的结论:在驯化10天的产甲烷菌的作用下,PCP 的脱氯主要发生在羟基邻位,当驯化时间为6个月,PCP 的脱氯可在邻、间、对三位同时发生.图4是驯化甲烷菌对PCP 降解示意图.然而微生物种群不同,环境条件不同,相同化合物会显示不同的代谢途径.我国周岳溪等[33]研究了升流式厌氧污泥床反应器在中温条件下处理含PCP 废水时,检测结果表明,PCP 厌氧降解途径是首先经间位脱氯生成2,3,4,6-T eCP ,进一步间位脱氯生成2,4,6-T CP ,然后经邻位脱氯生成2,4-DCP ,再经对位脱氯生成邻氯苯酚,最后矿化生成甲烷和二氧化碳.图4　产甲烷菌作用下五氯酚的降解路径Fig .4Reductive dechlorination pathw ay for PCP by a PC P -accl imated methanogenic consortium . 尽管在厌氧或缺氧条件下氯酚类化合物生物降解方面的研究表明,在适宜的条件下,厌氧环境中存在大量潜在的降解氯酚的微生物.但至今已发现的具有还原脱氯作用的厌氧微生物仅有3种:Desulfomonile tiedjei DCB -1、Desulfito -bacterium dehalogenans JW /IU -DC1和Desul fitobacterium chlororespirans .这是因为大多数还原脱氯需要多种微生物的参与,首先多种微生物共存易于创造厌氧环境;其次,一种微生物要靠其他微生物作为电子受体和供体;另外一种微生物可以借助其他微生物消除抑制性的中间代谢产物,从而使降解进一步完成[19,24,30].4　新型生物技术的开发利用4.1　基因工程菌开发利用 从自然界筛选驯化获得的土著菌,其降解污染物的酶活性往往有限,同时酶作用的专一性使得微生物对有机污染的降解局限于一种或结构相似的几种化合物.但是从氯酚类化合物的生产和进入环境后所处的系统来看,它总不是单一存在的,而是由多种有机物、多种组分共存.因此对这些菌进行遗传学改造,构建符合实际需求的工程菌成为必要;降解质粒的发现、细胞融合技术和DNA 重组技术等现代生物技术使得构建高效降解工程菌成为可能.R .A .Haugland 用Ps eudomo as putida AC1100(2,4-D 的降解菌)和Alicaligenes eutrophus JM P134(2,4,5-T 的降解菌)进行细胞融合得到一新工程菌RHJ1,可同时降解2,4-D 和2,4,5-T [13].4.2　细胞固定化技术 游离菌体受环境因素影响大,且在生物反应器中易随着反应液的流出物流失,从而影响降解效果.为此,人们开始采用细胞固定化方法,将菌体包埋或吸附于载体中,增强菌体对外界因素的抵抗力,提高其降解能力.Piero M .Armenanto 等[7]分别将Phanerochaete chrysosporium 菌体包埋于硅胶载体和轻木颗粒中降解2-氯酚的实验表明,固定化细胞降解率远远高于游离细胞.目前对载体的研究是一个新热点.4.3　酶工程 微生物对有机污染物的降解归根结底是通过其分泌的酶来完成的,直接采用酶进行有机污染物的降解比微生物修复更具优势:如酶不受微生物代谢抑制剂的影响、酶对环境中营养要求不高、酶在环境中有较大的移动性等.Gianfrada 等[9]发现,固定化后的漆酶和过氧化酶修复2,4-DCP 污染的土壤效果良好.5　展 望 高效降解菌株的筛选及其降解机理的研究使得利用高效降解菌株修复CPs 污染的环境成为可能.但是许多实验表明,当将实验室获得的高效降解菌株投入实际污染现场进行生物修复,往往不能达到预期的效果.因此,如何将实验室驯化出来的微生物应用于实际生物处理或生物修复而保持其降解活性是有待深入研究的课题.其次现代生物技术在有机污染物治理方面的研究大多只是停留在实验室阶段,它们在治理有机污染方面的实际应用是又一值得关注的研究方向.参考文献1　Adrian L ,M anz W ,S zew zyk U .1998.Phys iological characterization10056期 姜　梅等:氯酚类化合物的微生物降解研究进展 of a bacterial consortium reductively dechlorinating1,2,3-and1,2, 4-trichlorobenzene.Appl En viron Microbiol,64:496～5032　Armenante PM,Pal N,Lew andow ski G.1994.Role of mycel ium and extracellular protein in the biodegradation of2,4,6-trichlo-rophenol by Phanerochaete chrysospor ium.Ap pl Envir on Micr obi-ol,66:1711～17183　Chen Y-S(陈勇生),Zhuang Y-Y(庄源益),Dai S-G(戴树桂).1997.A survey on the microbial degradation of chlorinated aromatic compounds.Ad v En viron S ci(环境科学进展),5(2):17～26(in Chines e)4　Chi-Yuan F and Krishnamurthy 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碱性磷酸酶

碱性磷酸酶

碱性磷酸酶中性粒细胞碱性磷酸酶染色碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。

但它不是单一的酶，而是一组同功酶。

目前已发现有 AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与 AKP6 六种同功酶。

其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏，第 3 种来自骨细胞，第 4 种产生于胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。

血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。

生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。

目录生物化学特征碱性磷酸酶偏高的原因碱性磷酸酶高对身体有何影响人体内的来源测定方法正常范围临床意义抑制作用•肝胆疾病引起的ALP升高•碱性磷酸酶偏低的原因生物化学特征碱性磷酸酶名字alkaline phosphatase (ALP 或 AKP)，现多用ALP细菌ALP二级结构(蓝色为N末端红色为C末端)骨软化症。

佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高，应加以鉴别。

研究应用碱性磷酸酶也是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。

与辣根过氧化物酶（HRP)相比，ALP用作标记酶的优点是，稳定性高、灵敏度高，缺点是成本高，标记困难。

在研究中最常用的ALP如下：◇细菌碱性磷酸酶Bacterial alkaline phosphatase (BAP), 来源：Escherichia coli C4 ；◇ Shrimp alkaline phosphatase (SAP), 来源：一种北极虾 (Pandalus borealis) ;◇ 小牛肠碱性磷酸酶Calf Intestinal Alkaline Phosphatase (CIP);◇ 胎盘碱性磷酸酶Placental alkaline phosphatase (PALP)和分泌性碱性磷酸酶the secreted alkaline phosphatase (SEAP)，后者是前者的C末端短缺版——与PALP相比，SEAP没有PALP的C末端最后24个氨基酸(这24个氨基酸构成了与糖基化磷脂酰肌醇靶向锚定的区域) ALP主要应用于分子生物学和酶免分析中：★分子生物学中主要用作核酸的去磷酸化。

BCIP_NBT比色法测定碱性磷酸酶活力_陈国千

BCIP_NBT比色法测定碱性磷酸酶活力_陈国千
图 1 酶量与产物量的关系
二、 反应时间与产物量的关系 取经生理盐水 稀释为 2. 0 U / L和 4. 0 U / L的两份血清标本 ,按附 表操作 ,反应时间分别为 0. 5、 1、 1. 5、 2、 3、 4 h,结果 见图 2。 在 3 h 内 ,吸光度与反应时间基本成正比。
三、 显色稳定性 取 4份不同 ALP 活力的血 清标本 ,反应 2 h 加终止液后 ,放置 0、 1、 2 h 比色 , 吸光度基本不变。
上海医学检验杂志 1999年第 14卷第 2期
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尿脂肪管型检测对肾病诊断的意义
沈忠新 孙作鹏 (中国医科大学附属第一医院检验科 沈阳 110001)
本 文 用自 行 配 制的 甲 苯 胺 蓝、 副品 红 复 合染 液 (以下简称甲、副染液 )制备尿沉渣涂片 ,用普通光镜 观察肾病患者尿脂肪管型 ,探讨尿脂肪管型检测对 肾病诊断的意义。
四、 精密度试验 两份血清标本用生理盐水稀 释后 AL P活力分别为 5. 0 U / L 和 1. 0 U / L,然后 分别作批内、批间各 10次重复性试验 , 5. 0 U / L标 本 CV 值批内 1. 07% ,批间 4. 13% , 1. 0 U /L 标本 CV 值批内 1. 59% ,批间 4. 38% 。
A colo rim etric method fo r measuring alkaline pho sphata se ( AL P) activity with BCIP a nd N BT as substrates w as established. The low limit o f detection is 0. 2 U / L ( Bessy -Low r y method) . The within run CV s o f two lev els of A L P ac tiv ity ( 5. 0、 1. 0 U /L ) ar e 1. 07% a nd 1. 59% , betw een run CV s 4. 13% a nd 4. 38% , respectiv ely. The cor relation coefficient betw ee n this method and Bessy -Lo wr y me tho d ( kinetic ) is 0. 992. The results show ed that this metho d w as simple , reliable and sensitiv e.

血清临床检测指标

血清临床检测指标

血清临床检测指标血清酶血清生化血清蛋白血清激素一、血清酶AＬT: 丙氨酸氨基转移酶(谷丙转氨酶)ASＴ: 天门冬氨酸氨基转移酶(谷草转氨酶)ＡＬＰ(AＬKP): 碱性磷酸酶GGT:γ－谷氨酰转肽酶ＣＫ: 肌酸激酶ＬDH: 乳酸脱氢酶ＡMＹL: 淀粉酶ＬIPＡ:脂肪酶Ａrginase: 精氨酸酶１、AＬT:丙氨酸氨基转移酶(Alaｎinｅａmｉnｏtrａｎｓfｅｒase )来源:大量存在于犬与猫得肝细胞浆内,肝脏疾病时,ALT逸至血清中且超过正常得3倍;横纹肌里也含有此酶,横纹肌损伤,ALT不会超过正常得3倍作用:丙氨酸磷酸吡多醛谷氨酸↓↑ALT(肝内)↓↑丙酮酸磷酸吡多胺α-酮戊二酸犬正常值:8 — 75 (＜6个月);10－100 (成)Ｕ/L猫正常值:12－1１5 (〈６个月);12—13０(成)U／Ｌ升高评价:200～400U／L中等程度肝坏死,400以上表明肝脏严重坏死、肝细胞坏死或损伤停止后此酶仍升高１～３周、此酶半衰期犬6０ｈ,猫３、５h。

检查适应症:腹泻、黄疸、腹水、精神不振与厌食,以及难以诊断得疼痛时,应检验此酶。

ALT值升高:肝病:见于肝坏死、肝肿瘤(癌)、脂肪肝及肝炎(原发及继发)、肝硬化、肝脓肿与肝胆炎时。

肝脏损伤(自然、手术、外伤)药物:氯丙嗪、利福平、红霉素、氯霉素、四环素、庆大霉素、皮质类固醇抗惊厥药(扑癫酮、苯巴比妥)等药物。

中毒:四氯化碳,铅、汞等重金属,砒霜等中毒传染病:犬传染性肝炎、猫传染性腹膜炎、马传贫。

肝脓肿与肝胆炎、钩端螺旋体病、败血症。

其她疾病:肾炎,肺炎,败血症,脑炎,脑膜炎,肌肉发炎,胆囊炎,胆结石,胆管梗阻,甲亢,风湿病,消化道疾病,尿毒症,骨骼疾病、蛔虫、肝片吸虫等时也升高。

严重休克肝脏灌流不足。

ＡLT值在肝损害一周以上才持续升高。

当肝细胞千分之一有炎症时,血清转氨酶含量就会增高一倍以上。

生理:妊娠、过度劳累、剧烈活动(乳酸在体内大量生成、积聚,使机体相对缺氧及低血糖,致使肝细胞膜通透性增加,引起转氨酶升高)、代谢紊乱与继发性肝疾病:急性胰腺炎、糖尿病、应激、肾上腺皮质机能亢进、肾病综合征、毒血症、饥饿或长期厌食、不吸收综合症、酮血病与各种原因引起得肝脂肪沉积症(肥胖猫多见)、猫甲状腺机能亢进、循环紊乱与继发肝病:心肌炎、心脏机能不足、心肌梗死、心力衰竭、严重贫血、缺氧、休克。

碱性磷酸酶

碱性磷酸酶

碱性磷酸的提取分离纯化及其性质的研究李小旭，赵彦彦，周晓倩，张林顺，伍红，林亚秋摘要：从新鲜兔肝中提取碱性磷酸酶，进行分离纯化得到纯度较好的碱性磷酸酶，然后测定其km，对最适温度及其热稳定性、最适pH及酸碱温度性的研究，最后用KH2PO4进行抑制剂类型鉴别。

关键词：温度、pH、酶、Km、抑制剂前言：酶是具有生物催化功能的大分子，在一定的条件下，酶可催化各种生化反应。

酶的催化作用具有催化效率高，专一性强和作用条件温和等显著特点，所以酶在医药、食品、轻工、化工、环保、能源和生物工程等领域应用广泛。

应用之前要先对酶的性质等进行研究，进行酶活力测定，研究抑制剂对酶活性的影响等等。

在抑制剂的的作用下，酶的催化活性降低甚至丧失，从而影响酶的催化功能。

抑制剂有可逆抑制剂和不可逆抑制剂之分。

不可逆抑制剂与酶分子结合后，抑制剂难以除去，酶活性不能恢复。

可逆抑制剂与酶的结合是可逆的，只要将抑制剂除去，酶活性即可恢复。

根据可逆抑制剂作用的机制不同，酶的可逆抑制作用可以分为竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制三种。

酶活力测定的方法多种多样，有化学测定法、光学测定法、气体测定法等。

对酶活力测定的要求是快速、简便、准确。

酶活力测定通常包括连个阶段，首先在一定条件下，酶与底物反应一段时间，然后再测定反应液中底物或产物的变化量。

而酶的活力高低，是以酶的单位数来表示的。

1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定，在特定条件下（温度可采用25℃，PH等条件均采用最适条件），每1min催化0.001mol的底物转化为产物的酶量定义为一个酶活力单位，这个称为国际单位。

由于这个规定没有法律效力所以在现实使用的酶活力单位多种多样。

国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（kat）。

在特定条件下，每秒催化1mol底物转化为产物的酶量定义为1卡特（kat）。

1 材料与方法1.1材料1.11碱性磷酸酶的分离纯化实验本实验使用的原料是新鲜兔肝，仪器有：离心机、搏力匀浆器等，试剂有：（1）0.5mol/L醋酸镁溶液（107.25g醋酸镁溶于蒸馏水中，定容至1000ml）、（2）0.1mol/L醋酸钠溶液（8.2g醋酸钠溶于蒸馏水中，定容至1000ml）、（3）0.01mol/L 醋酸镁-0.01mol/L醋酸钠溶液（准确吸取20ml 0.5mol/L醋酸镁溶液及100ml 0.14mol/L醋酸钠溶液，混匀后定容至1000ml、（4）Tris-HCl pH8.8缓冲液（称取三羟甲基甲烷12.1g，用蒸馏水溶解后定容至1000ml，即为0.1mol/L Trls溶液。

五官科系列-353基础知识-口腔临床药物学

五官科系列-353基础知识-口腔临床药物学

五官科系列-353基础知识-口腔临床药物学[单选题]1.下列哪项不用作牙髓失活剂？()A.金属砷B.蟾酥C.亚砷酸D.多聚甲醛E.甲醛正确答案：E参考解析（江南博哥）：甲醛主要用于根管消毒，不宜做牙髓失活剂。

[单选题]4.有关戊二醛的叙述中，不正确的一项是()。

A.戊二醛是目前较理想的消毒药B.戊二醛在碱性溶液中稳定，在酸性溶液中消毒作用强C.戊二醛消毒作用强，刺激性小D.戊二醛两个活泼醛基可与细菌的重要基团结合而杀菌E.与氢氧化钙配伍可作牙髓切断后的覆盖剂正确答案：B参考解析：戊二醛水溶液在pH为7.5～8.5时，即碱性溶液中抗菌效果最佳，该溶液在14天内可保持其化学稳定性。

[单选题]5.下列哪种药物具有抗牙本质敏感症作用？()A.氯胺-TB.3%硝酸钾凝胶C.次氯酸钠D.酸性磷酸氟凝胶E.8%氟化亚锡正确答案：B参考解析：B项，钾离子可降低感觉神经敏感性，凝胶剂型可持续钾离子作用。

AC两项，次氯酸钠与氯胺-T用于根管治疗。

DE两项，酸性磷酸氟凝胶与8%氟化亚锡为防龋药。

[单选题]6.目前临床倾向于采纳多聚甲醛取代亚砷酸作为牙髓失活剂，其主要理由是()。

A.亚砷酸作用缓慢B.亚砷酸失活作用不理想C.亚砷酸毒性大，无自限性D.多聚甲醛失活效果好E.多聚甲醛失活作用快正确答案：C参考解析：亚砷酸失活作用强，但毒性大，无自限性，而多聚甲醛不良反应少，毒性低，故临床倾向于采用多聚甲醛作为牙髓失活剂。

[单选题]7.下列哪种药物可用于口腔念珠菌感染或其他真菌感染治疗？()A.地塞米松糊剂B.曲安奈德软膏C.制霉菌素膜D.复方四环素膜E.溶菌酶含片正确答案：C参考解析：AB两项，地塞米松糊剂和曲安奈德软膏为皮质激素类药，无抗真菌作用。

DE两项，复方四环素膜和溶菌酶含片有抑菌作用，无抗真菌作用。

C 项，制霉菌素膜有抗口腔念珠菌感染或其他真菌感染作用。

[单选题]8.酚醛树脂塑化剂的主要成分包括()。

A.甲醛溶液、甲酚溶液、丁香酚B.甲酚溶液、甲醛溶液、间苯二酚C.甲醛溶液、甲酚溶液、樟脑苯酚D.甲醛溶液、甲酚溶液、麝香草酚E.甲醛溶液、间苯二酚、戊二醛正确答案：B参考解析：酚醛树脂塑化剂是酚类药物与甲醛在催化剂的作用下进行酚醛缩合反应，形成有一定硬度的塑化物，充填在根管中或包埋塑化根管内的残留物，主要成分包括甲酚溶液、甲醛溶液、间苯二酚。

碱性磷酸酶的检测与临床应用汇总.

碱性磷酸酶的检测与临床应用汇总.

• 但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、 骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、 骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病 、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升 高，所以对人体的危害是比较大的。
测定方法
• 我国曾应用较广的为磷酸苯二钠比色法，但现 在应用较多的是连续检测法。原理为以磷酸对 硝基酚为底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇或二乙醇 胺为磷酸酰基的受体。在碱性环境下，ALP催 化4-NPP水解产生游离的对硝基酚，在碱性溶 液中转变成黄色。根据405nm处吸光度增高速 率来计算ALP活性单位。
肝胆疾病引起的ALP升高
• 肝细胞参与合成ALP，肝胆疾病时增高的ALP来 自肝细胞。
淤胆性疾病时ALP的升高
• ALP存在于毛细胆管面的微绒毛上，在胆汁分 泌障碍时明显增高。因胆汁酸刺激而ALP mRNA转译增高，肝细胞合成ALP亦增高。ALP 经胆汁排出，肝内外胆管阻塞时，ALP有非常 明显的升高，ALP升高先于黄疸的出现，在黄 疸消退后还可持续异常。在原发性胆汁肝硬化 、药物性肝炎、肝移植排斥或淤胆型病毒性肝 炎引起的肝内淤胆，都会使ALP升高，甚至高 达正常值的4倍。
碱性磷酸酶的检测与临床应用
梅河口市新华医院
简介
• 碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中， 其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和 胎盘等组织,这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸 基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成 5’-OH末端。
• 但它不是单一的酶，而是一组同功酶。目前已 发现有 AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与 AKP6 六种同功酶。其中第 1 、 2 、 6 种均 来自肝脏，第 3 种来自骨细胞，第 4 种产生于 胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮 与成纤维细胞。

五官科系列-355基础知识-口腔临床药物学

五官科系列-355基础知识-口腔临床药物学

五官科系列-355基础知识-口腔临床药物学[单选题]1.下列叙述中，哪项不属于局麻药物合理应用？()A.传导阻滞麻醉时可加1:100000肾上腺素B.应准备好抢救设施和抢救药品C（江南博哥）.组织内注射给药时要在回抽无血后缓慢进行D.应详细询问病史和药物过敏史E.多数局麻药物对孕妇和儿童无禁忌正确答案：E参考解析：E项，多数局麻药物对孕妇和儿童是有禁忌的。

ABCD四项，皆属于局麻药的合理应用。

[单选题]2.用于龋病化学治疗的药物包括()。

A.氟化物或硝酸银B.甲硝唑C.氢氧化钙D.麝香草酚E.甲醛甲酚正确答案：A参考解析：A项，龋病的化学治疗是用化学药物处理龋损，使病变终止或消除的办法。

适用于恒牙早期釉质龋尚未形成龋洞者，或乳前牙邻面浅龋及乳磨牙[单选题]3.作为牙髓失活剂，多聚甲醛的含量一般是()。

A.35%～60%B.20%～30%C.10%～20%D.5%～10%E.0.1%～0.5%正确答案：A参考解析：多聚甲醛为甲醛的聚合体，不稳定，高温下甲醛可逐渐成为气体游离。

由于甲醛有凝固蛋白作用，牙髓干性坏死。

作为牙髓失活剂，多聚甲醛的含量一般是35%～60%。

[单选题]4.甲硝唑棒局部应用与口服同剂量的甲硝唑相比，在龈沟液中的药物浓度较()。

A.60倍B.50倍C.40倍D.20倍E.80倍以上正确答案：E参考解析：甲硝唑棒属于牙周缓释抗菌药物。

最大特点是用药量少，局部药物浓度大，维持时间长。

进行牙周冲洗后，取适当长度的药棒放入牙周袋内，本药可在牙周袋内自行软化溶解释药，局部应用与口服同剂量的甲硝唑相比，在龈沟液中的药物浓度较后者高80倍以上，用量则为1/600以下。

[单选题]5.短疗程糖皮质激素疗法适用于()。

A.丹毒B.药疹C.天疱疮D.类天疱疮E.单纯疱疹正确答案：C参考解析：C项，糖皮质激素能抗炎，减轻充血，降低毛细血管通透性，抑制炎性细胞向炎症部位移动。

短程糖皮质激素治疗指疗程小于1个月，包括应激性治疗。

碱性磷酸酶米氏常数及活性的测定

碱性磷酸酶米氏常数及活性的测定

[结果与计算] 在37℃保温15分钟，每生成1mg酚为一个酶 活性单位，以标准曲线查出释放酚量(μg)即可 算出酶活性。
100mL血清中酶活性 = 释放的酚量×（1/0.1）×100× （1/1000）=释放的酚量（μg） （释放酚量（μg）、1/0.1--0.1为实际取血清0.1ml、 100为100ml血清、1000为μg变为mg。）
此式为直线方程，以不同的底物浓度1/[S]为横坐 标，以1/V为纵坐标，并将各点连成一直线，向纵轴方 向延长，此线与横轴相交的负截距为-1/ Km，由此可以 正确求得该酶的Km值，如图所示。
本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同底物浓度 的酶活性，再根据Lineweaver-Burk法作图，计算 其Km值。 可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多，底物反 应的酶对于不同的底物有不同的Km值。本实验以磷 酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催化水解，生成游 离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林 作用，经铁氰化钾氧化，生成红色的醌衍生物，颜 色深浅和酚的含量成正比。根据吸光度的大小可以 计算出酶的活性，也可以从标准曲线上查知酚的含 量，进而算出酶活性的大小。反应式如下：
三、[试剂与器材] 1．0.04mol/L 基质液 2．0.1mol／L碳酸盐缓冲液pH10(37℃) 3．碱性溶液 4．0.5％铁氰化钾 5．0.3％ 4-氨基安替比林 6．酚标准液(0.1mg/mL) 7．37℃恒温水浴锅 8．可见光分光光度计
四、[操作步骤] 1．酚标准曲线的绘制 ：
酚含量（μg）：
(4)各管分别加入0.3％ 4-氨基安替比林 1.OmL，0.5％ 铁氰化钾2.0mL，充分混 匀，放置10分钟，以6号空白管作对照， 于510nm波长处比色测定，根据酚标准 曲线计算酶活性。 (5)以各管基质浓度的倒数1/[S]为横坐 标，以各管吸光度的倒数或者以酶活性 单位的倒数1/V作纵坐标，作图求出Km 值。

五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响

五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响

五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响
耿芳宋;童家明;王秀丽
【期刊名称】《中国医学物理学杂志》
【年(卷),期】1999(016)003
【摘要】目的研究五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶构象与活力的影响，材料和方法：应用荧光光度法检测不同浓度五氯酚溶液中人胎盘碱性酸酶的内源荧光发射光谱，用分光光度法测定其活力。

结果五氯酚浓度小于１．０ｍｍｏｌ／Ｌ时，平衡态酶的内源荧光发射强度及其活力迅速下降，发射峰位明显明显红移；继续提高五氯酚浓度，其荧光发射强度与活力逐渐下降，发射峰位仍在缓慢红移，五氯酚浓度增至５．０ｍｍｏｌ／Ｌ时，荧光淬灭，但酶仍保留５１
【总页数】1页(P187)
【作者】耿芳宋;童家明;王秀丽
【作者单位】青岛大学医学院生化教研室;青岛大学医学院生化教研室
【正文语种】中文
【中图分类】X592.031
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底物和产物及其类似物对植酸酶的抑制动力学

底物和产物及其类似物对植酸酶的抑制动力学

底物和产物及其类似物对植酸酶的抑制动力学宋耿云;王敏;王晓云【期刊名称】《山东农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2005(036)002【摘要】本文研究了底物(植酸)、产物类似物(钒酸盐)和产物(磷酸盐)对植酸酶的活力影响.研究发现当植酸的浓度小于0.6mmol/L时,反应速度随着底物浓度的增加而增大;当植酸的浓度在0.6～1.6mmol/L范围内时,反应速度变化不大,维持一个平台期;而当浓度大于1.6mmol/L时,反应速度随着底物浓度的增加而降低,高浓度植酸对植酸酶有明显的抑制作用,动力学分析表明底物抑制常数K′s为2.0mmol/L.分别以植酸和对硝基苯磷酸二钠(pNPP)做底物时研究了钒酸盐对植酸酶的抑制作用,均表现为非竞争性抑制,抑制常数Ki分别为68.29μmol/L和2.42μmol/L.磷酸盐对植酸酶表现为竞争性抑制类型,抑制常数Ki值为1.45mmol/L.【总页数】6页(P235-240)【作者】宋耿云;王敏;王晓云【作者单位】山东农业大学生命科学学院,山东泰安,271018;山东农业大学生命科学学院,山东泰安,271018;山东农业大学生命科学学院,山东泰安,271018【正文语种】中文【中图分类】Q55【相关文献】1.磷脂酰乙醇胺的酶促合成及底物抑制动力学 [J], 邓杨敏;李冰麟;董文博;杨开利;张小里;赵彬侠2.饲用植酸酶酶活测定过程中底物的影响研究 [J], 闵兆升;郭会明;洪厚胜3.底物抑制型酶的不可逆抑制动力学研究 [J], 赵敏4.微量热法研究过氧化氢酶底物抑制动力学 [J], 王志勇;刘欲文;汪存信;张绍辉;屈松生5.连续搅拌反应器中产物─底物非竞争性抑制动力学的无因次分析 [J], 沈文豪;崔文农;潘柯敏;徐献文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

中性粒细胞碱性磷酸酶积分值（LAP）测定的临床诊断意义

中性粒细胞碱性磷酸酶积分值（LAP）测定的临床诊断意义

中性粒细胞碱性磷酸酶积分值（LAP）测定的临床诊断意义丁淑贞;徐珠;等
【期刊名称】《同煤科技》
【年(卷),期】1992(000)002
【总页数】2页(P63-64)
【作者】丁淑贞;徐珠;等
【作者单位】第一职工医院;第一职工医院
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.恶性淋巴瘤患者骨髓内中性粒细胞碱性磷酸酶测定的临床意义 [J], 张婷;邓晶;沈丹;杨雨;徐威;宋菊贞
2.白细胞形态结合中性粒细胞碱性磷酸酶测定对感染诊断的意义 [J], 贺姝慧;赵巧莲
3.乙型肝炎患者嗜中性粒细胞碱性磷酸酶测定及其临床意义 [J], 骆光亮
4.中性粒细胞碱性磷酸酶测定在小儿肺炎病因诊断中的临床意义 [J], 高振玲
5.探讨肾小球滤过率测定对早期糖尿病肾病患者的临床诊断意义 [J], 张甜甜;王全顺;董寿岳;杨秀梅;赵晓燕;李建华;付文英
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不同试验条件对酸性磷酸酶测定的影响

不同试验条件对酸性磷酸酶测定的影响

不同试验条件对酸性磷酸酶测定的影响曾方银;张豫明;何莹;王前【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2004(019)002【摘要】目的模拟临床检测酸性磷酸酶(ACP)的试验条件,探讨其对ACP活性测定的影响.方法采用不同的试管收集静脉血标本,在不同时间、不同条件下分离血清并检测ACP总活性(ACPT)和耐酒石酸酸性磷酸酶(TrACP)活性,观察其变化规律.结果低温离心后血清置室温1 h内测定ACPT和TrACP活性与其真实值较为一致;血清置室温2.5～3.5 h酶活性下降约9%.离心后未及时分离血清或全血置室温2.5 h 再分离血清可使测定结果偏高,后者可使酶活性升高达20%.促凝胶可使血清ACPT 显著升高,但对TrACP影响不显著.柠檬酸钠抗凝和氟化钠-草酸钾抗凝血浆ACPT 均比普通真空管明显降低,尤以后者对ACP活性的抑制更显著.结论不同试验条件可使ACPT与TrACP的测定结果产生明显差异,做好分析前的质量控制对ACP活性测定非常重要.【总页数】3页(P143-145)【作者】曾方银;张豫明;何莹;王前【作者单位】第一军医大学附属南方医院检验科,广东,广州,510515;第一军医大学附属南方医院检验科,广东,广州,510515;第一军医大学附属南方医院检验科,广东,广州,510515;第一军医大学附属南方医院检验科,广东,广州,510515【正文语种】中文【中图分类】Q555【相关文献】1.试验条件对酸性磷酸酶活性的影响研究 [J], 曾方银;张豫明;郑磊;王前2.试验条件对纺织品中4-氨基偶氮苯测定结果的影响 [J], 薛建平;裴德君3.试验条件对于基质沥青黏度测定的影响 [J], 王文斌;刘忠根4.不同试验条件下流式细胞术测定CD62P的影响因素 [J], 王兆丰;陈松动;郁俊杰5.基于不同方法测定土壤酸性磷酸酶活性的比较 [J], 李莹飞;耿玉清;周红娟;杨英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

棉酚抗生育新机制——对磷脂酶A_2活力的抑制作用(英文)

棉酚抗生育新机制——对磷脂酶A_2活力的抑制作用(英文)

棉酚抗生育新机制——对磷脂酶A_2活力的抑制作用(英文)刘猛六;徐卉平;胡卓逸【期刊名称】《中国生物化学与分子生物学报》【年(卷),期】2001(17)4【摘要】采用微孔比色法及荧光分析法 ,研究抗男性生育化合物棉酚与猪胰腺磷脂酶A2 (phospho lipaseA2 ,PLA2 ,EC3 1 1 4 )温育并透析前后对酶活力及荧光的影响 .结果表明 ,棉酚与PLA2 不可逆地结合明显地降低了PLA2 活力及荧光强度 .棉酚对酶活力抑制作用的IC50 为35μmol L ;当其浓度达到 80 μmol L时 ,能够完全抑制PLA2 ( 4 11μmol L)对合成底物 2 硫代十六酰乙基磷酸胆碱(HEPC ,0 .2 5mmol L)的水解作用 .PLA2 的最大激发波长与发射波长分别为 2 75nm ,343nm ,荧光强度与酶浓度呈良好的线性关系 .棉酚对PLA2 的荧光具有较强的淬灭作用 .由于PLA2 与男性生育密切相关 ,棉酚对PLA2【总页数】5页(P442-446)【关键词】棉酚;磷脂酶A;磷脂酶A2拮抗剂;微孔比色法;荧光分析法;抗生育作用;机制【作者】刘猛六;徐卉平;胡卓逸【作者单位】中国药科大学生物化学研究室【正文语种】中文【中图分类】R979.21【相关文献】1.圆斑蝰蛇毒中性磷脂酶A_2对家兔血小板聚集的抑制作用 [J], 杨小毅;刘广芬;王晴川2.急性低氧性肺动脉高压与磷脂酶A_2活力关系初探 [J], 李惠萍;何金兰;金彩娟;丁劲松3.磷脂酶A_2激活与氨甲酰胆碱所致CCL137人胚肺成纤维细胞中M-胆碱受体隐没的关系(英文) [J], 吕宝璋;田英4.磷脂酶A_2抑制剂的研究──粉防己碱对U937细胞磷脂酶A_2和前列腺素生成的影响 [J], 赵树铭;彭永正;蒋纪恺;康格非;向国春5.磷脂酶A_2活力与急性缺氧性肺动脉高压关系的探讨 [J], 李惠萍;何金兰;全彩娟;丁劲松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

药用植物提取物抑制钙调磷酸酶活性作用的研究进展

药用植物提取物抑制钙调磷酸酶活性作用的研究进展

药用植物提取物抑制钙调磷酸酶活性作用的研究进展何娜;吴鹏飞;崔志峰【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2014(000)003【摘要】Calcineurin inhibitors,such as cyclosporin A and tacroli mus,are widely-used i mmuno-suppressive drugs clinically.However,renal toxicity,hyperglycae mia and other side-effects can occur over long-term use.Isolation of novel calcineurin inhibitors fro m medicinal plants in recent years has pro-vided a new approach to the development of new immunosuppressive drugs with high efficiency and low toxicity.Recnt studies have shown that medicinal plant extracts, such as isogarcinol, quercetin, kae mpferol,phenylethanoid glycosides,ere mophilane sesquiterpenes A and B,pisiferdiol,as well as extracts fro m Smilax china L and Jasminum humile L,have obvious inhibitory effect on calcineurin.%钙调磷酸酶抑制剂如环孢素A和他克莫司是目前临床上常用的免疫抑制剂，但具有肾毒性、高血糖等多种不良反应。

血清临床检测指标 (2)【精选文档】

血清临床检测指标 (2)【精选文档】

血清临床检测指标血清酶血清生化血清蛋白血清激素一、血清酶ALT: 丙氨酸氨基转移酶（谷丙转氨酶）AST：天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转氨酶)ALP（ALKP): 碱性磷酸酶GGT：γ—谷氨酰转肽酶CK：肌酸激酶LDH: 乳酸脱氢酶AMYL：淀粉酶LIPA：脂肪酶Arginase：精氨酸酶1、ALT：丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase ）来源:大量存在于犬和猫的肝细胞浆内,肝脏疾病时，ALT逸至血清中且超过正常的3倍；横纹肌里也含有此酶，横纹肌损伤，ALT不会超过正常的3倍作用：丙氨酸磷酸吡多醛谷氨酸↓↑ALT (肝内）↓↑丙酮酸磷酸吡多胺α—酮戊二酸犬正常值：8 - 75 (〈6个月）；10-100 （成)U/L猫正常值:12—115 （<6个月)；12-130 (成）U/L升高评价：200～400U/L中等程度肝坏死，400以上表明肝脏严重坏死.肝细胞坏死或损伤停止后此酶仍升高1~3周。

此酶半衰期犬60h,猫3.5h。

检查适应症：腹泻、黄疸、腹水、精神不振和厌食，以及难以诊断的疼痛时，应检验此酶.ALT值升高：肝病:见于肝坏死、肝肿瘤（癌)、脂肪肝及肝炎（原发及继发)、肝硬化、肝脓肿和肝胆炎时。

肝脏损伤（自然、手术、外伤）药物：氯丙嗪、利福平、红霉素、氯霉素、四环素、庆大霉素、皮质类固醇抗惊厥药（扑癫酮、苯巴比妥）等药物。

中毒：四氯化碳，铅、汞等重金属，砒霜等中毒传染病：犬传染性肝炎、猫传染性腹膜炎、马传贫。

肝脓肿和肝胆炎、钩端螺旋体病、败血症。

其他疾病:肾炎，肺炎，败血症，脑炎,脑膜炎，肌肉发炎，胆囊炎，胆结石，胆管梗阻，甲亢，风湿病，消化道疾病，尿毒症，骨骼疾病、蛔虫、肝片吸虫等时也升高。

严重休克肝脏灌流不足。

ALT值在肝损害一周以上才持续升高。

当肝细胞千分之一有炎症时，血清转氨酶含量就会增高一倍以上。

生理：妊娠、过度劳累、剧烈活动(乳酸在体内大量生成、积聚，使机体相对缺氧及低血糖，致使肝细胞膜通透性增加，引起转氨酶升高).代谢紊乱与继发性肝疾病：急性胰腺炎、糖尿病、应激、肾上腺皮质机能亢进、肾病综合征、毒血症、饥饿或长期厌食、不吸收综合症、酮血病和各种原因引起的肝脂肪沉积症（肥胖猫多见）、猫甲状腺机能亢进。

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氯酚对碱性磷酸酶的抑制动力学研究摘要：采用分光光度法研究了2-氯酚(2-CP)及4-氯酚(4-CP)对碱性磷酸酶(ALP)活性的抑制作用及抑制动力学. 结果表明, 2种氯酚均可明显抑制ALP的活力, 2-CP及4-CP对ALP酶活力的50%抑制浓度(IC50)分别为23.29 mmol·L-1和30.02 mmol·L-1. 采用Lineweaver-Burk双倒数曲线求得ALP的表观米氏常数K m和表观最大反应速率V max分别0.124 mmol·L-1和1.80 µmol·L-1·min-1. 分别加入2-CP及4-CP后, ALP的表观米氏常数和表观最大反应速率均降低. 抑制动力学研究结果表明, 2-CP及4-CP对ALP的抑制作用类型为反竞争性的可逆抑制, 即2种氯酚通过与酶-底物复合物作用而抑制酶的催化活性. 采用二次作图法求得2-CP及4-CP 对ALP的抑制常数K i分别为18.89 mmol·L-1和32.68 mmol·L-1, 结果表明2-CP比4-CP对ALP呈现更强的抑制作用.Inhibition Kinetics of Chlorophenols on alkaline phosphatase氯酚(chlorophenols)广泛用于农药、杀菌剂、医药、造纸、防腐剂等工业, 属典型的持久性有机污染物, 进入环境后, 可在环境中长期残留, 对生态系统和人类的健康造成严重威胁, 很多氯酚化合物已被各国环境保护部门列为环境优先污染物[1,2]. 氯酚类污染物的毒性效应及其降解一直是国内外研究的热点[3~6].碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP, EC 3.1.3.1)是广泛存在于生物体内的非特异性磷酸单酯水解酶, 它是哺乳动物生理过程中一种非常重要的酶, 被用于很多疾病的辅助诊断[7-9]. ALP也广泛存在于水体和土壤环境中, 监测其活性对于指示环境污染的程度有重要意义。

关于污染物对ALP活性抑制作用的研究报道较多, 刘斌等[10]的研究表明联苯胺是ALP的竞争性抑制剂, Meštrovic和Pavela-Vrancic [11]的研究表明冈田酸是ALP的非竞争性抑制剂, 耿芳宋等[12]的研究表明五氯酚是ALP的反竞争性抑制剂, Whisnant和Gilman [13]的研究表明乙二胺四乙酸是ALP的不可逆抑制剂. 可见, 不同性质的小分子对ALP呈现不同的抑制作用机制. 目前, 尚未见2-氯酚及4-氯酚对ALP抑制作用方面的研究报道. 本文探讨2-氯酚及4-氯酚对ALP的抑制效应及其抑制动力学, 旨在为氯酚类污染物的安全使用及其生物毒性评价提供理论依据.1 材料与方法1.1 仪器与试剂配有恒温装置的722E型分光光度计(上海光谱仪器有限公司), SDC-6低温恒温槽(宁波新芝生物科技股份有限公司), 1810a超纯水器(上海摩勒科学仪器公司), PHS-3C精密pH计(上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂).碱性磷酸酶(ALP, 活力≥ 10 DEA/mg, 来源于牛肠黏膜)及对硝基苯磷酸二钠(p-NPP, ≥99%)购自美国Sigma公司; 三羟基氨甲基(Tris base, Ultra Pure Grade, >99.9%)购自美国Amresco公司; 2-CP及4-CP购自国药集团化学试剂有限公司. 所用试剂均为分析纯, 实验用水为无菌超纯水.1.2 实验方法1.2.1 溶液配制用0.1mol·L-1HCl盐酸将0.1mol·L-1Tris溶液的pH值调节为9.8, 即得到pH为9.8的Tris-HCl缓冲溶液. 用Tris-HCl缓冲溶液配制浓度为5.0×10-5mol·L-1的ALP 贮备液, 冷冻储存, 使用时用Tris-HCl缓冲溶液稀释成所需浓度的使用液; 用超纯水配制浓度为0.20 mol·L-1的p-NPP贮备液, 用时稀释至所需浓度的使用液; 用无水乙醇配制1.0mol·L-1的2-CP及4-CP贮备液; 用超纯水配制浓度为0.10 mol·L-1的MgCl 2溶液.1.2.2 ALP 活力的测定用分光光度法测定ALP 的活力. ALP 催化底物p -NPP 的水解产物对硝基苯酚在400～410 nm 范围有较大吸收, 在本实验条件下对硝基苯酚的最大吸收波长为405 nm, 通过测定405 nm 处水解产物吸光度值的变化来测定酶活力.对照组ALP 活力的测定: 在5 mL 比色管中加入3.0 mL Tris-HCl 缓冲溶液、0.10 mL MgCl 2激活剂及一定体积的p -NPP 使用液, 于37 ℃水浴中恒温5 min, 然后加入一定体积的ALP 使用液, 迅速用缓冲溶液定容至5.0 mL, 摇匀, 开始计时. 于37 ℃水浴中恒温反应一定时间后, 以蒸馏水为参比, 在波长405 nm 处测定其吸光度值(A control ). 以Tris-HCl 缓冲溶液代替ALP 使用液做空白实验，测得试剂空白吸光度值(A 0).抑制组ALP 活力测定: 加入ALP 使用液的同时加入一定浓度的氯酚污染物(2-CP 或4-CP)，其余操作按照对照组ALP 活力测定的步骤，在波长405 nm 处测得加入一定浓度氯酚抑制剂后的吸光度值(A ). 按照下式计算加入氯酚后的相对酶活力:相对酶活性(%)=100⨯∆∆ControlA A (1) 式中, △A Control 是未加氯酚时测得的校正吸光度值, △A Control =A Control －A 0; △A 是加入氯酚后酶催化反应的校正吸光度值, △A =A －A 0.1.2.3 酶催化反应速率的测定通过分光光度计测得的吸光度值变化反映了酶催化反应产物浓度的变化. 固定酶催化反应温度为37℃, 在酶催化反应线性区间内, 采用吸光度扫描模式, 采用水浴恒温保持吸收池的温度为37℃, 每间隔一定时间自动读取水解产物对硝基苯酚在405 nm 处的吸光度值, 对照标准曲线计算对硝基苯酚的浓度(本实验条件下测得对硝基苯酚的摩尔吸收系数ε为19700 L·mol -1·cm -1). 以酶催化反应时间为横坐标, 对硝基苯酚的浓度为纵坐标作图, 其斜率代表酶催化反应的初始速率[14-15].2 结果与讨论2.1 ALP 催化反应进程固定ALP 的浓度为6.0×10-10 mol·L -1, p -NPP 的初始浓度为4.0×10-4 mol·L -1. 测得无抑制剂存在时和分别加入0.010 mol·L -1的2-CP 及4-CP 后, ALP 催化p -NPP 水解的反应时间进程曲线如图1所示.A t / min图1 ALP 的催化反应进程曲线Fig. 1 Curve of ALP-catalyzed reaction progress由图1可见, 无抑制剂存在时, ALP 的催化反应进程曲线的线性期较长, 反应40min 仍呈线性(相关系数r > 0.999), 其斜率代表酶催化反应的初速度. 加入2-CP 及4-CP 抑制剂后, 酶催化反应速率明显降低, 但对催化反应的线性期没有明显影响, 反应40min 仍呈线性(相关系数r > 0.999). 要真实反映出ALP 酶活力的大小, 就必须在产物生成量与反应时间成正比的这一段线性期内进行初速度的测定, 本实验选择 在15 min 内进行ALP 活力的测定.2.2 氯酚对ALP 活力的抑制作用固定ALP 浓度为6.0×10-10 mol·L -1, p -NPP 的初始浓度为4.0×10-4 mol·L -1, 催化反应时间为15 min, 分别测定不同浓度2-CP 及4-CP 对ALP 活力的影响, 结果如图2所示.相对酶活力 (%)c / 10-3 mol/L图2 2-CP 及4-CP 对ALP 活力的抑制作用Fig. 2 Inhibition effect of 2-CP and 4-CP on the activity of AL P由图2可知, ALP 的相对酶活力随着2-CP 及4-CP 浓度的增加而逐渐降低, 当氯酚浓度在0～20 mmol·L -1范围时, 相对酶活力与氯酚浓度之间呈线性负相关关系, 线性拟合曲线分别为: 相对酶活力=－2.0834 c (2-CP) + 98.53(相关系数r > 0.9956); 相对酶活力=－1.6838 c (4-CP) + 100.54(相关系数r = 0.9969). 根据线性拟合曲线, 求得导致ALP 酶活力下降50%所需的2-CP 及4-CP 浓度, 即50%抑制浓度(IC 50)分别为23.29 mmol·L -1和30.02 mmol·L -1. 可见, 2种氯酚对ALP 的抑制作用由强到弱的顺序为: 2-CP, 4-CP.2.3 氯酚对ALP 的抑制动力学2.3.1 氯酚对ALP 的抑制类型固定p -NPP 的初始浓度为4.0×10-4 mol·L -1,不加抑制剂和分别加入0.010 mol·L -1的2-CP 及4-CP 时, 测定不同浓度ALP 催化p -NPP 水解的初始反应速率ν, ν随ALP 浓度变化的关系如图3所示.5101520250246810c (ALP) / 10-10mol•L -1v / 10-7m o l •L -1•m i n -1图3 2-CP 及4-CP 对ALP 的抑制类型Fig. 3 Plots of initial reaction rate versus ALP concentration.由图3可知, 未加抑制剂时, 以初始速率v 对酶浓度c (ALP)作图, 得到一条通过原点的直线(线性相关系数r > 0.99). 分别加入0.01 mol·L -1的2-CP 及4-CP 后, 以ν对c (ALP)作图, 得到两条过原点且斜率降低的直线. 由酶抑制动力学知识可知[16-17], 2-CP 及4-CP 对ALP 的抑制类型属于可逆抑制, 表明氯酚以非共价键与酶分子或酶-底物复合物可逆性结合造成酶活性降低或丧失.2.3.2 氯酚对ALP 的可逆抑制类型及抑制常数根据抑制剂、底物及酶的相互关系, 可逆抑制又可分为竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制和混合型抑制4种类型, 可通过Lineweaver-Burk 双倒数作图法进行判断[17]. 固定反应体系中ALP 浓度为6.0×10-10 mol·L -1, 改变底物p -NPP 的浓度([S ]), 不加抑制剂时和分别加入不同浓度的2-CP 及4-CP 后, 1/v 随1/[S ]的变化关系如图4所示.图4 2-CP 及4-CP 对ALP 反竞争性抑制的双倒数曲线. (a) 2-CP; (b) 4-CP Fig. 4 Lineweaver –Burk plots of uncompetitive inhibition for ALP inhibited by2-CP (a) and 4-CP (b), respectively.由图4(a)及(b)可知, 分别加入3组不同浓度的2-CP 及4-CP 后, g 得到三条与未加抑制剂时近似平行的曲线, 且曲线的横轴截距和纵轴截距的绝对值均随着加入氯酚浓度的增加而增大, 表明加入氯酚后表观米氏常数K m ′和最大反应速率V m ′均降低. 根据酶的可逆抑制动力学特征可知, 2-CP 及4-CP 对ALP 的可逆抑制类型为反竞争性抑制, 即2-CP 及4-CP 与酶-底物复合物在非活性中心结合, 导致酶活力降低. 根据反竞争性抑制的动力学特征, 在可逆抑制剂存在的情况下, 表观米氏常数与抑制常数遵循以下关系[17]: im m K I K K ][1+=' (2)式中, K m ，K m ′分别为无抑制剂存在时和加入抑制剂后的表观米氏常数, [I ]为抑制剂浓度, K i 为抑制常数. 对式(2)取倒数, 得到表观米氏常数倒数1/K m ′与抑制剂浓度[I ]的关系式:][111I K K K K im m m +=' (3) 根据Lineweaver-Burk 双倒数曲线(图4), 分别求得无抑制剂存在时的K m 和V max 以及加入不同浓度2-CP 及4-CP 时的表观米氏常数K m ′和最大反应速率V max ′; 将上述参数代入式(3), 以1/K m ′对[I ]作图(即二次作图法), 分别求得2-CP 及4-CP 对ALP 的抑制常数K i , 各参数的计算结果如表1所示.表1 2种氯酚对ALP 的抑制动力学参数Table 1 Inhibition kinetic parameters of ALP inhibited by chlorophenols抑制剂 浓度 /mmol·L -1 K m ′ /mmol·L -1 V max ′ /µmol·L -1·K i /mmol·L -1 2-CP 10 0.074 1.12 18.89 15 0.063 0.9420 0.055 0.834-CP 10 0.091 1.39 32.68 15 0.082 1.2520 0.074 1.14 *无抑制剂时, K m 为0.124 mmol·L , V max 为1.80µmol·L ·min -1.由表1可知, 无抑制剂存在时, ALP 的表观米氏常数K m 为0.124 mmol·L -1, 最大反应速率V max 为1.80 µmol·L -1·min -1. 加入20 mmol·L -1的2-CP 及4-CP 后, K m ′分别降低至0.055和0.074 mmol·L -1, V max ′分别降低至0.83和1.14 µmol·L -1·min -1. 在本实验条件下, 2-CP 对ALP 的抑制常数(18.89 mmol·L -1)明显小于4-CP 对ALP 的抑制常数(32.68 mmol·L -1), 表明2-CP 与酶-底物形成的复合物较4-CP 与酶-底物形成的复合物更稳定, 呈现出更强的抑制作用. 可见, 对同一种氯酚来说, 抑制作用随着抑制剂浓度的增加而增强; 对研究的2种氯酚来说, 抑制作用随分子结构的变化规律为: 2-CP > 4-CP.ALP 的活性中心是由Asp-91、Ser-92、Arg-166、二个Zn 2+(Zn 2+-1与Zn 2+-2)和一个Mg 2+所组成, 其中Arg-166和二个Zn 2+与底物中磷酸基团的定向结合有关; Zn 2+-1除了定向结合磷酸基团外, 还参与催化作用[18-19]. ALP 不仅催化底物中磷酸单酯键的水解, 亦可催化底物中磷酸基团的转移, 在催化过程中生成磷酸化酶中间复合物(E-P). 氯酚对ALP 反竞争性抑制的机制可能由于氯酚的酚羟基负离子与酶活性中心的Zn 2+-1以离子键可逆结合后, 阻碍了磷酸化酶中间复合物的水解或磷酸基团的转移, 从而抑制酶的催化活性. 一方面, 由于2-CP 的pKa(8.56)小于4-CP 的pKa(9.41), 前者在溶液中以负离子形式存在的比例比后者高; 另一方面, 由于2-CP 与酶-底物形成的复合物的解离平衡常数(即抑制常数K i )比4-CP 与酶-底物形成的复合物的解离平衡常数小, 前者与酶-底物形成的复合物更加稳定. 因此, 2-CP 较4-CP 呈现更强的抑制作用.3 结论研究结果表明, 2-CP 及4-CP 可明显抑制ALP 的催化活性, 抑制作用随着氯酚浓度的增加而加强, 2种氯酚均是ALP 的反竞争性可逆抑制剂, 通过与酶-底物复合物作用而抑制酶的催化活性, 2-CP对ALP的50%抑制浓度及抑制常数均明显较4-CP的小, 表明2-CP比4-CP呈现更强的抑制作用. 本文的研究结果可为氯酚类污染物的安全使用及其生物毒性评价提供理论依据, 氯酚与酶蛋白质相互作用的特征尚需深入研究, 以进一步阐明其致毒机理.参考文献：[1]Czaplicka M. Sources and transformations of chlorophenols in the naturalenvironment [J]. Science of the Total Environment, 2004, 322(1-3):21-39.[2]Chang B V, Zheng J X, Yuan S Y. Effect of alternative electron donors, acceptorsand inhibitors on pentachlorophenol dechlorination in soil [J]. Chemosphere, 1996, 33(2):313-320.[3]Yang S Z, Han X D, Chen W. Advances in the Toxicity of Pentacholrophenol onOrganism. 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