补肾复方对压力负荷增加大鼠循环内分泌的影响

2011年11月山东中医药大学学报第35卷第6期充血性心力衰竭（CHF ）的发生发展是一个众多神经体液因素参与并共同调节的过程，如肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS ）、交感神经系统、心钠素（ANP ）、内皮素（ET ）等异常激活或改变在CHF 的发展机制中起了重要作用［1］。

本研究主要通过观察补肾复方对压力负荷增加大鼠循环血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）、ANP 、ET 的影响，探讨补肾复方逆转压力负荷增加大鼠左室重构的可能机制。

1材料和方法1．1实验材料1．1．1动物雄性SD 大鼠60只，体质量180～200g ，由南京军区南京总医院比较医学科提供，合格证号为0008389。

1．1．2药物及试剂卡托普利12．5mg /片，中美上海施贵宝制药有限公司生产，批号9912031J 。

补肾复方口服液，由淫羊藿、熟地黄、肉苁蓉、益母草、葶苈子、徐长卿、沉香、川芎等组成，生药含量1．6g /mL 。

Ang Ⅱ放免试剂盒，购自中国科学院天津核技术研究所；血浆ET 放免药盒，解放军总医院科技开发中心放免所。

1．2造模方法参考Doering 等［2］的方法，2%戊巴比妥钠40mg /kg 腹腔注射麻醉，固定，剃毛，常规消毒，分层打开腹腔，在左肾上缘分开后腹膜等软组织，暴露腹主动脉，并在双肾动脉上方分离腹主动脉，用银夹造成腹主动脉狭窄（银夹内径0．7mm ），分层关闭腹腔。

1．3分组处理60只大鼠随机分为5组，每组12只，均常规喂养。

假手术组：手术时只分离腹主动脉，不用银夹缩窄，手术4周后，双蒸水灌胃1．5mL /100g 体质量，日1次，连续4周；模型组：造模4周后，双蒸水灌胃1．5mL /100g 体质量，日1次，连续4周；卡托普利组：造模4周后，卡托普利灌胃100mg /kg 体质量（相当于成人80～160倍），日1次，双蒸水稀释，连续4周；补肾复方大剂量组：造模4周后，补肾复方口服液（生药含量24g /kg 体质量，相当于成人16倍），日1次，灌胃，连续4周；补肾复方小剂量组：造模4周后，补肾复方口服液（生药含量12g /kg 体质量，相当于成人8倍），日1次，灌胃，连续4周。

1．4观察指标1．4．1左室质量指数（LVMI ）大鼠处死后，迅速取出心脏，沿房室交界处去除左右心房及大血管，去除右心室游离壁，将左心室加室间隔用JA1003型电子天平准确称重（上海精科天平厂生产）作为左室质量（LVM ），并计算LVMI （‰）作为左室肥厚的指标［计算公式：左室质量（mg ）/体质量（g ）］。

1．4．2左室心肌细胞超微结构大鼠迅速处死后，取左室心肌固定于pH 7．4二甲砷酸钠配置的2%戊二醛溶液内，经取材心肌缓冲液冲洗后再固定于10%锇酸溶液中，按电镜常规技术脱水、包埋，用LKB Ⅴ型超薄切片机作超薄切片，经醋酸钠与枸橼酸铅双重染色，在日本电子1200EX 透射电镜下观察并照像。

1．4．3血浆Ang Ⅱ放免测定腹主动脉取血3mL ，迅速注入冰水冷却的抗凝管（10%EDTA 二钠）中摇匀，即刻再放回冰水浴中冷却，4℃、1000r /min ，离心5min ，分离血浆，-70℃保存。

测定时冰冻的标本在流动的冷水浴中快速融化，在冰水浴中，加样操作后，3500r /min ，离心15min ，吸弃上清，测定各管沉淀的放射性（cpm ）。

1．4．4血浆ANP 放免测定腹主动脉取血2mL ，补肾复方对压力负荷增加大鼠循环内分泌的影响张群燕，蔡辉，赵智明，董晓蕾，郭郡浩，商玮（南京军区南京总医院中西医结合科，江苏南京210002）［摘要］目的：观察补肾复方对压力负荷增加大鼠循环血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）、心钠素（ANP ）、内皮素（ET ）的影响，探讨补肾复方逆转左室重构的可能机制。

方法：参考Doering 等的方法，制备充血性心力衰竭（CHF ）大鼠模型，采用放射免疫分析法，测定血浆Ang Ⅱ、ANP 、ET 水平。

结果：模型组血浆Ang Ⅱ、ANP 、ET 水平较假手术组显著升高（P <0．01），卡托普利组、补肾复方大剂量组、补肾复方小剂量组明显低于模型组（P <0．05）。

结论：补肾复方具有降低压力负荷增加大鼠血浆Ang Ⅱ、ANP 、ET 水平的作用，是其逆转压力负荷增加大鼠左室重构作用的可能机制。

［关键词］左室重构；压力负荷；血管紧张素Ⅱ；心钠素；内皮素；补肾复方；大鼠［中图分类号］R285．5［文献标识码］A［文章编号］1007-659X （2011）06-0532-03［收稿日期］2011-05-17［基金项目］南京军区南京总医院科研基金资助项目（编号：Q2008042）［作者简介］张群燕（1981-），女，湖北武汉人，医学硕士，医师，主要从事中西医基础与临床工作。

第35卷第6期山东中医药大学学报Vol．35，No．62011年11月JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCM Nov .20115322011年11月第35卷第6期表1压力负荷增加大鼠各组血浆Ang Ⅱ、ANP 和ET 的改变（x ±s ）ρ/pg ·m L -1n 血浆Ang Ⅱ血浆ANP血浆ET假手术组11424.8±78.7 5.56±0.91196.9±106.3模型组9646.7±229.1**7.61±1.53**505.3±159.9**卡托普利组8418.7±138.3# 5.41±1.32##196.3±113.4##补肾复方大剂量组8413.8±153.4# 5.21±1.36##268.3±158.2##补肾复方小剂量组8437.8±133.1#5.42±1.78##282.2±137.7##与假手术组比较**P <0.01；与模型组比较#P <0.05，##P <0.01图1压力负荷增加大鼠各组LVMI 的改变注入含10%EDTA 二钠30μL 和抑肽酶40μL 试管中，混匀，4℃、3000r /min ，离心10min ，分离血浆，-70℃存放。

测定前冷水中复融，再次4℃、3000r /min ，离心5min 后取上清采用非平衡法测定。

将聚苯乙稀试管编号，经过加液程序后，混匀，4℃、3500r /min 离心20min ，吸弃上清液，在放射免疫计数器上测定放射性（cpm ）。

1．4．5血浆ET 放免测定腹主动脉取血2mL ，注入含10%EDTA 二钠30μL 和抑肽酶40μL 的试管中，混匀，4℃、3000r /min 离心10min ，分离血浆，-70℃存放。

测定前冷水中复融，再次4℃、3000r /min 离心5min ，取上清采用非平衡法测定。

将聚苯乙稀试管编号，经过加液程序后，4℃、3500r /min 离心25min ，吸弃上清液，在γ计数器上测定沉淀cpm 数。

1．5统计学分析采用SPSS 11．5统计软件进行统计处理，定量资料以x ±s 表示。

实验组和对照组之间比较采用两独立样本t 检验，以P ≤0．05表示差别有统计学意义。

2结果2．1压力负荷增加大鼠各组LVMI 的改变见图1。

2．2左室心肌细胞超微结构假手术组心肌细胞为正常超微结构：细胞核、细胞质、线粒体、肌浆网、肌原纤维形态正常，见图2a ；模型组心肌细胞超微结构的主要改变为：线粒体变性，表现为线粒体嵴减少、断裂，基质密度变浅；肌浆网扩张；肌原纤维变性，表现为肌原纤维断裂及排列紊乱；细胞核边缘不规则，染色质边移，见图2b 。

卡托普利组（图2c ）、补肾复方大剂量组（图2d ）与小剂量组（图2e ）心肌细胞超微结构基本接近正常。

2．3血浆Ang Ⅱ、ANP 、ET 的改变压力负荷增加大鼠各组血浆Ang Ⅱ、ANP 、ET 水平的改变，见表1。

3讨论CHF 属中医学心悸、怔忡、水肿、喘病等范畴。

现代医学认为CHF 的发生发展是一个有众多神经体液因素参与并共同调节的过程［3］。

对于CHF 的治疗，针对交感神经系统、肾素-血管紧张素-醛固酮及神经内分泌系统（RAS ）的药物治疗已取得突飞猛进的成就［4］。

中医药治疗CHF 也积累了较多经验，对改善CHF 患者症状、提高生活质量、降低病死率的事例也屡有报道［5］。

我们根据清·陈士铎《石室秘录》“治心之所以治肾，而治肾之所以治心”这种“心肾相关”的治疗学理论，确立平补肾阴肾阳的补肾复方治疗CHF 。

通过观察补肾复方对压力负荷增加大鼠循环血浆Ang Ⅱ、ANP 、ET 的影响，探讨补肾复方逆转压力负荷增加大鼠左室重构的可能机制。

结果显示：①模型组LVMI 明显高于假手术组（P <0．01），卡托普利组、补肾复方大剂量组、补肾复方小剂量组明显低于模型组（P <0．01）。

②左室心肌细胞超微结构表明，假手术组心肌细胞为正常超微结构：细胞核、细胞质、线粒体、肌浆网、肌原纤维形态正常。

模型组的主要改变为：线粒体变性，表现为线粒体嵴减少、断裂，基质密度变浅；肌浆网扩张；肌原纤维变性，表现为肌原纤维断裂及排列紊乱；细胞核边缘不规则，染色质边移。

卡托普利组、补肾复方大剂量组与小剂量组心肌细胞超微结构基本接近正常。

③模型组血浆Ang Ⅱ、ANP 、ET 水平较假手术组显著升高（P <0．01），卡托普利组、补肾复方大剂量组、补肾复方小剂量组明显低于模型组（P <0．05）。

LVMI 是研究左室重构的传统方法，不仅意味着左室心肌细胞的肥厚，还有可能伴随着心肌间质异常的增殖。

本研究结合左室心肌细胞超微结构等张群燕等：补肾复方对压力负荷增加大鼠循环内分泌的影响5332011年11月山东中医药大学学报第35卷第6期图2左室心肌间质超微结构图2a 假手术组（×20K）图2b 模型组（×15K）图2c 卡托普利组（×12K）图2d 补肾复方大剂量组（×12K ）指标提示，卡托普利、补肾复方可明显降低压力负荷增加大鼠LVMI ；进一步研究显示，补肾复方具有与卡托普利一致的降低压力负荷增加大鼠血浆AngⅡ、ANP 、ET 水平的作用。

因此，我们推测，补肾复方逆转压力负荷增加大鼠左室重构的作用可能与改变循环内分泌有关。

［参考文献］［1］Díez J ，González A ，López B ，et al．Mechanisms of Disease ：path -ologic structural remodeling is more than adaptive hypertrophy in hypertensive heart disease ［J ］．Cardiovascular medicine ，2005，2（4）：209-216．［2］Doering C W ，Jalil J E ，Janicki J S ，et al．Collagen network re -modeling and diastolic stiffness of the rat left ventricle with pr -essure overload hypertrophy ［J ］．Cardiovasc Res ，1998，22：686-695．［3］Solomon S D ，Appelbaum E ，Manning W J ，et al．Effect of thedirect renin inhibitor Aliskiren ，the angiotensin receptor blocker losartan ，or both on left ventricular mass in patients with hype -rtension and left ventricular hypertrophy ［J ］．Circulation ，2009，119：530-537．［4］Pfister R ，Schneider C A．ESC guidelines for the diagnosis andtreatment of acute and chronic heart failure 2008：application of natriuretic peptides ［J ］．Eur Heart J ，2009，30（3）：382-383．［5］王兰玉，程伟．中医治疗高血压左室肥厚的研究进展［J ］．湖北中医杂志，2009，31（3）：62-64．图2e 补肾复方小剂量组（×12K ）534。