肺癌组织中Stat3的表达变化及意义

肝癌的发展ꎮ在我们的研究中ꎬ生物信息分析和荧光素酶报告分析显示ꎬｍｉＲ－３７０－３ｐ是胶质瘤细胞中Ｌｎ￣ｃＲＮＡＨ１９的潜在靶点ꎮ此外ꎬＬｎｃＲＮＡＨ１９的上调与胶质瘤组织中ｍｉＲ－３７０－３ｐ的下调密切相关ꎮ在本研究证实了ｍｉＲ－３７０－３ｐ是ＬｎｃＲＮＡＨ１９的直接靶点ꎮ生物学功能研究表明下调ｍｉＲ－３７０－３ｐ促进了Ｔ９８Ｇ细胞增殖和侵袭ꎮ此外上调ＬｎｃＲＮＡＨ１９靶向ｍｉＲ－３７０－３ｐ促进了Ｔ９８Ｇ细胞增殖和侵袭ꎬ降低了Ｔ９８Ｇ细胞的放疗敏感性ꎮ越来越多的研究表明ＲＡＦ１参与了各种癌症的发展ꎮ如Ｚｈｉ等发现吉非替尼通过ＲＡＦ１/ＥＲＫ通路逆转胰腺癌细胞系的多药耐药[１４]ꎮ在人类结直肠癌中ꎬ抑制ＲＡＦ１激酶活性恢复根尖基极性并损害肿瘤生长ꎮＣｉｒｃＡＧＦＧ１通过ｍｉＲ－３７０－３ｐ/ＲＡＦ１信号促进宫颈癌进展[１５]ꎮ在本研究发现ｍｉＲ－３７０－３ｐ靶向ＲＡＦ１ꎬ下调ＲＡＦ１表达后抑制了Ｔ９８Ｇ细胞增殖和侵袭ꎬ提高了Ｔ９８Ｇ细胞的放疗敏感性ꎬ在胶质瘤发展过程中也发挥了重要作用ꎮ总之ꎬ在胶质瘤组织和细胞中ꎬｌｎｃＲＮＡＨ１９和ＲＡＦ１表达上调ꎬ而ｍｉＲ－３７０－３ｐ表达下调ꎮ我们的研究结果表明ꎬｌｎｃＲＮＡＨ１９可以通过结合ｍｉＲ－３７０－３ｐꎬ进而上调ＲＡＦ１的表达ꎬ促进胶质瘤细胞的增殖和转移ꎬ这可能是胶质瘤治疗的一个很有前景的靶点ꎮʌ参考文献ɔ[１]㊀陈怡东ꎬ邱晓光.２０１８年脑胶质瘤放化疗进展[Ｊ].中华医学信息导报ꎬ２０１９ꎬ３４(１):１４.[２]㊀邢士军ꎬ王莉ꎬ张丽君.ＩＶＩＭ－ＭＲＩ对人脑胶质瘤的病理分级及ＩＤＨ１基因突变的评估价值[Ｊ].中国临床神经外科杂志ꎬ２０２０ꎬ２５(１２):１０~１３.[３]㊀曹美香ꎬ王奉淼ꎬ周素敏.同步高压氧治疗联合放化疗在脑胶质瘤术后患者中的应用[Ｊ].齐鲁护理杂志ꎬ２０２０ꎬ４８４(１６):８４~８７.[４]㊀ＤｉｎｇＹＭꎬＣｈａｎＥＣꎬＬｉｕＬＣꎬｅｔａｌ.ＬｏｎｇｎｏｎｃｏｄｉｎｇＲＮＡｓ:Ｉｍ￣ｐｏｒｔａｎｔｐａｒｔｉｃｉｐａｎｔｓａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｍｙｏ￣ｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈａｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ[Ｊ].ＣｌｉｎＥｘｐＰｈａｒｍａｃｏｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０２０ꎬ４７(１１):１７８３~１７９０.[５]㊀ＳｈｅｎＹꎬＰｅｎｇＸꎬＳｈｅｎＣ.Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｉｍ￣ｍｕｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄｌｎｃＲＮＡｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｓｉｇｎａｔｕｒｅｆｏｒｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ[Ｊ].Ｇｅｎｏｍｉｃｓꎬ２０２０ꎬ１１２(３):２６４０~２６４６.[６]㊀ＷａｎｇＣꎬＫｅＳꎬＬｉＭꎬｅｔａｌ.ＤｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＬｎｃＲＮＡＧＡＳ５ｐｒｏｍｏｔｅｓｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｂｙｄｅ￣ｃｒｅａｓｉｎｇＰＴＥＮｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＧｅ￣ｎｏｍｉｃｓꎬ２０２０ꎬ２９５(１):２５１~２６０.[７]㊀ＺｈａｎｇＪꎬＬｉＸＹꎬＨｕＰꎬｅｔａｌ.ｌｎｃＲＮＡＮＯＲＡＤｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｍｉＲ－２０２－５ｐ[Ｊ].ＯｎｃｏｌＲｅｓꎬ２０１８ꎬ２６(９):１４１１~１４１８.[８]㊀ＦｕＺꎬＣｈｅｎＣꎬＺｈｏｕＱꎬｅｔａｌ.ＬｎｃＲＮＡＨＯＴＴＩＰｍｏｄｕｌａｔｅｓｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｉｎｈｕｍａｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＨＯＸＡ９[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔꎬ２０１７ꎬ１(４１０):６８~８１. [９]㊀ＨｕａＱꎬＬｖＸꎬＧｕＸꎬｅｔａｌ.ＧｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｎｔｓｉｎｌｎｃＲＮＡＨ１９ａｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｉｓｋｏｆｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｉｎａＣｈｉｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ].Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓꎬ２０１６ꎬ３１(５):５３１~５３８. [１０]㊀ＳｕｎＨꎬＷａｎｇＧꎬＰｅｎｇＹꎬｅｔａｌ.Ｈ１９ｌｎｃＲＮＡｍｅｄｉａｔｅｓ１７β－ｅｓｔｒａｄｉｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎＭＣＦ－７ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＯｎｃｏｌＲｅｐꎬ２０１５ꎬ３３(６):３０４５~３０５２.[１１]㊀潘力雄ꎬ陈忠平ꎬ李永强ꎬ等.人脑胶质瘤细胞放射敏感性的实验研究[Ｊ].中国临床神经外科杂志ꎬ２００４ꎬ９(４):２８３~２８５.[１２]㊀ＬｉｕＳꎬＱｉｕＪꎬＴａｎｇＸꎬｅｔａｌ.ＬｎｃＲＮＡ－Ｈ１９ｒｅｇｕｌａｔｅｓｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖａｓｉｏｎｏｆｅｃｔｏｐｉｃｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍｂｙｔａｒｇｅ￣ｔｉｎｇＩＴＧＢ３ｖｉａｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｍｉＲ－１２４－３ｐ[Ｊ].ＥｘｐＣｅｌｌＲｅｓꎬ２０１９ꎬ３８１(２):２１５~２２２.[１３]㊀ＤａｎｇＳꎬＭａｌｉｋＡꎬＣｈｅｎＪꎬｅｔａｌ.ＬｎｃＲＮＡＳＮＨＧ１５ｃｏｎｔｒｉｂ￣ｕｔｅｓｔｏｉｍｍｕｎｏ－ｅｓｃａｐｅｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｈｒｏｕｇｈｔａｒｇｅｔｉｎｇｍｉＲ１４１/ＰＤ－Ｌ１[Ｊ].ＯｎｃｏＴａｒｇｅｔｓＴｈｅｒꎬ２０２０ꎬ２４(１３):８５４７~８５５６.[１４]㊀ＸｉａｏＺꎬＤｉｎｇＮꎬＸｉａｏＧꎬｅｔａｌ.Ｒｅｖｅｒｓａｌｏｆｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔ￣ａｎｃｅｂｙｇｅｆｉｔｉｎｉｂｖｉａＲＡＦ１/ＥＲＫｐａｔｈｗａｙｉｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅ[Ｊ].ＡｎａｔＲｅｃ(Ｈｏｂｏｋｅｎ)ꎬ２０１２ꎬ２９５(１２):２１２２~２１２８.[１５]㊀ＷｕＦꎬＺｈｏｕＪ.ＣｉｒｃＡＧＦＧ１ｐｒｏｍｏｔｅｓｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｐｒｏｇｒｅｓ￣ｓｉｏｎｖｉａｍｉＲ－３７０－３ｐ/ＲＡＦ１ｓｉｇｎａｌｉｎｇ[Ｊ].ＢＭＣＣａｎｃｅｒꎬ２０１９ꎬ１９(１):１０６７~１１０９.ʌ文章编号ɔ１００６－６２３３(２０２１)１２－１９４３－０６ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２激活ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３信号通路调控人口腔癌ＫＢ细胞增殖侵袭和转移周㊀涛ꎬ㊀钱㊀永ꎬ㊀刘韦淞ꎬ㊀邓㊀达ꎬ㊀赵方腾ꎬ㊀姜垂广(海南省肿瘤医院头颈外科ꎬ㊀海南㊀海口㊀５７０３１２)ʌ基金项目ɔ海南省卫生健康行业科研项目ꎬ(编号:１８Ａ２００１０７)ʌ摘㊀要ɔ目的:探讨ＣＯＸ－２在人口腔癌ＫＢ细胞中的表达量及其调控癌细胞增殖㊁侵袭和转移的作用机制ꎮ方法:利用ｑＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＣＯＸ－２在人口腔癌和癌旁正常组织㊁人口腔癌ＫＢ细胞和人口腔上皮ＨＩＯＥＣ细胞中的差异表达ꎮ通过慢病毒转染ꎬ建立ＣＯＸ－２高表达的ＫＢ细胞系或加入ＣＯＸ２抑制剂(塞来昔布)后ꎬＲＴ－ｑＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测细胞系中ＣＯＸ－２的表达水平ꎬＣＣＫ－８法检测细胞增殖能力ꎬＴｒａｎｓｗｅｌｌ检测细胞的侵袭能力ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析细胞内ＥＭＴ相关蛋白的表达ꎬＥＬＩＳＡ方法检测细胞培养液中ＰＧＥ２的含量ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＫＢ细胞系ＪＡＫ㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ＳＴＡＴ３和ｐ－ＳＴＡＴ３蛋白的表达ꎮＰＧＥ２受体ＰＴＧＥＲ２抑制剂(ＡＨ６８０９)或ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３通路抑制剂(ＡＧ４９０)作用ＫＢ细胞系后ꎬ检测ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴ能力ꎮ结果:与癌旁正常组织相比ꎬ人口腔癌组织中ＣＯＸ－２表达明显升高(Ｐ<０.０５)ꎬ与ＨＩＯＥＣ细胞相比ꎬＫＢ细胞中ＣＯＸ－２表达明显升高(Ｐ<０.０１)ꎮ成功构建了ＣＯＸ－２高表达的ＫＢ细胞系ꎬ过表达ＣＯＸ－２促进了ＫＢ细胞增殖㊁侵袭与ＥＭＴꎬ使ｐ－ＪＡＫ和ｐ－ＳＴＡＴ３蛋白表达明显上升ꎬ且上调了细胞培养液中ＰＧＥ２表达ꎮＡＨ６８０９或ＡＧ４９０作用ＫＢ细胞能明显抑制ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴ的促进作用ꎮ结论:ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２激活ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３信号通路促进人口腔癌ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴꎮʌ关键词ɔ㊀ＣＯＸ－２ꎻ㊀ＰＧＥ２ꎻ㊀ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３ꎻ㊀口腔癌ꎻ㊀增㊀殖ꎻ㊀侵㊀袭ʌ文献标识码ɔ㊀Ａ㊀㊀㊀㊀㊀ʌｄｏｉɔ１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００６－６２３３.２０２１.１２.００２ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２ＡｃｔｉｖａｔｅｓｔｈｅＪＡＫ/ＳＴＡＴ３ＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙｔｏＲｅｇｕｌａｔｅｔｈｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＩｎｖａｓｉｏｎａｎｄＭｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆＫＢＣｅｌｌｓｉｎＨｕｍａｎＯｒａｌＣａｎｃｅｒＺＨＯＵＴａｏꎬＱＩＡＮＹｏｎｇꎬＬＩＵＷｅｉｓｏｎｇꎬｅｔａｌ(ＨａｉｎａｎＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｉｔａｌꎬＨａｉｎａｎＨａｉｋｏｕ５７０３１２ꎬＣｈｉｎａ)ʌＡｂｓｔｒａｃｔɔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ:ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ－２ｉｎｈｕｍａｎｏｒａｌｃａｎｃｅｒＫＢｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ:ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ－２ｉｎｈｕｍａｎｏｒａｌｃａｎｃｅｒａｎｄａｄｊａｃｅｎｔｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓꎬｈｕｍａｎｏｒａｌｃａｎｃｅｒＫＢｃｅｌｌｓａｎｄｈｕ￣ｍａｎｏｒａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＨＩＯＥＣｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｑＲＴ－ＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ.ＴｈｅＫＢｃｅｌｌｌｉｎｅｗｉｔｈｈｉｇｈＣＯＸ－２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｒＣＯＸ２ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ(ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ)ｗａｓａｄｄｅｄꎬｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＣＯＸ－２ｉｎＫＢｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＲＴ－ｑＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔꎬＣＣＫ－８ａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬＴｒａｎｓｗｅｌｌａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌｉｎｖａｓｉｏｎꎬａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＭＴ－ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｃｅｌｌｓꎬＰＧＥ２ｃｏｎｔｅｎｔｉｎｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＥＬＩＳＡꎬａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＪＡＫꎬＰ－ＪＡＫꎬＳＴＡＴ３ａｎｄＰ－ＳＴＡＴ３ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔ￣ｅｒｎｂｌｏｔ.ＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｉｎｖａｓｉｏｎꎬａｎｄＥＭＴｏｆＫＢｃｅｌｌｓｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄａｆｔｅｒＰＧＥ２ｒｅｃｅｐｔｏｒＰＴＧＥＲ２ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ(ＡＨ６８０９)ｏｒＪＡＫ/ＳＴＡＴ３ｐａｔｈｗａｙｉｎｈｉｂｉｔｏｒ(ＡＧ４９０)ａｃｔｅｄｏｎＫＢｃｅｌｌｌｉｎｅｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ:ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ－２ｉｎｈｕｍａｎｏｒａｌｃａｎｃｅｒｔｉｓｓｕｅｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎａｄｊａｃｅｎｔｎｏｒｍａｌｔｉｓｓｕｅｓ(Ｐ<０.０５).ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＨＩＯＥＣｃｅｌｌｓꎬｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ－２ｉｎＫＢｃｅｌｌｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ(Ｐ<０.０１).ＫＢｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗｉｔｈｈｉｇｈＣＯＸ－２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ.ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＯＸ－２ｐｒｏｍｏｔｅｄｐｒｏ￣ｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄＥＭＴｏｆＫＢｃｅｌｌｓꎬｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ－ＪＡＫａｎｄｐ－ＳＴＡＴ３ｐｒｏ￣ｔｅｉｎｓꎬａｎｄｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＧＥ２ｉｎｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ.ＡＨ６８０９ｏｒＡＧ４９０ｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄＥＭＴｏｆＫＢｃｅｌｌｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ:ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２ａｃｔｉｖａｔｅｓｔｈｅＪＡＫ/ＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｔｏｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄＥＭＴｏｆＫＢｃｅｌｌｓｉｎｈｕｍａｎｏｒａｌｃａｎｃｅｒ.ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ＣＯＸ－２ꎻ㊀ＰＧＥ２ꎻ㊀ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３ꎻ㊀Ｏｒａｌｃａｎｃｅｒꎻ㊀Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎻ㊀Ｉｎｖａｓｉｏｎ㊀㊀口腔上皮癌是世界上第六大最常见的癌症ꎬ其预后很差ꎬ每年有超过５０％的病例被诊断为口腔上皮癌[１]ꎮ研究发现口腔上皮癌的侵袭潜能与预后不良密切相关[２]ꎮ一些研究者已经证实深部浸润前的高恶性分级对口腔上皮癌的颈部区域淋巴结转移和预后具有预测价值ꎮ因此ꎬ为了改善口腔上皮癌患者的预后ꎬ必须阐明其潜在的侵袭机制和新的治疗策略ꎮ近些年越来越多的研究发现ＣＯＸ－２在喉部鳞状细胞癌㊁乳腺癌㊁肺癌㊁胃癌㊁食道癌㊁结肠癌㊁卵巢癌㊁肝癌等多种癌症中均有过表达ꎬ且生存率低㊁预后差[３]ꎮ此外ꎬ研究发现ＣＯＸ－２可促进细胞增殖㊁血管生成㊁肿瘤侵袭和转移[４]ꎮ据报道ＣＯＸ－２可抑制细胞凋亡和免疫反应ꎮ吲哚美辛通过下调ＣＯＸ－２抑制人胰腺星状细胞的增殖和活化[５]ꎮ另外ꎬ在胃癌和乳腺癌中ꎬＣＯＸ－２的表达与ＶＥＧＦ－Ｃ和淋巴管密切相关ꎬ提示ＣＯＸ－２与肿瘤转移有关[６]ꎮＣＯＸ－２介导肿瘤间质催乳素信号以启动肿瘤发生ꎮ但是有关ＣＯＸ－２具体调控口腔上皮癌发展的机制尚不明了ꎮ本研究主要通过分析ＣＯＸ－２调控口腔上皮癌ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴ的作用机制ꎬ进一步阐明ＣＯＸ－２在口腔上皮癌发展过程中发挥的关键作用ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀主要材料:人口腔上皮癌组织和癌旁正常组织均来自本医院ꎬ样本的采取经过了患者和家属的同意ꎬ并保存在－２０ħ备用ꎮ人口腔上皮癌细胞(ＫＢ细胞)及其人永生化口腔上皮细胞(ＨＩＯＥＣ细胞)来自中国科学院上海细胞库ꎻＤＭＥＭ(Ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ－ｍｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ'ｓｍｅｄｉｕｍ)培养基㊁胎牛血清㊁青霉素㊁链霉素和胰蛋白酶来自购自Ｇｉｂｃｏ公司ꎻＢＣＡ蛋白定量试剂盒㊁ＣＣＫ－８试剂盒和ＳＤＡ－ＰＡＧＥ试剂盒来自上海碧云天生物科技有限公司ꎻ荧光定量ＰＣＲ试剂盒购自日本ＴａｋａｒａꎻＴｒｉｚｏｌ来自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司ꎻ塞来昔布(ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ)和ＡＨ６８０９来自美国ＡＰＥｘＢＩＯ公司ꎻＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ㊁Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ㊁ｐ－ＪＡＫ㊁ｐ－ＳＴＡＴ３抗体购自ＡｂｃａｍꎻＤＡＢ显色试剂盒来自北京中杉金桥生物科技有限公司ꎻＣＯＸ－２抗体来自ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司ꎮ１.２㊀方㊀法１.２.１㊀细胞培养和细胞转染:取ＫＢ细胞和ＨＩＯＥＣ细胞ꎬ用加入１０％ＦＢＳ㊁１％青霉素及链霉素的ＤＭＥＭ培养基培养ꎬ细胞放在３７ħ㊁５％ＣＯ２㊁饱和湿度的恒温培养箱中生长ꎬ待细胞融合度达９０％左右时ꎬ用０.２５％胰酶进行消化和传代培养ꎮ传代的细胞铺于细胞培养板中ꎬ待细胞汇合达７５％时ꎬ用Ｔｕｒｂｏｆｅｃｔ试剂按照说明书转染质粒ꎮ１.２.２㊀慢病毒转染:取长满后的ＫＢ细胞ꎬ用０.２５％胰酶进行消化ꎬ将稀释后的细胞接种于２４孔板中ꎬ加入含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养基ꎬ待细胞汇合至７５％时ꎮ用辅助质粒(ＧＡＧ㊁ＲＥＶ㊁ＶＳＶ－Ｇ)和目的基因转染细胞ꎬ培养２４ｈꎬ去上清ꎬ将２ｍＬＡｄｖａｎｃｅｄＤＭＥＭꎬ４０μＬ血清ꎬ４０μＬＬ－Ｇｌｕꎬ２０μＬ１ˑｃｈｅｍｉｃａｌｌｙｄｅｆｉｎｅｄｌｉｐｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅꎬ２μＬ０.０１ｍｍｏＬ/Ｌ胆固醇和２μＬ０.０１ｍｍｏＬ/Ｌ蛋黄卵磷脂混匀后加入细胞ꎬ４８ｈ后收集上清液ꎮ将收集的慢病毒和５００μＬ含１００ｍＬ/ＬＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养基混合ꎬ添加到ＫＢ细胞中ꎬ加入浓度为６μｇ/ｍＬ的聚凝胺ꎬ显微镜观察细胞出现绿色荧光ꎬ添加终浓度为５μｇ/ｍＬ的嘌呤ꎬ观察细胞发光数量达到９０％以上ꎬ收取细胞系进行检测ꎮ１.２.３㊀细胞增殖测定:取长满后的ＫＢ稳转细胞系ꎬ用０.２５％胰酶进行消化ꎬ将稀释后的ＫＢ细胞铺于９６孔板ꎬ每孔１００μＬꎬ９６孔板细胞置于常规培养箱中培养ꎬ细胞分为处理组和未处理组ꎬ皿底细胞观察为７０％~８０％时ꎬ分别用ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ㊁ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０处理细胞ꎬ于３７ħ㊁饱和湿度和５％ＣＯ２培养箱静置４８ｈꎬ将１０μＬＣＣＫ－８工作液加入细胞中ꎬ慢慢晃匀后置于细胞培养箱持续培养２ｈꎬ取出细胞培养板ꎬ在酶标仪上读取各孔细胞在４５０ｎｍ处的吸光值ꎮ１.２.４㊀细胞侵袭实验:取长满后的ＫＢ稳转细胞系ꎬ用０.２５％胰酶进行消化ꎬ将稀释后的ＫＢ细胞铺于１２孔板ꎬ观察密度为７０％~８０％时ꎬ分别用ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ㊁ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０处理细胞ꎬ长满后进行消化制成细胞悬液ꎬ将１００μＬ融化的Ｍａｔｒｉｇｅｌ基质加入Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上室ꎬ上室中加入１ˑ１０５个的细胞悬液ꎬ下室中加入６００μＬ完全ＤＭＥＭ培养基ꎬ置于培养箱中培养２４ｈꎬ取出小室ꎬ加入４％多聚甲醛进行固定ꎬ取ＰＢＳ加入其中进行洗涤ꎬ再加入０.１％结晶紫染色ꎬ２０ｍｉｎ后随机选取５个视野中的细胞进行观察和计数ꎮ１.２.５㊀ＥＬＩＳＡ检测细胞培养液中ＰＧＥ２表达:将长满后的ＫＢ稳转细胞系用０.２５％胰酶消化ꎬ铺于９６孔板ꎬ在常规培养箱中培养ꎬ皿底细胞观察为７０％~８０％时ꎬ用ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ处理细胞ꎬ同时设置未处理组作为对照ꎬ于３７ħ㊁饱和湿度和５％ＣＯ２培养箱静置４８ｈꎬ用ＥＬＩＳＡ试剂盒检测细胞培养液中ＰＧＥ２表达ꎮ１.２.６㊀ｑＲＴ－ＰＣＲ:收取分别用ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ㊁ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０处理后处于对数期的ＫＢ稳转细胞系ꎬ加入Ｔｒ￣ｉｚｏｌ提取细胞总ＲＮＡꎬ在紫外风光光度计下读取ＲＮＡ浓度和纯度ꎬ取Ａ２６０/２８０值在１.８~２.０范围内的ＲＮＡ样品ꎬ根据反转录二步法将ＲＮＡ反转为ｃＤＮＡꎮ以ｃＤＮＡ为模板ꎬ使用ＳＹＢＲＲｅａｌ－Ｔｉｍｅ试剂盒进行ｑＲＴ－ＰＣＲꎬ重复３个复孔ꎬ以ＧＡＰＤＨ为内参ꎬ使用２－әәＣｔ法分析结果ꎮ引物见表１ꎮ１.２.７㊀Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ:收取分别用ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ㊁ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０处理后处于对数期的ＫＢ稳转细胞系ꎬ加入裂解液在冰上充分裂解ꎬ用ＢＣＡ试剂盒定量上清蛋白的浓度ꎬ每孔取５０μｇ蛋白进行点ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳ꎬ蛋白分离后通过湿转仪器将蛋白转移到ＰＶＤＦ膜上ꎮ加入５％的脱脂奶粉进行过夜封闭ꎬ封闭完成后ＰＶＤＦ膜在相应的的一抗中过夜孵育ꎬ加入ＴＢＳＴ清洗５次ꎬ再和二抗在室温条件下孵育２ｈꎬ加入ＴＢＳＴ清洗ꎬ清洗干净后用ＥＣＬ试剂盒进行蛋白曝光ꎮ表１㊀引物序列引物序列(５'－３')ＣＯＸ－２－ＦＴＣＡＡＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＡＴＣＴＡＣＧＧＴＴＣＯＸ－２－ＲＣＴＧＴＴＧＴＧＴＴＣＣＣＧＣＡＧＣＣＡＧＡＴＴＧＡＰＤＨ－ＦＣＡＡＧＧＡＣＣＴＣＴＡＣＧＣＣＡＡＣＡＣＧＡＰＤＨ－ＲＴＧＧＡＧＧＣＧＣＧＡＴＧＡＴＣＴＴ１.３㊀统计学分析:用ＳＰＳＳ１６.０软件进行统计分析ꎮ多组间比较采用单因素方差分析ꎬ组间两两比较采用ＬＳＤ－ｔ检验ꎬＰ<０.０５时ꎬ表示差异显著或极显著ꎮ２㊀结㊀果２.１㊀ＣＯＸ－２在口腔上皮癌组织和口腔上皮癌ＫＢ细胞中表达上调:由图１Ａ和１Ｂ结果可知ꎬ和癌旁正常组织相比ꎬ口腔上皮癌组织中ＣＯＸ－２的基因和蛋白表达量明显上升(Ｐ<０.０５)ꎮ由图１Ｃ和１Ｄ结果可知ꎬ和ＨＩＯＥＣ细胞相比ꎬＫＢ细胞中ＣＯＸ－２基因和蛋白表达量明显升高(Ｐ<０.０１)ꎮ以上结果表明ＣＯＸ－２在口腔上皮癌组织和口腔上皮癌ＫＢ细胞中表达上调ꎮ图１㊀ＣＯＸ－２在口腔上皮癌组织和口腔上皮癌ＫＢ细胞中表达上调Ａ:ＲＴ－ｑＰＣＲ检测ＣＯＸ－２在癌旁正常组织和口腔上皮癌组织中的基因表达量ꎻＢ:Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＣＯＸ－２在癌旁正常组织和口腔上皮癌组织中的蛋白表达量ꎻＣ:ＲＴ－ｑＰＣＲ检测ＣＯＸ－２在ＨＩＯＥＣ和ＫＢ细胞中的基因表达量ꎻＤ:Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＣＯＸ－２在ＨＩＯＥＣ和ＫＢ细胞中的蛋白表达量２.２㊀过表达ＣＯＸ－２促进ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴ:由图２Ａ可知ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞中ＣＯＸ－２的基因表达量明显高于Ｌｅｎｔｉ－ＧＦＰ细胞(Ｐ<０.０１)ꎮ由图２Ｂ－２Ｃ可知ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞中ＣＯＸ－２的蛋白表达量明显高于Ｌｅｎｔｉ－ＧＦＰ细胞(Ｐ<０.０１)ꎬ说明过表达ＣＯＸ－２的ＫＢ稳转细胞系构建成功ꎮ由图２Ｄ－２Ｈ结果可知ꎬ和Ｌｅｎｔｉ－ＧＦＰ细胞相比ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞增殖能力明显提高(Ｐ<０.０５)ꎬ细胞侵袭数目明显增加(Ｐ<０.０１)ꎬＮ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显上升(Ｐ<０.０１)ꎬＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显下降(Ｐ<０.０１)ꎮ和Ｌｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞相比ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２＋ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ细胞增殖能力明显降低(Ｐ<０.０５)ꎬ细胞侵袭数目明显减少(Ｐ<０.０１)ꎬＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显上升(Ｐ<０.０１)ꎬＮ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显下降(Ｐ<０.０１)ꎮ表明ＣＯＸ－２能够增强ＫＢ细胞的增殖㊁侵袭和ＥＭＴꎮ图２㊀过表达ＣＯＸ－２促进ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴＡ:ＲＴ－ｑＰＣＲ检测ＣＯＸ－２在Ｌｅｎｔｉ－ＧＦＰ和Ｌｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞中的基因表达量ꎻＢ:Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＣＯＸ－２在Ｌｅｎｔｉ－ＧＦＰ和Ｌｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞中的蛋白表达量ꎻＣ:ＣＯＸ－２蛋白相对表达量ꎻＤ:ＣＣＫ－８检测过表达ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞活力的影响ꎻＥ:ＫＢ细胞侵袭数目ꎻＦ:Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ检测过表达ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞侵袭的影响ꎻＧ:Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测过表达ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞内Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ㊁Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达量的影响ꎻＨ:Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ㊁Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白的相对表达量２.３㊀ＣＯＸ－２上调ＫＢ细胞内ＰＧＥ２表达和激活ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３通路:由图３Ａ－３Ｃ可知ꎬ和Ｌｅｎｔｉ－ＧＦＰ细胞相比ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞内ＰＧＥ２表达明显提高(Ｐ<０.００１)ꎬｐ－ＪＡＫ/ＪＡＫ比值明显增加(Ｐ<０.０１)ꎬｐ－ＳＴＡＴ３/ＳＴＡＴ３比值明显上升(Ｐ<０.０１)ꎬ和Ｌｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞相比ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２＋ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ细胞内ＰＧＥ２表达明显降低(Ｐ<０.００１)ꎬｐ－ＪＡＫ/ＪＡＫ比值明显降低(Ｐ<０.０１)ꎬｐ－ＳＴＡＴ３/ＳＴＡＴ３比值明显降低(Ｐ<０.０１)ꎮ表明ＣＯＸ－２能够上调ＫＢ细胞内ＰＧＥ２表达和激活ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３通路ꎮ图３㊀ＣＯＸ－２上调ＫＢ细胞内ＰＧＥ２表达和激活ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３通路Ａ:ＥＬＩＳＡ检测过表达ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞中ＰＧＥ２表达的影响ꎻＢ:Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测过表达ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３通路的影响ꎻＣ:ｐ－ＪＡＫ/ＪＡＫ和ｐ－ＳＴＡＴ３/ＳＴＡＴ３比值２.４㊀ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０作用细胞明显抑制了ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴ:由图４Ａ－４Ｅ结果可知ꎬ和Ｌｅｎｔｉ－ＧＦＰ细胞相比ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞增殖能力明显提高(Ｐ<０.０５)ꎬ细胞侵袭数目明显增加(Ｐ<０.０１)ꎬＮ－ｃａｄ￣ｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显上升(Ｐ<０.０１)ꎬＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显下降(Ｐ<０.０１)ꎮ和Ｌｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２细胞相比ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２＋ＡＨ６８０９细胞增殖能力明显降低(Ｐ<０.０５)ꎬ细胞侵袭数目明显减少(Ｐ<０.０１)ꎬＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显上升(Ｐ<０.０１)ꎬＮ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显下降(Ｐ<０.０１)ꎬＬｅｎｔｉ－ＣＯＸ－２＋ＡＧ４９０细胞增殖能力明显降低(Ｐ<０.０５)ꎬ细胞侵袭数目明显减少(Ｐ<０.０１)ꎬＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显上升(Ｐ<０.０１)ꎬＮ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量明显下降(Ｐ<０.０１)ꎮ表明ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０作用细胞明显抑制了ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴꎮ图４㊀ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０作用细胞明显抑制了ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴＡ:ＣＣＫ－８检测ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０作用细胞后ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞活力的影响ꎻＢ:ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０作用细胞后ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞侵袭的影响ꎻＣ:ＫＢ细胞侵袭数目ꎻＤ:Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＡＨ６８０９或ＡＧ４９０作用细胞后ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞内Ｅ－ｃａｄ￣ｈｅｒｉｎ㊁Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达量的影响ꎻＥ:Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ㊁Ｎ－ｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白的相对表达量３㊀讨㊀论口腔上皮癌是世界上最常见的肿瘤之一ꎬ其发病率和死亡率都在迅速上升ꎬ但其预后仍不理想ꎮ然而ꎬ口腔癌相关蛋白和基因的调控网络尚不清楚ꎬ限制了临床治疗的改进ꎬ充分地了解参与恶性行为的蛋白可能有助于改善口腔癌的治疗ꎮ近些年的研究表明ＣＯＸ－２能够作为人类疾病的关键调节因子ꎮ如通过抑制ＣＯＸ－２过表达的癌细胞中的ｄｅｌｔａ－５去饱和酶来抑制癌细胞的迁移和侵袭ꎮ本研究首先发现ＣＯＸ－２在口腔癌组织和ＫＢ细胞中表达上调ꎬ与上述研究结果一致ꎬＣＯＸ－２在口腔癌ＫＢ细胞中作为癌基因发挥作用ꎮ我们建立了ＣＯＸ－２的稳转细胞系ꎬ进一步研究表明过表达ＣＯＸ－２促进了ＫＢ细胞的增殖㊁侵袭和ＥＭＴꎬ而用塞来西布抑制ＣＯＸ－２后ꎬ明显下调了ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴ的促进作用ꎮ研究结果提示ＣＯＸ－２在口腔癌发展中具有重要作用ꎬ有望成为肿瘤治疗的新靶点ꎮ后续研究发现ＣＯＸ－２上调ＫＢ细胞内ＰＧＥ２表达和激活ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３通路ꎮＰＧＥ２作为花生四烯酸ＣＯＸ－２的主要催化产物ꎬ是ＣＯＸ－２的下游产物ꎬ且ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２通路在肿瘤发生中起关键作用ꎮ有文献报道乙型肝炎病毒Ｘ蛋白可通过ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２信号通路促进了乙肝相关性肝细胞癌发展和转移ꎮ研究发现ＰＧＥ２具有４中受体ꎬ而其中ＰＴＧＥＲ２在ＰＧＥ２参与的肿瘤发展中具有关键作用ꎬ抑制剂作用ＰＴ￣ＧＥＲ２能够下调ＰＧＥ２对肿瘤发展的调控作用ꎮ我们研究发现ＣＯＸ－２能够上调ＫＢ细胞内ＰＧＥ２表达ꎬ塞来西布抑制ＣＯＸ－２表达后ꎬ发现细胞培养液中ＰＧＥ２表达量明显降低ꎮ考虑到ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２轴在肿瘤发展中的关键作用ꎬ我们用ＡＨ６８０９抑制了ＰＧＥ２受体ＰＴＧＥＲ２的表达ꎬ进一步探讨了ＫＢ细胞系的生物学功能ꎬ结果发现ＣＯＸ－２对ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴ的促进作用明显受到抑制ꎮ这些年的研究发现ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３通路在癌症增殖㊁侵袭和转移过程中发挥了关键作用ꎬ如丹参酮Ｉ通过抑制ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３信号通路抑制骨肉瘤的生长和转移[７]ꎮ癌相关成纤维细胞通过分泌ＩＬ－１１靶向ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３/Ｂｃｌ２途径促进胃癌化疗耐药[８]ꎮ而且研究表明在肝癌细胞中ꎬＣＯＸ－２和ＪＡＫ/ＳＴＡＴ通路密切联系ꎬ抑制ＣＯＸ－２的过度表达可能影响ＪＡＫ/ＳＴＡＴ细胞信号转导通路的活性[９]ꎮ此外还发现小檗碱通过ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２介导的ＪＡＫ２/ＳＴＡＴ３信号通路抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移[１０]ꎮ此外文献报道在肝细胞癌(ＨＣＣ)中ꎬＴＬＲ４信号促进ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２/ＳＴＡＴ３正反馈环路ꎬ参与ＨＣＣ进展[１１]ꎮＡＴＰγＳ通过/ＪＡＫ２/ＳＴＡＴ３/ｃｐｌ(２)信号通路诱导Ａ５４９细胞中ＣＯＸ－２的表达和ＰＧＥ(２)的产生ꎮ考虑到ＣＯＸ－２/ＰＧＥ２与ＪＡＫ２/ＳＴＡＴ３信号通路在肺癌㊁直肠癌等癌症中发挥的关键作用ꎬ我们猜想在口腔癌ＫＢ细胞中ꎬＣＯＸ－２/ＰＧＥ２也可能通过ＪＡＫ２/ＳＴＡＴ３信号通路发挥作用ꎮ因此我们用ＡＧ４９０抑制了ＫＢ细胞内ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３通路ꎬ发现能够过表达ＣＯＸ－２后ꎬＫＢ细胞的增殖㊁侵袭和ＥＭＴ能力明显下调ꎮ研究结果表明ＣＯＸ－２/ＰＥＧＥ/ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３轴在口腔癌ＫＢ细胞发展中发挥了关键作用ꎬ值得进一步深入的研究ꎮ综上所述ꎬ该研究表明ＣＯＸ－２在口腔癌ＫＢ细胞中高表达ꎬＣＯＸ－２/ＰＧＥ２激活ＪＡＫ/ＳＴＡＴ３信号通路促进人口腔癌ＫＢ细胞增殖㊁侵袭和ＥＭＴꎮ本研究结果为口腔癌患者的靶向治疗提供了新的研究方向ꎮʌ参考文献ɔ[１]㊀王伊婷ꎬ何永文.口腔鳞状细胞癌相关长链非编码ＲＮＡ调控肿瘤细胞上皮－间充质转化的研究进展[Ｊ].国际口腔医学杂志ꎬ２０１８ꎬ４５(６):２１~２５.[２]㊀毕也ꎬ周童ꎬ贾颜鸿ꎬ等.ＭＭＰ－１４在口腔癌患者预后及转移的临床病理学研究[Ｊ].口腔医学ꎬ２０１８ꎬ３８(８):６８５~６８９.[３]㊀ＪｉａｎｇＷꎬＹａｎＹꎬＣｈｅｎＭꎬｅｔａｌ.Ａｓｐｉｒｉｎｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖ￣ｉｔｙｏｆｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎｂｙａｂｒｏｇａｔｉｎｇｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｏｆＮＦ－κＢｔｏｔｈｅＣＯＸ－２ｐｒｏｍｏｔｅｒ[Ｊ].Ａｇｉｎｇ(ＡｌｂａｎｙＮＹ)ꎬ２０２０ꎬ１２(１):６１１~６２７.[４]㊀ＨａｓｈｅｍｉＧｏｒａｄｅｌＮꎬＮａｊａｆｉＭꎬｅｔａｌ.Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ｉｎｃａｎｃｅｒ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０１９ꎬ２３４(５):５６８３~５６９９.[５]㊀ＳｕｎＬꎬＣｈｅｎＫꎬＪｉａｎｇＺꎬｅｔａｌ.Ｉｎｄｏｍｅｔａｃｉｎｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｐｒｏｌｉｆ￣ｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐａｎｃｒｅａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＣＯＸ－２[Ｊ].ＯｎｃｏｌＲｅｐꎬ２０１８ꎬ３９(５):２２４３~２２５１.[６]㊀张建军ꎬ邹建平ꎬ马晓雁ꎬ等.胃癌组织中ＣＯＸ－２㊁ＮＦ－κＢ及ＶＥＧＦ的表达及与血管生成的关系[Ｊ].现代中西医结合杂志ꎬ２０１８ꎬ２７(１２):１２６３~１２６６.[７]㊀ＷａｎｇＷꎬＬｉＪꎬＤｉｎｇＺꎬｅｔａｌ.ＴａｎｓｈｉｎｏｎｅＩｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａｖｉａｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇＪＡＫ/ＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＣｅｌｌＭｏｌＭｅｄꎬ２０１９ꎬ２３(９):６４５４~６４６５.[８]㊀ＭａＪꎬＳｏｎｇＸꎬＸｕＸꎬｅｔａｌ.Ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｐｒｏ￣ｍｏｔｅｔｈｅｃｈｅｍｏ－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｔｈｒｏｕｇｈｓｅｃｒｅ￣ｔｉｎｇＩＬ－１１ｔａｒｇｅｔｉｎｇＪＡＫ/ＳＴＡＴ３/Ｂｃｌ２ｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＲｅｓＴｒｅａｔꎬ２０１９ꎬ５１(１):１９４~２１０.[９]㊀赵军艳ꎬ郑艳敏ꎬ李轩.ＣＯＸ－２和Ｐ－ＳＴＡＴ＿３ꎬＰ－ＳＴＡＴ＿５在肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１中的表达及意义[Ｊ].中国组织化学与细胞化学杂志ꎬ２０１１ꎬ２０(２):１４４~１４７.[１０]㊀ＬｉｕＸꎬＪｉＱꎬＹｅＮꎬｅｔａｌ.Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅｉｎｈｉｂｉｔｓｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅ￣ｔａｓｔａｓｉｓｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｖｉａＣＯＸ－２/ＰＧＥ２ｍｅｄｉａ￣ｔｅｄＪＡＫ２/ＳＴＡＴ３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１５ꎬ１０(５):ｅ０１２３４７８.[１１]㊀ＬｉｎＡꎬＷａｎｇＧꎬＺｈａｏＨꎬｅｔａｌ.ＴＬＲ４ｓｉｇｎａｌｉｎｇｐｒｏｍｏｔｅｓａＣＯＸ－２/ＰＧＥ２/ＳＴＡＴ３ｐｏｓｉｔｉｖｅｆｅｅｄｂａｃｋｌｏｏｐｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌ￣ｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ(ＨＣＣ)ｃｅｌｌｓ[Ｊ].Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙꎬ２０１５ꎬ５(２):ｅ１０７４３７６.ʌ文章编号ɔ１００６－６２３３(２０２１)１２－１９４８－１０胃癌外泌体ｌｎｃＲＮＡＣＡＳＣ１１调控ＴＬＲ４/ＮＦ－κＢ通路诱导Ｍ２型巨噬细胞极化周安付１ꎬ㊀谭㊀琰１ꎬ㊀张惠晶２(１.海南医学院第一附属医院消化内科ꎬ㊀海南㊀海口㊀５７０１０２２.中国医科大学附属第一医院内镜科ꎬ㊀辽宁㊀沈阳㊀１１０００１)ʌ摘㊀要ɔ目的:探究胃癌外泌体ｌｎｃＲＮＡＣＡＳＣ１１对Ｍ２型巨噬细胞极化的影响及机制ꎮ方法:人单核细胞ＴＨＰ－１加入ＰＭＡ诱导其分化为Ｍ０型巨噬细胞ꎬＭ０型巨噬细胞和胃癌细胞ＭＧＣ－８０３中转染空白质粒(Ｖｅｃｔｏｒ组)和ｌｎｃＲＮＡＣＡＳＣ１１过表达质粒(ｌｎｃＲＮＡＣＡＳＣ１１组)ꎬｑＲＴ－ＰＣＲ转染后巨噬细胞中ｉＮＯＳ㊁ＣＤ１６㊁ＣＤ２０６㊁Ａｒｇ－１㊁Ｙｍ１㊁ＴＮＦ－α㊁ＩＬ－１β㊁ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０ｍＲＮＡ的表达ꎬ流式细胞术检测ＣＤ２０６＋ＣＤ１４＋细胞比例ꎮ提取人胃粘膜细胞ＧＥＳ－１㊁人胃癌细胞株ＭＧＣ－８０３㊁ＳＧＣ７９０１㊁ＭＫＮ４５以及ʌ基金项目ɔ海南省卫生健康行业科研项目ꎬ(编号:２０Ａ２００１７０)ꎻ国家自然科学基金项目ꎬ(编号:８１８６０６５０)ʌ通讯作者ɔ张惠晶。

JNK 和 STAT3蛋白在宫颈病变组织中的表达及临床意义陈滢;程艳香【摘要】目的：观察宫颈上皮内瘤样病变（ CIN）及宫颈癌（ CC）组织中c-Jun 氨基末端激酶（研究JNK）和信号转导及转录活化因子3（STAT3）的表达变化，并探讨其意义。

方法采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶（SABC）法，检测10例正常宫颈组织（NCE）、105例CIN和66例宫颈癌（CC）组织中JNK和STAT3蛋白表达情况，并分析其阳性表达率与CC临床病理参数的关系。

结果 JNK蛋白在NCE、CIN及CC组织中阳性表达率分别为10．0％、45．7％、75．8％，三者两两相比，P均＜0．05。

STAT3蛋白在NCE、CIN及CC组织中阳性表达率分别为10．0％、48．6％、83．3％，三者两两相比，P均＜0．05。

JNK、STAT3蛋白阳性表达均与CC患者年龄、临床分期、淋巴结转移无关，但与肿瘤组织学分级有关，其中低分化癌组织中JNK、STAT3蛋白水平表达显著高于高、中分化癌组织（P＜0．005）。

结论 JNK、STAT3蛋白在CIN及CC组织中表达增强，与CC发生、发展相关；检测两者表达水平可作为CC预后判断的一项客观指标及为个体化治疗提供依据。

%Objective To observe the expression of c-Jun N-terminal kinase ( JNK) and signal transducer and activator of transcription3(STAT3) in cervical intraepithelial neoplasia(CIN) and cervical cancer(CC) tissues and to explore its signifi-cance .Methods Expression of JNK and STAT 3 protein was detected by immunohistochemical SABC method in 10 cases of nor-mal cervical epithelium(NCE),105 cases of cervical intraepithelial neoplasia(CIN) and 66 cases of cervical cancer(CC),their relationship with clinicopathological parameters of cervical cancer were analyzed .ResultsThe positive expression rates of JNK protein in NCE,CIN and CC tissue were 10.0%,45.7%and 75.8%respectively.There was significant difference between these groups (P<0.05).Meanwhile,the positive expression rates of STAT3 protein NCE,CIN and CC tissue were 10.0%,48.6%and83.3%respectively.There was significant difference between these groups (P<0.05).The JNK and STAT3 expression was not related to age,clinical stage and lymph node metastasis ,but related to histological grade .The expression of JNK ans STAT3 was higher in poorly differentiated carcinoma than in highly-and moderately-differentiated one,(P<0.005,χ2=12.08,12.61).Con-clusion The expression of JNK and STAT3 protein in cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer increase and correlate with the carcinogenesis ,development of cervical cancer .Detecting JNK and STAT3 protein expression may be efficient indicators of predicting prognosis of cervical cancer and have important implications for individual treatment .【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】3页(P611-613)【关键词】宫颈癌;宫颈上皮内瘤样病变;c-Jun氨基末端激酶;信号转导及转录活化因子3【作者】陈滢;程艳香【作者单位】430070 广州军区武汉总医院妇产科;430060武汉大学人民医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.33宫颈癌(cervical cancer,CC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球妇女恶性肿瘤中居第二位。

胰腺癌中STAT3信号通路作用及其机制的研究进展周文涛【摘要】信号转导与转录激活因子3 (signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)是介导细胞间信号转导的经典转录因子.异常活化的STAT3信号通路通过抑制细胞凋亡、加速炎症进展、诱导血管生成等方式参与胰腺癌的发生发展.阻断该信号通路的活性能显著抑制肿瘤细胞的恶性生物学行为.本文就STAT3信号通路在胰腺癌中的作用机制作一综述,以期为胰腺癌的临床治疗提供新思路.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2016(043)006【总页数】6页(P757-762)【关键词】信号转导与转录激活因子3;信号通路;胰腺癌;机制【作者】周文涛【作者单位】复旦大学附属中山医院普外科上海200032【正文语种】中文【中图分类】R735.9胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系统肿瘤,中位生存期仅为4～6个月,五年生存率不足6%[1]。

手术联合辅助性放化疗是目前治疗胰腺癌的主要方法。

但是,大多数患者在就诊时已属局部晚期或发生远处转移,仅10%的患者具有手术切除的可能,且术后的复发和转移也导致胰腺癌的预后极差。

因此,探讨胰腺癌的发病机制,并从中寻找有效的治疗靶点,以期能减缓甚至逆转胰腺癌的发生发展过程,将是未来研究的重点。

信号转导与转录激活因子3 (signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)是介导细胞间信号转导的重要转录因子,参与细胞分化、免疫应答、胚胎发育等多种生理过程。

近年来,大量研究显示,STAT3在多种恶性肿瘤中异常活化,并与肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移等生物学行为紧密相关[2]。

越来越多的证据表明,STAT3信号通路在胰腺癌的发生发展中发挥了重要作用,将其作为靶点有望为临床治疗提供新思路。

本文将围绕STAT3信号通路在胰腺癌发病机制及治疗中的作用进行综述。

肾癌组织中 STAT3、p-STAT3的表达及其临床意义顾玉彬;刘秉乾【摘要】目的：探讨肾癌组织中信号转导及转录活化因子3（STAT3）、磷酸化信号转导及转录活化因子3（p-STAT3）的表达及其临床意义。

方法采用免疫组化S-P 法检测63例肾癌和30例癌旁正常肾脏组织中STAT3和 p-STAT3的表达，并分析两者与肾癌临床病理参数的关系。

结果肾癌组织中 STAT3和 p-STAT3的阳性率分别为80.95％、74.60％，癌旁正常肾脏组织分别为33.33％、16.67％，差异均有统计学意义（P 均﹤0.05）。

肾癌组织中 STAT3和 p-STAT3的表达与其淋巴结转移、分化程度、临床分期有关（P 均﹤0.05）。

肾癌组织中 STAT3和p-STAT3的表达呈正相关关系（rS =0.367，P ﹤0.05）。

结论肾癌组织 STAT3和p-STAT3持续高表达，提示 STAT3信号通路可能参与肾癌的临床进展，且与肾癌的恶性程度密切相关，联合检测可以为肾癌的临床诊断提供更为客观的参考。

%Objective To investigate the expressions and clinical significance of signal transducers and activators of transcription 3(STAT3)and phosphorylated signal transducers and activators of transcription 3(p-STAT3)in the renal carcinoma. Methods Immunohistochemistry S-P method was used to detect the expressions of STAT3 and p-STAT3 in the 63 cases of renal carcinoma and the 30 cases of paraneoplastic normal renal tissue. The relationship between STAT3 or p-STAT3 and clinicopathological features were analyzed. Results The positive rates of STAT3 and p-STAT3 were 80. 95% and 74. 60% in the renal carcinoma,and were 33. 33% and 16. 67% in the paraneo-plastic normal renal tissue(P ﹤ 0.05). The expressions of STAT3 and p-STAT3 in the renal carcinoma wererelated with lymph node metastasis,differentiation degree and clinical stage(P ﹤ 0. 05). The expressions of STAT3 was positively related with p-STAT3 in the renal carcinoma(rS = 0. 367,P ﹤ 0. 05). Conclusion High expressions of STAT3 and p-STAT3 are related to the canceration and improvement of renal carcinoma.【期刊名称】《肿瘤基础与临床》【年(卷),期】2016(029)004【总页数】3页(P308-310)【关键词】肾癌;信号转导及转录活化因子3;磷酸化信号转导及转录活化因子3【作者】顾玉彬;刘秉乾【作者单位】太康县人民医院，河南周口 461400;郑州大学第一附属医院泌尿外科，河南郑州 450052【正文语种】中文【中图分类】R737.11;R730.23[Abstract]Objective To investigate the expressions and clinical significance of signal transducers and activators of transcription 3 (STAT3) and phosphorylated signal transducers and activators of transcription 3 (p-STAT3) in the renal carcinoma.Methods Immunohistochemistry S-P method was used to detect the expressions of STAT3 and p-STAT3 in the 63 cases of renal carcinoma and the 30 cases of paraneoplastic normal renal tissue. The relationship between STAT3 or p-STAT3 andclinicopathological features were analyzed.Results The positive rates of STAT3 and p-STAT3 were 80.95% and 74.60% in the renal carcinoma, and were 33.33% and 16.67% in the paraneoplastic normal renal tissue(P<0.05). The expressions of STAT3 and p-STAT3 in the renal carcinoma were related with lymph node metastasis, differentiation degree and clinical stage (P<0.05). The expressions of STAT3 was positively relatedwith p-STAT3 in the renal carcinoma (rS=0.367, P<0.05).Conclusion High expressions of STAT3 and p-STAT3 are related to the canceration and improvement of renal carcinoma.[Key words]renal cell carcinoma; signal transducers and activators of transcription 3; phosphorylated signal transducers and activators of transcription 3肾癌是起源于肾实质集合小管上皮系统的肾脏恶性肿瘤，发病率逐年上升，且有年轻化趋势，其发病与多种信号通路的异常有关。

STAT3信号通路与慢性炎症疾病关联一、STAT3信号通路概述STAT3（信号转导和转录激活因子3）是一种重要的转录因子，它在细胞内信号传导中扮演着核心角色。

STAT3信号通路是细胞因子和生长因子信号传导的关键途径之一，参与调控多种生物学过程，包括细胞增殖、分化、迁移、凋亡以及免疫应答等。

STAT3信号通路的激活通常涉及细胞表面受体的结合，如细胞因子受体或生长因子受体，这些受体激活后通过JAK（Janus激酶）家族激酶磷酸化STAT3。

磷酸化的STAT3形成二聚体，随后转移到细胞核内，激活或抑制特定基因的表达。

二、STAT3信号通路在慢性炎症疾病中的作用慢性炎症疾病是一类以持续性炎症反应为特征的疾病，涉及多种组织和器官，如慢性阻塞性肺病、炎症性肠病、类风湿性关节炎等。

在这些疾病中，STAT3信号通路的异常激活与炎症反应的持续和加剧密切相关。

STAT3的持续激活可以促进炎症细胞因子的产生，如IL-6（白细胞介素6）、TNF-α（肿瘤坏死因子α）和IL-1β（白细胞介素1β），这些细胞因子进一步加剧炎症反应，形成恶性循环。

在慢性炎症疾病的发病机制中，STAT3信号通路的异常激活可能通过以下机制发挥作用：1. 促进炎症细胞因子的产生：STAT3可以直接或间接地激活多种炎症细胞因子的基因表达，如IL-6、TNF-α和IL-1β，这些因子是炎症反应的关键介质。

2. 调节免疫细胞的分化和功能：STAT3在免疫细胞的分化和功能中起着重要作用，如促进Th17细胞的分化和抑制调节性T细胞（Treg）的功能，这可能导致免疫失衡和炎症反应的加剧。

3. 促进细胞增殖和存活：在某些慢性炎症疾病中，STAT3信号通路的激活可以促进炎症细胞的增殖和存活，如成纤维细胞和上皮细胞，这可能导致组织损伤和纤维化。

4. 调节血管生成：STAT3信号通路在血管生成中也起着重要作用，它可以促进血管内皮生长因子（VEGF）的表达，从而促进新血管的形成，这在某些慢性炎症疾病中可能加剧炎症反应。

p-STAT3、Bcl-2、MMP-7在胆囊癌组织中的表达及临床意义发表时间：2017-04-17T11:11:11.060Z 来源：《心理医生》2017年1期作者：徐同磊1 王广义2（通讯作者）[导读] 本研究初步表明三者可能在胆囊癌的发生发展中发挥协同作用，共同促进胆囊癌细胞的侵袭和转移，但其机制尚有待进一步研究。

（1江苏省连云港市第一人民医院肝胆外科江苏连云港 222002）（2吉林省长春市吉林大学第一医院肝胆外科吉林长春 130021）【摘要】目的：对p-STAT3、Bcl-2、MMP-7三种蛋白在慢性胆囊炎以及胆囊癌患者中的表达情况进行分析，进而对三种蛋白的表达与胆囊癌间的关系进行探索。

方法：将本院从2000年1月至2012年10月行手术治疗的胆囊癌患者64例作为观察组，取病理样本进行检测，同时在该时间段内选取行胆囊切除治疗的慢性胆囊炎患者10例作为对照组，同样取病理样本进行检测。

借助免疫组织化学SP对两组患者p-STAT3、Bcl-2、MMP-7表达情况进行检测，借助统计学方法对三种蛋白在两组患者表达差异性进行比较。

结果： p-STAT3蛋白在胆囊癌患者中的表达阳性率为82.81%（53/64），Bcl-2表达阳性率为79.69%（51/64），MMP-7表达阳性率为81.25%（52/64），对照组对应为10.0%（1/10），20.00%（2/10），0.00%，观察组明显高于对照组，P<0.05差异具备统计学意义。

三种蛋白在胆囊癌患者中的表达情况，与患者胆囊癌临床分期以及淋巴癌转移情况存在一定联系，差异具备统计学意P<0.05。

与患者年龄等方面无较大联系，P>0.05不具备统计学意义。

从三种蛋白表达上的联系可以发现，p-STAT3蛋白与Bcl-2蛋白表现为正相关，同时Bcl-2与MMP-7蛋白也表现为正相关，p-STAT3蛋白与MMP-7蛋白也表现出明显正相关的关系。